FLNA在肝癌中的表达及其对细胞增殖、侵袭转移的作用

摘 要：［目的］ 探讨细丝蛋白A（FLNA）在肝癌组织中的表达及过表达对肝癌细胞生物表型的影响。［方法］ 采用免疫组织化学方法、Western Blot检测75例肝癌组织及距其癌组织边缘2cm以上的镜下未见癌浸润的37例正常肝脏组织中FLNA的表达情况。采用慢病毒转染建立FLNA过量表达的肝癌HepG2细胞株。荧光定量PCR及Western Blot检测FLNA转染后肝癌HepG2细胞株中FLNA表达含量的变化。MTT法、Transwell检测FLNA过量表达对肝癌细胞增殖及细胞侵袭转移的影响。［结果］ 免疫组织化学结果表明,FLNA蛋白在肝癌组织及正常肝脏组织中的表达阳性率分别为37.3%、89.2%,差异有统计学意义（P＜0.05）。Western Blot结果表明,FLNA 蛋白在肝癌组织的相对表达量较正常肝脏组织明显降低,两者比较差异具有统计学意义（P＜0.05）。FLNA蛋白表达水平与肝癌有无淋巴结转移、临床分期以及组织学分级有关（P＜0.05）,而与患者年龄、性别、肝癌病理类型及T分期无关（P＞0.05）。FLNA高表达的肝癌细胞其增殖能力明显减弱、侵袭转移能力降低,MMP-9蛋白的表达量明显下调。［结论］ 肝癌组织中FLNA蛋白表达明显下降,可能是正常肝脏组织恶性转变的重要生物学标志,对预测肝癌发生、浸润转移有重要意义。     

WT1和β-catenin蛋白在非小细胞肺癌中的表达及意义

目的 探讨肾母细胞瘤基因1（WT1）和β-链蛋白（β catenin）在非小细胞肺癌（NSCLC）组织中的表达情况,分析两者与临床病理特征的关系以及两者表达的相关性。方法采用免疫组化En Vision二步法检测WT1和β catenin蛋白在48例NSCLC组织中的表达情况,以20例癌旁组织作对照。结果 WT1蛋白在NSCLC和癌旁组织中的阳性表达率分别为62.5％和10.0％（P＜0.05）,β-catenin蛋白在NSCLC和癌旁组织中的异常表达率分别为72.9％和15.0％（P＜0.05）。WT1蛋白表达与淋巴结转移有关,而与性别、年龄、肿块直径、病理类型、组织分化和pTNM分期均无关（P＞0.05）;β-catenin蛋白异常表达与组织分化有关（P＜0.05）,而与性别、年龄、肿块直径、pTNM分期、淋巴结转移和病理类型均无关（P＞0.05）。NSCLC中WT1蛋白与β-catenin蛋白表达呈正相关（r=0.331,P＜0.05）。结论 WT1和β-catenin蛋白可能与NSCLC的发生、发展有关。     

OTUD3和PTEN在乳腺癌组织中的表达及与临床病理特征和预后的关系

目的:检测乳腺癌组织中OTUD3与PTEN表达,分析其与临床病理特征及预后的关系。方法:选取2014年1月至2014年12月于我院行手术治疗的79例乳腺癌患者癌组织及其对应癌旁正常组织标本。采用免疫组化染色法、Western blot 检测、RT-PCR法分别检测癌组织及癌旁正常组织中OTUD3与PTEN表达,并分析两者表达相关性;探究OTUD3、PTEN与乳腺癌临床病理特征及预后的关系。结果:乳腺癌组织中PTEN阳性主要定位于细胞核,OTUD3阳性主要定位于细胞质。乳腺癌组织中OTUD3和PTEN阳性率、蛋白表达量及mRNA水平显著低于癌旁正常组织（P均<0.05）。乳腺癌组织中OTUD3、PTEN表达呈正相关（r=0.580,P=0.000）。PTEN与肿瘤直径、组织学分级、TNM分期、淋巴结转移、分子分型及ER/PR/HER-2/p53状态显著相关（P＜0.05）;OTUD3与组织学分级、TNM分期、淋巴结转移及p53显著相关（P＜0.05）。OTUD3及PTEN阴性表达组患者生存率显著低于阳性表达组（Log-rank检验P＜0.05）,两者不同表达是影响乳腺癌预后生存的独立危险因素之一（P＜0.05）。结论:乳腺癌组织中OTUD3、PTEN低表达,两者表达呈正相关,与组织学分级、TNM分期、淋巴结转移及p53等临床病理特征及预后显著相关,有望成为临床预后预测的有效因子。     

