MiR-30a-5p通过泛素水解酶22抑制人宫颈癌细胞上皮-间质转化功能

【目的】研究microRNA-30a-5p（miR-30a-5p）对人宫颈癌Hela细胞上皮-间质转化功能的影响及其相关机制。【方法】宫颈癌Hela细胞株分别转染目的mir的模拟物和阴性对照模拟物,分别以30a-5p组、NC组命名并标记细胞。同时,以未经过处理的Hela细胞作为对照（Control组）。分别用逆转录-聚合酶链反应法检测各组宫颈癌细胞的miR-30a-5p含量。Transwell实验检测3组细胞迁移能力和侵袭能力。Western-blot法检测3组细胞神经-钙粘素（N-cadherin）、α-连环蛋白（α-Catenin）和泛素水解酶22（USP22）表达水平。运用生物信息学方法预测miR-30a-5p的靶基因。采用Western blot法检测USP22过表达对miR-30a-5p抑制EMT的拮抗作用。双荧光素酶实验检测miR-30a-5p与USP22的关系。建立皮下移植瘤模型观察miR-30a-5p的体内作用。【结果】30a-5p组宫颈癌细胞miR-30a-5p的表达水平明显上调,表达水平为Control组的853.82（862.26~843.11）倍（P＜0.01）。30a-5p组侵袭细胞数量8.17（8.32~8.03）明显低于Control组（P＜0.01）。30a-5p组细胞N-cadherin蛋白的细胞内含量明显下降,α-Catenin蛋白的细胞内含量明显上升,USP22蛋白表达量明显降低。合并USP22过表达处理的30a-5p组宫颈癌细胞中N-cadherin蛋白表达量明显升高,α-Catenin蛋白表达量明显降低。双荧光素酶检验结果显示USP22为miR-30a-5p的下游靶基因（P＜0.01）。30a-5p组皮下移植瘤明显小于Control组（P＜0.01）。与Control组肿瘤组织相比,30a-5p组肿瘤组织miR-30a-5p的相对含量升高,USP22蛋白含量降低,N-cadherin蛋白的含量降低,α-Catenin蛋白含量升高。【结论】miR-30a-5p在宫颈癌Hela细胞中,可能通过靶向识别下游靶基因USP22,进而抑制其翻译。最终实现对宫颈癌细胞EMT过程的抑制。     

MicroRNA-544在肝癌组织中的表达及其对肝癌细胞恶性生物学行为的影响

目的 明确微RNA-544(microRNA-544,miR-544)在肝癌组织中的表达及其对肝癌细胞增殖、凋亡、克隆形成及成球能力的影响,探讨其在肝癌发生、发展中的作用.方法 利用qPCR法检测二乙基亚硝胺(DEN)造模的大鼠肝组织和人肝癌组织与癌旁组织以及成球培养后肝癌干细胞球中miR-544的表达;肝癌细胞株Hep3B转染miR-544mimic或miR-544 inhibitor后,利用CCK-8试剂盒检测细胞增殖情况,平板克隆形成实验观察细胞克隆形成能力,碘化丙啶(PI)染色后流式细胞仪检测细胞凋亡情况.肝癌细胞转染miR-544mimic后成球培养观察细胞形成肿瘤干细胞球能力的变化.结果 MiR544在DEN造模大鼠肝组织及人肝癌组织中的表达分别较未造模大鼠肝组织(P＜0.05)和癌旁组织(P＜0.01)下调.过表达miR-544可抑制肝癌细胞的增殖(P＜0.05,P＜0.01)和平板克隆形成能力(P＜0.05),并促进细胞凋亡(48 h和72 h,P＜0.01);而在肝癌细胞中抑制miR-544的作用可促进肝癌细胞的增殖(P＜0.01)和克隆形成能力(P＜0.05).在富集肝癌干细胞的成球培养中,miR-544的表达下调(P＜0.05);而过表达miR-544可抑制肝癌细胞形成干细胞球(P＜0.05).结论 MiR-544在肝癌组织中表达下调,且可抑制肝癌细胞的多种恶性生物学行为,提示其可能在肝癌的发生、发展中发挥着抑癌作用.     

