β-细辛醚通过PKA/CREB信号通路对快速老化痴呆小鼠脑组织凋亡机制的影响

目的研究β-细辛醚对快速老化痴呆小鼠大脑组织蛋白激酶A(PKA)、cAMP反应元件结合蛋白(CREB)的影响。方法选取健康昆明小鼠10只作为对照组,30只快速老化小鼠被随机分为模型组(10只)、实验组(10只)、治疗组(10只)。对照组采用生理盐水灌胃,2 mL/次;实验组采用β-细辛醚混浊液灌胃,2 mL/次;治疗组采用脑复康水溶液5 mg/mL灌胃,2 mL/次;模型组采用生理盐水灌胃,2 mL/次。所有小鼠均每天灌胃1次,持续3周。3周后进行小鼠行为学测试,检测脑组织PKA、CREB酶改变及光镜和电镜下神经元细胞形态变化。结果实验组和治疗组与模型组相比,潜伏期明显缩短、在原平台停留时间延长,PKA、CREB活性与模型组比较均明显增高,差异有统计学意义(P<0.05)。光镜下观察实验组海马神经元损伤较轻,大部分细胞核清楚完整,电镜下核周隙清晰,细胞器清晰,神经纤维较丰富。结论β-细辛醚能提高快速老化痴呆小鼠知识记忆能力,影响PKA/CREB传导路径和突触结构,减少快速老化痴呆小鼠大脑组织神经元损伤,对快速老化痴呆小鼠有明显治疗作用。     

β-细辛醚的药代及药理作用研究进展

天南星科植物石菖蒲（Acorus tatarinowii Sehott）气味芳香,具有开窍豁痰、醒神益智、化湿和胃等功效,临床上多用于湿浊或痰浊蒙蔽心窍之神昏谵语。β-细辛醚是石菖蒲的主要活性成分之一,是石菖蒲挥发油中的六个特征成分之一,近些年来有关β-细辛醚的研究报道很多,本文对其药代动力学、药理学等方面的研究综述如下。     

石菖蒲有效部位中α-细辛醚、β-细辛醚的含量测定

目的建立石菖蒲有效部位中α-细辛醚、β-细辛醚的含量测定方法。方法HPLC法:采用翡纳米科技kromasil ODS C_(18)色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μL),流动相为甲醇-水(56:44),流速: 1.0 mL／min,检测波长:257 nm。结果β-细辛醚平均回收率为98.57％,RSD=0.35％;α-细辛醚平均回收率为99.75％,RSD=1.30％。结论所建立的方法简便、准确,可作为石菖蒲有效部位的质量控制方法。     

高效液相色谱法测定通塞益脑口服液中α-细辛醚和β-细辛醚的含量

目的：建立通塞益脑口服液中α-细辛醚和β-细辛醚的含量测定方法,为生产质量提供保障。方法采用高效液相色谱法测定,色谱柱为Lichrospher-C18柱（250 mm×4.6 mm,5μm）,流动相为甲醇-0.05%磷酸溶液（54：46）,流速为1.0 mL/min,柱温为30℃,检测波长为257 nm。结果α-细辛醚在1.248~6.240μg/mL范围内有良好的线性关系,Y =85526X-1.0581（r=0.9999）,β-细辛醚在2.632~13.159 mg/mL范围内有良好的线性关系,Y =41727X-0.0433（r=0.9999）,平均回收率分别为99.07%、101.94%,RSD分别为2.15%、2.83%（n=6）。结论该方法准确易行,便于通塞盖脑口服液的质量控制。     

