丹瓜方对ApoE－/－糖尿病小鼠肝脏AdipoR2表达的影响

目的研究祛瘀化痰的复方中药丹瓜方对载脂蛋白E基因敲除(Apo E-/-)糖尿病小鼠肝脏脂联素受体(AdipoR2)表达及其对肝脏的影响。方法将8周龄的Apo E-/-小鼠,随机分为模型对照组、丹瓜方组、吡格列酮组和联合治疗组,另设同龄C57BL/6J小鼠为C57组,4组Apo E-/-小鼠均注射链脲佐菌素(STZ)诱导糖尿病模型,并分别予以相应的药物干预,12周后,观察丹瓜方对糖脂代谢的影响,并分别检测肝脏AdipoR2 mRNA及蛋白表达,用HE、红油O脂肪染色、Masson等观察肝脏组织形态学改变。结果丹瓜方组Apo E-/-小鼠的空腹血糖(FBG)、总胆固醇(TC)和低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)较模型组显著降低;丹瓜方组Apo E-/-小鼠肝脏AdipoR2蛋白及mRNA表达明显高于模型对照组(P0.01),并优于吡格列酮组(P0.05,P0.01);丹瓜方组在改善糖尿病Apo E-/-小鼠肝细胞脂肪异位沉积和纤维化等病理改变上明显优于吡格列酮组和联合治疗组。结论丹瓜方能够明显地改善肝脏脂代谢,减轻肝脏脂肪沉积和纤维化,可能与丹瓜方促进肝脏AdipoR2的表达有关。     

丹瓜方对Apo E－/－糖尿病模型小鼠糖脂代谢及血管细胞黏附分子-1及mRNA表达水平的影响

目的研究丹瓜方对载脂蛋白E基因敲除（ApoE^-/-）小鼠复合糖尿病模型糖脂代谢指标、血管细胞黏附分子-1（vascular cell adhesion molecule-1,VCAM-1）及其mRNA表达水平的影响,探讨丹瓜方防治糖尿病合并血管病变的部分机制。方法 Apo E^-/-小鼠皮下注射链脲佐菌素（STZ）制备糖尿病模型。将32只成模鼠按照体重分层,再按血糖水平以随机数字表法分为模型组[无菌水（SW）,15 m L/（kg·d）]、丹瓜方组[丹瓜方（DG）,15 m L/（kg·d）]、联合用药组[吡格列酮（PG）,4.3 mg/（kg·d）加DG1 5 mL/（kg·d）]、吡格列酮组[PG,4.3 mg/（kg·d）],每组8只。选血糖正常的8只同龄同品系C 57小鼠作为对照组。灌胃干预12周。监测各组小鼠空腹血糖（FBG）、体重、摄食量及饮水量;测量皮温及鼠尾长度,并通过肉眼观察肝脂肪变程度;测定各组小鼠血清HbA1 c、TC、LDL-C水平,采用放射免疫法测定ET-1,生化法—硝酸还原酶法测定NO,E LISA法测定VCAM-1,应用实时荧光定量PCR（qPCR）检测肾组织VCAM-1 mRNA表达。结果与对照组比较,模型组小鼠体重及摄食量减少,饮水量增加（P〈0.05）,且血糖值曲线全程高于对照组（P〈0.01）。与模型组比较,丹瓜方组小鼠体重增量、HbA1 c、TC、LDL-C、ET-1、VCAM-1水平显著降低,皮温升高（P〈0.05或P〈0.01）。与吡格列酮组比较,丹瓜方组小鼠体重、体重增量、FBG、TC及LDL-C水平降低（P〈0.05或P〈0.01）、饮水量和摄食量增加,鼠尾较长（P〈0.01）;各组小鼠NO水平比较,差异无统计学意义。与对照组比较,模型组肝脂肪变程度较重（P〈0.05）;与模型组及吡格列酮组比较,丹瓜方组脂肪变程度明显减轻（P〈0.05,P〈0.01）,吡格列酮组肝脂肪变程度重于模型组（P〈0.01）,而联合用药组肝脂肪变程度处于丹瓜方组和吡格列酮组之间。丹瓜方组VCAM-1 mRNA的表达显著低于模型组（P〈0.01）,且低于联合用     

丹瓜方干预Apo E^-/-糖尿病模型小鼠脑组织IGF-1表达研究

目的探讨丹瓜方对Apo E^-/-糖尿病模型小鼠脑组织胰岛素样生长因子-1(insulin-like growth factor-1,IGF-1)表达水平的影响,以探究丹瓜方防治糖尿病脑病的部分机制。方法以链脲佐菌素(STZ)对Apo E^-/-小鼠塑造糖尿病模型。将成模后的小鼠按体质量分层,依照随机数字表随机分为模型组、丹瓜方组、吡格列酮组、联合组,每组8只。选取血糖正常的同龄同品系C57小鼠8只作为对照组。分组灌胃干预12周。ELISA法测定IGF-1表达。结果与C57组IGF-1(19.89±0.95)ng/m L比较,其余各组均明显降低(P<0.01);丹瓜方组(14.31±0.99)ng/m L和联合用药组IGF-1水平(11.58±0.92)ng/m L明显高于模型组(7.25±0.42)ng/m L;丹瓜方组IGF-1水平明显高于联合用药组(P<0.01)。结论通过适度提升糖尿病鼠脑组织中IGF-1表达,可能是丹瓜方防治糖尿病脑病的部分机制。     

