ＨＯ-１持续高表达对ＤＡ到Ｌｅｗｉｓ大鼠肝移植急性排斥反应的影响

目的:探讨血红素氧化酶-1(hemeoxygenage-1,HO-1)在DA到Lewis大鼠肝移植中对急性排斥反应的影响及其机制.方法:建立DA到Lewis大鼠肝移植急性排斥模型,实验分3组,各12对.A组供体术前24 h阴茎背静脉注射5ml/kg生理盐水作为对照;B组供体术前24 h阴茎背经脉注射HO-1诱导剂钴原卟啉(CoPP),C组供体给予HO-1抑制剂锌原卟啉(ZnPP),移植后持续予相同处理直至受体死亡.术后7天,各组处死6只,取外周血及肝脏标本,测定血清ALT,DBIL水平,组织病理观察排斥反应程度,RT-PCR及Western blot法测定移植物内HO-1 mRNA,Foxp3 mRNA及其蛋白表达情况,余观察生存期.结果:术后7天,B组血ALT,TBIL水平与A组,c组相比,差异有统计学意义(P＜0.01);病理示B组移植肝排斥反应程度轻于A,C组;B组HO-1和Foxp3 mRNA及其蛋白的表达均强于A,C组;B组受体存活时间(29.83±1.40)天较A组(13.00±0.52)天与C组(11.67±0.42)天显著延长(P＜0.01),而A,C组之间差异无统计学意义(P＞0.05).结论:诱导移植肝HO-1持续高表达,可通过促进移植物内Foxp3表达增强,发挥免疫抑制作用,减轻移植肝急性排斥反应.     

大鼠原位肝移植中血红素加氧酶-1表达对细胞因子的影响

目的探讨血红素加氧酶-1(HO-1)对大鼠原位肝移植后细胞因子的影响。方法建立大鼠原位肝移植排斥模型,将大鼠分为3组:对照组,锌原卟啉(ZnPP)组和钴泵卟啉(CoPP)组。三组分别于建模后3d和7d处死,取肝脏标本。荧光实时RT-PCR检测HO-1及细胞因子(TNF-α,IL-2,IL-4,TGF-β1)的表达。结果HO-1在CoPP组表达明显升高,ZnPP组不明显,对照组介于两组之间。在对照组和ZnPP组中以促炎症因子(TNF-α,IL-2)升高明显,而在CoPP组中以抑制炎症的因子(IL-4,TGF-β1)升高为主。结论HO-1过表达能上调抗炎症因子的表达,抑制促炎症因子的表达。     

血红素加氧酶的生物学功能及其在肝移植中的作用研究进展

血红素加氧酶(heme oxygenase,HO)是催化血红素降解的限速酶,能催化血红素降解为一氧化碳(C0)、铁和胆红素,其降解产物在调节机体稳态方面具有重要作用.近来研究表明,促进HO-1高表达可以减轻器官移植的缺血-再灌注损伤和调节移植免疫排斥反应,在肝移植中具有重要的临床应用前景.     

血红素加氧酶-1和热休克蛋白70在肾移植中的表达

目的 探讨血红素加氧酶-1(HO-1)和热休克蛋白70(HSP70)在大鼠肾移植急性排斥反应中的表达及意义.方法 建立大鼠同种异体肾移植模型.实验分为Ⅰ组(正常对照)、Ⅱ组(同基因移植:SD大鼠→SD大鼠)、Ⅲ组(异基因移植:Wistax大鼠→SD大鼠)、Ⅳ组(异基因移植环孢霉素A干预).用免疫组化法检测移植肾组织中HO-1和HSP70的表达,并观察其与病理学检查的相关性.结果 同基因移植组移植肾中HO-1和HSP70的表达水平在术后无明显变化(P>0.05);异基因移植组移植肾中HO-1和HSPT0的表达在术后第1、3天和第7天逐渐升高(P<0.01),且与病理分级间存在正相关(r=0.911,P<0.01;r=0.869,P<0.01).结论 HO-1和HSP70参与肾移植急性排斥反应,监测HO-1和HSPT0的表达可能为急性排斥反应的早期诊断和治疗提供新的方法.     

