一氧化氮和过氧亚硝基阴离子在肢体缺血再灌注致肺损伤中的作用

目的:观察肢体缺血再灌注致肺损伤时肺组织中一氧化氮(NO)及过氧亚硝基阴离子(ONOO^-)的变化,以探讨二者在此种损伤中的作用。方法:采用夹闭大鼠腹主动脉下段造成双下肢缺血和再灌注后肺损伤模型,分别测定假手术组、缺血4h组、缺血4h再灌注1h组及再灌注4h组肺组织匀浆中超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)、NO₂^-/NO₃^-含量变化;应用免疫组化方法测定上述各组肺组织中诱导型一氧化氮合酶(iNOS)及ONOO^-体内生成标志物硝基酪氨酸(NT)的变化。结果:肢体缺血再灌注后1h和4h肺组织中MDA和NO₂^-/NO₃^-的含量显著高于对照组和单纯缺血组(P＜0.05),而SOD活性则显著低于此两组(P＜0.05),并出现大量iNOS及NT阳性信号。结论:肢体缺血再灌注致肺损伤时肺组织中有大量NO和ONOO^-产生,脂质过氧化增强,提示ONOO^-参与介导此种肺损伤。     

银杏叶提取物对糖尿病大鼠睾丸损伤的作用

目的:研究银杏叶提取物(GBE)对糖尿病所致的睾丸损伤的作用及其机制。方法:用光镜及透射电镜观察链脲佐菌素(STZ)诱导的糖尿病1个月大鼠睾丸的形态学改变,并测定睾丸组织丙二醛(MDA)、NO产物NO₂^-/NO₃^-的含量及超氧化物歧化酶(SOD)、一氧化氮合酶(NOS)的活性。 结果:①糖尿病大鼠睾丸组织光镜下主要表现为睾丸曲细精管萎缩、变形及生精上皮脱落,透射电镜下主要见到支持细胞浆内内质网扩张、脂滴空泡形成,溶酶体明显减少,银杏叶组大鼠睾丸组织光镜、透射电镜下上述病变明显改善。②睾丸组织的MDA、NO₂^-/NO₃^-含量及tNOS和iNOS活性银杏叶组低于糖尿病组,SOD活性银杏叶组高于糖尿病组。 结论:GBE对糖尿病所致的睾丸损伤有明显的保护作用,其作用机制与提高SOD活力减少MDA产生,抑制iNOS活力减少NO产生有密切关系。     

氨基胍等对严重烧伤大鼠一氧化氮表达及烧伤休克的影响

目的:研究一氧化氮合酶(NOS)抑制剂与严重烧伤大鼠体内NO产量、NOS表达以及平均动脉压(MAP)变化的关系。方法:复制大鼠重症烧伤模型,检测应用非选择性NOS抑制剂L-NAME和选择性诱生型NOS(iNOS)抑制剂氨基胍(AG)后大鼠血液中NO代谢产物(NO₂^-／NO₃^-)以及肺和十二指肠组织中神经型NOS(nNOS)mRNA的表达水平,同时测定各组大鼠的MAP。结果:烧伤后大鼠血液中NO₂^-／NO₃^-含量显著增高,L-NAME和AG都能抑制NO₂^-／NO₃^-的升高,P<0.01;烧伤后nNOS的mRNA表达在肺和十二指肠中均有不同程度升高,AG和L-NAME使nNOS表达增加,L-NAME作用更为显著,P<0.01;烧伤后大鼠MAP略有上升,然后进行性下降,L-NAME组大鼠MAP显著升高,但于3h后急剧下降,AG组大鼠MAP下降速度明显低于对照组。结论:结构型NOS(cNOS)与iNOS在烧伤休克病理生理过程中的作用明显不同,iNOS活性过度增高与烧伤休克发病关系密切。     