β-细辛醚对抑郁模型大鼠海马CA3区超微结构的改变及脑组织ERK蛋白表达的影响

目的：探讨β-细辛醚对抑郁模型大鼠海马CA3区超微结构及脑组织ERK蛋白表达的影响及干预作用。方法：选取60只4~5月龄SD雄性大鼠随机分为正常对照组、模型组、氟西汀组和β-细辛醚组,每组15只。采用慢性轻度不可预见性应激制作大鼠抑郁模型,造模第2天开始,氟西汀组和β-细辛醚组给予氟西汀和石菖蒲干预,于实验第1、7、14、21天,分别进行体重、糖水偏爱度检测和敞箱实验,对大鼠行为学改变进行评定。采用电镜技术观察大鼠大脑组织海马CA3区超微结构的改变,采用免疫组织化学染色和计算机图像分析技术测定检测ERK蛋白阳性目标积分光密度及其表达的变化。结果：电镜观察结果显示：模型组大鼠海马神经元凋亡增加,β-细辛醚能改善大鼠海马病理改变;免疫组化结果显示：与模型组比较,氟西汀组和β-细辛醚组大鼠行为学指标显著改善,海马区ERK蛋白表达增强,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论：β-细辛醚可显著改善抑郁模型大鼠的抑郁症状,其作用机制可能与增强ERK蛋白表达有关。     

β-细辛醚及石菖蒲挥发油中β-细辛醚在家兔体内的药代动力学

目的:研究β-细辛醚及石菖蒲挥发油中β-细辛醚的药物代谢动力学.方法:采用气相色谱法测定β-细辛醚的血药浓度,色谱柱:HP-35毛细管气相色谱柱;程序升温:起始温度为30℃,6℃/min升至220℃,保持5 min;进样口温度250℃;检测器温度320℃;进样量2.0 μL;无分流进样;溶剂:甲醇;载气:氦气;柱头压:5.5×104 Pa;内标物:α-萘酚.结果:建立了用气相色谱法测定β-细辛醚血药浓度的方法,线性方程:Y=0.01889ρ 1.755×10-3(n=6,r=0.9999),线性范围:0.04～40.00mg/L.兔全血中最低检测浓度为:0.04mg/L. β-细辛醚灌胃ig后,在兔体内符合一级吸收二室模型,T1/2(α)为7.5 min,T1/2(β)为69.6 min.家兔灌胃石菖蒲挥发油后,β-细辛醚在体内的药时过程为线性动力学过程,同样符合一级吸收二室模型,T1/2(α)为18.3 min,T1/2(β)为114.5 min.结论:本实验的研究结果为中药石菖蒲的合理用药以及进一步开发石菖蒲新制剂提供了参考依据,同时,也为中药材中挥发油类有效成分的药代动力学研究提供了可供借鉴的方法.     

姜黄素对APP/PS1双转基因小鼠Aβ及Aβ寡聚体表达的影响

目的运用免疫组织化学方法和蛋白质印迹(Western-blot)方法观察淀粉样前体蛋白/早老素1(APP/PS1)双转基因小鼠治疗前后β淀粉样蛋白42(Aβ42)、β淀粉样蛋白40(Aβ40)和可溶性Aβ寡聚体(ADDLs)的变化,判断姜黄素(curcumin)对Aβ级联反应的影响。方法将3月龄的APP/PS1双转基因小鼠随机分为模型组、阳性对照组(罗格列酮组)及姜黄素大、中、小剂量组。灌胃3个月后,以免疫组织化学方法和Western blot方法检测Aβ42、Aβ40和ADDLs蛋白表达量的变化。结果免疫组织化学检测模型组小鼠海马Aβ40、Aβ42和ADDLs阳性细胞均较正常组增加,Aβ40和Aβ42相比,阳性细胞计数增加以Aβ42更加明显,各干预组小鼠海马Aβ40、Aβ42和ADDLs阳性细胞明显降低。Western blot检测模型组小鼠海马Aβ40、Aβ42和ADDLs蛋白表达比正常对照组明显增加(P<0.01);与模型组小鼠相比,虽然各干预组小鼠海马Aβ40、Aβ42和ADDLs蛋白表达均减少,罗格列酮组和姜黄素中剂量组小鼠海马Aβ40和Aβ42的蛋白表达显著减低(P<0.01);罗格列酮组小鼠海马ADDLs的蛋白表达减低显著(P<0.01),姜黄素大、中剂量组小鼠海马ADDLs的蛋白表达明显降低(P<0.05)。结论姜黄素给药3个月能显著减少APP/PS1双转基因小鼠脑内海马CA1区Aβ40、Aβ42和ADDLs的表达,对Aβ42减低更为明显。其潜在的神经保护机制是否通过下调Aβ42和ADDLs的产生,增强Aβ42和ADDLs的降解影响Aβ级联反应,有待进一步研究。     

