基于RNA干扰技术探讨消岩汤对肺腺癌A549细胞凋亡的影响

目的 分析消岩汤干预下sh-survivin对人肺腺癌A549细胞增殖及凋亡的影响。方法 选择人肺腺癌A549细胞, 采用中药复方进行干预及shRNA进行转染, 将转染后的细胞分组, 通过MTT法观察消岩汤对A549细胞生长的影响, 免疫组化法检测survivin蛋白的表达, 流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果 消岩汤能有效地抑制人肺腺癌A549的细胞增殖, 运用消岩汤作用细胞24 h后, 侵袭的细胞数明显减少, 该方作用48 h后可以诱导肿瘤细胞凋亡;消岩汤中剂量组与转染sh-survivin组抑制率相当, 不同剂量的消岩汤均可协同sh-survivin使肺癌细胞凋亡率增加。结论 消岩汤可以通过干预肿瘤细胞凋亡抑制蛋白的表达而有效抑制肿瘤的发展。     

miR-552通过PTEN/AKT信号通路促进非小细胞肺癌A549细胞的恶性生物学行为

目的 探讨miR-552通过调控PTEN/AKT信号通路促进人非小细胞肺癌A549细胞的恶性生物学行为及其相关机制。方法 通过qRT-PCR检测人肺癌组织样本和人非小细胞肺癌A549细胞系中miR-552、PTEN mRNA的表达情况;通过Western blotting检测PTEN、AKT、p-AKT蛋白的表达情况;通过CCK-8检测miR-552表达对A549细胞增殖能力的影响;通过Transwell小室检测miR-552表达对A549细胞迁移和侵袭能力的影响;通过流式细胞术检测miR-552表达对A549细胞凋亡能力的影响。结果 miR-552在肺癌组织和A549细胞中的表达显著上调。过表达miR-552可显著促进A549细胞的增殖、迁移和侵袭,并抑制细胞凋亡,而抑制其表达则结果相反。与癌旁组织相比,肺癌组织中PTEN表达显著下调。过表达miR-552可下调PTEN蛋白表达,上调p-AKT蛋白表达,对AKT蛋白无影响,而抑制其表达则结果相反。结论 miR-552可能通过PTEN/AKT信号通路促进人非小细胞肺癌A549细胞的恶性生物学行为。     

川楝素下调ATF2蛋白的表达增强顺铂对肺癌细胞的凋亡诱导活性研究

目的 探讨川楝素辅助治疗是否能增强顺铂对肺癌细胞的凋亡诱导活性并研究其机制。方法 MTT法检测肺癌细胞系A549在顺铂和川楝素处理下的细胞活力。Western blot试验检测顺铂和川楝素对A549细胞ATF2磷酸化水平,Bcl-xl蛋白表达水平、细胞色素c释放水平、caspase-9和caspase-3活化水平的影响。流式细胞术检测A549细胞在顺铂和川楝素联合处理下的细胞凋亡率。结果 MTT试验结果显示,川楝素辅助治疗能明显提降低顺铂对A549的IC₅₀。Western blot试验结果显示川楝素处理能显著抑制A549细胞ATF2的表达和磷酸化。MTT试验结果显示,转染ATF2表达质粒显著抑制川楝素对顺铂的协同抗肺癌活性。Western blot和流式细胞试验结果显示,川楝素能显著抑制A549细胞中顺铂诱导的Bcl-xl表达水平的上调,进而促进A549细胞中顺铂诱导的细胞色素c的释放、caspase-9和caspase-3活化及A549细胞的凋亡水平。结论 川楝素通过抑制ATF2蛋白的磷酸化增强顺铂对肺癌细胞的凋亡诱导活性。     

