COX-2抑制剂Mavacoxib对骨肉瘤干细胞增殖、凋亡及相关信号通路的影响

目的 探讨COX-2抑制剂Mavacoxib对骨肉瘤干细胞增殖、凋亡及相关信号通路的影响。方法 体外培养人骨肉瘤MG-63细胞以获取骨肉瘤干细胞,经Mavacoxib（0、1、10、50、100 μmol/L）处理后采用四甲基偶氮唑盐（MTT）比色法检测增殖抑制率的变化,同时采用流式细胞术Annexin-FITC/PI双染法及PI单染法检测不同浓度Mavacoxib处理24、48 h的凋亡情况（早、晚期凋亡率）及48 h的细胞周期情况,Western blotting检测不同浓度Mavacoxib 处理48 h的骨肉瘤干细胞中PI3K/Akt及Wnt/β-catenin信号通路的影响。结果 在10～100 μmol/L范围内,Mavacoxib可呈剂量和时间依赖的方式升高骨肉瘤干细胞的增殖抑制率,差异均有统计学意义（P＜0.05）;与0 μmol/L相比,除1 μmol/L 24 h的晚期凋亡率无统计学差异,10～100 μmol/L的早晚期凋亡率、G0/G1期细胞比例均升高,S期、G2/M期细胞比例均降低（P＜0.05）。Mavacoxib处理后的PI3K/Akt通路中的PTEN水平升高,Akt水平降低;Wnt/β-catenin通路中β-catenin、C-myc和Cyclin D1水平均降低（P＜0.05）。结论 Mavacoxib 对骨肉瘤干细胞有毒性作用,且可诱导其凋亡及细胞周期阻滞并抑制PI3K/Akt和Wnt/β-catenin信号通路的激活。     

蛋白激酶Cδ失活对骨肉瘤干细胞增殖、凋亡及相关信号通路的影响

目的 探讨短发夹RNA（shRNA）靶向沉默人蛋白激酶Cδ（PKCδ）对骨肉瘤干细胞增殖、凋亡及相关信号通路的影响。方法 根据Genbank数据库中PKCδ序列,设计、合成互补并特异性编码其 shRNA序列（PKCδ-shRNA-1和PKCδ-shRNA-2）,克隆至pRNA6-1-Neo质粒载体后采用Western blotting检测PKCδ蛋白水平,筛选抑制效果最好的shRNA片段转染骨肉瘤干细胞（转染组）,设阴性对照组（转染shRNA无意义随机阴性对照序列）和空白对照组（不行转染处理）。采用噻唑蓝（MTT）法检测各组转染24、48、72、96 h后的增殖抑制率,流式细胞术检测各组转染后的细胞凋亡和细胞周期情况,实时荧光定量PCR检测凋亡相关基因的表达,采用Western blotting检测各组转染96 h后PI3K／Akt及Wnt／β-catenin信号通路中相关蛋白的水平。结果 转染PKCδ-shRNA-1和PKCδ-shRNA-2后PKCδ蛋白水平均降低（P＜0.05）,且PKCδ-shRNA-1的抑制效果优于PKCδ-shRNA-2,故后续实验选择PKCδ-shRNA-1;与其余两组相比,转染组的增殖抑制率、凋亡率及促凋亡基因Bax、Bad的mRNA水平均升高,而Bcl-2水平降低,且在细胞周期上,G0／G1期细胞比例升高,但S期和G2／M期细胞比例均降低,以上差异均有统计学意义（P＜0.05）;转染组PI3K／Akt通路中的PTEN水平升高、Akt水平降低,Wnt／β-catenin通路中β-catenin、C-myc和Cyclin D1水平均降低（P＜0.05）。结论 通过shRNA抑制PKCδ基因表达可抑制骨肉瘤干细胞增殖并诱导凋亡和细胞周期阻滞,对PI3K／Akt和Wnt／β-catenin信号通路激活有一定抑制作用,可能对骨肉瘤的防治有一定价值。     