L-硝基精氨酸对大鼠LPS性肺损伤的实验治疗研究

目的:观察一氧化氮(NO)和一氧化氮合酶抑制剂N^G-硝基-L-精氨酸(L-NA)对LPS性肺损伤的影响。方法:采用静脉注射脂多糖(LPS)复制急性肺损伤大鼠模型。将40只SD大鼠随机分为5组:空白对照组、LPS模型组、L-NA高剂量(20mg/kg)、中剂量(10mg/kg)、低剂量(5mg/kg)治疗组,经腹腔注射,实验过程中监测大鼠平均动脉压(MAP),定时取静脉血测定血浆中NO₂^-/NO₃^-含量,于规定时间处死大鼠,迅速取出肺脏,观察LPS引起大鼠急性肺损伤后肺系数、肺水肿情况和肺组织中丙二醛(MDA)含量、一氧化氮合酶(NOS)、超氧化物歧化酶(SOD)活性的变化,以及L-NA的治疗作用。结果:L-NA可明显升高MAP,降低肺系数和肺含水量,减少血浆中NO₂^-/NO₃^-含量,可显著降低肺组织中NOS活性,减少MDA含量,增强SOD活性,减轻肺损伤。结论:L-NA对LPS性肺损伤具有治疗作用,且随剂量增大作用增强。     

肝缺血预处理保护作用与一氧化氮/内皮素-1系统有关

目的:研究一氧化氮/内皮素-1(NO/ET-1)失衡与肝缺血再灌注(I/R)损伤的关系以及肝缺血预处理(IPC)对NO/ET-1系统的调节作用。方法:采用鼠肝I/R模型,比较I/R组和IPC+I/R组NO/ET-1系统的变化情况及其与肝I/R损伤的关系。用RT-PCR检测再灌注2h内肝组织中是否有诱生性一氧化氮合酶(iNOS)mRNA表达。结果:再灌注急性期血浆NO代谢产物(NO₂^-/NO₃^-)降低、ET-1升高致NO/ET-1比值降低,血浆ALT、AST、LDH、TNF-α含量及肝组织丙二醛(MDA)含量增高,而肝组织ATP含量降低,肝损伤加重;肝IPC的保护作用与其升高NO₂^-/NO₃^-、降低ET-1,升高NO/ET-1比值有关;在上述肝组织中未测出有iNOSmRNA表达。结论:肝I/R损伤与NO/ET-1失衡有关,IPC对I/R急性期肝的保护作用可能是通过对NO/ET-1系统的调节作用而介导的,此时NO来源于原生性一氧化氮合酶(cNOS)而非iNOS。     

败血症休克大鼠血管L-精氨酸/一氧化氮途径的变化

目的:观察败血症休克大鼠主动脉内膜、中膜和外膜一氧化氮合成途径的改变。方法:雄性Wistar大鼠盲肠结扎并穿孔复制败血症休克模型,分别测定假手术组、早期休克组和晚期休克组大鼠主动脉内膜、中膜和外膜的亚硝酸盐(NO^-₂)含量、一氧化氮合酶(NOS)活性及L-精氨酸(L-Arg)转运;免疫组化染色检测诱导型一氧化氮合酶(iNOS)在主动脉各层的分布。结果:早期及晚期败血症休克大鼠主动脉内膜产生的NO^-₂含量、NOS活性及L-Arg转运速率均低于假手术组,而中膜和外膜的NO^-₂、NOS活性及L-Arg转运速率则显著高于假手术组,外膜增加的程度尤为显著。免疫组织化学染色显示,败血症休克时血管中膜和外膜尤其是外膜iNOS阳性染色明显较强。结论:败血症休克时血管内膜NO合成受到抑制,而中膜和外膜NO合成显著增强,这一改变与休克状态下血管中L-Arg转运、iNOS表达及其活性的变化有关。     