MicroRNA-150在结膜黏膜相关淋巴组织淋巴瘤增殖、迁移及侵袭中的作用

目的 观察结膜黏膜相关淋巴组织(MALT)淋巴瘤中microRNA-150 (miR-150)的表达,探讨miR-150在结膜MALT淋巴瘤中影响肿瘤细胞增殖、迁移与侵袭的机制.方法 使用qPCR法检测第二军医大学长征医院收治的3例结膜MALT淋巴瘤患者肿瘤组织及瘤旁组织中miR-150及其可能的下游靶分子Cbl-b的表达.将miR-150抑制物和阴性对照转染人多发性骨髓瘤细胞株RPMI8226,采用CCK-8法和流式细胞术研究miR-150对RPMI8226细胞增殖和凋亡的影响,通过Transwell实验研究miR-150对RPMI8226细胞迁移和侵袭的影响,用蛋白质印迹法检测miR-150对RPMI8226细胞中Cbl-b表达的调控.结果 与瘤旁组织相比,结膜MALT淋巴瘤组织中miR-150表达上调(P＜0.05,P＜0.01);抑制miR-150后,RPMI8226细胞的增殖受到抑制,细胞凋亡明显增加,迁移和侵袭能力降低,与阴性对照组相比差异有统计学意义(P＜0.05,P＜0.01).在结膜MALT淋巴瘤组织中,miR-150下游靶基因Cbl-b表达下调(P＜0.01);抑制miR-150后,RPMI8226细胞内Cbl-b蛋白的表达上调(P＜0.01).结论 MiR-150对淋巴瘤细胞的增殖、迁移和侵袭有促进作用,其表达上调参与了MALT淋巴瘤的发生.其机制可能与miR-150对下游分子Cbl-b的抑制性调控有关.     

miR-138-5p 靶向 TCF4调节眼葡萄膜黑色素瘤细胞的恶性生物学行为

目的 探讨miR-138-5p与转录因子4(TCF4)对眼葡萄膜黑色素瘤MuM-2B细胞恶性生物学行为的影响.方法 miR-138-5p mimic 和 pcDNA-TCF4分别或共转染 MuM-2B细胞,构建小鼠体内移植瘤模型.RT-qPCR检测细胞转染效率;生物信息学软件预测miR-138-3p和TCF4靶向位点;双荧光素酶报告基因实验验证靶向关系;克隆形成实验检测细胞增殖;Transwell实验检测细胞侵袭能力;Western blot检测TCF4及上皮-间质转化(EMT)相关蛋白表达;免疫组化检测Ki67、VEGF、Vimentin在肿瘤组织中的表达.结果 与对照组相比,转染组miR-138-5p和TCF4均升高(P＜0.05),且miR-138-5p和TCF4是靶向关系.miR-138-5p过表达通过靶向TCF4抑制MuM-2B细胞增殖和侵袭力并下调E-cad-herin和Vimentin蛋白表达量,上调N-cadherin蛋白表达量(P＜0.05).在体内移植瘤中,miR-138-5p过表达减轻肿瘤重量(P＜0.05),miR-138-5 p 过表达下调 Ki67、VEGF、Vim-entin在肿瘤组织中阳性细胞率(P＜0.05).结论 miR-138-5p过表达可下调TCF4水平,进而抑制葡萄膜黑色素瘤MuM-2B细胞增殖、侵袭及EMT.     

微小RNA-134-5p靶向作用于EGFR对卵巢癌SKOV3和A2780细胞生长的影响

目的 探讨微小RNA-134-5p(miR-134-5p)靶向作用于表皮生长因子受体(EGFR)基因对卵巢癌细胞生长的影响.方法 以卵巢癌细胞系SKOV3和A2780为研究对象,根据处理方法分为对照组(转染miR-NC)和实验组(转染miR-134-5p).采用qRT-PCR和Western blot检测EGFR基因及下游靶蛋白的表达量;流式细胞术检测细胞周期分布和细胞凋亡情况;四甲基偶氮唑蓝(MTT)法和集落形成实验检测卵巢癌细胞增殖能力.结果 实验组EGFR基因及下游靶蛋白表达显著下调,其中SKOV3细胞中EGFR mRNA下调至48％(P＜0.05),A2780细胞中EGFR mRNA下调至47％(P＜0.05).实验组细胞的细胞周期明显受到抑制(P＜0.05),miR-134-5p通过EGFR靶蛋白诱导细胞凋亡(P＜0.05).实验组细胞的增殖活性和集落形成能力明显受到抑制(P＜0.05).结论 miR-134-5p可通过靶向抑制EGFR基因,促进细胞周期停滞和细胞凋亡,降低卵巢癌细胞的增殖能力.     