shRNA靶向沉默P2X7R表达对鼻咽癌细胞增殖、凋亡及PI3K／Akt和Wnt／β-catenin通路的影响

目的 探讨靶向P2X7受体（P2X7R）的小发夹RNA（shRNA）对人鼻咽癌HONE1细胞增殖、凋亡及信号通路的影响。方法 根据预实验结果优化shRNA转染条件,将2条靶向抑制P2X7R基因的shRNA载体片段（shRNA-1、shRNA-2）分别高效转染HONE1细胞,同时设转染无义序列（Blank）的空转染组及不进行任何处理的对照组。分别于转染24、48、72、96 h后采用实时荧光定量PCR（QPCR）检测P2X7R表达水平以筛选抑制率高的转染载体用于后续试验。四甲基偶氮唑盐（MTT）法检测各组转染24、48、72、96 h后的增殖抑制率,流式细胞术检测各组转染48、96 h后的细胞凋亡率,QPCR法检测各组凋亡相关基因的mRNA水平,Western blotting检测各组转染96 h后磷脂酰肌醇3-激酶／蛋白激酶B（PI3K／Akt）通路和Wnt／β-连接素（β-catenin）通路中的蛋白变化。结果 转染组的P2X7R mRNA水平均低于空转染组和对照组（P＜0.05）,且选择干扰效率高的shRNA-1载体进行功能学研究;与空转染组和对照组比较,shRNA-1转染组的HONE1细胞增殖抑制率、凋亡率及促凋亡基因Bid、Bax的mRNA水平均升高,而抗凋亡基因Bcl-2、Mcl-1的mRNA水平均降低,差异有统计学意义（P＜0.05）;与对照组比较,shRNA-1转染组处理后PI3K／Akt通路中PTEN蛋白水平均升高,而p-Akt水平均降低（P＜0.05）,Wnt／β-catenin通路中p-β-catenin、Cyclin D1和C-myc水平均降低（P＜0.05）。结论 通过shRNA抑制P2X7R基因表达可抑制鼻咽癌细胞增殖并诱导凋亡,可能与抑制PI3K／Akt、Wnt／β-catenin通路有关,对鼻咽癌的防治有一定价值。     

Stellettin B对非小细胞肺癌细胞增殖与凋亡的影响

目的 探讨Stellettin B 对非小细胞肺癌细胞增殖和凋亡的影响及可能的作用机制。方法采用四甲基偶氮唑盐（MTT）比色法检测不同浓度（01、1、10、100μmol／L）Stellettin B处理A549细胞和NCI-H1299细胞24、48、72和92h的增殖抑制率;采用Hoechst染色检测处理A549细胞24、48h后的凋亡指数;流式细胞术Annexin-FITC／PI双染法和PI染色法分别检测处理A549细胞48h后的凋亡率和细胞周期分布情况;采用Western blotting检测处理48h后A549细胞周期相关蛋白（Cyclin A、CDK2及p21CIP1）的表达水平。结果 不同浓度Stellettin B可显著增强对A549细胞的增殖抑制作用,且呈剂量和时间依赖性（P＜0.05）。不同浓度Stellettin B处理24、48h后,A549细胞的凋亡指数、凋亡率均升高且呈剂量依赖性（P＜0.05）。随着Stellettin B浓度的增加,G0／G1期细胞比例及p21CIP1蛋白的表达水平逐渐升高,S和G2／M期细胞比例及Cyclin A和CDK2蛋白的表达水平逐渐降低,差异均有统计学意义（P＜0.05）。结论 Stellettin B 可抑制A549细胞增殖并诱导细胞凋亡及细胞周期阻滞,可能与其对细胞周期相关蛋白表达的调控有关。     