细胞保护蛋白在人体移植肾中的表达

目的 研究细胞保护蛋白在人体移植肾中的表达情况和临床意义. 方法采用免疫组化染色技术检测人体移植肾急性排斥反应(AR)、慢性排斥反应(CR)和无排斥反应 (NR)3组各10例中细胞保护蛋白A20、血红素加氧酶-1(HO-1)和B细胞淋巴瘤/白血病-XL蛋白(Bcl-XL)的表达情况. 结果 A20、HO-1和Bcl-XL主要表达于内皮细胞、平滑肌细胞和浸润性单核细胞.A20在AR中表达强于CR[(5.04±0.71)vs(3.20±0.64),P＜0.01];A20在NR中不表达.HO-1在AR中表达(7.91±2.24),在CR和NR中不表达.Bcl-XL在3组中均表达(AR:10.62±3.17;CR:8.50±2.45;NR:11.03±2.77),但在CR中表达较弱;AR、 NR与CR相比,差异均具有统计学意义(P＜0.05);而AR组和NR组间的差异无统计学意义. 结论 A20和HO-1可能在AR中发挥细胞保护作用;而在CR中,A20可能是发挥保护作用的主要蛋白.     

血红素加氧酶-1与肝移植

在肝移植过程中,移植物的缺血缺氧是不可避免的,肝缺血再灌注损伤(ischemia reperfusion injury,IRI)限制了肝移植存活率,通过某种方式上调血红素加氧酶-1(heme oxygenase-1,HO-1)的表达在许多动物移植模型中被证实具有减轻移植物再灌注损伤(reperfusion injury,RI)和慢性排斥反应的作用。同时,人为诱导时,HO-1可减缓病理进展、促进供体特异性耐受。本文综述了HO-1的生物学特性、     

泡状棘球蚴感染纯系大鼠肝移植免疫耐受的实验研究

目的:探讨感染泡球蚴的大鼠原位肝移植(Orthotopiclivertransplantation,OLT)后免疫系统的变化特点及其对移植物的影响。方法:分为3组:(1)A组为正常对照组(同系移植):健康(Lewis)LEW大鼠→健康LEW大鼠;(2)B组为对照组(非同系移植):健康BrownNorway(BN)大鼠→健康LEW大鼠;(3)C组为实验组:BN大鼠→LEW大鼠(感染泡球蚴后3个月)。术后LEW大鼠存活48h判定为肝脏移植手术成功。每组于术后1、3、5、7d4个时间点各处死2只LEW大鼠,取血清及移植的肝脏、脾脏。每组留8只用于观察生存期。结果:A组、B组、C组受体存活时间平均为(54.13±16.62)d、(4.75±1.58)d、(15.50±3.93)d,差异有统计学意义(P<0.05)。病理结果示:(1)A组无排斥反应现象;(2)B组排斥反应随移植天数的增加逐渐加重,术后1、3、5、7d分别出现0、1、2、3级排斥反应;(3)C组第7天出现1级排斥反应。结论:感染泡状棘球蚴后有利于同种异体移植物的存活;该模型为研究感染泡球的肝脏移植提供了良好的实验平台     

血红素加氧酶-1在高氧肺损伤小鼠中的表达及作用

目的 探讨血红素加氧酶-1(HO-1)在高氧造成的肺损伤转基因小鼠和正常小鼠中的肺部表达水平及其作用.方法 把32只新生小鼠分成4组:野生型组(WT组),特异性转基因小鼠全身高水平表达HO-1组[HO-1-FL(H)组,细胞质]、特异性转基因小鼠全身低水平表达HO-1组[HO-1-FL(L)组,细胞质]和切去C末端HO-1(Nuc-HO-1-TR组,细胞核).把4组小鼠暴露在高氧环境中3d,然后放到正常空气环境中,通过免疫组织化学、免疫荧光等实验技术来观察小鼠3d、7d和14 d肺泡发育情况及HO-1在小鼠肺部表达情况.结果 HO-1在HO-1-FL(H)组小鼠肺部高表达,高氧暴露3d后4组小鼠肺部肺泡发育都受到了损害,在正常空气环境中7、14 d时HO-1-FL(H)组小鼠的肺泡发育恢复得最好.结论 小鼠肺部适度高水平的HO-1表达有助于高氧环境造成的小鼠肺损伤的恢复.     