丹瓜方调控Apo E-/-糖尿病模型小鼠肾脏p38-MAPK、MCP-1、FN蛋白及mRNA表达研究

目的观察丹瓜方对载脂蛋白E基因敲除(Apo E-/-)小鼠复合糖尿病模型肾组织p38丝裂原活化蛋白激酶(p38-MAPK)、单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)、纤维连接蛋白(FN)及其mRNA表达的影响。方法通过注射链脲佐菌素(STZ)制备Apo E~(-/-)小鼠糖尿病模型。将32只糖尿病成模鼠按照体重分层,再按血糖水平以随机数字表法分为模型组[无菌水,15 mL/(kg·d)]、丹瓜方组[丹瓜方,15 mL/(kg·d)]、吡格列酮组[4.3 mg/(kg·d)]、联合用药组[吡格列酮,4.3 mg/(kg·d)+丹瓜方15 mL/(kg·d)],每组各8只。选血糖正常的8只同龄同品系C 57小鼠作为对照组。灌胃干预12周。检测TC、LDL-C、FPG及尿微量白蛋白(UmAlb)水平。以化学荧光法测肾组织活性氧族(ROS),比色法测定超氧化物歧化酶(SOD)、还原型谷胱甘肽(GSH),Western blot检测p38-MAPK、FN蛋白表达,ELISA法测定MCP-1表达,实时荧光定量PCR(q PCR)检测p38-MAPK、MCP-1、FN的mRNA表达。结果与对照组比较,模型组TC、LDL-C、FPG、HbA1c、UmAlb、ROS、GSH水平及p38-MAPK、MCP-1、FN蛋白表达水平升高,SOD水平降低(P0.05,P0.01)。与模型组比较,丹瓜方组TC、LDL-C、FPG、HbA1C、UmAlb、ROS、GSH及p38-MAPK、MCP-1、FN mRNA和蛋白表达水平降低,吡格列酮组HbA1C、UmAlb、ROS、GSH水平、p38-MAPK mRNA和蛋白表达水平及联合组FPG、HbA1c、UmAlb、ROS、GSH水平、p38-MAPK、FN mRNA和蛋白表达水平降低(P0.05,P0.01);同时丹瓜方组SOD水平升高(P0.01)。与吡格列酮组比较,丹瓜方组TC、LDL-C、UmAlb水平、p38-MAPK、MCP-1、FN蛋白表达降低,SOD水平、MCP-1 mRNA表达升高(P0.05,P0.01)。结论丹瓜方可调节复合糖尿病模型糖脂代谢及氧化应激,调控p38-MAPK、MCP-1、FN及其mRNA表达,有益于减轻糖尿病的肾脏损害。     

左归降糖舒心方对糖尿病心肌病MKR鼠心肌细胞损伤和凋亡的影响＊

目的 观察左归降糖舒心方对糖尿病心肌病（Diabetic cardiomyopathy， DCM）模型鼠心肌细胞损伤和凋亡的影响，并探讨其作用机制。方法 以转基因2型糖尿病小鼠（MKR鼠）为实验对象，通过链脲菌素（streptozotocin， STZ）腹腔注射+持续高脂喂饲建立DCM模型，分为模型组、中药组、阳性药物组，另设C57小鼠为空白对照组。中药组给予左归降糖舒心方14.27 g生药/（kg·天）灌胃，阳性药物组给予二甲双胍250 mg/（kg·天）+依那普利4.5 mg/（kg·天）灌胃，连续给药4周。采用电化学法血糖仪测定空腹血糖（fasting blood glucose， FBG），光镜和透射电镜观察小鼠心肌组织形态学变化，ELISA法检测血清心肌肌钙蛋白I（cardiac troponin I， cTnI）、乳酸脱氢酶（lactic dehydrogenase， LDH）水平，免疫组化法检测I型胶原蛋白（Collagen-I）、III型胶原蛋白（Collagen-III）、Bcl-2相关X蛋白（Bcl-2 associated X protein， Bax）、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-9（Caspase-9）、B淋巴细胞瘤-2基因（B-cell lymphoma-2， Bcl-2）的蛋白表达，TUNEL法检测心肌细胞凋亡。结果 模型组FBG较空白对照组显著升高，经左归降糖舒心方干预后明显降低（P<0.01）。与模型组比较，中药组和阳性药物组的心肌组织病理形态明显改善，Collagen-I、Collagen-III蛋白表达减弱（P<0.01），血清cTnI、LDH水平明显降低（P<0.01），细胞凋亡阳性表达减弱（P<0.01），Bax、Caspase-9表达减弱（P<0.01），Bcl-2表达增强（P<0.01）。中药组下调Collagen-I和Collagen-III表达、减少心肌细胞凋亡、下调Bax和Caspase-9表达等作用弱于阳性药物组（P<0.01），但上调Bcl-2表达的作用强于阳性药物组（P<0.01）。结论 左归降糖舒心方对糖尿病心肌病MKR鼠的心肌细胞损伤和凋亡具有保护作用，其作用机制可能与降糖、改善心肌纤维化、抑制促凋亡因子Bax和Caspase-9表达、促进抗凋亡因子Bcl-2表达等有关。     