血清中microRNA对非小细胞肺癌早期转移潜在的诊断价值

目的 对转移和未转移非小细胞肺癌(NSCLC)患者血清中外泌体进行测序,探讨血清外泌体中微小RNA(miRNA)对NSCLC早期转移诊断价值.方法 超高速离心法提取转移NSCLC和未转移NSCLC患者血清中外泌体,Arraystar人类miRNA微阵列检测2组外泌体中差异表达的miRNA.选择30例NSCLC转移患者和30例NSCLC未转移患者进行实时定量聚合酶链式反应验证基因芯片检测结果.结果 全部患者血清外泌体RNA浓度和纯度达到基因芯片检测标准,转移NSCLC患者血清外泌体中差异上调表达基因为miR-4436a,miR-4687-5p.差异下调表达基因miR-22-3p,miR-3666,miR-4448,miR-4449,miR-6751-5p,miR-92a-3p.实时定量聚合酶链式反应结果和基因芯片结果一致,miR-4436a上调2.11倍,miR-4687-5p上调2.09倍,miR-22-3p下调0.43倍,miR-3666下调0.41倍,miR-4448下调0.39倍,miR-4449下调0.46倍,miR-6751-5p下调0.45倍,miR-92a-3p下调0.41倍.结论 肺癌患者血清外泌体中miR-4436a,miR-4687-5p,miR-22-3p,miR-3666,miR-4448,miR-4449,miR-6751-5p,miR-92a-3p差异表达可以对NSCLC的早期转移起到提示作用.     

miR-15b-5p在胃癌组织中的表达及其临床意义

目的:检测miR-15b-5p在胃癌中的表达变化,探索其对胃癌细胞功能的影响。方法:采用实时定量PCR检测35例胃癌组织及其对应的癌旁正常胃组织中miR-15b-5p的表达;构建miR-15b-5p过表达载体及合成miR-15b-5p抑制剂,并转染胃癌细胞系AGS;应用MTT法检测胃癌细胞增殖能力变化;采用流式细胞术分析miR-15b-5p对细胞周期和凋亡的影响。结果:miR-15b-5p在胃癌组织中的表达显著下调(P<0.01);转染miR-15b-5p过表达载体抑制了胃癌细胞的增殖,将细胞周期阻滞在G_0/G_1期,并诱导了细胞凋亡;转染miR-15b-5p抑制剂促进了胃癌细胞的增殖,使细胞进入S和G_2/M期,并抑制细胞凋亡。结论:miR-15b-5p在胃癌中下调,抑制胃癌细胞的增殖,并诱导细胞凋亡。     

miRNA-671上调抑制胃癌细胞增殖与迁移

目的 探索miR-671在胃癌组织和细胞中的表达,并研究其对胃癌细胞增殖和迁移的影响.方法 通过qRT-PCR实验检测miR-671在胃癌组织和细胞中的表达,通过CCK-8实验检测miR-671表达上调对MKN45胃癌细胞增殖,通过划痕和Transwell小室实验检测miR-671表达上调对MKN45胃癌细胞侵袭和迁移的影响.结果 与癌旁正常组织相比,胃癌组织中的miR-671表达明显下调(P＜0.01);与正常人胃黏膜上皮细胞相比,胃癌细胞中的miR-671表达也明显下调(P＜0.01);miR-671表达上调明显抑制MKN45胃癌细胞增殖、迁移和侵袭(P＜0.01).结论 miR-671可以抑制胃癌细胞的增殖、迁移和侵袭,在胃癌中发挥抑癌基因功能.     