Twist在肾细胞癌中表达及其临床意义研究

目的：研究twist的表达与肾细胞癌（renal cell carcinoma,RCC）恶性进展的关系.方法：应用免疫组织化学及Western blot方法检测twist在RCC及其对应癌旁组织的表达情况,并分析其在肿瘤组织中的表达水平与患者年龄、性别、T分期、Fuhrman分级及淋巴结转移等临床病理资料之间的相关性.结果：twist在RCC阳性表达率为73.1％,显著高于其在对应癌旁组织阳性表达率15.4％ （P ＜0.05）.twist在肿瘤组织的阳性表达率在小于及大于49岁组中分别为69.2％、76.9％;在男、女组中分别为75％、71.9％;T1＋2及T3＋4期分别为61.3％、90.5％;在G1、G2及G3组依次为41.7％、80.8％、85.7％;在无及有淋巴结转移组分别为60％、90.9％.统计学分析提示twist表达差异在T分期、Fuhrman分级及淋巴结转移具有统计学意义（P＜0.05）.Western blot检测发现twist在肾细胞癌组织表达水平显著强于其对应癌旁组织（P＜0.05）.结论：twist在肾细胞癌中高表达与肾癌恶性进展密切相关,有望成为肾癌诊断及治疗新的标记物.     

MMP-2与TIMP-1在食管鳞癌细胞中的表达及临床意义

目的：检测食管鳞癌（ESCC）及癌旁正常组织中基质金属蛋白酶-2（MMP-2）以及组织抑制因子（TIMP-1）的表达,研究其与临床特征的关系,为临床ESCC恶性程度和预后判断提供新的依据。方法应用组织芯片技术及免疫组织化学链霉菌抗生物素蛋白-过氧化酶连接法（S-P法）对60例ESCC组织及癌旁正常食管组织中MMP-2、TIMP-1蛋白表达进行检测,分析其阳性表达与性别、年龄、组织学分级、浸润深度、淋巴结转移及肿瘤分期之间的关系。结果 MMP-2、TIMP-1在癌旁正常上皮组织不表达;MMP-2主要在癌细胞中表达, TIMP-1主要在间质细胞中表达,二者在食管鳞状细胞癌中表达阳性率分别为38.3%和46.7%,高于正常组织（P﹤0.05）。MMP-2与ESCC的浸润深度、淋巴结转移和TNM临床分期有关,差异有统计学意义（P﹤0.05）,肿瘤浸润程度深者MMP-2阳性表达率高;无淋巴结转移者的MMP-2阳性表达率低于有淋巴结转移者;临床病理分期为Ⅰ、Ⅱ期患者的阳性表达率低于Ⅲ期者。TIMP-1的表达与ESCC性别、年龄、组织学分级、浸润深度、淋巴结转移及临床病理分期无关（P﹥0.05）。结论 MMP-2能在ESCC的侵袭、转移中起重要作用,TIMP-1可能与早期ES-CC的生物学性状有关,MMP-2与浸润深度、淋巴结转移及TNM分期有关,二者有助于判断ESCC的生物学行为。     

