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结缔组织生长因子介导转化生长因子促肾小管上皮细胞转分化 总被引:11,自引:0,他引:11
目的 探讨结缔组织生长因子(CTGF)在体外能否够促进肾小管上皮细胞的表型转化,以及这一作用与转化生长因子β(TGF—β)的关系。方法 将NRK52E肾小管上皮细胞株细胞分组处理,采用RT—PCR和Western印迹的方法检测CTGF mRNA水平和蛋白水平的表达;Western印迹和流式细胞仪观察α—SMA的表达。结果 正常体外培养的NRK52E肾小管上皮细胞表达少量的CTGF,加入TGF—β1 10ng/ml刺激48h后,CTGFmRNA和蛋白水平的表达都显著升高,α—SMA蛋白表达和荧光强度也明显增加;同时加入TGF—β1中和抗体后,CTGF和α—SMA的表达都显著降低。经过反义寡核苷酸处理48h,几乎检测不到CTGF mRNA和蛋白的表达,并且CTGF反义寡核苷酸可以基本消除TGF—β1引起的细胞α—SMA表达增强,而相同时间和剂量的CTGF正义寡核苷酸不能引起相应的改变。结论 CTGF和TGF—β1都可以促使体外培养的肾小管上皮细胞α-SMA表达增强,并且CTGF作为TGF—β1的下游效应介质而起作用,提示CTGF参与了肾小管上皮细胞的转分化。 相似文献
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目的 探讨Numb在大鼠肾小管上皮细胞转分化过程中的作用。 方法 重组人转化生长因子β1(TGF-β1)刺激大鼠近端肾小管上皮细胞(NRK52E细胞),不同浓度TGF-β1 (0、1、5、10、15、20 μg/L)作用48 h与TGF-β1 10 μg/L作用不同时间(0、24、48、72 h)后,采用RT-PCR、Western印迹和免疫荧光染色分别检测NRK52E细胞内E钙黏蛋白(E-cadherin)、α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和Numb 的表达。采用RNA干扰技术下调Numb表达,Western印迹观察改变Numb水平对E-cadherin、α-SMA蛋白水平的影响。 结果 TGF-β1以剂量及时间依赖的方式诱导NRK52E细胞E-cadherin 蛋白表达下调,α-SMA 蛋白表达增高。Numb蛋白的表达随TGF-β1浓度的增加而增高,在5、10、15和20 μg/L时分别为0 μg/L时的1.33倍(P = 0.024)、1.39倍(P = 0.035)、1.45倍(P = 0.025)和1.51倍(P = 0.000)。而Numb蛋白和mRNA的表达亦随TGF-β1作用时间的延长而增高,作用24 h、48 h、72 h,Numb蛋白分别为0 h的1.48倍(P = 0.046)、1.54倍(P = 0.011)、1.79倍(P = 0.028),Numb mRNA分别为0 h的1.56倍(P = 0.012)、1.82倍(P = 0.008)、1.82倍(P = 0.002);同时Numb的分布也发生了改变,大量聚集在胞质中。下调Numb表达可以显著抑制TGF-β1诱导的α-SMA表达上调(为Numb表达正常时的18.1%,P = 0.004)、E-cadherin表达下调(为Numb表达正常时的2.19倍,P = 0.004)。 结论 Numb可以促进肾小管上皮细胞发生转分化。 相似文献
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NADPH氧化酶在转化生长因子β1诱导大鼠肾小管上皮细胞转分化中的作用 总被引:2,自引:0,他引:2
目的探讨NADPH氧化酶在转化生长因子β1(TGF-β1)诱导大鼠肾小管上皮细胞(NRK-52E)转分化中的作用。方法用TGF-β1(10μg/L)刺激NRK-52E细胞不同时间,观察α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、E-钙黏蛋白(E-cadherin)、纤溶酶原激活物抑制剂1(PAI- 1)及Ⅰ型胶原(Col-Ⅰ)的表达。部分实验中细胞在TGF-β1刺激前用NADPH氧化酶抑制剂DPI预处理1 h。用激光共聚焦显微镜观察细胞内活性氧(ROS)的产生。用RT-PCR方法检测NADPH氧化酶p22phox、gp91phox、p47phox和p67phox亚单位mRNA的表达。α-SMA、E-cadherin、PAI-1及Col-ⅠmRNA及蛋白的表达分别采用RT-PCR、Western印迹和细胞免疫化学检测。结果TGF-β1可显著上调NADPH氧化酶p67phox亚单位mRNA的表达,8 h及24 h时分别为对照组的2.43倍及3.59倍(P〈0.01)。TGF-β1可显著促进细胞ROS的产生,5 min时已是对照组的2.5倍(P〈0.05)。DPI预处理同时可显著逆转TGF-β1诱导NRK-52E细胞ROS的产生(P〈0.05)、α-SMA的表达上调、E-cadherin的表达下调以及PAI-1和Col-Ⅰ的表达上调。结论TGF-β1可促进NRK-52E细胞增加ROS的产生。ROS介导了TGF-β1诱导NRK-52E细胞的转分化,促进肾脏纤维化。 相似文献
4.