MiR-17-5p调控STAT3信号通路在心肌慢性缺氧适应中意义的研究

目的 探讨心肌慢性缺氧环境下,miR-17-5p的表达变化以及miR-17-5p对STAT3信号通路的调控对于缺氧心肌细胞的影响.方法 ①选取新桥医院心外科2014年8月至2015年4月期间先心病患儿20例,其中紫绀型(年龄61.5±46.5月,术后诊断为法洛氏四联症)与非紫绀型(年龄43.2 ±32.1月,术后诊断为室缺伴右心室流出道狭窄)各10例.术中取右室流出道心肌组织作为标本,采用RT-PCR检测两组先心病患儿心肌组织miR-17-5p的表达情况.②建立大鼠源H9c2心肌细胞慢性缺氧适应模型,分为缺氧0、12、24、48、72 h组(n=5),RT-PCR分别检测各组miR-17-5p的表达.③脂质体转染antagomir miR-17-5p和agomir miR-17-5p至H9c2心肌细胞,建立过表达miR-17-5p和沉默miR-17-5p的H9c2心肌细胞系,慢性缺氧培养48 h,CCK8实验检测细胞增殖情况,TUNNEL实验检测细胞凋亡情况,Western blot检测STAT3,p-Tyr-705-STAT3及其下游调控蛋白c-myc蛋白表达.结果 ①与非紫绀组(0.482 ±0.163)相比,紫绀组(1.450±0.705)患儿miR-17-5p表达明显升高(P＜0.01).②慢性缺氧细胞模型研究结果显示慢性缺氧时H9c2细胞miR-17-5p表达逐渐增高(P＜0.01).③缺氧环境下miR-17-5p过表达明显抑制p-Tyr-705-STAT3、STAT3、c-myc表达,引起心肌心肌细胞增殖受抑制,凋亡增加(P＜0.01);而抑制miR-17-5p对p-Tyr-705-STAT3、STAT3、c-myc表达改变不明显,且对于心肌细胞的增殖和凋亡改变也不明显(P＞0.05).结论 在心肌慢性缺氧过程中,miR-17-5p可能参与调控STAT3-c-myc信号通路,对于心肌细胞的存活和功能调节有重要意义.     

miR-30b-5p在乳腺癌中的表达及靶基因预测与生物信息学分析

目的 为深入研究miR-30b-5p在乳腺癌形成和发展中的作用提供理论依据.方法 原位杂交法(ISH)检测乳腺癌与癌旁组织中miR-30b-5p的表达.探针荧光定量PCR比较乳腺癌细胞系miR-30b-5p表达情况.软件预测miR-30b-5p的靶基因,进行KEGG及GO富集分析.结果 ISH显示乳腺癌组织中miR-30b-5p表达明显下调,与癌旁组织相比差异有统计学意义(P<0.01);miR-30b-5p的表达水平与 TNM 分期及远处转移等有关(P< 0.01),而与年龄和淋巴结转移无关(P>0.05).比较MCF-7,MDA-MB-231,MDA-MB-415,MDA-MB-453,和 MDA-MB-468这5株乳腺癌细胞系miR-30b-5p表达情况,发现较正常乳腺组织呈不同程度的低表达,并且以侵袭性最强的MDA-MB-231细胞的表达最低(P<0.01).在乳腺癌中,KEGG分析显示miR-30b-5p的靶基因参与了Pathways in cancer、P53 signaling pathway、Wnt signaling pathway、Cell cycle等通路,GO分析显示miR-30b-5p具有细胞代谢调控、基因表达调控、RNA代谢调控等生物功能.结论 miR-30b-5p在乳腺癌中表达明显下调,可能通过参与Pathways in cancer、P53 signaling pathway、Wnt signaling pathway、Cell cycle等通路,对乳腺癌细胞的代谢、基因表达等功能具有重要影响.     