PKF118-310对白血病K562细胞凋亡的影响及其机制

目的：探讨小分子化合物PKF118-310对人慢性粒细胞白血病（CML）K562细胞凋亡的影响及其机制。方法用不同浓度PKF118-310处理K562细胞,用四甲基偶氮唑盐（MTT）法检测其对细胞增殖的抑制;免疫荧光法观察细胞核β-catenin／TCF转录复合物的形成;流式细胞术检测细胞凋亡;Western blot检测caspase-3、caspase-8、XIAP、bcl-2、β-catenin、TCF、C-myc及cyclin D1的表达。结果PKF118-310能够抑制K562细胞生长,其对K562细胞在24、48、72 h的半数抑制浓度（IC50）值分别为5.388、3.290、1.566μmol ／L。细胞核内形成β-catenin／TCF转录复合物。分别用1.6、3.2μmol／L的PKF118-310作用于K562细胞48 h后,经Annexin V-FITC／碘化丙啶（PI）双标检测细胞凋亡率分别为（48.0±0.9）%、（80.2±1.2）%,均高于对照组的（1.2±0.6）%（均P＜0.05）。不同浓度PKF118-310处理K562细胞72 h后,caspase-3及caspase-8蛋白表达均高于对照组（均P＜0.05）,而XIAP、bcl-2、β-catenin、TCF、c-myc及cyclin D1蛋白表达均低于对照组（均P＜0.05）。结论PKF118-310可抑制K562细胞增殖,并诱导其凋亡。     

醉茄素A对非小细胞肺癌A549细胞增殖、凋亡及PI3K／Akt信号通路的影响

目的 探讨醉茄素A（WFA） 对非小细胞肺癌（NSCLC）A549细胞增殖、凋亡及PI3K／Akt信号通路的影响。方法 采用0、2.5、5.0、10.0、20.0μmol／L WFA 处理A549细胞,采用四甲基偶氮唑盐（MTT）比色法检测上述浓度处理24、48、72和96h的细胞增殖抑制率,Hoechst染色和磷酯酰丝氨酸结合蛋白 异硫氢酸荧光素／碘化丙啶双染法（Annexin V-FITC／PI）检测各浓度组48h的细胞凋亡情况,流式细胞仪检测各浓度组48h的细胞周期分布情况,免疫印迹检测各浓度组48h凋亡相关基因（Bcl-2、Bax和Cleaved caspase-3）和PI3K／Akt信号通路重要蛋白Akt及其磷酸化形式p-Akt的蛋白水平。结果 WFA 可抑制细胞增殖,并呈剂量和时间依赖性（P＜0.05）;0、2.5、5.0、10.0、20.0μmol／L WFA作用48h后A549细胞的凋亡指数分别为2.75±0.64、4.61±1.36、9.75±2.78、12.92±3.42和18.68±4.31,组间差异有统计学意义（P＜0.05）。除2.5μmol／L外,其余浓度组的早、晚期凋亡率、凋亡促进基因（Bax和Cleaved caspase-3）水平及G0／G1期细胞比例均高于0μmol／L,凋亡抑制基因Bcl-2水平及S期和G2／M期细胞比例均低于0μmol／L（P＜0.05）; 2.5、5.0、10.0、20.0μmol／L的组间差异有统计学意义（P＜0.05）。随着浓度升高,p-Akt／Akt值呈降低趋势,差异有统计学意义（P＜0.05）。结论 WFA能够抑制A549细胞的增殖及凋亡,可能通过抑制PI3K／Akt通路激活实现。     

去甲斑蝥素对白血病细胞系K562的增殖、凋亡、细胞周期及NF-κB活性的影响

目的 探讨去甲斑蝥素（NCTD）对白血病细胞系K562的增殖、凋亡、细胞周期及核因子（NF）-κB活性的影响。方法 采用CCK-8试剂盒检测不同浓度NCTD（0、10、25、50、100 μmol／L）处理K562细胞24、48、72、96 h后的增殖抑制率,采用流式细胞术检测不同浓度NCTD处理24、48 h后的细胞凋亡率和处理48 h后的细胞周期,采用原位细胞凋亡检测试剂盒（Tunnel）检测不同浓度NCTD处理24、48 h后的细胞凋亡指数,采用Western blotting检测不同浓度NCTD处理48 h后的NF-κB p65及IκB α水平以评价NF-κB活性的变化。结果 在10～100 μmol／L范围内,NCTD可呈时间和浓度依赖的方式升高K562细胞的增殖抑制率,各浓度间的差异有统计学意义（P＜0.05）;与0 μmol／L相比,其余各浓度处理24、48 h后的凋亡率和凋亡指数均升高,处理48 h后的G0／G1期细胞比例升高,S、G2／M期细胞比例均降低,NF-κB p65水平降低,IκB-α水平升高,以上差异均有统计学意义（P＜0.05）。结论 NCTD对白血病细胞系K562有细胞毒性,可抑制该细胞的增殖、诱导其凋亡及细胞周期阻滞并下调NF-κB表达。     