膳食锌缺乏对成年APPswe/PSEN1dE9双转基因小鼠学习记忆能力的影响

目的研究膳食锌缺乏对成年APPswe/PSEN1dE9双转基因小鼠学习记忆能力的影响。方法应用跳台试验观察膳食锌缺乏喂养50 d后,缺锌喂养组（zinc deficiency group,ZD）小鼠与阳性对照组（positive controlgroup,PG）和阴性对照组（negative control group,NC）小鼠学习记忆能力的差异。结果缺锌喂养50 d后,ZD组潜伏期由（126.30±106.43）s明显延长至（226.30±101.35）s,差异有显著性（P＆lt;0.05）。ZD组与NC组潜伏期分别为（226.30±101.35）s和（253.80±81.05）s,均明显较PC组（61.00±53.96）s长,差异有显著性意义（P＆lt;0.01）。ZD组与NC组5min错误次数分别为（1.4±1.9）次、（0.5±0.7）次,均低于PC组（3.8±2.9）次,差异有显著性（P＆lt;0.05）。结论缺锌喂养可能在一定程度上可以延缓成年APPswe/PSEN1dE9转基因小鼠学习记忆能力的下降。     

石菖蒲中α、β-细辛醚含量的测定

Grass leaved Sweetflag (Shi chang pu),a traditional Chinese drug, is dried rhizome of Acorus tatarinowii Schott. and the main active components are αand β asarone.In order to control the interior quality of the Grass leaved Sweetflag, the HPLC method was built to determine the Contents ofαand β asarone in Grass leaved Sweetflag. The method was superior to the GS/MS method.     

α-细辛醚、β-细辛醚改善Aβ25-35诱导的PC12细胞损伤及机制

目的：探究α-细辛醚、β-细辛醚对β淀粉样蛋白活性片段Aβ_25-35诱导的PC12细胞损伤模型的保护作用及相关作用机制。方法：采用Aβ_25-35诱导PC12细胞建立Aβ毒性损伤细胞模型。将PC12细胞分为空白对照组、模型对照组、α-细辛醚组（0.5、1.0、1.5?μg/mL）、β-细辛醚组（6.3、12.5、25.0?μg/mL）、血管活性肠肽（VIP）组,并设VIP拮抗剂对照。采用细胞计数试剂盒（CCK-8）法检测细胞存活率;流式细胞术检测细胞凋亡率;酶联免疫吸附试验检测炎症因子白介素（IL）-1、IL-10、肿瘤坏死因子（TNF）-α,氧化因子诱生型一氧化氮合酶（iNOS）、一氧化氮（NO）和凋亡因子caspase-3、p53水平;蛋白质印迹法检测细胞c-Jun氨基端激酶（JNK）、p38丝裂原活化蛋白激酶（p38MAPK）蛋白表达。结果：与模型对照组比较,α-细辛醚组、β-细辛醚组和VIP组细胞存活率增加,细胞凋亡率下降,凋亡因子caspase-3、p53和炎症因子IL-1、TNF-α水平下降,IL-10水平升高,氧化因子iNOS和NO水平下降,c-Jun氨基端激酶（JNK）、p38MAPK蛋白表达减少（均P<0.05）。VIP拮抗剂干预后,β-细辛醚组细胞存活率下降,细胞凋亡率增加,凋亡因子caspase-3、p53和炎症因子IL-1、TNF-α水平升高,IL-10水平下降,氧化因子iNOS和NO水平升高,JNK、p38MAPK蛋白表达增加（均P<0.05）;α-细辛醚组无显著变化（均P>0.05）。结论：α-细辛醚、β-细辛醚对Aβ_25-35诱导的PC12细胞损伤模型具有保护作用,β-细辛醚可通过促进VIP的分泌,调控JNK/MAPK通路从而抑制炎症因子、氧化因子水平,改善PC12细胞凋亡;α-细辛醚作用机制与VIP分泌水平无明显联系。     