石蜡包埋的肝细胞癌组织中ASPP家族的表达

目的:研究肝细胞癌中p53凋亡刺激蛋白（ASPP）家族的表达以及临床意义。方法:应用免疫组织化学SP方法检测73例甲醛固定和石蜡包埋的肝细胞癌组织切片和相应癌旁正常组织中ASPP蛋白家族的表达情况。结果:在癌旁正常组织中,ASPP1和ASPP2的表达阳性率高于肝细胞癌组织(P=0.000,0.000),但是肝细胞癌组织中iASPP的表达阳性率高于相应癌旁正常组织(P=0.000)。在肝细胞癌组织中,ASPP1的表达与患者性别、年龄、临床分期以及淋巴结转移均无相关性(P＞0.05),但与病理分级有关(P=0.001);ASPP2的表达与病理分级和临床分期有关(P=0.000,0.000),与性别、年龄以及淋巴结转移无关(P＞0.05)。iASPP的表达与淋巴结转移有关(P=0.004),但是与性别、年龄、病理分级和临床分期无关(P＞0.05)。结论:ASPP蛋白家族异常表达可能与肝细胞癌的发生机制相关,ASPP1和ASPP2表达水平下调并与肝细胞癌病理分级相关,而 iASPP的表达水平上调与癌的淋巴转移相关,iASPP可能是基因治疗肝细胞癌的一个靶点。      

p16与survivin蛋白在食管癌中的表达及意义

[目的]探讨食管癌中p16与survivin蛋白的表达及其与临床病理特征的关系.[方法]采用EnVision免疫组化法检测62例食管癌及其相应癌旁正常黏膜组织的p16与survivin蛋白的表达.[结果]癌旁正常黏膜中的p16与survivin蛋白的阳性表达率分别为91.9%和6.45%,而相应癌组织分别为32.3%和72.6%.两组间均有显著性差异（P＜0.01）.食管癌中p16表达的缺失与组织学分级、临床分期和淋巴转移有关（P＜0.05）.而survivin蛋白阳性表达则与淋巴转移有关（P＜0.05）,而与组织学分级、临床分期无关（P＞0.05）.p16与survivin蛋白在食管癌中的表达呈负相关（r=-0.495,P＜0.01）.[结论]p16表达的缺失与survivin蛋白的过度表达与食管癌的发生、进展和淋巴结转移密切相关,两者联合检测有助于食管癌病情的评估和预后判断.     

结直肠癌中VEGF-C和MMP-2蛋白表达量与肿瘤侵袭转移关系的研究

目的:研究VEGF-C、MMP-2在结直肠癌中mRNA和蛋白水平的表达,分析其表达与临床病理特征间关系,探讨其在结直肠癌中的表达及其意义。方法:收集46例常熟市第二人民医院病理科2014年至2017年结直肠癌手术切除的新鲜肿瘤组织及20例癌旁正常组织。采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应方法检测46例结直肠癌与癌旁正常组织中VEGF-C mRNA、MMP-2的表达,应用免疫组织化学方法检测结直肠癌与癌旁正常组织VEGF-C、MMP-2蛋白的表达,分析VEGF-C mRNA、MMP-2 mRNA和蛋白表达与临床病理分期特征间关系。结果:46例结直肠癌中VEGF-C mRNA（P<0.05）、MMP-2 mRNA（P<0.05）转录水平显著高于癌旁正常组织。VEGF-C mRNA转录水平与患者年龄、性别和肿瘤直径等无相关性（P>0.05）,与组织学分级、TNM分期、淋巴结和远处转移等有相关性（P<0.05）;MMP-2 mRNA转录水平与年龄、性别、肿瘤直径、淋巴结和远处转移等无相关性（P>0.05）,而与组织学分级、TNM分期上有统计学差异（P<0.05）。VEGF-C蛋白表达量与性别、肿瘤直径和远处转移无相关性（P>0.05）,而与患者年龄、淋巴结转移、组织学分级和TNM分期等相关（P<0.05）;MMP-2蛋白表达量与年龄、性别、肿瘤直径和远处转移无相关性（P>0.05）,只与组织学分级和TNM分期等相关（P<0.05）。两基因间mRNA转录水平与蛋白表达水平呈线性相关性（P<0.01）。结论:VEGF-C、MMP-2蛋白的高表达与结直肠癌细胞侵袭及转移过程的发生密切相关,可为作潜在靶向标志物,为临床上进一步诊断治疗及预后提供理论依据。     