脑泰通组方对局灶性脑缺血再灌注大鼠模型的影响及保护机制

目的：观察脑泰通组方对局灶性脑缺血再灌注大鼠模型的影响及保护机制。方法：构建局灶性脑缺血再灌注大鼠模型,成模后随机分为模型对照组、阳性药物组、中药组、联合用药组,另选取健康斯泼累格·多雷（SD）大鼠作为假手术组。观察并评估各组大鼠的美国国立卫生研究院卒中量表（NIHSS）评分、脑组织含水量、脑梗死体积百分比,免疫组织化学法检测脑组织Bcl-2相关X蛋白（Bax）、B细胞淋巴瘤-2（Bcl-2）的平均光密度值,蛋白质免疫印迹法、实时定量PCR（QT-PCR）检测脑组织叉头框转录因子3a（FoxO3a）基因、低氧诱导因子-1α（HIF-1α）、核因子κB（NF-κB）、脑源性神经营养因子（BDNF）蛋白及mRNA的表达水平。结果：与假手术组比较,模型对照组NIHSS评分,脑组织含水量,脑组织缺血体积百分比,脑组织FoxO3a、HIF-1α、NF-κB、BDNF蛋白和mRNA的表达水平,Bax、Bcl-2平均光密度值以及Bax/Bcl-2值均显著升高（均P<0.05）;与模型对照组比较,药物干预各组的NIHSS评分、脑组织含水量、脑梗死体积百分比、Bax平均光密度值、Bax/Bcl-2值、脑组织NF-κB蛋白和mRNA的表达水平显著降低（均P<0.05）,其中联合用药组的降低程度最大（均P<0.05）,Bcl-2平均光密度值,脑组织FoxO3a、HIF-1α、BDNF蛋白和mRNA的表达水平显著升高（均P<0.05）,其中联合用药组的升高程度最大（均P<0.05）。结论：脑泰通组方能有效保护局灶性脑缺血再灌注大鼠模型脑组织损伤,改善局部脑缺血,其作用机制可能与脑泰通组方调控FoxO3a/HIF-1α/NF-κB信号通路相关。     

脑瘤一号方联合替莫唑胺对裸鼠脑胶质瘤模型MGMT、Bax和Bcl-2蛋白表达的影响

目的观察脑瘤一号方联合替莫唑胺（TMZ）对脑胶质瘤模型O6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶（MGMT）、Bax和Bcl-2蛋白表达的影响。方法经荧光素mcherry转染的人神经胶质瘤U87细胞（U87MG-Luc），注射于BALB/c裸鼠纹状体，建立裸鼠脑胶质瘤原位模型，成瘤裸鼠（荧光量≥1×105）24只随机分为模型组（生理盐水0.3 mL）、TMZ组（TMZ 50 mg/kg）、脑瘤一号方组（脑瘤一号方32.125 mg/g）和联合组（TMZ 50 mg/kg+脑瘤一号方32.125 mg/g），每组6只，连续灌胃12天，每3天检测1次裸鼠体重、肿瘤体积，给药结束后取脑组织，HE染色检测瘤块组织病理，Western Blot检测MGMT、促凋亡因子Bax和抗凋亡因子Bcl-2水平。结果与模型组比较，TMZ组、脑瘤一号方组和联合组肿瘤体积减少 （P<0.05），TMZ组肿瘤组织MGMT表达升高（P<0.05），联合组Bax 表达及Bax/Bcl-2升高（P<0.05），抗凋亡因子Bcl-2表达水平降低（P<0.05）。与TMZ组比较，联合组MGMT及Bcl-2表达降低 （P<0.05），Bax表达及Bax/Bcl升高（P<0.05）。结论脑瘤一号方组和联合组均表现出有效的抗肿瘤作用。脑瘤一号方联合TMZ治疗胶质瘤能降低TMZ副作用，下调MGMT表达缓解胶质瘤细胞对TMZ的耐药性，同时上调Bax和下调Bcl-2表达，促进肿瘤细胞凋亡。     