转化生长因子β1诱导肾小管上皮细胞转分化的蛋白质组学研究 总被引:2,自引:0,他引:2
目的 研究转化生长因子(TGF)β1诱导肾小管上皮细胞(NRK52E)转分化(EMT)过程中相关靶蛋白的表达变化。 方法 应用比较蛋白质组学方法。用双向凝胶电泳(2-DE)对TGF-β1刺激组和对照组 NRK52E细胞总蛋白进行分离。两组间差异蛋白点用质谱和数据库搜索鉴定,并用RT-PCR和Western 印迹在蛋白质和mRNA水平上进一步检测验证。 结果 鉴定出22个差异蛋白,包括与细胞骨架相关蛋白、参与物质转化和能量代谢的酶类、与蛋白翻译后修饰相关蛋白、细胞因子及其他蛋白等。应用RT-PCR验证了转胶蛋白(transgelin)、ATP合成酶α亚型、苹果酸脱氢酶、丝氨酸(半胱氨酸)蛋白酶抑制因子、泛素结合酶9(Ubc9)和表皮生长因子8在mRNA水平的表达差异,与2-DE结果一致。用Western 印迹验证了transgelin、ATP 合成酶α亚型两种蛋白的表达差异,亦与2-DE结果一致。 结论 TGF-β1刺激NRK52E细胞EMT发生过程中可诱导包括与细胞骨架相关蛋白、与翻译后修饰相关蛋白、代谢酶类及细胞因子等多种蛋白表达变化。本研究结果有助于深入理解EMT的具体分子机制及阐明肾脏疾病慢性进展的机制。 相似文献
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目的 研究氧化应激在糖尿病肾病(DN)大鼠肾小管上皮细胞转分化中的作用,探讨抗氧化剂普罗布考对大鼠DN的肾脏保护作用。 方法 30只雄性SD大鼠随机分为正常对照组、DN组和普罗布考干预组(1%普罗布考饮食),每组10只。分别于第3周、第8周及第12周检测24 h尿蛋白(UTP);12周末检测各组大鼠血糖、血脂(胆固醇、三酰甘油)、Scr、肌酐清除率(Ccr)、肾脏组织匀浆液丙二醛(MDA)含量及谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性。肾组织病理切片行 HE和Masson染色;采用免疫组化和Western印迹检测肾组织核转录因子Sp1、α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)及E钙黏蛋白(E-cadherin)表达。 结果 与正常对照组比较,DN组血糖、Scr、肾组织匀浆MDA和24 h UTP水平显著增高(均P < 0.01),Ccr显著降低(P < 0.01);肾组织肾小管损伤分数、α-SMA和 Sp1蛋白表达水平明显增高(均P < 0.01);肾组织E-cadherin蛋白表达明显下调。肾组织MDA含量分别与α-SMA及Sp1蛋白表达呈正相关(r = 0.896,P < 0.01;r = 0.862,P < 0.01),与E-cadherin蛋白表达呈负相关(r = -0.673, P < 0.01)。普罗布考干预组Scr、24 h UTP、肾组织MDA、肾小管损伤分数及肾组织α-SMA、 Sp1蛋白表达水平较DN组均明显降低(均P < 0.01);Ccr和肾组织E-cadherin蛋白表达水平较DN组均明显增加(均P < 0.01)。 结论 氧化应激在DN大鼠肾小管上皮细胞转分化中起重要作用。普罗布考可能通过抗氧化、下调肾组织Sp1蛋白表达及抑制肾小管上皮细胞转分化延缓DN大鼠肾脏病变进展。 相似文献
6.