一氧化氮与脑血管痉挛性神经元损伤和L-精氨酸的作用

目的:探讨一氧化氮(NO)与蛛网膜下腔出血(SAH)后脑血管痉挛(CVS)所致神经元损伤的关系及L-精氨酸(L-Arg)的保护作用。方法: 应用血管内穿刺法建立大鼠SAH模型,将动物随机分为假手术组(SO组)、SAH组和SAH+L-Arg组。动态检测24 h内大脑顶叶皮层局部脑血流量(rCBF),测量基底动脉(BA)管径变化,测定不同时点血清NO(NO^-₂/NO^-₃)水平和血浆ET-1含量,并行海马神经元形态学观察。 结果: 假手术对各项指标无显著影响。SAH组术后rCBF迅速降低,1 h达最低值,并持续24 h;SAH后BA管径明显缩小;血清NO^-₂／NO^-₃含量明显减少,血浆ET-1含量逐渐增加,海马神经元显著损伤。与SAH组比较,SAH+L-Arg组rCBF下降的速度减慢、程度减轻;BA管径缩小的程度减轻;血清NO^-₂／NO^-₃水平降低和血浆ET-1含量增高的变化减轻;海马神经元损伤的程度减轻。结论: 血清NO浓度的降低参与了CVS性神经元损伤,L-Arg对之具有一定减轻作用。     

含硒藻蓝蛋白抗小鼠实验性肝损伤的作用

目的:观察含硒藻蓝蛋白(Se-SPC)对四氯化碳(CCl₄)致小鼠急性肝损伤的拮抗作用。方法:以2%CCl₄油灌胃复制小鼠急性肝损伤模型,各组分别腹腔注射Se-SPC、藻蓝蛋白(SPC)、无机硒(Se)7d,测定血及肝组织中Se、谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、谷丙转氨酶(ALT)、一氧化氮(NO)水平,分析Se-SPC、SPC、无机Se对上述指标的影响。结果:Se-SPC组比CCl₄组血和肝中Se、GPx、SOD水平显著增高(P<0.05),血ALT、血和肝中MDA及NO₂^-/NO₃^-水平显著降低(P＜0.05),高剂量Se-SPC组对Se含量、GPx、MDA、NO₂^-/NO₃^-等指标的影响更为显著(P＜0.01),在相同蛋白或硒剂量下,Se-SPC组比SPC组和无机Se组对上述指标作用更大。相关分析发现小鼠血Se水平与GPx活性呈显著正相关(r=0.705),血GPx活性与MDA、NO₂^-/NO₃^-、ALT水平呈明显负相关(r=－0.629,r=－0.336,r=－0.457),血ALT活性与MDA及NO₂^-/NO₃^-呈显著正相关(r=0.519,r=0.641)。结论:Se-SP可能结合增高硒酶活性及抗炎双重功效,对CCl₄致小鼠肝脏的氧化损伤具有拮抗作用。     

阿司匹林对炎症条件下人血管内皮细胞一氧化氮的产生及诱导型一氧化氮合酶mRNA表达的影响

目的:探讨炎症时阿司匹林(AS)对内皮细胞一氧化氮(NO)的产生及诱导型一氧化氮合酶(iNOS)基因表达的抑制作用。方法:Griess法测上清液NO^-₂/NO^-₃水平、黄递酶法测NOS活性、常规生化法测乳酸脱氢酶(LDH)、丙二醛(MDA)浓度,染料排除法测细胞活力,RT-PCR技术分析iNOSmRNA水平。结果:白介素(IL)-1β、肿瘤坏死因子(TNF)-α、γ-干扰素(INF)联用脂多糖(LPS)诱导后上清液中NO^-₂/NO^-₃由(4.27±0.75)μmol/L增加到(9.35±1.25)μmol/L,对内皮细胞造成明显的损伤。但3mmol/LAS组NO生成及NOS活性明显降低,LDH释放率及MDA浓度下降,细胞存活率上升,与NO诱导组相比差异显著。并随AS剂量的增加对NO的抑制及对细胞的保护作用更加明显,但AS对生理水平的NO没有抑制作用。同时发现10mmol/L浓度以下AS对iNOSmRNA表达水平没有影响;但10-20mmol/L的AS则可在转录水平上抑制iNOSmRNA的表达。并观察到水杨酸钠及消炎痛不具有抑制NO产生的作用。结论:AS具有明显抑制IL-1β、TNF-α、γ-INF及LPS诱导NO生成的作用,从而保护血管内皮细胞避免炎症时高浓度NO的损伤。     