双转基因小鼠模型中microRNA-153对RTN4的表达调控

目的 探讨mir-153在阿尔茨海默病发病机制中的作用.方法 通过microRNA芯片及Real-timePCR检测APPswe/PSAE9双转基因小鼠脑内mir-153的表达;构建高表达mir-153的稳转细胞系,通过western-blot检测稳转细胞系内RTN4的蛋白表达;构建野生型及突变型RTN4的3'UTR荧光素酶报告载体,分别将其与mir-153表达载体或microRNA阴性对照载体共转染入293T细胞内,检测海肾荧光素酶的相对活性以验证mir-153对RTN4 mRNA的作用靶点.结果 microRNA芯片及Real-time PCR检测均证实3月龄APP8we/PS△E9双转基因小鼠脑内mir-153的表达较同龄野生对照显著降低;在高表达mir-153的稳转细胞系内RTN4的蛋白水平明显降低;共转染野生型RTN4的3'UTR/mir-153表达载体可使海肾荧光素酶相对活性较共转染野生型RTN4的3'UTR/miRNA阴性对照质粒组显著降低(P＜0.05),而共转染突变型RTN4的3'UTR/mir-153表达载体组则较之无明显差异.结论 在3月龄APPswe/PS△E9双转基因小鼠脑内存在mir-153的异常表达;mir-153可调控RTN4的蛋白表达;mir-153对RTN4的表达调控是通过结合RTN4 3'UTR 839-845碱基处的作用位点而实现的.     

实时荧光定量PCR检测转基因阿尔茨海默病小鼠脑组织中miRNAs的差异表达

目的通过实时荧光定量PCR方法检测APPswe/PS△E9双转基因小鼠和对照小鼠脑组织中miRNA-135a-5p、miRNA-135a-2-3p、miRNA-298-5p、miRNA-466b-3p和miR-669f-3p的表达。方法选取6月龄大小的APPswe/PS△E9双转基因小鼠为实验组,同月龄同种系的野生型小鼠C57为对照组,分别提取其脑组织总miRNA,应用实时荧光定量PCR方法检测两组小鼠脑组织中miRNA-135a-5p、miRNA-135a-2-3p、miRNA-298-5p、miRNA-466b-3p和miR-669f-3p的表达。结果上述5种miRNAs在实验组与对照组小鼠中的相对表达量分别为0.73±0.27、1.08±0.58,2.47±6.15、1.65±0.67,0.72±0.14、1.31±0.73,0.57±0.34、1.06±0.35,0.63±0.26、1.02±0.18。其中有统计学意义的是miRNA-135a-5p、miRNA-298-5p、miRNA-466b-3p和miR-669f-3p(P≤0.05)。结论 miRNA-135a-5p、miRNA-298-5p、miRNA-466b-3p和miR-669f-3p在APPswe/PS△E9双转基因小鼠中有差异表达,可能在阿尔茨海默病的发病过程中起着重要作用。     

5 xFAD转基因小鼠与阿尔茨海默病患者大脑中β-淀粉样蛋白特征的异同

目的 探明5xFAD转基因小鼠与阿尔茨海默病(Alzheimer disease,AD)患者大脑中 β-淀粉样蛋白(amyloidβ-protein,Aβ)斑块特征的异同.方法 利用免疫荧光染色通过单克隆抗体(4G8)检测了5xFAD转基因小鼠与AD患者大脑中的Aβ 斑块,利用CaseViewer和GraphPad P...     