引起排斥反应模型肝移植大鼠生存时间延长分析

目的　查找肝移植大鼠肝移植生存期明显延长的影响因素。方法　选用来自不同单位SD大鼠和同一单位的Wistar大鼠 ,分A ,B ,C组行Wistar至SD的大鼠原位肝移植 ,观察受鼠的术后第 7天肝病理、生存期。结果　A ,C组病理示重度急性排斥反应 ,生存期为 10 9d ,11 7d ;B组大鼠病理示轻度急性排斥反应 ,生存期为6 9 8d ,较A ,C组明显延长 (P =0 0 0 0 0 ,0 0 0 0 2 )。结论　B组SD大鼠基因发生变化 ,可能是引起B组肝移植大鼠生存期明显延长的原因     

HIBD新生大鼠海马神经元血红素加氧酶-1的表达及纳洛酮的干预作用

目的:研究新生大鼠脑缺氧缺血(hypoxia-ischemia,H/I)后血红素加氧酶-1(heme oxygenase,HO-1)活性和蛋白表达的变化?海马神经元凋亡及纳洛酮注射液的干预作用?方法:新生7日龄SD大鼠随机分为3组:假手术组(S)?生理盐水对照组(C)?纳洛酮干预组(N)?每组按照观测的时间点(H/I后3 h?6 h?12 h?24 h?3 d?7 d)分为6个亚组,每个亚组8只?用Rice法制备新生大鼠缺氧缺血性脑损伤(hypoxic-ischemic brain damage,HIBD)模型?将大鼠断头取右侧海马组织匀浆,Western blot 方法测HO-1蛋白表达,分光光度计法检测HO-1活性变化,用TUNEL染色法检测海马CA1区的细胞凋亡?结果:① Western blot 显示S组海马HO-1表达很弱,各时间点表达无差异(P > 0.05),C组和N组右侧海马HO-1表达在H/I后3 h即明显增加(P < 0.01),24 h达到峰值,3 d后明显下降,7 d接近S组,但仍较正常偏高(P < 0.01),N组在12 h?24 h?3 d?7 d海马HO-1表达均较C组高(P < 0.01)?② C组和N组右侧海马HO-1活性在H/I后3 h即明显增加(P < 0.01),H/I后24 h海马HO-1活性达到峰值,3 d后明显下降,7 d接近S组(P = 0.168),N组在12 h?24 h?3 d海马HO-1活性均较C组高(P < 0.01)?③TUNEL显示S组各时间点右侧海马CA1区仅见少量凋亡细胞,H/I后3 h C组和N组右侧海马神经元凋亡细胞数即明显增加(P < 0.01),24 h达到高峰,3 d开始下降,7 d时仍高于S组(P < 0.01),N组凋亡数在24 h?3 d?7 d这3个时间点上均较C组明显下降(P < 0.01)?结论:H/I后脑海马组织细胞中HO-1活性及蛋白表达均增加,与H/I后海马组织的细胞凋亡趋势相一致,在时间上吻合,表明HO-1参与了新生大鼠H/I后细胞凋亡的病理过程,纳洛酮注射液能够促进HO-1的表达及活性,抑制神经元凋亡,发挥神经保护作用?     