Cyclin D1、PTEN蛋白在甲状腺乳头状癌中的表达及临床意义

目的 探讨细胞周期蛋白D1（Cyclin D1）、第10号染色体同源丢失性磷酸酶张力蛋白（PTEN）在甲状腺乳头状癌（PTC）组织中的表达情况及临床意义。方法 收集2013年3月至2014年12月手术切除的PTC组织和配对癌旁组织各70例。采用免疫组化En Vision两步法检测上述组织中Cyclin D1、PTEN的表达情况;分析Cyclin D1、PTEN蛋白表达与PTC临床病理特征的关系以及两种蛋白表达的相关性。结果在70例PTC组织中,Cyclin D1蛋白的阳性表达率为77.1％（54／70）,高于癌旁组织的12.9％（9／70）,差异有统计学意义（P＜0.001）;PTEN蛋白的阳性表达率为21.4％（15／70）,低于癌旁组织的81.4％（57／70）,差异有统计学意义（P＜0.001）。Cyclin D1表达与淋巴结转移、临床分期有关（P＜0.05）,而与年龄、性别、肿瘤大小无关（P＞0.05）。PTEN表达与性别、淋巴结转移、临床分期有关（P＜0.05）,而与年龄、肿瘤大小无关（P＞0.05）。Cyclin D1与PTEN蛋白表达无明显相关性（r=0.105,P=0.386）。结论 PTC组织中Cyclin D1高表达,而PTEN低表达,且两者均与淋巴结转移和临床分期有关,提示两者在PTC的发生、发展中发挥一定的作用。     

Pokemon在卵巢癌中的表达及临床意义

目的 探讨Pokemon蛋白在人卵巢癌组织中的表达及其与临床病理特征之间的关系。方法 采用免疫组化法检测50例卵巢癌组织中Pokemon蛋白的表达情况,并分析其与临床病理特征（年龄、临床分期、病理分级和淋巴结转移）的关系。选取同期20例卵巢交界性肿瘤组织和20例正常卵巢组织作对照。结果 Pokemon的阳性表达定位于细胞核和胞质,其在卵巢癌的阳性表达率高于正常卵巢和卵巢交界性肿瘤（P＜0.05）,而卵巢交界性肿瘤的亦高于正常卵巢（P＜0.05）;Pokemon阳性表达在不同临床分期、病理分级及淋巴结转移中的差异有统计学意义（P＜0.05）。结论 Pokemon在卵巢癌组织中高表达,并与卵巢癌组织分化、临床分期及淋巴结转移有关,对卵巢癌的发生发展有重要作用。     

IGF-Ⅰ及IGF-ⅠR在肾细胞癌中的表达和临床意义

目的探讨胰岛素样生长因子Ⅰ(IGF-Ⅰ)及其受体(IGF-ⅠR)在肾细胞癌中表达的意义。方法应用免疫组化法检测40例肾细胞癌、25例癌旁组织及10例正常肾组织中IGF-Ⅰ及IGF-ⅠR的表达,并对两者与组织学分级、淋巴转移和临床分期等临床资料的关系进行分析。结果 IGF-Ⅰ、IGF-ⅠR在肾细胞癌标本中阳性率明显高于癌旁及正常组织(均P<0.01),但与肾细胞癌的分级、分期及淋巴结转移情况无相关性(均P>0.05)。结论 IGF-Ⅰ、IGF-ⅠR在肾细胞癌的发生发展中起重要的作用,两者对肾细胞癌的早期诊断、免疫治疗或基因治疗具有一定的临床价值。     

DMBT1在肾癌组织中的表达及其临床意义

[目的]探讨脑恶性肿瘤缺失基因1（DMBT1）在肾癌组织中的表达及其意义。[方法]采用免疫组织化学方法检测47例肾癌组织及距其癌组织边缘2cm以上的镜下未见癌浸润的正常组织中DMBT1蛋白表达情况。[结果]免疫组织化学结果表明,DMBT1蛋白在肾癌组织及正常肾脏组织中的表达阳性率分别为31.9%、76.6%,差异有统计学意义（P〈0.05）。DMBT1蛋白表达与肾癌患者性别、年龄、肿瘤大小无关（P〉0.05）;而与细胞分化程度、淋巴结转移以及肿瘤临床分期有关（P〈0.05）。Kaplan-Meier生存分析提示,DMBT1表达阳性的肾癌患者5年总生存率明显高于表达阴性者,差异具有统计学意义（P〈0.05）。[结论]肾癌组织中DMBT1蛋白表达降低,且与肾癌细胞分化程度、淋巴结转移、临床分期及患者预后有关。     