三七总皂甙对慢性低氧性肺动脉高压大鼠的防治作用

目的:探讨三七总皂甙(PNS)对慢性常压低氧性肺动脉高压大鼠的防治效果及其机制。方法: 将雄性SD大鼠随机分为:正常对照组(C组)、单纯低氧组(H组)、低氧+PNS组(HT组)。进行血流动力学、红细胞比积(Hct)、透射电镜和有关生化指标检测。结果:(1)H组平均肺动脉压(mPAP)、平均右室压(RVMP)和Hct显著高于C组而HT组显著低于H组;(2)H组血浆、肺匀浆一氧化氮(NO₂^-/NO₃^-)含量、一氧化氮合酶(NOS)活性及血浆总超氧化物歧化酶(T-SOD)、铜/锌超氧化物歧化酶(Cu/ZnSOD)活性显著低于C组, HT组显著高于H组,但HT组血浆、肺匀浆NO₂^-/NO₃^-、NOS仍显著低于C组;(3) HT组肺小动脉内皮细胞损伤显著轻于H组 。结论: 三七总皂甙可抑制大鼠慢性低氧性肺动脉高压的形成,其机制可能与其调节NO含量、抗氧自由基损伤、减轻细胞损伤和降低红细胞比积有关。     

川芎嗪对肠粘膜屏障功能的保护作用

目的:探讨川芎嗪对失血性休克再灌注后肠粘膜屏障功能的保护作用。方法:30只日本大耳白兔随机分为3组:假手术组(A组),单纯休克组(B组),川芎嗪治疗组(C组)。以硫代巴比妥酸比色法、放射免疫法及硝酸还原酶法测定末端回肠粘膜丙二醛(MDA)、肿瘤坏死因子(TNFα)、白细胞介素-1β(IL-1β)及一氧化氮代谢产物(NO^-2/NO^-3)含量,并取体循环血做细菌培养,取肠粘膜行光镜和电镜观察。结果:B组肠粘膜MDA、TNFα、IL-1β含量明显高于A组,NO^-2/NO^-3浓度显著低于A组,而C组变化无显著;B组细菌移位率明显高于A组,而C组与A组比较无显著差异;B组肠粘膜损伤明显重于A组,C组明显轻于B组,而C组与A组差异无显著。结论:川芎嗪能保护失血性休克再灌注后肠粘膜屏障功能,这可能与其清除体内氧自由基、提高一氧化氮水平及阻抑炎性介质作用有关。     

肠系膜淋巴管结扎对休克大鼠肾功能不全的干预机制

目的： 观察结扎肠系膜淋巴管对不同时期重症失血性休克大鼠肾组织自由基、炎症介质的影响，探讨肠淋巴途径对休克大鼠肾功能不全的干预机制。方法: 雄性Wistar大鼠78只，分为假手术组、休克组、结扎组。休克组与结扎组复制重症失血性休克模型，结扎组于休克复苏后行肠系膜淋巴管结扎术。于休克后90 min、输液复苏后0 h、1 h、3 h、6 h、12 h、24 h等时点处死大鼠，制备肾组织匀浆，检测MDA、SOD、NO、NOS、TNF-α、IL-6以及MPO水平，RT-PCR法测定各组大鼠肾组织iNOS mRNA表达。结果: 休克组大鼠输液复苏后不同时点肾组织匀浆MDA、NO、NOS、TNF-α、IL-6水平和MPO活性以及iNOS mRNA表达均有不同程度的升高，6 h-12 h持续在较高水平，均显著高于假手术组，肾组织匀浆SOD活性显著低于假手术组（P<0.01，P<0.05）；结扎组输液复苏后6 h、12 h、24 h肾组织匀浆MDA、NO、NOS、TNF-α、IL-6水平和MPO活性以及iNOS mRNA均显著低于休克组相应时点，SOD活性高于休克组相应时点（P<0.01，P<0.05）。结论: 肠系膜淋巴管结扎干预重症失血性休克大鼠肾功能不全的机制与减少肾PMN扣押、降低TNF-α、IL-6的释放、抑制NO生成及iNOS mRNA表达、减少自由基释放与SOD消耗等因素有关。     