灯盏花乙素对非小细胞肺癌细胞JAK/STAT信号通路的影响

目的 研究灯盏花乙素对非小细胞肺癌细胞JAK/STAT信号通路及其凋亡机制的影响。方法 培养非小细胞肺癌A549细胞,经不同浓度灯盏花乙素处理24 h后收集细胞。采用MTT法观察细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡;RT-qPCR法检测JAK2,STAT3,Pim1和Bcl-2的mRNA表达情况;Western blot检测JAK2和STAT3蛋白表达水平。结果 MTT法和流式细胞术结果显示,灯盏花乙素能降低A549细胞的存活率,促进其凋亡,并呈剂量依赖效应;RT-qPCR和Western blot结果显示,与对照组比较,灯盏花乙素各组JAK2,STAT3,Pim1和Bcl-2的mRNA表达降低,JAK2和STAT3蛋白水平下降,且与加入的灯盏花乙素浓度成反比。结论 灯盏花乙素可以促进非小细胞肺癌A549细胞凋亡,其机制可能是通过抑制JAK/STAT信号转导通路的激活,减少JAK2和STAT3蛋白的表达。     

YM-155协同顺铂杀伤非小细胞肺癌细胞的机制研究

目的 探讨survivin小分子抑制剂YM-155对非小细胞肺癌顺铂化疗的协同治疗作用并研究其机制。方法 MTT法检测YM-155和顺铂对非小细胞肺癌细胞系A549的杀伤活性。Western blot试验检测A549细胞中survivin、细胞色素C、凋亡诱导因子、caspase-9和caspase-3的表达水平。流式细胞术检测A549细胞的线粒体膜电位和凋亡率。结果 YM-155能增强顺铂的抗肺癌活性,显著降低顺铂对A549细胞的半抑制浓度（IC₅₀）。YM-155处理能显著抑制A549细胞中survivin的表达。顺铂+YM-155组A549细胞的线粒体膜电位明显低于顺铂单治疗组。顺铂+YM-155组A549细胞的凋亡率,细胞色素C、凋亡诱导因子释放水平以及caspase-9、caspase-3活化水平均明显高于顺铂单治疗组。顺铂+YM-155+survivin质粒组A549细胞的相对细胞活力和线粒体膜电位明显高于顺铂+YM-155组。顺铂+YM-155+survivin质粒组A549细胞的凋亡率、细胞色素C、凋亡诱导因子释放水平以及caspase-9、caspase-3活化水平均明显低于顺铂+YM-155组。结论 YM-155通过抑制survivin的表达能够增强顺铂对非小细胞肺癌细胞线粒体途径凋亡的诱导活性。     

白藜芦醇诱导肺腺癌A549细胞凋亡的作用机制

目的 探讨白藜芦醇（Res）对肺腺癌A549细胞凋亡的作用及其机制。方法 常规培养肺腺癌A549细胞（购于中国科学院细胞生物学研究所）至对数生长期,加入不同浓度的Res （终浓度分别为3、10、30、60、100、200、300 mg/L）,以Res 0 mg/L为对照组,采用噻唑蓝（MTT）比色法检测不同浓度的Res对A549细胞的吸光度值,计算细胞的生长抑制率;采用Annexin-Ⅴ/PI双染法检测Res对肺腺癌A549细胞凋亡的影响;采用逆转录酶-聚合酶联反应（RT-PCR）检测端粒酶mRNA和β-actin mRNA的相对活性。结果 MTT检测显示Res呈剂量依赖性抑制A549细胞增殖。与对照组比较,不同浓度（10、30、100 mg/L） Res可抑制A549细胞增殖;Annexin-Ⅴ/PI检测结果显示,与对照组比较,随着Res剂量（10、30、100 mg/L）的增加,A549细胞的凋亡数升高,差异有统计学意义（P<0.05）;与对照组比较,不同剂量Res （10、30、100 mg/L）诱导端粒酶mRNA相对含量明显下降,差异有统计学意义（P<0.05）。结论 Res可诱导肺腺癌A549细胞凋亡,其机制可能与抑制端粒酶活性有关。     