动态观察姜黄素对APP/PS1双转基因小鼠尿液AD7C-NTP浓度的影响

目的 通过动态检测小鼠尿液中AD7C-NTP的浓度变化,了解姜黄素在阿尔茨海默病治疗方面的作用.方法 3月龄APP/PS1双转基因小鼠35只,随机分为5组,每组7只,分别为模型组,阳性对照组(罗格列酮组),姜黄素大、中、小剂量组;另选用同月龄同背景的C57BL/6J小鼠7只作为正常对照组.以上6组连续灌胃3个月,分别于灌胃前、灌胃30 d、灌胃60 d和灌胃90 d收集小鼠尿液,应用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测尿AD7C-NTP浓度的变化.结果 不同时间点各组小鼠尿AD7C-NTP浓度的动态存在波动,各治疗组治疗2个月与治疗1个月相比,AD7C-NTP浓度均有所下降(P＜0.05,P＜0.01);同一时间点小鼠尿AD7C-NTP浓度组间比较:治疗2个月后,西药组,姜黄素大、小剂量组与模型组相比AD7C-NTP浓度有所下降(P＜0.05,P＜0.01).结论 姜黄素可降低AD模型小鼠尿液内AD7C-NTP浓度,延缓AD的进展.     

PS1/APP双转基因AD模型小鼠与Aβ1-40海马注射AD模型大鼠的组织病理学比较

目的 对PS1/APP双转基因阿尔茨海默病(alzheimer disease, AD)模型小鼠进行基因鉴定和组织学分析,探讨其与老化态Aβ1-40单侧海马注射AD模型大鼠之间的组织病理学差异.方法 对Tg小鼠和AD大鼠模型应用改进刚果红染色法、Nissl's染色结合免疫组织化学方法观察脑内Aβ沉积和星形胶质细胞的活化情况.结果 ①PS1/APP双转基因AD小鼠刚果红染色显示皮质和海马内广泛圆形Aβ沉积,周围绕以胶质细胞带,免疫组化显示GFAP阳性细胞活化呈团块聚集.②AD大鼠刚果红染色显示单侧海马齿回区有Aβ斑块状沉积,Nissl's染色显示注射针道附近海马锥体层细胞丢失,注射侧海马GFAP阳性细胞增多.结论 Aβ1-40单侧海马注射AD模型大鼠尽管可以模拟人类AD疾病的部分特征病理改变,但是不能模拟疾病渐进性的病理学改变.PS1/APP双转基因小鼠能够模拟AD病人脑内的主要病理改变与渐进性过程,是较为理想的实验动物模型,但该模型未发现细胞丢失.     

APP swe/PS△E9双转基因小鼠脑组织miRNA的表达

摘要：目的观察APPswe/PS△E9双转基因小鼠与正常小鼠脑组织内miRNA的差异表达,探索miRNA在阿尔茨海默病中的可
能作用。方法采用6月龄APPswe/PS△E9双转基因小鼠作为实验组,同月龄、同种系野生型小鼠C57作为对照组,基因芯片检
测两组小鼠脑组织miRNA表达;比较两组小鼠miRNA的差异表达。结果与对照组比较,实验组中表达上/下调2 倍以上的
miRNA 有miRNA-135a、miRNA-135a-2*、miRNA-298、miRNA-466b-3p、miR-669-3p、miR-142-5p、miR-144、miR-466f-3p、
miR-466g、miR-200a、miR-200b、miR-96 等12 种,但有统计学意义（P<0.05）的均是下调的5 种miRNA：miRNA-135a、
miRNA-135a-2*、miRNA-298、miRNA-466b-3p 和miR-669-3p。结论miRNA-135a、miRNA-135a-2*、miRNA-298、miRNA-
466b-3p和miR-669-3p可能是在APPswe/PS△E9双转基因小鼠发病中有意义的miRNA。
     