光甘草定对宫颈癌Hela细胞增殖、侵袭和凋亡的影响及其机制

目的:探讨光甘草定对宫颈癌Hela细胞增殖、侵袭和凋亡的影响及其机制。方法:以0、1、2.5、5、10和20 μmol/L光甘草定作用于体外培养的Hela细胞24 h后,采用细胞计数（CCK-8)法检测细胞存活率并计算出光甘草定的半抑制浓度。将体外培养的Hela细胞分别以0、2.5和5 μmol/L光甘草定处理后,采用Transwell小室检测细胞侵袭变化,流式细胞仪检测细胞凋亡和周期变化,免疫印迹法检测细胞中Wnt/β-连环蛋白（β-catenin）信号通路相关蛋白Wnt1、β-catenin、细胞周期蛋白D1（CyclinD1）、基质金属蛋白酶-2（MMP-2）和生存素（Survivin）的表达情况。结果:与对照（0 μmol/L）组相比,1、2.5、5、10和20 μmol/L 光甘草定处理组细胞存活率均明显降低（P<0.05）,且呈浓度依赖性;同时,光甘草定对Hela细胞的半抑制浓度为4.56 μmol/L。与对照（0 μmol/L）组相比,2.5和5 μmol/L光甘草定处理组中侵袭细胞数和细胞在S期与G2/M期的百分比以及细胞中Wnt1、β-catenin、CyclinD1、MMP-2、Survivin蛋白的表达水平均明显减少,而细胞凋亡率和细胞在G0/G1期百分比明显升高（P<0.05）,且5 μmol/L光甘草定处理组细胞的变化更为显著。结论:光甘草定可抑制Hela细胞增殖、侵袭并促进其凋亡,其作用机制可能与抑制Wnt/β-catenin信号通路的活化有关。     

NVP-BEZ235对肝癌HepG2细胞增殖、凋亡及侵袭转移的影响

目的探讨PI3K／Akt／mTOR双靶点抑制剂NVP-BEZ235在体外对肝癌HepG2细胞增殖、凋亡及侵袭转移的影响。方法 采用0、0.01、0.1、1.0μmol／L NVP-BEZ235 处理HepG2细胞,四甲基偶氮唑盐（MTT）比色法检测不同浓度NVP-BEZ235处理24、48、72和96h的增殖抑制率,流式细胞仪、Transwell侵袭实验、荧光定量PCR及免疫印迹检测不同浓度NVP-BEZ235处理48h后的细胞周期分布、穿膜细胞数及基质金属蛋白酶（MMP）-2的mRNA和蛋白水平。结果NVP-BEZ235可呈剂量和时间依赖的方式升高增殖抑制率（P＜0.05）;除0.01μmol／L处理24h的晚期凋亡率外,0.01、0.1、1.0μmol／L NVP-BEZ235处理24、48h的早、晚期凋亡率均高于0μmol／L（P＜0.05）;0.01、0.1、1.0μmol／L NVP-BEZ235处理48h的G0／G1期细胞比例高于0μmol／L,穿膜细胞数、MMP-2 mRNA和蛋白水平及S期和G2／M期细胞比例均低于0μmol／L（P＜0.05）,且各浓度间的差异均有统计学意义（P＜0.05）。结论NVP-BEZ235可抑制肝癌HepG2细胞增殖及侵袭转移,促进其凋亡和阻滞细胞在G0／G1期并降低MMP-2表达。     