微小RNA-30c在肾癌组织中的表达及其临床意义

目的   探讨微小RNA-30c（miR-30c）在肾癌组织中的表达及其临床病理特征和预后关系。方法   收集本院2012年1月至2015年12月经手术切除的95例肾癌组织和82例癌旁组织标本,采用实时定量PCR（QPCR）检测以上组织中miR-30c水平,分析miR-30c表达与肾癌临床病理参数（性别、年龄、TNM分期、淋巴结转移、远处转移和T分期）及预后的关系,采用Cox回归模型进行多因素分析。结果  QPCR检测发现95例肾癌组织中miR-30c的表达水平为0.561±0.378,低于82例癌旁组织的1.220±0.820（P＜0.05）。肾癌组织中miR-30表达与性别、远处转移和年龄均无关（P＞0.05）,而与TNM分期、淋巴结转移和T分期均有关（P＜0.05）,其中Ⅲ～Ⅳ期、淋巴结转移及T3～T4期的miR-30c相对表达量分别为0.422±0.219、0.442±0.299和0.408±0.194,均低于Ⅰ～Ⅱ期、无淋巴结转移及T1～T2期的0.671±0.439、0.619±0.400和0.654±0.431（P＜0.05）;Ⅲ～Ⅳ期、淋巴结转移及T3～T4期的miR-30c高表达率分别为21.43％（9／42）、16.13％（5／31）和19.44％（7／36）,均低于Ⅰ～Ⅱ期、无淋巴结转移及T1～T2期的41.51％（22／53）、16.13％（26／64）和40.68％（24／59）,差异均有统计学意义（P＜0.05）。miR-30c低表达组的中位总生存期为37.0个月,短于高表达组（＞60.0个月）,差异有统计学意义（P＜0.05）。Cox回归模型分析发现,TNM分期、淋巴结转移、远处转移、T分期及miR-30c表达均是影响预后的独立因素。结论   肾癌组织中miR-30c低表达,miR-30c参与肾癌的发生发展且与预后有关,其中miR-30c低表达者的预后较差,是影响预后的独立因素。     

CCNG2在肾癌组织中的表达及其临床意义

[目的]探讨细胞周期蛋白G2（CCNG2）在肾癌组织中的表达及其临床意义。[方法]采用免疫组织化学方法、WesternBlot法检测65例肾癌组织及距其癌组织边缘2em以上镜下未见癌浸润的正常组织中CCNG2蛋白的表达情况。[结果]免疫组织化学结果表明,CCNG2蛋白在肾癌组织及正常肾组织中的表达阳性率分别为32.3％、93．8％,有统计学差异（P〈0．05）。Westem Blot结果表明．CCNG2的蛋白在肾癌组织的表达相对量较正常肾组织的表达相对量明显降低,两者比较差异具有统计学意义（P〈0．05）。CCNG2蛋白表达与肾癌患者性别、年龄及肿瘤大小无关（P〉0．05）。但与淋巴结转移、临床分期及分化程度有关（P〈0．05）。[结论]肾癌组织中CCNG2蛋白表达明显减低,其表达与淋巴结转移、临床分期及肿瘤分化有关。     

前列腺癌中细丝蛋白A表达的临床意义

[目的]探讨细丝蛋白A（filamin A,FLNA）在前列腺癌中的表达及意义。[方法]采用免疫组织化学方法、Western blot检测68例前列腺癌组织及距其癌组织边缘2cm以上的镜下未见癌浸润的正常组织中FLNA蛋白的表达情况。[结果]免疫组织化学结果表明,FLNA蛋白在前列腺癌组织的表达阳性率为38.2%,较正常前列腺组织（75.7%）明显降低（P〈0.05）。Western blot结果表明,FLNA的蛋白在前列腺癌组织的相对表达量较正常前列腺组织明显降低,两者比较差异具有统计学意义（P〈0.05）。FLNA蛋白表达与前列腺患者年龄、PSA水平无关（P〉0.05）;而与淋巴结转移、临床分期以及Gleason评分有关（P〈0.05）。[结论]前列腺癌组织中FLNA蛋白表达明显减低,可能在前列腺癌发生的负反馈调节中起重要作用。     