非小细胞肺癌组织长链非编码RNA LINC00265、microRNA-98-5p的表达及其临床意义

目的 探究长链非编码RNA（lncRNA）LINC00265、microRNA-98-5p（miR-98-5p）在非小细胞肺癌（NSCLC）组织中的表达及其临床意义。方法 选取2016年1月—2017年12月乐山市人民医院收治的97例NSCLC患者的癌组织、相应癌旁正常组织进行研究。利用实时荧光定量聚合酶链反应测定癌组织及癌旁正常组织lncRNA LINC00265、miR-98-5p相对表达量;分析癌组织lncRNA LINC00265、miR-98-5p与患者临床病理特征及预后的关系;采用Pearson法分析癌组织lncRNA LINC00265与miR-98-5p的相关性;Cox回归分析影响NSCLC患者预后的因素。结果 NSCLC患者癌组织lncRNA LINC00265相对表达量高于癌旁正常组织（P <0.05）,miR-98-5p相对表达量低于癌旁正常组织（P <0.05）。有无淋巴结转移、不同临床分期和分化程度患者癌组织的lncRNA LINC00265和miR-98-5p表达水平比较,差异有统计学意义（P <0.05）。癌组织lncRNA LINC00265与miR-98-5p呈负相关（r =-0.580,P =0.000）。lncRNA LINC00265高表达、miR-98-5p低表达NSCLC患者36个月总生存时间、无病生存期较短（P <0.05）。淋巴结转移［R=2.152（95% CI：1.431,3.235）］、临床分期［R=2.136（95% CI：1.429,3.192）］、lncRNA LINC00265［R=2.533（95% CI：1.552,4.135）］是NSCLC患者死亡的独立危险因素（P <0.05）,而miR-98-5p［R=0.618（95% CI：0.506,0.755）］是NSCLC患者死亡的独立保护因素（P <0.05）。结论 NSCLC患者癌组织lncRNA LINC00265相对表达量升高,miR-98-5p相对表达量降低,其可能共同调控NSCLC的发生、发展,检测其相对表达量有利于判定NSCLC患者的预后。     

miR-125 a-5 p在非小细胞肺癌血清中的表达及其意义

目的探究miR-125a-5p在非小细胞肺癌(NSCLC)患者血清中的表达情况,分析miR-125a-5p与临床病理特征之间的相关性及其在NSCLC早期诊断中的意义。方法收集2017年7月至2018年3月安徽医科大学附属巢湖医院44例NSCLC患者为试验组和20例体检的健康志愿者为对照组。采用Q-PCR术检测NSCLC患者和健康者外周血清miR-125a-5p的表达量,并评估其临床意义。结果试验组血清miR-125a-5p相对表达量为0. 025(0. 017,0. 051),低于对照组的0. 050(0. 034,0. 117),差异有统计学意义(P <0. 05)。试验组患者miR-125a-5p的表达量与临床TNM分期呈负相关性(r=-0. 688,P <0. 05),而在性别、年龄、吸烟、组织分型间差异无统计学意义,与癌胚抗原(CEA)、细胞角蛋白19片段抗原(CYFRA21-1)水平均无相关性(P> 0. 05)。试验组患者CEA、CYFRA21-1的表达量与临床TNM分期均无相关性(P> 0. 05)。结论 miR-125a-5p在NSCLC患者血清中表达下调,对NSCLC早期诊断优于CEA、CYFRA21-1,可能成为NSCLC早期诊断的重要生物学指标。     

microRNA-30b在非小细胞肺癌中的表达及预后分析

目的 探讨微小RNA-30b（miRNA-30b）在非小细胞肺癌（NSCLC）中的表达情况,并进一步分析miR-30b与NSCLC患者预后的相关性。方法 收集41例NSCLC患者的肿瘤组织及其正常组织（距离肿瘤组织>5cm）,采用real-time PCR法检测miR-30b的表达情况,并对预后进行分析。结果 肿瘤组织miR-30b的表达水平显著低于正常组织（P<0.01）;miR-30b的表达水平与临床分期、淋巴结转移及EGFR基因突变显著相关（P<0.05）。Kaplan-Meier分析显示肿瘤组织中miR-30b高表达组的生存时间明显高于低表达组（P<0.05）。结论 MiR-30b在NSCLC中的表达是下调的,可作为NSCLC预后的一个新的潜在标志物。     