石菖蒲挥发油β-细辛醚对支气管哮喘的影响

【目的】观察石菖蒲挥发油β-细辛醚喷雾给药对支气管哮喘模型豚鼠的影响。【方法】豚鼠30只,随机分为模型组、氨茶碱组和β-细辛醚组,各组豚鼠喷雾给药7 d后,以组织胺(His)和乙酰胆碱(Ach)喷雾复制哮喘模型,观察药物对模型豚鼠引喘潜伏期和跌倒潜伏期的影响;取豚鼠气管,置克—亨氏液浴槽内,观察药物对His和Ach造模后,离体气管平滑肌张力的影响;豚鼠30只,分组同前,先以40 g/L卵蛋白(OVA)和Al(OH)3致敏,连续喷雾给药7 d后,再以OVA喷雾引喘,观察各药物对模型豚鼠支气管和肺组织中肥大细胞脱颗粒数的影响。【结果】β-细辛醚可延长His和Ach引喘的模型豚鼠的哮喘发作潜伏期和跌倒潜伏期;拮抗因His和Ach所致的离体支气管平滑肌痉挛;抑制由OVA和Al(OH)3引喘的模型豚鼠的肥大细胞脱颗粒,与模型组比较均有显著性差异(P<0.05或P<0.01或P<0.001),与氨茶碱的作用相仿。【结论】β-细辛醚具有一定的平喘和抗过敏作用。     

β-细辛醚对阿尔茨海默病大鼠海马神经元突触可塑性的影响

目的 探讨石菖蒲挥发油主要成分β-细辛醚对阿尔茨海默病(AD)大鼠海马神经元突触可塑性的影响.方法 以雄性Sprague-Dawley大鼠为研究对象,建立AD动物模型,用不同剂量β-细辛醚[12.5、25、50 mg/(kg·d)](分别为β-细辛醚低、中、高剂量组),连续灌胃4周;生理盐水组予等量生理盐水灌胃,正常对照组不予任何造模处理.Morris水迷宫检测动物的空间记忆能力;JC-1法检测海马组织线粒体膜电位;利用透射电镜观察海马CA1区突触数量及结构的变化;实时定量PCR比较各组生长相关蛋白43(GAP-43)、突触素(SYP)、突触后致密蛋白95(PSD-95) mRNA表达水平的差异.结果 水迷宫结果显示β-细辛醚高剂量组大鼠逃避潜伏期明显比生理盐水组要短.AD大鼠海马线粒体膜电位较正常对照组明显降低;而β-细辛醚处理组大鼠海马线粒体膜电位均增加,β-细辛醚高剂量组增加最明显.透射电镜结果证实β-细辛醚处理组大鼠海马CA1区突触数量增多,尤其是β-细辛醚高剂量组.PCR结果表明,与生理盐水组相比,β-细辛醚中、高剂量组中SYP mRNA表达量明显增加;而β-细辛醚处理组GAP-43和PSD-95 mRNA表达量明显降低,尤其是β-细辛醚高剂量组.结论 β-细辛醚通过影响海马神经元的突触可塑性,从而改善Aβ1-42导致的大鼠认知功能障碍.     

β-细辛醚对抑郁模型大鼠海马组织及Bax、Bcl-2的影响

目的:探讨β-细辛醚对抑郁模型大鼠海马组织及Bax、Bcl-2蛋白表达的影响。方法:经过敞箱实验选取得分相近的2~3个月龄SD大鼠80只,按随机数字表法分为四组,每组20只,结合孤养并给予慢性轻度不可预见刺激,复制抑郁模型,于造模成功第2天开始,分别给予氟西汀组和β-细辛醚组1.2 mg/(kg·d)氟西汀和25 mg/(kg·d)β-细辛醚灌胃,模型组与正常组给予等体积生理盐水。于第21天对大鼠处死取脑,免疫组织化学法检测Bax、Bcl-2蛋白相对含量。结果:模型组大鼠海马组织神经元数目减少,散在排列,细胞核发生固缩变形,CA1区,CA3区变化显著。与模型组比较,β-细辛醚组、氟西汀组Bax蛋白表达均显著降低(P0.01)。结论:β-细辛醚可以降低大鼠海马组织Bax蛋白表达,促进Bcl-2蛋白表达。