姜黄素联合FOLFOX诱导胃癌细胞发生凋亡及其机制研究

目的观察姜黄素联合FOLFOX（folinic acid fluorouracil oxaliplatin）对胃癌细胞株BGC-823生长的影响,并探讨其可能的发生机制。方法设立空白对照组、姜黄素组、FOLFOX组［5-FU（0.1 mmol/L）+奥沙利铂（5 μmol/L）］及姜黄素联合FOLFOX组。CCK8法检测细胞活性,Hoechst染色观察细胞凋亡,Caspase-3试剂盒检测Caspase-3活性, 实时荧光定量PCR法测定Bcl-2、Bax mRNA表达的变化,Western blot法测定Bcl-2、Bax蛋白表达的变化。结果各用药组均能抑制BGC-823细胞增殖、诱导细胞凋亡、增加Caspase-3的活性、降低Bcl-2 mRNA及Bcl-2蛋白表达而增加Bax mRNA及Bax蛋白表达,且姜黄素联合FOLFOX组疗效优于姜黄素组及FOLFOX组,差异有统计学意义（P<0.01）。结论姜黄素联合FOLFOX组能够明显抑制BGC-823细胞的增殖,其联合作用可能通过促进Bax的表达及Caspase-3的活性、抑制Bcl-2表达,从而加速肿瘤细胞的凋亡。     

天香丹对动脉粥样硬化秽浊痰阻证 ApoE（－/－） 小鼠血清炎性细胞因子及NF-κB p65信号通路的影响

目的观察天香丹对动脉粥样硬化（atherosclerosis,AS）秽浊痰阻证载脂蛋白E基因敲除 ［apolipoprotein E gene knock-out,ApoE（－/－） ］ 小鼠血清中炎性细胞因子白细胞介素-1β（interleukin-1β,IL-1β）、肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α, TNF-α）以及主动脉组织中核因子-κB p65（NF-κB p65）信号通路的影响,探讨天香丹防治AS的可能机制。方法48只8周龄ApoE（－/－） 小鼠分为正常对照组（12只,给予普通饲料室温饲养）,高脂饲料复合气候箱干预组（36只）。喂养12周后,成功复制ApoE（－/－） 小鼠AS秽浊痰阻证模型后,分为3组：模型组、天香丹组、阿托伐他汀组。12周后处死各组小鼠,采用酶联免疫双抗夹心（ELISA）法检测血清中IL-1β和TNF-α含量;蛋白免疫印迹（Western blot）法检测主动脉组织中NF-κB p65蛋白表达水平。结果模型组IL-1β、TNF-α浓度高于正常对照组（P<0.01）,天香丹组、阿托伐他汀组IL-1β、TNF-α浓度低于模型组（P<0.01）;天香丹组与阿托伐他汀组比较,差异均无统计学意义（P>0.05）;此外,模型组主动脉组织中NF-κB p65蛋白磷酸化水平高于正常对照组（P<0.01）,天香丹组、阿托伐他汀组NF-κB p65蛋白磷酸化水平均低于模型组（P<0.01）;天香丹组与阿托伐他汀组比较,差异无统计学意义（P>0.05）。结论天香丹能够防治AS,其机制可能与抑制NF-κB p65信号通路的活性,下调炎性细胞因子IL-1β、TNF-α表达水平,进而抑制炎症反应有关。     

左金丸对DSS 诱导溃疡性结肠炎小鼠滤泡辅助性T 细胞的调控作用

目的探讨左金丸对溃疡性结肠炎（UC）小鼠滤泡辅助性T 细胞（Tfh）的调控作用。方法将BALB/c 小 鼠随机均分为正常组、模型组、左金丸组（3 g·kg-1）及美沙拉嗪组（300 mg·kg-1）,每组10 只。除正常组外其余 各组小鼠采用自由饮水的方式给予3%葡聚糖硫酸钠（DSS） 溶液,连续7 d,构建UC 小鼠模型。7 d 后按照相 应剂量灌胃给药,每日1 次,连续给药7 d。每天称小鼠体质量并观察其一般症状;采用流式细胞术检测Tfh 及滤泡调节性T 细胞（Tfr）数量;测定小鼠结肠质量、结肠长度,计算结肠质量指数;采用HE 染色法进行结肠 组织病理学观察;Western Blot 法检测小鼠结肠组织Bax、Bcl-2、Caspase-3 蛋白表达水平。结果与模型组比 较,左金丸组小鼠的结肠质量指数明显降低（P < 0.01）,结肠长度明显恢复（P < 0.01）,结肠组织病理评分明显 降低（P < 0.05）;CD4+CD44+ICOS+、CD4+CD44+IL-17+及CD4+CD44+CXCR5+细胞水平明显下降（P < 0.05,P < 0.01）,CD4+CXCR5+Foxp3+及CD4+CXCR5+Blimp-1+细胞水平均明显升高（P < 0.05）;结肠组织中的Caspase-3、 Bax 蛋白表达明显下调（P < 0.05,P < 0.01）,Bcl-2/Bax 蛋白比值明显升高（P < 0.01）。结论左金丸可能通过 调控Tfh/Tfr 细胞平衡,以及结肠组织的Bax、Bcl-2、Caspase-3 蛋白表达水平,发挥对UC 小鼠的治疗作用。 关键词：左金丸;溃疡性结肠炎;滤泡辅助性T 细胞;滤泡调节性T 细胞;Bax;Bcl-2;Caspase-3;小鼠     