紫杉醇通过抑制Wnt/β-catenin信号通路抑制鼻咽癌细胞增殖的实验研究

目的：探究紫杉醇对人鼻咽癌细胞株HONE1增殖、凋亡及对Wnt/β-catenin信号通路的影响。方法用终浓度为1、5、10、20 ng/ml的紫杉醇处理HONE1细胞,分别在培养0、12、24、48 h后,用CCK-8检测HONE1细胞的增殖情况。培养48 h后,用平板细胞克隆形成实验检测细胞克隆形成数;流式细胞术检测细胞凋亡情况;Western Blot检测细胞中Wnt/β-catenin信号通路关键蛋白Wnt4、β-catenin及凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax表达情况。用终浓度为10 ng/ml的紫杉醇及100 ng/ml的Wnt阻断剂DKK-1单独或共同处理HONE1细胞48 h后,用CCK-8和流式细胞术分别检测细胞增殖和凋亡情况。结果1、5、10、20 ng/ml的紫杉醇能够不同程度地抑制HONE1细胞的增殖,减少HONE1细胞的克隆形成数目,促进HONE1细胞发生凋亡,下调Wnt4、β-catenin和Bcl-2蛋白表达,上调Bax蛋白表达,与对照组相比差异均有统计学意义（P﹤0.05）;用DKK-1抑制Wnt/β-catenin信号通路能够增强紫杉醇对细胞增殖的抑制作用及对细胞凋亡的促进作用,与紫杉醇处理组相比差异有统计学意义（P﹤0.05）。结论紫杉醇能够抑制人鼻咽癌细胞株HONE1增殖,并促进其发生凋亡,作用机制可能与抑制Wnt/β-catenin信号通路相关。     

IWP-2对人肝癌Hep3B细胞增殖和凋亡的影响及其机制探讨

目的:研究Wnt/β-catenin抑制剂IWP-2对体外培养的人肝癌细胞Hep3B细胞增殖和凋亡的影响,并探讨其可能的作用机制。方法:用终浓度分别为0、20、40、80、160、320μmol/L的IWP-2作用于人肝癌Hep3B细胞,采用CCK-8法检测细胞的增殖抑制率,FCM法检测细胞周期分布与细胞凋亡率,Western blot法检测细胞凋亡蛋白的表达,Western blot法检测细胞中Cyclin D1和survivin蛋白表达的变化,实时定量RT-PCR法检测Cyclin D1和survivin mRNA表达的变化。结果:20~320μmol/L的IWP-2对细胞的增殖均有抑制作用,其抑制作用随IWP-2浓度的升高和作用时间的增长而增强,各组与对照组相比差异有统计学意义（P＜0.01）。FCM检测结果显示,IWP-2(20~320μmol/L)能够导致G0/G1期细胞比例上升,S期细胞比例下降;同时诱导细胞凋亡,凋亡率随IWP-2浓度的升高而上升,与对照组相比差异有统计学意义（P＜0.01）。IWP-2可引起caspase-3和caspase-7蛋白表达水平的升高,并且可下调肝癌细胞中Cyclin D1和survivin基因和蛋白的表达水平,呈明显的剂量依赖性。结论:IWP-2可抑制Hep3B细胞的增殖并诱导其凋亡,其机制可能与抑制Cyclin D1和survivin的表达有关。     

鹰嘴豆芽素A通过抑制Wnt/β-catenin信号通路抑制结肠癌细胞增殖迁移的可能机制

目的 观察鹰嘴豆芽素A(BCA)对结肠癌细胞增殖迁移的影响,并探讨可能机制。方法 取对数期人结肠癌HCT-116细胞,随机分为对照组、BCA组、SB216763[Wnt/β-连环蛋白(β-catenin)通路激活剂]组、联合组。对照组不做处理,BCA组加入BCA(40μmol/L),SB216763组中加入SB216763(20μmol/L),联合组加入BCA(40μmol/L)+SB216763(20μmol/L)。MTT法检测各组细胞增殖能力;划痕实验检测各组细胞迁移能力;血管拟态形成实验检测各组细胞血管新生能力;免疫印迹法检测各组细胞兔抗人糖原合成酶激酶3β(GSK-3β)、β-catenin蛋白表达量。结果 与对照组比较,BCA组24、48、72 h MTT实验吸光度值、迁移率、β-catenin蛋白表达量降低,血管数量/视野减少,GSK-3β蛋白表达量升高(P<0.05),SB216763组24、48、72 h MTT实验吸光度值、迁移率、β-catenin蛋白表达量升高,血管数量/视野增加,GSK-3β蛋白表达量降低(P<0.05);与BCA组比较,联合组24、...     