去甲斑蝥素通过下调c-met基因逆转肺癌A549/DDP细胞顺铂耐药的研究

目的 本研究通过去甲斑蝥素（NCTD）作用于肺癌顺铂（DDP）耐药细胞A549/DDP,探讨其对DDP耐药的逆转作用及其相关机制。方法 应用CCK-8法检测NCTD对A549和A549/DDP细胞活力的影响、DDP对A549细胞和A549/DDP的半数抑制浓度（IC₅₀）、NCTD联合不同浓度DDP对A549/DDP细胞DDP耐药性的影响;细胞克隆形成实验检测NCTD、DDP单给药及NCTD与DDP联合用药对A549/DDP细胞克隆形成率的影响;Western blotting法检测A549/DDP和A549细胞中c-met表达,以及NCTD、DDP单给药及NCTD与DDP联合用药对A549/DDP细胞内c-met蛋白表达的影响。结果 NCTD剂量相关性地抑制A549和A549/DDP细胞的活力,选择抑制率小于10%的最大NCTD浓度即10 μmol/L作为逆转浓度;DDP作用于A549/DDP和A549细胞的IC₅₀分别为15.11和5.04 μmol/L,差异有统计学意义（P<0.01）;A549/DDP细胞中c-met表达明显高于A549细胞;用NCTD（10 μmol/L）处理后,DDP对A549/DDP细胞的IC₅₀从15.11 μmol/L减少到8.06 μmol/L,差异显著（P<0.01）;与DDP单给药组比较,NCTD联合DDP作用明显降低A549/DDP细胞克隆形成率（P<0.01）;Westernblotting结果显示,NCTD联合DDP作用明显抑制顺铂耐药细胞A549/DDP细胞中c-met蛋白的表达,单用DDP或NCTD与对照组比较差异不明显。结论 NCTD与DDP联用可逆转A549/DDP细胞对DDP耐药,其机制可能与抑制c-met蛋白表达有关。     

氧化苦参碱对HepG-2与A549细胞增殖抑制与促凋亡活性比较研究

目的 研究氧化苦参碱在体外对人肺癌细胞（A549）、人肝癌细胞（HepG-2）增殖抑制与促凋亡活性,并进行比较。方法 通过MTT比色法和生长曲线法比较氧化苦参碱对两种肿瘤细胞增殖活性的抑制作用,采用HE染色、Hoechst 33258荧光染色和透射电镜3种方法比较氧化苦参碱对两种肿瘤细胞形态的影响及促凋亡作用。结果 MTT结果显示,与对照组比较,氧化苦参碱200、400、800 μg/mL浓度组A549、HepG-2细胞存活率均显著降低（P<0.05、0.01）,半数抑制浓度（IC₅₀）分别为1 055.45、774.11 μg/mL;生长曲线结果显示,与对照组比较,氧化苦参碱组HepG-2细胞培养第4、5天及A549细胞第5天细胞数显著下降（P<0.05、0.01）;在HE染色、Hoechst 33258荧光染色和透射电镜形态学观察实验中,氧化苦参碱对HepG-2细胞作用较明显,细胞数量明显减少,同时出现细胞绒毛减少、细胞核变小变圆、固缩等明显的细胞凋亡形态学特征,对A549细胞形态的影响较弱。结论 氧化苦参碱具有抑制肿瘤细胞增殖和促进凋亡的作用,对HepG-2作用较强,对A549作用较弱,具有一定的特异性。     