二氯甲烷对肝脏缺血再灌注损伤的影响

目的 探讨二氯甲烷对减轻肝脏缺血再灌注损伤的机制.方法 将80只雄性SD大鼠随机分为4组(20只/组):对照组,无任何处理;CoPP(钴-原卟啉)组,供肝收获前24 h供体腹腔注射CoPP 5 mg/kg;ZnPP(锌-原卟啉)组,供肝收获前24 h供体腹腔注射ZnPP 20mg/kg;MC(二氯甲烷)组,供肝收获前7 d,供体口服MC 500 ms/(kg·d).受体不作处理,采用双袖套法施行大鼠同基因原位肝移植(每组供体和受体各10只),移植后3 d每组各处死5只受体鼠,取出供肝并检测:移植后受体肝功能;Western印迹法和免疫组化法检测供肝血红素氧合酶-1(HO-1)的表达;TUNEL法检测供肝细胞的凋亡;Suzuki标准评分评估供肝的缺血再灌注损伤程度.每组留下5只受体鼠观察移植后的生存时间.结果 MC组、CoPP组血清的丙氨酸转氨酶(ALT)[(75±16)、(65±28)U/L]、天冬氨酸转氨酶(AST)[(185±42)、(187±43)U/L]明显较对照组[ALT(346±45)U/L、AST(474±90)U/L]和ZnPP组[ALT(578±75)U/L、AST(1084±128)U/L]低(P<0.01).CoPP组肝脏移植物的HO-1表达量中位数为3.05,明显较对照组高(P<0.05),MC组与对照组间差异无统计学意义(P>0.05).MC组和CoPP组的移植物细胞凋亡指数分别为4.1%±0.6%、3.2%±0.8%,明显较对照组(12.5%±2.4%)和ZnPP组(25.8%±3.1%)低(P<0.05).MC组、CoPP组比对照组、ZnPP组的肝细胞损伤轻、炎症细胞浸润少,MC组、CoPP组的Suzuki评分分别为0.76±0.52、0.76±0.59,明显较对照组(1.32±0.74)和ZnPP组(1.80±0.70)低(P<0.05).MC组、CoPP组的中位生存时间分别为100、93 d,较对照组(85 d)、ZnPP组(12 d)延长(P<0.05).结论 HO-1上调和二氯甲烷对肝脏移植物缺血再灌注损伤均有保护作用.     

血红素氧合酶-1对肝脏缺血再灌注损伤的保护作用

目的:探讨血红素氧合酶-1(HO-1)对肝脏缺血再灌注损伤的保护作用机制。方法:SD大鼠30只,建立二套袖法原位肝移植模型。随机分为3组:对照组,无任何处理;CoPP处理组,供肝收获前24h供体腹腔注射HO-1诱导剂CoPP5mg/kg。;ZnPP处理组,腹腔注射抑制剂ZnPP20mg/kg。移植后第三天检测肝脏移植物肝功能,免疫组织化学方法检测肝脏移植物HO-1的表达情况。TUNEL法检测凋亡变化。以Suzuki标准评分来反映肝脏移植物的缺血再灌注损伤程度。结果:①CoPP组ALT,AST较对照组和ZnPP组明显降低(P<0.01)。②HO-1表达:CoPP组明显高于其他组(P<0.05)。③移植物凋亡阳性细胞百分率:CoPP组明显低于对照组和ZnPP组(P<0.05)。④肝脏移植物病理变化:CoPP组和与对照组,ZnPP组比较,炎症细胞浸润少,肝细胞损伤轻。肝脏移植物Suzuki评分,CoPP组(0.76±0.59)明显低于对照组(1.32±0.74)与ZnPP组(1.80±0.70),有显著统计学差异(P<0.05)。结论:HO-1对肝脏移植物缺血再灌注损伤具有保护作用,其机制可能与抗炎症与抗凋亡有关。     

Heme oxygenase-1 regulates the major route involved in formation of immune hepatic fibrosis in rats