氯喹对MCF7细胞增殖的抑制作用及其机制

目的:探讨氯喹对乳腺癌细胞MCF7的生长抑制作用及其可能机制。方法:取对数生长期的MCF7细胞,用不同浓度氯喹(0、10、20、30、40 μmol/L)作用于MCF7细胞不同时间(0 h、24 h、48 h和72 h),通过MTT法检测细胞增殖情况。使用显微镜观察不同浓度氯喹作用MCF7细胞72 h后细胞形态变化。利用Western blot方法检测不同浓度氯喹作用MCF7细胞24 h后细胞内β-catenin蛋白和Cyclin D1蛋白变化情况。结果:与对照组比较,氯喹在一定浓度范围内对MCF7细胞有明显的抑制作用（P＜0.05）,细胞增殖活性随着剂量和时间增加而逐渐下降。显微镜下观察到氯喹处理MCF7细胞后,细胞数目减少而细胞碎片增加。Western blot结果显示氯喹处理MCF7细胞后,细胞内β-catenin和Cyclin D1蛋白表达出现下调（P＜0.05）。结论:氯喹对MCF7细胞增殖具有抑制作用,其机制可能与下调Wnt/β-catenin信号通路有关。     

姜黄素通过调节Wnt/β-catenin信号通路抑制结肠癌细胞上皮间质转化

[目的]探讨姜黄素对结肠癌细胞上皮间质转化(EMT)的作用机制。[方法]通过MTS检测姜黄素对HCT116细胞活性的影响;运用Western-blot、Real-time q PCR检测不同浓度姜黄素对HCT116细胞Wnt相关基因(β-catenin、TCF4)及EMT相关基因(E-cadherin和Vimentin)的表达情况。[结果 ]姜黄素能明显抑制HCT116细胞的增殖活性,在12h、24h和48h的IC50分别是61.98±2.68μmol/L,19.64±1.29μmol/L和17.84±1.25μmol/L。姜黄素能下调HCT116细胞内β-catenin和TCF4的表达水平;同时显著性上调E-cadherin及下调Vimentin表达水平,且呈剂量依赖性。Wnt信号通路活化剂能上调姜黄素处理后细胞内的β-catenin表达和下调E-cadherin表达水平。[结论]姜黄素通过抑制Wnt/β-catenin信号通路,从而抑制肿瘤细胞上皮间质转化。     

shRNA靶向沉默ZEB2表达通过Wnt/β-catenin信号通路降低肺癌细胞增殖活性的实验研究

目的:研究shRNA靶向沉默E盒结合锌指蛋白2（zinc finger E-box binding homeobox,ZEB2）表达对肺癌细胞增殖活性的影响。方法:用shRNA-ZEB2慢病毒和shRNA阴性对照慢病毒感染肺癌细胞,Real time PCR和Western blot检测沉默效果。MTT检测细胞增殖活性,流式细胞术检测细胞凋亡情况,Western blot检测细胞中激活型Caspase-3（Cleaved Caspase-3）、β-连环蛋白（β-catenin）、C-myc蛋白水平。用Wnt/β-catenin信号通路抑制剂处理沉默ZEB2的肺癌细胞,MTT检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot检测细胞中激活型Caspase-3、β-catenin、C-myc蛋白水平。结果:shRNA-ZEB2慢病毒可以明显沉默肺癌细胞中ZEB2的表达和转录,shRNA阴性对照慢病毒对肺癌细胞中ZEB2的表达没有影响。沉默ZEB2后的肺癌细胞增殖活性降低,细胞凋亡率升高,细胞中激活型Caspase-3蛋白水平升高,β-catenin、C-myc蛋白水平降低。Wnt/β-catenin信号通路抑制剂下调沉默ZEB2的肺癌细胞株中Wnt/β-catenin信号通路的激活水平,同时可以降低细胞存活率,诱导细胞凋亡,促进细胞中激活型Caspase-3的表达。结论:shRNA靶向沉默ZEB2表达通过Wnt/β-catenin信号通路降低肺癌细胞增殖活性。     