基于代谢组学的柠檬烯抗非小细胞肺癌作用机制研究

目的 采用非靶向代谢组学等方法，探究柠檬烯抑制非小细胞肺癌增殖的作用机制。方法 以肺癌A549细胞为研究对象，通过CCK-8法测定柠檬烯抑制A549细胞活力及IC₅₀；通过集落形成、流式细胞检测、铁含量测定及线粒体染色等实验，分别评价柠檬烯的体外抗肺癌及诱导铁死亡作用；代谢组学分析发现柠檬烯的潜在作用通路；最后采用Western blotting对相关通路主要蛋白进行验证。结果 与对照组相比，柠檬烯给药组可以显著抑制A549细胞的增殖及集落的形成，且呈剂量依赖性；光学显微镜观察发现，柠檬烯给药后A549细胞出现脱落现象，并可显著改变其形态；同时柠檬烯具有诱导A549细胞凋亡作用，并阻滞在G₀-G₁期；共聚焦显微镜发现柠檬烯作用后，A549细胞线粒体荧光减弱，同时细胞内铁含量亦显著增加，呈现典型的铁死亡表现；代谢组学研究发现谷胱甘肽(glutathione，GSH)代谢、精氨酸生物合成、D-谷氨酰胺和D-谷氨酸代谢及半胱氨酸和蛋氨酸代谢等多条差异代谢通路，这些通路与细胞内GSH合成密切相关；Western blotting实验发现，柠檬烯给药后细胞中SLC40A1、SLC7A11(xCT)及GPX4蛋白含量显著减少。结论 柠檬烯抗肺癌作用机制可能与降低肺癌细胞中GSH合成及增加Fe²⁺含量诱导其铁死亡有关。     

仙鹤草水提液对胰腺癌细胞BXPC-3和PANC-1增殖的抑制作用研究

目的 研究仙鹤草水提液对胰腺癌细胞BXPC-3和PANC-1增殖的抑制作用。方法 SRB法检测不同浓度仙鹤草水提液对胰腺癌细胞BXPC-3（仙鹤草水提液浓度：0.15,0.3,0.6,1.2,2.4,4.8 mg·mL^-1）和PANC-1（仙鹤草水提液浓度：0.125,0.25,0.5,1.0,2.0,4.0 mg·mL^-1）分别作用24,48,72 h后的增殖抑制率;流式细胞仪检测0.5,1,2 mg·mL^-1仙鹤草水提液对胰腺癌细胞BXPC-3周期分布的影响;Annexin V-FITC/PI双染法检测1,2,4,8 mg·mL^-1仙鹤草水提液对BXPC-3细胞凋亡的影响。结果 仙鹤草水提液可显著抑制BXPC-3和PANC-1细胞的增殖,并呈时间和浓度依赖性;仙鹤草水提液可显著增加BXPC-3细胞停滞在G1期的百分率,促进BXPC-3细胞的早期凋亡和晚期凋亡。结论 仙鹤草水提液可通过或部分通过诱导胰腺癌细胞BXPC-3和PANC-1的凋亡,抑制胰腺癌细胞的增殖,发挥抗胰腺癌作用。     

4种中药制剂对人肺癌A549细胞增殖的影响

目的　研究人肺癌A5 49细胞和乳腺癌MCF7细胞对市售 4种中药制剂 (斑蟊酸钠、苦参素、华蟾素和川芎素 )的敏感性 ,以及川芎素影响肺癌A5 49细胞增殖的可能机制。方法　采用MTT法测定药物对细胞增殖的抑制率和药物间的协同抑制作用 ;流式细胞法测定细胞周期。结果　4种中药对乳腺癌MCF7细胞的增殖均有不同程度的抑制作用 ,但只有川芎素可明显抑制肺癌A5 49细胞的增殖 ;川芎素与 3种化疗药物联合对A5 49细胞有协同作用 ;川芎素可诱导A5 49细胞凋亡。结论　斑蟊酸钠、苦参素和华蟾素对不同肿瘤细胞的抑制效果差异很大 ;川芎素不仅有抑制肿瘤细胞增殖的作用 ,还与化疗药物有协同效果 ;川芎素抑制A5 49细胞增殖的机制与其诱导细胞凋亡有关。     

Impact of siRNA targeting pirh2 on proliferation and cell cycle control of the lung adenocarcinoma cell line A549

The aim of this study was to investigate the role of pirh2 (p53-induced RING-H2) protein in the proliferation, apoptosis and cell cycle control of the lung cancer cell line A549. Pirh2 expression was detected by immunofluorescence, Western blot analysis and real-time polymerase chain reaction (PCR). Cell proliferation was assessed by cell counting kit-8 (CCK-8). Cell cycle control and apoptosis were analyzed by flow cytometry. The results showed that pirh2 was expressed in the cytoplasm of A549 cells. The inhibition of pirh2 expression by siRNA (psiRNA-pirh2) resulted in reduced cell proliferation and increased apoptosis. In addition, the number of G₀/G₁ phase cells was increased but G₂/M cells were not affected significantly. Taken together, the inhibition of pirh2 expression in the lung adenocarcinoma cell line A549 resulted in reduced tumor cell growth via the inhibition of cell proliferation, the activation of apoptosis and the interruption of cell cycle transition.     