补肾养血方对卵巢早衰小鼠凋亡调控蛋白Bcl-2/Bax的影响

目的：探讨补肾养血方对免疫性卵巢早衰（POF）小鼠卵巢凋亡调节基因B细胞淋巴瘤/白血病-2原癌基因（Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白（Bax）表达的影响。方法：以小鼠透明带3（Zp3）为抗原,皮下多点注射免疫 BALB/c雌性小鼠,14 d后强化免疫,建立免疫性卵巢早衰模型。设补肾养血方低、中、高剂量（5.1,10.2,20.4 g·kg^-1）进行治疗,以补佳乐（戊酸雌二醇0.6 mg·kg^-1）为阳性对照,于造模后15 d开始灌胃给药1次/d,连续6周（每1周休息1 d）。放射免疫法检测小鼠血清激素水平,Western法检测卵巢组织 Bcl-2,Bax蛋白的表达。结果：与空白对照组相比,模型组小鼠卵巢Bcl-2蛋白的表达减少,Bax蛋白表达增加,（P<0.05）,模型组小鼠卵巢Bcl-2/Bax下降（P<0.01）,提示模型组卵泡Bcl-2蛋白的低表达、Bax蛋白的高表达可能加速了卵泡的凋亡,导致卵巢早衰;与模型组相比,补肾养血方高、中、低剂量组及西药组小鼠卵巢Bcl-2蛋白的表达明显增加（P<0.01,P<0.05）,卵巢Bax蛋白的表达均减少（P<0.05）,Bcl-2/Bax明显降低（P<0.05）。结论：卵泡凋亡过快可能导致卵巢早衰,补肾养血方可能通过上调卵泡及卵巢间质Bcl-2蛋白的表达,下调Bax蛋白的表达,抑制卵泡的过快凋亡,从而改善卵巢功能。     

黄芪甲苷对急性肝衰竭小鼠抗氧化、抗凋亡机制探讨

目的 研究黄芪甲苷（AS-Ⅳ）对急性肝衰竭小鼠转录因子NF-E2相关因子2(Nrf2)/血红素氧化酶-1(HO-1)和B淋巴细胞瘤-2基因（Bcl-2）/Bcl-2相关X蛋白（Bax）表达的影响，并探讨其抗氧化、抗凋亡的作用机制。方法 将50只C57BL6雄性小鼠随机分为正常组，模型组，低、中、高剂量AS-Ⅳ组，每组10只。低、中、高剂量AS-Ⅳ组分别给予50、150、500 mg/（kg·d）AS-Ⅳ预处理3天，正常组和模型组仅给予助溶剂预处理，然后正常组腹腔注射生理盐水，余4组分别给予D-GalN/LPS腹腔注射建立急性肝衰竭小鼠模型。留取肝组织病理标本，采用Western Blot和RealTime PCR技术检测各组Nrf2、HO-1、Bcl-2、Bax、半胱氨天冬蛋白酶-3(Caspase-3)蛋白及m RNA的表达水平。结果 与正常组比较，模型组小鼠肝组织Nrf2、HO-1、Bcl-2/Bax蛋白及mRNA表达降低（P<0.01）,Caspase-3蛋白及m RNA表达增加（P<0.01）。与模型组比较，低剂量AS-Ⅳ组小鼠肝组织Nrf2蛋白及HO-1、Bcl-...     

心复力颗粒对阿霉素致扩张型心肌病心力衰竭大鼠心肌细胞凋亡的影响

目的探讨心复力颗粒对阿霉素（adriamycin,ADR）致扩张型心肌病（dilated cardiomyopathy,DCM）心力衰竭大鼠心肌细胞凋亡的影响。方法72只SD大鼠随机分为正常组,模型组,厄贝沙坦组,心复力颗粒低、中、高剂量组,除正常组外均予ADR腹腔注射制备DCM心衰大鼠模型,正常组注射等量生理盐水,每周1次,持续6周。从注射ADR第5周各组开始灌胃给药,将心复力颗粒用蒸馏水配成0.5 g/mL的混悬液,心复力颗粒低、中、高剂量组的灌胃剂量分别为0.675、1.350、2.700 g/（kg·d）,厄贝沙坦组剂量为50 mg/（kg·d）,正常组和模型组给予与中剂量组等量生理盐水,每天上午灌胃1次,连续给药4周。用原位末端转移酶标记（terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated dUTP nick end labeling,TUNEL）技术法检测大鼠心肌细胞凋亡,免疫组化方法检测心肌细胞Bcl-2、Bax蛋白表达。结果与正常组比较,模型组心肌细胞凋亡率和Bax蛋白表达明显升高,Bcl-2蛋白表达水平及Bcl-2/Bax比值明显下降（P<0.05）。与模型组比较,心复力颗粒高剂量组和厄贝沙坦组Bcl-2表达水平及 Bcl-2／Bax比值显著升高（P<0.01）;心复力颗粒各剂量组和厄贝沙坦组Bax蛋白表达水平明显下降（P<0.01）。结论心复力颗粒能明显减轻DCM心衰大鼠心肌细胞凋亡,逆转心脏重构的发生、发展,其机制可能与调控Bcl-2、Bax蛋白表达有关。     