Carfilzomib联合CPT-11对胃癌SGC-7901细胞增殖、凋亡及NF-κB的影响

目的 探讨Carfilzomib（CFZ）联合伊立替康（CPT-11）对胃癌SGC-7901细胞增殖、凋亡及核因子（NF）-κB水平的影响。方法 采用噻唑蓝比色法检测不同浓度CFZ（0、0.1、1、10、50、100nmol／L）或CPT-11（0、2.5、5、10、50、100μmol／L）及100nmol／L CFZ联合100μmol／L CPT-11处理SGC-7901细胞24、48、72、96h的增殖抑制率,采用流式细胞仪Annexin V／PI双染流式细胞术检测CFZ联合CPT-11处理48h的凋亡率和细胞周期,流式细胞术检测细胞内活化caspase 3的表达,采用Western blotting检测CFZ联合CPT-11处理48h的NF-κB、IκB-α水平及PI3K／Akt信号通路的活化情况。结果 CFZ联合CPT-11或两者单用可呈时间和剂量依赖的方式升高SGC-7901细胞增殖抑制率,且CFZ联合CPT-11的增殖抑制率高于CFZ或CPT-11单用,差异有统计学意义（P＜0.05）;与CFZ或CPT-11单用相比,CFZ联合CPT-11处理48h的凋亡率、caspase-3活化率、S期细胞比例及IκB-α水平均升高, G2／M期细胞比例、NF-κB p65及p-Akt 水平均降低,差异均有统计学意义（P＜0.05）。结论 CFZ和CPT-11对胃癌SGC-7901细胞均有细胞毒性,如抑制增殖、诱导凋亡、下调NF-κB及抑制PI3K／Akt信号通路活化,CFZ联合CPT-11对胃癌细胞具有协同增效的作用。     

槲皮素对肺癌干细胞活性的影响

目的 探索槲皮素对A549肺癌干细胞活性及对Wnt/β-连环蛋白(β-catenin)和音猬因子(sonic hedgehog,SHH)信号通路的影响。方法 使用不同浓度槲皮素(0、5、10、25、50、100和200μmol/L)处理肺癌A549细胞24、48和72 h,MTT法检测细胞存活率。采用无血清培养法分离富集肺癌干细胞,观察槲皮素对A549悬浮细胞球体积、数量以及肺癌干细胞分子标志物表达的影响;流式细胞术检测细胞凋亡;蛋白质印迹法检测增殖凋亡相关指标以及Wnt/β-catenin和SHH信号通路关键分子的表达变化。结果 槲皮素能够显著抑制A549细胞活力,且呈现时间和浓度依赖性;与空白对照组相比,槲皮素均显著抑制A549成球能力和肺癌干细胞分子标志物[CD133、CD44和醛脱氢酶1A1(ALDH1A1)]表达;同时,肺癌干细胞增殖相关蛋白增殖细胞核抗原(PCNA)、细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)和B细胞白血病/淋巴瘤-2(Bcl2)水平显著下调,凋亡相关指标Bcl2相关蛋白X(Bax)和半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶-3(Cleaved Caspase 3)表达显著...     

蛋白激酶D抑制剂SD-208对非小细胞肺癌细胞增殖及凋亡的影响

目的 探讨蛋白激酶D抑制剂SD-208对非小细胞肺癌细胞增殖、凋亡及细胞周期的影响。方法 采用5、10、20、30 μmol／L SD-208处理非小细胞肺癌细胞A549（设不加SD-208仅添加完全培养基组为对照组）,分别在24、48、72 h 3个不同刺激时间点应用四甲基偶氮唑盐比色（MTT）法检测A549细胞的吸光值并计算增殖抑制率;膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素（Annexin V-FITC）和碘化丙啶（PI）双染色法结合流式细胞术检测不同浓度SD-208处理A549细胞24、48 h后的细胞凋亡情况,PI染色法流式细胞仪检测分析不同浓度SD-208处理A549细胞48 h后细胞周期时相分布情况;Western blotting检测不同浓度SD-208处理48 h后的细胞周期蛋白A（Cyclin A）、Cyclin D1、Cyclin E、细胞周期蛋白依赖性激酶4（CDK4）和p16蛋白的表达水平。结果 SD-208 可抑制A549细胞的增殖,且呈剂量和时间依赖性（P＜0.05）;SD-208处理后A549细胞的凋亡率及G0／G1期细胞比例均高于对照组,而S、G2／M期细胞比例均低于对照组,各浓度间的差异均有统计学意义（P＜0.05）;与对照组比较,SD-208处理后的Cyclin D1和CDK4蛋白水平降低,p16蛋白水平升高,差异均有统计学意义（P＜0.05）。SD-208处理对A549细胞Cyclin A和Cyclin E蛋白水平无影响,与对照组比较差异无统计学意义（P＞0.05）。结论 SD-208可抑制A549细胞增殖并诱导细胞凋亡及G0／G1期阻滞,其机制可能与其影响细胞周期及相关调控蛋白水平有关。     