Background Heme oxygenase （HO） plays roles in some liver diseases, but what it does in immune liver fibrosis is rarely reported. We investigated the regulation mechanisms of HO-1 in rat immune liver fibrosis to find routes for intervention. Methods Male Sprague-Dawley rats were randomly divided into control group （N, n=-12）, fibrosis group （F, n=20）, cobalt protoporphyrin （CoPP） inducing group （Co, n=20） and zinc protoporphyrin （ZnPP） inhibiting group （Zn, n=20）. In groups F, Co and Zn, immune liver fibrosis was established with human serum albumin. At the attacked stage, CoPP （5 mg/kg） and ZnPP （5 mg/kg） were intraperitoneally injected in groups Co and Zn, respectively. After establishment of rat models, the numbers of rats reduced to 11, 15, 17 and 12 in groups N, F, Co and Zn respectively, because of death during the process. HO-1 in liver was detected by Western blotting and immunohistochemistry. The indexes of fibrosis were assessed by radioimmunoassay. Concentrations of serum transforming growth factor-β1 （TGF-β1）, and tissue inhibitor of metalloproteinses （TIMP-1） were detected using enzyme-linked immunosorbent assay. Hepatic stellate cell （HSC） and proliferation degree of fibrosis were assessed by pathological examination. Data analysis was performed by SPSS 10.0 software. Results The expression of HO-1 in group F was significantly higher than that in group N, but lower than that in group Co （P 〈0.05）; while that in group Zn was lower than in group F （P 〈0.05）, but still higher than that in group N （P 〈0.01）. Compared with group N, liver functional and liver fibrosis indicators were increased in group F （P 〈0.01）, while comparing to group F, they were decreased in group Co （P 〈0.05） and increased in group Zn （P 〈0.05）. CoPP reduced the extent of hepatocellular injury and hepatic fibrosis in comparison with group F （P 〈0.01）, being the opposite effect of ZnPP （P 〈0.01）. HSC was observed using indirect method and the result showed that the number of HSC in group F increased more than that in groups N and Co, while much less than in group Zn. The concentration of TGF-β1 decreased when HO-1 expressed increasingly （group Co： （3.5±1.0） ng/ml, group F： （7.8±1.3） ng/ml, P 〈0.01） and enhanced （group Zn： （9.6±13.6） ng/ml） when HO-1 presented less （P 〈0.01）. The concentrations of TIMP-1 were （151.1±32.0）, （472.0±34.8）, （232.3±41.3） and （533.2±37.2） ng/g liver wet weight in groups N, F, Co, and Zn, respectively. It was reduced in group Co （P 〈0.01） and increased in group Zn compared with group F （P 〈0.05）. Conclusions Inducing HO-1 expression appropriately may lighten hepatic fibrosis, and in contrast, inhibiting it strengthens the lesion. HO-1 interferes with the main ways to form liver fibrosis.     

Effect of emodin in suppressing acute rejection following liver allograft transplantation in rats

<正>Objective:To investigate the mechanism of action of emodin for suppressing acute allograft rejection in a rat model of liver transplantation.Methods:Brown Norway(BW) recipient rats of orthotopic liver transplantation(OLT) were divided into three groups,Group A receiving isografting(with BW rats as donor), Group B receiving allografting(with Lewis rats as donor),Group C receiving allografting and emodin treatment (50 mg/kg daily).They were sacrificed on day 7 of post-transplantation,and their hepatic histology,plasma cytokine levels,and T-cell subset expression were detected.Results:Compared with those in Group A,rats in Group B exhibited severe allograft rejection with a rejection activity index(RAI) of 7.67±0.98,extensive hepatocellular apoptosis with an apoptosis index(Al) of 35.83±2.32,and elevated plasma levels of interleukin-2 (IL-2),interleukin-10(IL-10),tumor necrosis factor-α(TNF-α),CD4~+ and CD4~+/CD8~+ ratio.However,recipients in Group C showed a decrease in histological grade of rejection and hepatocellular apoptosis,as well as a decrease in plasma levels of IL-2,TNF-α,CD4~+ and CD4~+/CD8~+ ratio,but elevated levels of IL-10 as compared with the allograft group.Conclusion:Post-OLT acute rejection could be attenuated by emodin,its mechanism of action may be associated with protecting hepatocytes from apoptosis,polarizing the Th 1 paradigm to Th2,and inhibiting the proliferation of CD4~+ T cell in plasma.     