从氧自由基、一氧化氮探讨四逆汤抗急性失血性休克的肝脏机制

目的:从氧自由基、一氧化氮探讨四逆汤抗急性失血性休克的肝脏机制。方法:复制急性失血性休克大鼠模型, 分为假手术对照组;单纯休克模型组;休克+生理盐水复苏组;休克+四逆注射液复苏组。四逆注射液(浓度1000g生药/L), 剂量0.1mL/200g大鼠。用生理盐水或四逆注射液治疗3h后处死动物并取组织。测定各组肝脏超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)水平, 一氧化氮(NO)水平。采用免疫组化染色法, 观察诱导型一氧化氮合酶(iNOS)在肝细胞中的变化特点。RT-PCR观测肝细胞iNOS和内皮源性一氧化氮合酶(eNOS)基因表达的变化。结果:模型组在休克1h后SOD活性明显低于对照组(P＜0.01)、MDA水平明显高于对照组(P＜0.01)。四逆汤组复苏3h后肝组织SOD明显高于生理盐水组(P＜0.01)、MDA低于生理盐水组(P＜0.01)、NO水平明显高于生理盐水组(P＜0.01)。生理盐水组iNOS在肝细胞中染色阳性单位明显高于四逆汤组(P＜0.05)。生理盐水组促进iNOSmRNA的表达。四逆汤组eNOSmRNA的表达增强。结论:四逆汤通过清除氧自由基, 升高NO, 改善肝组织微循环, 减少诱导型iNOS表达的各种因素, 理论上减轻了NO与氧自由基生成的ONOO的细胞毒作用和血管的低反应性, 并对肝脏起到保护作用。     

感染性休克下调大鼠血管内皮和血小板L-精氨酸/一氧化氮通路

目的：观察感染性休克对大鼠血小板及血管L-精氨酸(L-Arg)/一氧化氮合酶(NOS) /一氧化氮(NO)通路的影响及其相互联系,探讨感染性休克损伤的机制。方法:利用盲肠结扎并穿孔复制早期和晚期感染性休克大鼠模型,采用Greiss法测定血管各层及血小板孵育液亚硝酸盐(NO^-₂/NO^-₃)含量;以同位素示踪法检测其NOS活性及L -Arg转运。结果:早、晚期感染性休克大鼠血小板和主动脉内膜NO-2/NO-3水平、NOS 活性及低亲合L-Arg 转运量均显著低于假手术组(高亲合L- Arg 转运量在早期休克增加、晚期休克降低);而中膜和外膜的NO^-₂/NO^-₃水平、NOS 活性及L-Arg 转运量则显著高于假手术组,均以休克晚期改变为显著。血小板和主动脉内膜NO^-₂/NO^-₃生成、NOS 活性及高、低亲合L-Arg 转运的改变均呈正相关(均P< 0. 01)。结论:感染性休克下调血管内膜和血小板的L-Arg/NO通路,上调血管中膜和外膜L-Arg/ NO通路。提示检测血小板L-Arg/NO通路的变化可能反映休克时血管内皮功能的损伤。     

Effects of vitamin D-induced supernatant of placental explants from preeclamptic women on oxidative stress and nitric oxide bioavailability in human umbilical vein endothelial cells

The study evaluated the effect of the supernatant of placental explants from preeclamptic (PE) and normotensive (NT) pregnant women after tissue treatment with or without vitamin D (VD) on oxidative stress and nitric oxide (NO) bioavailability in human umbilical vein endothelial cells (HUVEC). Placental explants were prepared from eight NT and eight PE women, and supernatants were obtained after incubation with or without hydrogen peroxide (H₂O₂) and/or VD. HUVEC were cultured for 24 h with supernatants, and the following parameters were analyzed in HUVEC cultures: NO, nitrate (NO₃ ^-), and nitrite (NO₂ ^-) levels, lipid peroxidation, and intracellular reactive oxygen species (ROS). Results showed that the production of NO₃ ^-, NO₂ ^-, malondialdehyde (MDA), and ROS were significantly higher in HUVEC treated with explant supernatant from PE compared to NT pregnant women, while the supernatant of PE explants treated with VD led to a decrease in these parameters. A significantly high production of NO was detected in HUVEC cultured with control supernatant of NT group, and in cultures treated with supernatant of PE explants treated with VD. Taken together, these results demonstrated that cultures of placental explants from PE women with VD treatment generated a supernatant that decreased oxidative stress and increased the bioavailability of NO in endothelial cells.     