川楝子配伍对一贯煎抑制荷H22小鼠肝癌细胞增殖的影响＊

目的 对比研究一贯煎，一贯煎去川楝子，川楝子对荷H22小鼠肝癌细胞增殖及凋亡相关蛋白B淋巴细胞瘤-2（B-celllymphoma/Leukemia-2，Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白（Bax）、细胞色素C（Cyt-c）、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3（Caspase-3）蛋白表达的影响。方法 小鼠随机分为模型组，环磷酰胺（cyclophosphamide， CTX）组（50 mg·kg^-1），一贯煎组（23 g·kg^-1），一贯煎去川楝子组（21 g·kg^-1），川楝子组（0.1 g·kg^-1）。雄性KM小鼠每组10只右侧腋下皮下注射H22细胞构建肝癌荷瘤模型，CTX组造模后腹腔注射给药，隔日一次，共7次，余组造模前后14天均灌胃给药，统计各组瘤重。原位末端标记法（TUNEL）检测肿瘤细胞凋亡；蛋白免疫印记法（Western blot）检测Bax、Bcl-2、Cyt-c、Caspase-3蛋白表达。结果 与模型组比较，CTX组，一贯煎组，一贯煎去川楝子组，川楝子组瘤重均降低（P<0.01），肝癌细胞凋亡率均升高（P<0.01），Bax、Caspase-3和Cyt-c蛋白表达均升高（P<0.05或P<0.01），CTX组、一贯煎组Bcl-2蛋白表达降低（P<0.01）；与一贯煎组比较，一贯煎去川楝子组、川楝子组瘤重、Bcl-2蛋白表达升高（P<0.05），肝癌细胞凋亡率和Bax、Caspase-3蛋白表达降低（P<0.05或P<0.01）；与一贯煎去川楝子组比较，川楝子组肝癌细胞凋亡率，Cyt-c、Caspase-3蛋白表达均升高（P<0.01），Bcl-2蛋白表达降低（P<0.01）。结论 一贯煎中川楝子配伍能明显增强该方抑制肝癌细胞增殖的功效，其机理可能与升高Bax、Caspase-3和Cyt-c蛋白表达，降低Bcl-2蛋白表达，进而促进肝癌细胞凋亡有关。     

银杏叶内酯K对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用

 目的 探讨银杏叶内酯K （ginkgolide K,GNK）对大脑局灶性脑缺血再灌注（MCAO）损伤大鼠的保护作用。方法 采用栓线法大鼠缺血2 h再灌注22 h模型,探讨银杏内酯K对模型大鼠神经缺损症状、脑梗死百分比、脑组织含水率、超氧化物歧化酶（SOD）活性 、丙二醛（MDA）含量及皮层神经元细胞内［Ca2+］_i浓度、Bax蛋白,Bcl-2蛋白及caspase-3蛋白的影响。结果与脑缺血再灌注组相比,GNK （4和8 mg·kg-1）组中大鼠神经缺损评分、脑含水率、脑梗死百分比显著降低（P<0.01）;脑组织丙二醛含量减少、SOD活性升高、［Ca2+］_i显著下降（P<0.01）,Bax和caspase-3蛋白表达显著降低,Bcl-2蛋白表达显著提高。结论 银杏内酯K对局灶性脑缺血再灌注损伤大鼠具有保护作用,本作用机制可能与银杏内酯K减少大鼠脑缺血再灌注后脑组织［Ca2+］_i浓度、抗自由基损伤及其抑制Bax与Bcl-2蛋白表达比例及caspase-3蛋白表达有关。     