血红素氧合酶－1对肝硬化大鼠肺脏结构和功能的影响

目的：探讨血红素氧合酶－1/一氧化碳系统在实验大鼠肝肺综合征中的作用。 方法：35只SD大鼠随机分为肝硬化组、锌原卟啉组、钴原卟啉组和假手术组。胆总管结扎制备大鼠肝硬化模型。锌原卟啉组、钴原卟啉组模型制备同肝硬化组,仅在标本采集前24小时分别腹腔给予锌原卟啉组、钴原卟啉组30mg/Kg。测量平均动脉压、门静脉压,血气分析;病理观察肝硬化和肺血管扩张形成;应用免疫组化方法观察HO-1蛋白在肺内的表达,RT-PCR法检测肺组织中HO-1 mRNA的表达。 结果：病理显示手术组4周肝硬化形成;肺内血管扩张,肺泡间隔增加伴有肺不张。与假手术组相比,肝硬化组平均动脉压显著下降,门静脉压显著升高（P）;肺泡动脉血氧梯度增加（P）;动脉碳氧血红蛋白、肺组织HO-1蛋白及HO-1 mRNA显著增加（P< 0.05）。与肝硬化组相比,锌原卟啉组肺泡动脉血氧梯度下降、动脉碳氧血红蛋白、肺组织HO-1蛋白及HO-1 mRNA显著减少（P< 0.05）,肺内血管扩张缩小;钴原卟啉组肺泡动脉血氧梯度增高、动脉碳氧血红蛋白、肺组织HO-1蛋白及HO-1 mRNA显著增加（P< 0.05）,肺内血管扩张加重。 结论：肺内血红素氧合酶－1表达增加在肝肺综合征的发病中起着重要的作用。     

异丙酚对高糖诱导心肌细胞肥大时血红素加氧酶-1表达的影响

目的:观察血红素加氧酶-1在高糖诱导的心肌细胞肥大中的表达,以及异丙酚对其表达的影响。方法:体外培养乳鼠心肌细胞,分组给药后,用BCA法测心肌细胞的蛋白质含量;用计算机图像分析系统检测心肌细胞表面积;用DCFH-DA活性氧检测试剂盒检测细胞内氧自由基的产生;用RT-PCR和Western blot分别检测心肌细胞中HO-1mRNA及蛋白表达。结果:高糖组心肌细胞表面积、细胞蛋白含量及氧自由基产生均升高。50μmol/L浓度的异丙酚对高糖诱导的肥大心肌细胞表面积、细胞蛋白含量及氧自由基的产生均有显著的抑制作用,而给予HO-1抑制剂后其作用明显减弱。结论:HO-1可能参与了异丙酚抑制心肌细胞肥大的作用。     

对DA－Lewis大鼠肝移植模型建立的探讨

[摘要]目的 探讨近交系大鼠肝移植的手术技巧,建立稳定的急性排斥模型。方法 DA大鼠做为供体,雄性Lewis大鼠做为受体,采用改良后的Kamada“二袖套管法”,建立大鼠原位肝移植模型。观察术后存活情况,并对其生存时间进行统计分析。结果 60例大鼠肝移植手术中,供体手术时间(30±8)min,修肝时间(15±2)min,受体手术时间（60±7）min,无肝期时间（21±3）min,手术成功率88.3％。术后4至5天开始出现黄疸,精神差,睁眼困难,反应迟钝,并于术后11天内全部死亡。结论 根据近交系大鼠自身结构特点,对大鼠原位肝移植模型建立方法进行了改进,取得了一定的成效。DA-Lewis为稳定、可靠的大鼠肝移植急性排斥模型,是研究肝移植排斥反应及免疫耐受的理想动物模型。     

氟对大鼠水迷宫学习记忆及脑内单胺类神经递质浓度的影响

目的探讨氟对大鼠学习记忆及脑内单胺类神经递质浓度的影响。方法 40只SD大鼠随机分为对照组及低、中、高剂量染毒组,分别以0、5、10、20mg/kg的氟化钠(NaF)对SD大鼠染毒90d后,应用水迷宫测试其学习记忆能力,并采用ELISA法检测脑组织中多巴胺(DA)和5-羟色胺(5-HT)浓度。结果高剂量染毒组与对照组大鼠水迷宫实验中抵达终点的游泳时间差异有统计学意义(P<0.05),其它各组抵达终点的游泳时间差异均无统计学意义(P>0.05);与组对比,高剂量染毒组脑中DA含量明显下降,差别有统计学意义(P<0.05);其它各剂量组DA及5-HT含量与对照组相比,差异均无统计学意义(P>0.05)。结论氟对大鼠学习记忆的影响可能与脑内单胺类神经递质含量变化有关。