抗胸腺细胞血清性肾炎模型大鼠肾小球中C5b-9的沉积及NO、TNFα含量分析

目的: 探讨抗胸腺细胞血清性肾炎(ATSN)大鼠肾小球内C5b-9复合物的沉积与某些炎症介质和细胞因子如:一氧化氮(NO)和肿瘤坏死因子α(TNFα)的含量情况。 方法: 大鼠一次性静脉注射抗胸腺细胞抗血清(ATS)建立ATSN模型,定期对ATSN大鼠肾小球中的补体C5b-9复合物进行免疫组化染色定位、显微图像扫描半定量分析;并对有C5b-9包绕的肾小球系膜细胞(MC)进行计数。测定ATSN大鼠肾中诱生型NO合酶(iNOS) mRNA的表达、尿液中NO的代谢产物(NO^-₂／NO^-₃)及TNFα的排泄量。 结果: ATSN模型大鼠肾小球MC先溶解坏死后继发增生,病变早期(溶解时相)补体C5b-9复合物主要定位于肾小球系膜区及MC表面;随着病程的进展,被C5b-9包绕的MC逐渐减少, 病程初期ATSN大鼠肾小球MC有明显的 iNOS mRNA表达, 尿液中NO^-₂／NO^-₃ 和TNFα的排泄量也明显增加。在ATSN病变的增生阶段(一般7 d后),上述指标的变化逐渐趋缓。 结论: ATSN模型大鼠肾小球中MC逐渐溶解与补体C5b-9沉积及NO和TNFα的合成与释放有一定关系。     

人补体C5b~9复合物对大鼠肾系膜 细胞一氧化氮生成的影响

目的:探讨人补体 C_5b~9复合物对大鼠肾小球系膜细胞(MC)合成一氧化氮(NO)的影响。方法:首先提取人补体C_5b~9复合物,同时培养出大鼠肾小球MC。然后用C_5b~9复合物刺激MC,观察刺激后6 h、24 h、和48 h培养上清液中NO代谢产物-硝酸根(NO₃^-)和亚硝酸根(NO₂^-)量的变化,并测定刺激后24 h、48 h时MC内环鸟苷酸(cGMP)的水平。结果:用人C_5b~9复合物刺激大鼠MC后可致培养上清中NO₃^-/NO₂^-含量增加,细胞内cGMP水平上升。NO合成增多能够被NO合酶(NOS)抑制剂—─-N^G-硝基-L-精氨酸甲基酯(L-NAME)所抑制。结论:人C_5b~9复合物能够增加大鼠肾MC 的NO合成。     

银杏叶提取物对实验性2型糖尿病大鼠肝脏的保护作用

目的： 研究银杏叶提取物(EGB)对实验性2型糖尿病大鼠肝脏损伤的影响及机制。方法: 雄性SD大鼠39只，随机分为4组: 正常对照组、高脂组、糖尿病对照组和EGB治疗组。采用高脂饮食加链脲佐菌素（STZ） 诱导2型糖尿病大鼠模型， EGB治疗组给予EGB 8 mg·kg^-1·d^-1治疗8周。用光镜和透射电镜观察EGB对2型糖尿病大鼠肝组织的形态学改变，并检测肝组织中超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽还原酶(GSH-PX)和总一氧化氮合酶(NOS)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的活性及MDA、NO含量。结果: 糖尿病组光镜下主要表现为肝细胞脂肪变性明显，出现大量脂肪空泡，胞浆内糖原颗粒减少或消失。电镜下主要表现为肝细胞核固缩，胞浆内含大量脂滴，细胞器明显减少，贮脂细胞明显增生，胶原纤维增生。肝组织内GSH-PX、SOD、CAT活性明显低于正常对照组，MDA、 NO含量及总NOS、iNOS 活性显著高于正常对照组； EGB治疗组肝脏组织病理改变较轻，GSH—PX、SOD、CAT 活性明显高于糖尿病组，MDA、NO含量及总NOS、iNOS 活性显著低于糖尿病组。结论: EGB对2型糖尿病大鼠的肝脏具有保护作用、抗脂质过氧化作用和抑制NO的过多产生可能在其中起重要作用。