通心络对高脂饮食诱导内质网应激致小鼠血管内皮细胞凋亡的保护作用＊

目的 探讨通心络（TXL）对高脂喂养小鼠肥胖模型内质网应激（ERs）相关蛋白的调节及细胞凋亡的干预作用。方法 将5-6周龄C57BL/6J小鼠随机分为低脂对照组（LFD + CMC）、模型组（HFD + CMC）和通心络组（HFD + TXL），18周后检测小鼠体重和血脂水平。制备小鼠离体肠系膜动脉血管环，进行血管张力测试，比较各组血管张力的变化。RT-PCR检测小鼠肠系膜动脉内质网应激相关因子GRP78、PERK、CHOP及凋亡相关因子Bax、Bcl-2 mRNA表达；用同型半胱氨酸（Hcy）建立细胞损伤模型，将HUVEC分为正常对照组（control group）、模型组（Hcy group，2 mmol·L^-1 Hcy）、通心络组（TXL组，200 μg·mL^-1通心络），检测各组GRP78，Caspase-3，Caspase-7，Caspase-9蛋白表达情况。结果 与LFD组比较，HFD组小鼠血总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）水平显著升高（P < 0.01）；与HFD组比较，TXL组小鼠TC、TG、LDL-C水平显著降低（P < 0.05）；在加入去甲肾上腺素（NE）诱发最大收缩程度后，按浓度依次加入Ach，与LFD组相比，HFD组小鼠肠系膜动脉舒张功能明显受损， TXL组小鼠肠系膜动脉舒张功能较HFD组有明显改善（P < 0.01）；与HFD组相比，TXL组的GRP78、PERK、CHOP、Bax mRNA表达下调（P < 0.05），Bcl-2 mRNA表达上调（P < 0.01）；与正常对照组比较，Hcy组细胞生存活性明显降低；HUVEC细胞Caspase-3，Caspase-7， Caspase-9蛋白表达上调（P < 0.05）；与模型组比较，通心络组GRP78及凋亡相关蛋白表达下调（P < 0.05）。结论 通心络可改善肥胖小鼠血脂水平，缓解内质网应激，并通过抗凋亡途径发挥血管保护作用。     

基于Bcl-2/Bax/Caspase-3信号通路探究参红通络方对心肌缺血再灌注损伤大鼠细胞凋亡的影响

目的 探讨参红通络方加减对心肌缺血再灌注损伤（MI/RI）大鼠细胞凋亡的作用机制。方法 60只SD大鼠随机分为空白组、模型组、参红通络方剂低、中、高剂量组和辛伐他汀组。除空白组外,采用线栓结扎冠状动脉左前降支方式制备心肌缺血再灌注损伤大鼠模型（MI/RI模型）,造模成功后第1天起,空白组（生理盐水1.0 mL·kg^-1）、模型组（生理盐水1.0 mL·kg^-1）、参红通络方剂低、中、高剂量组（1.031、2.063、4.126 g·kg^-1参红通络方标准浓缩液）和辛伐他汀组（辛伐他汀0.71 mg·kg^-1）,定时灌胃给药,每日1次,连续2周。苏木素-伊红（HE）染色法观察心肌细胞病理形态学变化;酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测血清肌酸激酶同工酶（CK-MB）、白细胞介素-6（IL-6）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）水平变化;原位末端转移酶标记技术（TUNEL）染色法检测大鼠心肌细胞凋亡率;蛋白免疫印迹法（Western blot）检测细胞凋亡相关蛋白B细胞淋巴瘤-2（Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白（Bax）和胱天蛋白酶-3（Caspase-3）表达水平。结果 与空白组比较,模型组HE染色可见心肌细胞排列紊乱,纤维不完整,心肌细胞小灶性坏死,并伴有炎性细胞浸润;血清CK-MB、IL-6和TNF-α水平明显上升（P<0.05）;心肌细胞凋亡率明显升高（P<0.05）,Bax、Caspase-3蛋白表达水平则明显升高,Bcl-2明显下降（P<0.05）;与模型组比较,参红通络方剂加减低、中、高剂量组可明显降低CK-MB、IL-6和TNF-α水平（P<0.05）;明显下调心肌细胞凋亡率（P<0.05）;Bax、Caspase-3蛋白显著降低,Bcl-2表达水平明显增加（P<0.05）。参红通络方剂加减组中Bax、Caspase-3蛋白随参红通络方给药剂量的增加而明显降低,Bcl-2表达水平随参红通络方给药剂量的增加而明显升高（P<0.05）。结论 参红通络方加减可通过减轻心肌组织病理损伤并降低心肌细胞凋亡,可能与抑制Caspase-3、Bax表达、促进Bcl-2水平表达有关。     

基于TGF-β1/p38MAPK通路探讨益气升清方对糖尿病大鼠肾组织的影响

目的:探讨益气升清方对糖尿病大鼠肾组织TGF-β1/p38MAPK通路的影响。方法:SPF级大鼠60只,正常组10只,其余腹腔注射STZ制备DM模型。成模后随机分为模型组（等量蒸馏水）、厄贝沙坦组［27 mg/(kg·d)］、中药低剂量组［3.465 g/(kg·d)］、中药中剂量组［6.93 g/(kg·d)］、中药高剂量组［13.86 g/(kg·d)］,每组10只,给药8周,检测血糖、Scr、BUN,观察肾组织的病理,用荧光定量PCR和免疫组化法检测TGF-β1、p38MAPK、FN mRNA和蛋白的表达。结果:造模后各组血糖较正常组有显著性升高（P<0.01）,但组间比较差异无统计学意义（P>0.05）。模型组大鼠血清BUN、Scr显著增高（P<0.01）,肾组织有大量TGF-β1、p38MAPK、FN mRNA及蛋白表达（P<0.01）;与模型组比较,各观察组病理损害明显减轻,血清BUN、Scr明显降低（P<0.01）,TGF-β1、p38MAPK、FN mRNA及蛋白表达明显减少（P<0.01）,厄贝沙坦组、中药中、高剂量组优于中药低剂量组（P<0.01）。结论:糖尿病大鼠TGF-β1/p38MAPK通路的激活导致肾间质病变,益气升清方可减少TGF-β1、p38MAPK的表达,从而减少FN的沉积,起到保护肾脏的作用。     