微小RNA-382-5p靶向作用核因子蛋白90对乳腺癌细胞增殖和凋亡的影响

目的 观察微小RNA-382-5p （miR-382-5p）对乳腺癌细胞增殖和凋亡的影响,并探讨其作用机制。方法 采用荧光实时定量聚合酶链反应（qPCR）的方法检测miR-382-5p在9例乳腺癌患者癌组织和乳腺癌细胞株中的表达,细胞计数试剂盒（CCK-8）法和平板克隆实验分别检测过表达miR-382-5p后乳腺癌细胞活力和增殖能力,流式细胞仪检测细胞凋亡情况。qPCR和Western blot法检测过表达miR-382-5p的乳腺癌细胞中核因子蛋白90（NF90）的表达。采用荧光素酶活性实验验证miR-382-5p对靶基因的靶向作用。结果 miR-382-5p在乳腺癌组织和细胞中低表达（P<0.05）,过表达miR-382-5p可抑制乳腺癌细胞的增殖能力,促进细胞的凋亡（P<0.01）。转染miR-382-5p模拟物组NF90基因的相对表达量较miR-NC组明显降低（P<0.01）。荧光素酶活性实验显示miR-382-5p与NF90基因3''非翻译区存在靶向关系（P<0.01）。结论 miR-382-5p对乳腺癌细胞的增殖具有抑制作用,对细胞的凋亡具有促进作用,其机制与靶向抑制NF90基因表达有关。     

幽门螺杆菌感染性胃癌组织microRNA-17、microRNA-490-3p的表达及其与临床病理特征和预后的关系

目的 探讨幽门螺杆菌(Hp)感染性胃癌组织microRNA-17(miR-17)、microRNA-490-3p(miR-490-3p)的表达及其与临床病理特征和预后的关系.方法 选取2012年1月—2014年6月东莞市人民医院收治的146例Hp阳性及阴性胃癌患者的癌组织及癌旁组织.实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-P...     

长链非编码RNA-H19特异性吸附微RNA-760调控nanog基因表达促进非小细胞肺癌细胞增殖和迁移

目的 探讨长链非编码RNA（lncRNA）-H19对非小细胞肺癌（NSCLC）细胞增殖、迁移的影响及分子机制。方法 收集2015年10月至2016年5月海军军医大学（第二军医大学）长海医院确诊的20例NSCLC患者手术切除的NSCLC组织及相应的癌旁正常组织。通过实时荧光定量PCR（qPCR）检测NSCLC组织及癌旁正常组织,人NSCLC细胞系A549、NCI-H1299和人正常肺上皮细胞系BEAS-2B中lncRNA-H19的表达。在A549细胞中过表达lncRNA-H19后,采用CCK-8法和Transwell实验分别检测细胞的增殖和迁移能力。利用生物信息学分析预测lncRNA-H19与微RNA（miRNA）-760的结合位点,通过双荧光素酶报告基因实验分析lncRNA-H19对miRNA-760的吸附作用,采用qPCR和蛋白质印迹法分别检测lncRNA-H19过表达对miRNA-760及下游靶基因nanog表达的影响。通过对A549细胞转染miRNA-760模拟剂过表达miRNA-760后,检测过表达miRNA-760对lncRNA-H19促进NSCLC细胞增殖和迁移作用的影响。结果 LncRNA-H19在NSCLC组织和A549、NCI-H1299细胞中均呈高表达,分别与其在癌旁正常组织和BEAS-2B细胞中的表达水平相比差异均有统计学意义（P均<0.01）。与对照组相比,过表达lncRNA-H19后A549细胞的增殖能力增强（P<0.05）、迁移能力提高（P<0.01）。在线数据库starBase v3.0预测分析结果显示lncRNA-H19能特异性吸附miRNA-760。双荧光素酶报告基因检测结果显示lncRNA-H19与miRNA-760之间存在特异性结合。与对照组相比,过表达lncRNA-H19可抑制A549细胞中miRNA-760的表达（P均<0.05）,并促进其下游基因nanog在mRNA和蛋白水平的表达（P均<0.01）。过表达miRNA-760可抑制lncRNA-H19对A549细胞增殖和迁移的促进作用,与lncRNA-H19过表达组相比差异均有统计学意义（P均<0.05）。结论 LncRNA-H19可通过特异性吸附miRNA-760调控nanog基因表达,从而促进NSCLC细胞增殖和迁移。     