EGCG通过调控DNA结合蛋白Ku70促进肺癌细胞凋亡

目的 观察表没食子儿茶素没食子酸酯[（-）-epigallocatechin-3-gallate,EGCG]对人肺腺癌细胞株的凋亡诱导作用,探讨Ku70在EGCG促肺癌细胞凋亡中的作用机制。方法 构建pSliencer 4.1-CMV-shKu70质粒干扰Ku70的表达,建立细胞系;MTT法和Annexin V/PI双染色流式细胞术检测细胞的增殖及凋亡;Western blot法检测Bax、caspase-3（17 kDa）、Ku70蛋白的表达;免疫共沉淀法检测Ku70和Bax之间的相互作用。结果 EGCG可明显抑制A549的增殖（P<0.01）,并诱导其凋亡（P<0.05）,上调Bax、caspase-3表达,下调Ku70表达。抑制Ku70的表达后,EGCG对A549细胞的抑制增殖和促进凋亡作用更加明显,进一步显著上调caspase-3的表达（P<0.05）,但是Bax的表达无明显变化;同时EGCG可以减弱Ku70-Bax之间的相互作用（P<0.05）。结论 EGCG可抑制人肺腺癌细胞增殖及诱导细胞凋亡,其机制与抑制Ku70的表达,抑制Ku70-Bax之间的相互作用,激活Bax,启动caspase级联反应有关。     

活性氧介导5, 7- 二甲氧基黄酮增敏TRAIL 诱导肺癌细胞凋亡

目的研究5,7-二甲氧基黄酮(5,7-DMF)是否能增强肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)诱导的人肺癌细胞凋亡及其作用机制。方法体外培养人肺癌A549细胞。MTT法测定细胞增殖活性;碘化丙啶(PI)染色流式细胞术(FCM)和ELISA试剂盒检测细胞凋亡;DCFH-DA荧光标记FCM检测细胞内活性氧(ROS)水平。结果 5,7-DMF能增强TRAIL诱导的A549细胞凋亡和ROS生成。N-乙酰半胱氨酸能有效阻断5,7-DMF与TRAIL所诱导的A549细胞凋亡及ROS生成。结论 5,7-DMF通过促进A549细胞内活性氧生成从而增强TRAIL诱导的凋亡。     

LINC00094靶向miR-19b对非小细胞肺癌增殖、侵袭的抑制作用及其分子机制

目的 探讨LINC00094对非小细胞肺癌A549细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭的影响及其作用机制。方法 将pcDNA3.1、pcDNA3.1-LINC00094、si-NC、si-LINC00094转染至非小细胞肺癌A549细胞中;将pcDNA3.1-LINC00094分别与miR-NC、miR-19b转染至A549细胞中,分别记为pcDNA3.1-LINC00094+miR-NC组、pcDNA3.1-LINC00094+miR-19b组。采用实时荧光定量PCR检测LINC00094和miR-19b表达水平;采用蛋白质印迹法检测细胞周期蛋白和凋亡蛋白表达水平;采用四甲基偶氮唑盐比色法、流式细胞术和Transwell分别检测细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭能力;双荧光素酶报告实验检测LINC00094与miR-19b的靶向关系。结果 LINC00094在肺癌组织中低表达。过表达LINC00094可降低A549细胞的生存率,并抑制细胞迁移、侵袭（P<0.05）,且伴有相关蛋白表达水平的改变（P<0.05）。LINC00094靶向调控miR-19b,过表达miR-19b可逆转LINC00...