黄芩苷对高原性小鼠脑损伤的影响及其机制研究

目的：探讨黄芩苷对高原性脑缺血缺氧致小鼠脑损伤的影响及相关作用靶点蛋白表达。方法：用water maze水迷宫作业测试筛选出50只昆明种小鼠,随机分为模型组、对照组、黄芩苷低、中、高剂量组（0.05、0.20、0.60 mg·kg^-1）,每组10只,检测受试小鼠的空间记忆和学习能力。用低压氧动物舱（模拟海拔4 000 m的高度）建立稳定的高原性脑缺血缺氧模型,检测小鼠海马组织中超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-PX）活性及丙二醛（MDA）含量的变化。应用蛋白印迹分析方法（western blot）分别检测小鼠脑干组织中各凋亡通路蛋白活化型半胱天冬酶-3（cleaved-caspase 3）、磷酸化蛋白激酶B（P-AKT）、神经胶质酸性蛋白（GFAP）、Bax、Bcl-2的表达。结果：模型组小鼠潜伏期明显高于对照组（P<0.05）,黄芩苷高剂量组与模型组相比潜伏期缩短,差异显著（P<0.05）,由此得出,黄芩苷最佳有效剂量为0.60 mg·kg^-1。与对照组比较,模型组小鼠海马组织中MDA含量明显升高、SOD和GSH-Px活性明显降低（P<0.05）;与模型组比较,黄芩苷高剂量组小鼠脑组织中SOD和GSH-Px活性明显提高、MDA含量明显降低（P<0.05）。从蛋白变化水平来看,模型组的cleaved-caspase 3、P-AKT、GFAP蛋白表达水平与对照组相比,条带明显增强,Bax/Bcl-2的比值也明显增加（P<0.05）;黄芩苷组表达水平弱于模型组（P<0.05）,其中黄芩苷高剂量组表达最弱,且呈一定的量效关系。结论：黄芩苷对高原性脑缺血损伤有保护作用,其作用机制可能与强的抗氧化能力及其抑制各个靶点蛋白cleaved-caspase 3、P-AKT、GFAP、Bax、Bcl-2在凋亡通路的表达有关。     

桔梗皂苷D通过Bax/Bcl-2/Caspase-3信号通路抑制细胞凋亡保护急性肺损伤的机制研究＊

目的 探讨桔梗皂苷D对脂多糖诱导的大鼠急性肺损伤的保护机制。方法 35只雄性SPF级SD大鼠，随机分为假手术组、桔梗皂苷D对照组、模型组、桔梗皂苷D给药组和地塞米松组，每组7只。除假手术组和桔梗皂苷D对照组外，其余各组采用脂多糖诱导大鼠急性肺损伤模型。造模24 h后，牺牲大鼠并称体重及两肺重量，计算肺指数；脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记（TUNEL）法检测肺组织细胞凋亡并计算凋亡指数（Apoptosis Index，AI）；透射电镜下观察大鼠肺组织超微结构的改变；蛋白免疫印迹法（Western blot）检测肺组织凋亡相关蛋白B细胞淋巴瘤/白血病-2（Bcl-2），Bcl-2相关X蛋白（Bax），半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3（Caspase-3），多聚腺苷二磷酸核糖聚合酶1（PARP1）蛋白及活化的天冬氨酸蛋白水解酶-3（Cleaved Caspase-3），Cleaved PARP1的表达水平。结果 与假手术组比较，模型组大鼠肺指数显著升高（P < 0.01），肺组织细胞凋亡指数（AI）显著升高（P < 0.01），肺组织Bcl-2及Bcl-2/Bax蛋白表达显著下调（P < 0.01），Bax，Cleaved Caspase-3/Caspase-3，Cleaved PARP1/PARP1蛋白表达均显著升高（P < 0.01）；透射电镜下可见到凋亡小体，影响并改变了肺组织细胞超微结构；与模型组比较，桔梗皂苷D给药组及地塞米松组肺指数明显降低（P < 0.01），肺组织AI明显降低（P < 0.01），肺组织中Bcl-2及Bcl-2/Bax蛋白表达显著上调（P < 0.01），Bax，Cleaved Caspase-3/Caspase-3，Cleaved PARP1/PARP1蛋白表达均显著降低（P < 0.01）；透射电镜下，桔梗皂苷D给药组和地塞米松组肺组织细胞超微结构状态较好。结论 桔梗皂苷D对脂多糖诱导的大鼠急性肺损伤具有保护作用，其作用机制与抑制Bax/Bcl-2/Caspase-3信号通路，减轻肺组织细胞凋亡密切相关。