吗啡联合顺铂对卵巢癌细胞Skov3增殖、凋亡及侵袭转移的影响

目的 探讨吗啡（Mor）联合顺铂（DDP）对人卵巢癌Skov3细胞增殖、凋亡及侵袭转移的影响。方法 采用MTT法观察不同浓度Mor（10、20、50、100、200 μmol／L）和DDP（1、2、5、10、20 mg／L）作用于Skov3细胞24、48、72、96 h后的增殖抑制率,筛选适合的浓度进行后续功能学研究。取对数生长期Skov3细胞分为4组：Mor（200 μmol／L）组、DDP（20 mg/L）组、Mor+DDP（200 μmol／L Mor+20 mg/L DDP）组和未加药对照组,分别采用流式细胞仪和实时定量PCR检测各组处理48 h的细胞凋亡率及凋亡相关基因（Bax、Bcl-2和caspase-3）的mRNA水平,采用Transwell试验和Western blotting检测各组处理48 h后穿膜细胞数和侵袭相关蛋白（MMP-2、MMP-9、TIMP-1和TIMP-2）水平。结果 随Mor（10～200 μmol／L）和DDP（1～20 mg／L）浓度增加,Skov3细胞的增殖能力受抑制,且抑制效应呈浓度和时间依赖方式;Mor+DDP组处理24、48、72、96 h后的增殖抑制率高于Mor组、DDP组和对照组（P＜0.05）。与对照组相比,Mor、DDP和Mor+DDP组的细胞凋亡率、caspase-3活化率、Bax mRNA、caspase-3 mRNA、TIMP-1和TIMP-2水平均升高,Bcl-2 mRNA、穿膜细胞数、MMP-2和MMP-9水平均降低,差异有统计学意义（P＜0.05）;Mor+DDP组的上述指标水平均优于Mor组和DDP组（P＜0.05）。结论 Mor和DDP对Skov3细胞均有细胞毒性,能抑制增殖及侵袭转移并诱导凋亡,且Mor联合DDP应用的抑制作用增强。     

香加皮杠柳苷通过抑制Wnt／β-catenin信号通路诱导结肠癌细胞SW480凋亡

背景与目的：Wnt／β-catenin信号通路在人类肿瘤尤其在大肠癌的发生发展中起着重要作用。本研究分析了香加皮杠柳苷（periplocin extracted fromcortex periplocae,CPP）对人结肠癌细胞SW480增殖的抑制作用,及对Wnt／β-catenin信号通路的调控作用。方法：MTT法检测CPP对SW480细胞增殖的影响,流式细胞技术检测细胞周期的变化和凋亡。Western blot法检测CPP处理组与对照组细胞总蛋白、细胞浆蛋白及细胞核蛋白中β-catenin表达变化,电泳迁移率改变法分析CPP作用后SW480细胞核TCF复合物与其特异性DNA结合序列结合能力变化。半定量RT—PCR法检测CPP作用后细胞中β-catenin、survivin、c—myc和cyclin D1mRNA的表达。结果：CPP明显抑制SW480细胞增殖（P〈0．01）,并呈时间和浓度依赖性;0．5μg／mLCPP可将SW480细胞阻滞于G0／G1期,并诱导细胞凋亡（P〈0．05）。CPP作用后SW480细胞总蛋白、胞浆蛋白及细胞核蛋白中的B—catenin表达均明显降低（P〈0．01）,细胞核中TCF复合物与其特异性DNA结合序列结合能力受到抑制,其下游靶基因mRNA表达水平下降（P〈0．01）,而β-cateninmRNA表达未见明显改变。结论：CPP可明显抑制SW480细胞增殖并诱导细胞凋亡,其作用机制与抑制细胞Wnt／β-catenin信号转导通路有关。