MicroRNA-219a-5p和AFAP1L2对胰腺癌细胞的作用研究

目的 探讨microRNA-219a-5p（miR-219a-5p）和肌动蛋白丝相关蛋白1相似蛋白2（AFAP1L2）对胰腺癌细胞的作用。方法 分别采用实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）和Western blotting法检测胰腺癌细胞株（PANC-1、BXPC-3、SW1990、Capan-1）及正常胰腺导管上皮细胞（HPDE）miR-219a-5p、AFAP1L2的表达，采用siRNA及过表达质粒下调或上调AFAP1L2表达，CCK-8法观察胰腺癌细胞株增殖变化。采用mimics或inhibitor上调或下调miR-219a-5p表达，CCK-8法观察胰腺癌细胞株增殖变化。流式细胞术检测不同干预条件下细胞凋亡和细胞周期。生物信息学预测两者可能具有靶向调控关系。qRT-PCR和Western blotting法检测AFAP1L2 mRNA及蛋白表达，荧光素酶实验观察二者碱基配对关系，进一步验证miR-219a-5p对AFAP1L2具有靶向调控作用。结果 与HPDE细胞比较，胰腺癌细胞株中miR-219a-5p表达较低（P <0.05）。AFAP1L2 mRNA及蛋白在胰腺癌细胞株中的表达高于在HPDE细胞中的表达（P <0.05）。Capan-1或SW1990细胞培养48 h后，与空白对照组（NC组）比较，pCMV-EGFP-AFAP1L2组光密度（OD）值升高（P <0.05），siAFAP1L2组OD值下降（P <0.05），AFAP1L2对胰腺癌细胞增殖具有正向调控作用。Capan-1及SW1990细胞培养48 h后，与miR-NC组比较，miR-219a-5p mimics组OD值下降（P <0.05），miR-219a-5p inhibitor组OD值升高（P <0.05），miR-219a-5p表达对胰腺癌细胞增殖具有负向调控作用；上调miR-219a-5p表达，可诱导细胞S期阻滞，导致细胞凋亡增加。miR-219a-5p负向调控AFAP1L2表达；荧光素酶实验显示，miR-219a-5p与AFAP1L2的3''-URT互补结合，miR-219a-5p与AFAP1L2存在靶向调控关系。结论 miR-219a-5p通过靶向调控AFAP1L2表达负向介导胰腺癌细胞增殖及凋亡。     

卵巢癌中miR-144-3p和SGK3的表达水平及临床意义

目的 检测卵巢癌中microRNA-144-3p（miR-144-3p）与血清和糖皮质诱导蛋白激酶（SGK3）的表达水平,并探究其临床意义。方法 收集2010年3月~2012年7月于笔者医院经手术切除的64例上皮性卵巢癌组织、12例卵巢良性肿瘤组织和12例正常卵巢组织。实时定量PCR（qRT-PCR）技术检测卵巢癌组织miR-144-3p水平;蛋白质印迹（Western blot）法技术检测卵巢癌组织SGK3水平;分析卵巢癌组织miR-144-3p、SGK3表达与患者临床病理特征及预后的关系。结果 （1）卵巢癌组织miR-144-3p表达水平显著低于正常卵巢组织、卵巢良性组织（P<0.05）。（2）卵巢癌组织SGK3蛋白表达水平显著高于正常卵巢组织、卵巢良性组织（P<0.05）。（3）卵巢癌组织中miR-144-3p表达水平与SGK3蛋白表达水平显著呈负相关（P<0.05）。（4）卵巢癌组织miR-144-3p、SGK3表达水平与患者的肿瘤直径、病理分期、淋巴结转移情况、分化程度有关（P<0.05）,与患者的年龄、有无腹腔积液、组织学类型无关（P>0.05）。（5）全部患者的中位生存期为40个月,术后1、3、5年的累积生存率分别为76.56%、53.13%、25.00%。miR-144-3p低表达患者术后1、3、5年的累积生存率分别为67.57%、37.84%、10.81%;miR-144-3p高表达患者术后1、3、5年的累积生存率分别为88.89%、74.07%、44.44%;两者生存率的差异有统计学意义（P=0.001）。（6）SGK3高表达患者术后1、3、5年的累积生存率分别为68.29%、39.02%、9.76%;SGK3低表达患者术后1、3、5年的累积生存率分别为91.30%、78.26%、52.17%;两者生存率的差异有统计学意义（P=0.000）。结论 miR-144-3p、SGK3表达异常与上皮性卵巢癌的发生、发展有关,可能成为上皮性卵巢癌临床治疗及预后的新靶点。