Interactions between Filamin A and MMP-9 Regulate Proliferation and Invasion in Renal Cell Carcinoma

This study aimed to analyze the expression, clinical significance of filamin A (FLNA) in renal cell carcinoma(RCC) and biological effects in a cell line by regulating FLNA expression. Immunohistochemistry and Westernblotting were used to analyze FLNA protein expression in 70 cases of RCC and normal tissues to study therelationship with clinical factors. FLNA lentiviral and empty vectors were transfected into RCC to study theinfluence of up-regulated expression of FLNA. FLNA siRNA was transiently transfected into ACHN kidneycarcinoma cells by a liposome-mediated method and protein was detected by Western blotting. The level ofexpression was found to be significantly lower in RCC than normal tissues (p<0.05). No correlation was notedwith gender, age, tumor size or pathological types (p>0.05), but links with lymph node metastasis, clinic stageand histological grade were noted (p<0.05). Loss of FLNA expression correlated significantly with poor overallsurvival time by Kaplan-Meier analysis (p<0.05). Results for biological function showed that ACHN cellstransfected with FLNA had a lower survival fraction, significant decrease in migration and invasion, higher cellapoptosis, higher percentage of the G0/G1 phases, and lower MMP-9 protein expression compared with ACHNcells untransfected with FLNA (p<0.05). However, renal 786-0 cells transfected with FLNA siRNA had a highersurvival fraction, significant increase in migration and invasion, and higher MMP-9 protein expression compared(p<0.05). In conclusion, FLNA expression was decreased in RCC and correlated significantly with lymph nodemetastasis, clinic stage, histological grade and poor overall survival, suggesting that FLNA may play importantroles as a a tumor suppressor in RCC by promoting degradation of MMP-9.     

KiSS-1和MMP-9在肾透明细胞癌中的表达及其临床意义

目的:探讨KiSS-1基因和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)与肾脏透明细胞癌侵袭、转移的关系,为研究肾透明细胞癌的转移机制及治疗提供理论基础。方法:利用免疫组化方法检测45例肾透明细胞癌和15例正常肾组织中KiSS-1、MMP-9的表达水平。结果:KiSS-1基因产物metastin在正常肾组织和肾透明细胞癌中的阳性表达率分别为40.0%和31.1%,差异无显著性(P>0.05);metastin表达与肾透明细胞癌的临床分期和淋巴结转移有关(P<0.05),与患者性别、年龄、肿瘤大小、肿瘤组织学分级等临床病理因素无关(P>0.05)。MMP-9在正常肾组织和肾透明细胞癌中的表达率分别为20.0%和64.4%,差异有显著性(P<0.05);MMP-9表达与肾透明细胞癌组织学分级、肿瘤临床分期及淋巴结转移有关(P<0.05),与患者性别、年龄、肿瘤大小等临床因素无关(P>0.05)。结论:metastin表达与肾透明细胞癌的临床分期和淋巴结转移有关,MMP-9可能促进肾透明细胞癌的侵袭和转移过程。两者有望成为判定肾透明细胞癌侵袭和转移能力的指标。     

DMBT1在乳腺癌组织中的表达及临床意义

[目的]探讨脑恶性肿瘤缺失基因1（DMBTI）在乳腺癌组织中的表达及意义。[方法]采用免疫组织化学方法检测73例乳腺癌组织及距其癌组织边缘2cm以上镜下未见癌浸润的正常组织中DMBT1蛋白的表达情况。[结果]免疫组织化学结果表明,DMBT1蛋白在乳腺癌组织及正常乳腺组织中的表达阳性率分别为35．6％、70．9％,差异有统计学意义（P〈0．05）。DMBT1蛋白表达与T分期、分化程度、淋巴结转移以及临床分期有关（P〈0．05）。Kap1an—Meier生存分析提示,DMBT1表达阳性的乳腺癌患者5年总生存率明显高于表达阴性者,两者比较差异具有统计学意义（P〈0．05）。[结论]乳腺癌组织中DMBT1蛋白表达降低,且与乳腺癌T分期、分化程度、淋巴结转移、临床分期及患者预后有关。