目的 观察转化生长因子(TGF)β1诱导的正常人近端肾小管上皮细胞(HK-2)转分化(EMT)过程中黏着斑激酶(FAK)的表达及下调FAK的表达后对TGF-β1诱导的HK-2细胞转分化进程的影响。 方法 应用TGF-β1(10 μg/L)刺激HK-2细胞,采用RT-PCR、Western印迹和免疫荧光方法分别检测E钙黏蛋白(E-cadherin)、α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、FAK mRNA和蛋白的表达及磷酸化(p)-FAK(Tyr397)的蛋白表达。应用Lipofectmine2000将FAK siRNA转染HK-2细胞,采用Western印迹观察下调表达FAK对上述指标的影响。 结果 TGF-β1刺激后,HK-2细胞α-SMA蛋白和mRNA水平上调,E-cadherin蛋白和mRNA表达下调。FAK蛋白和mRNA随时间的延长表达逐渐增多,48 h达到高峰。p-FAK(Tyr397)蛋白表达趋势与FAK相同。脂质体转染siRNA后FAK的mRNA和蛋白分别下调了50%和41%,下调表达FAK后可以显著抑制TGF-β1诱导的HK-2细胞α-SMA蛋白的上调表达,逆转 E-cadherin蛋白的下调表达。 结论 在TGF-β1诱导的HK-2细胞转分化进程FAK蛋白表达上调,敲低FAK蛋白表达后可以部分减轻EMT的程度,提示FAK在TGF-β1诱导的肾小管上皮细胞转分化和肾脏纤维化中发挥一定的作用。 相似文献
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肝细胞生长因子对人肾小管上皮细胞转分化抑制作用初步研究 总被引:4,自引:2,他引:2
目的:晚近研究提示肝细胞生长因子(hepatocyte growth factor,HGF)具有减轻实验性肾间质纤维化的作用,但其机制尚不十分清楚;本研究目的在于探讨HGF对人肾小管上皮细胞(HKC)转分化的作用。方法:将体外培养的HKC细胞分为:(1)无血清培养对照组;(2)阳性对照组(MCP-1+AAⅠ);(3)HGF组(HGF浓度为0.01,0.1,1.0,10.0ng/ml);(4)MCP-1 AAⅠ HGF组(HGF浓度0.1,1.0,10.0ng/ml)。应用间接免疫荧光法检测HKC细胞内α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、波形蛋白、角蛋白表达的变化。应用流式细胞技术检测α-SMA(+)的HKC细胞百分数。结果:不同浓度HGF分别作用于HKC细胞48h后,经间接免疫荧光法测定该组HKC细胞角蛋白、波形蛋白及α-SMA抗原表达,与无血清对照组均无显著差异;流式细胞术测得HGF组α-SMA表达阳性HKC细胞百分数,与无血清对照组(平均为3.1%)也无显著差异(P>0.05)。MCP-1+AAⅠ培养HKC48h后α-SMA(+)的HKC细胞平均百分数为85.6%。MCP-1+AAⅠ+HGF(0.1,1.0,10.0ng/ml)培养HKC48h后,α-SMA(+)的HKC细胞百分数分别为26.7%,2.0%,13.6%,比阳性对照组明显下降(P<0.05)。结论:(1)HGF对正常HKC细胞分化无明显影响;(2)HGF对某些因素诱导下发生的增强的HKC细胞转化可能具有显著抑制作用。 相似文献
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目的探讨肾小管上皮细胞-肌成纤维细胞转分化在慢性移植肾肾病(CAN)的发生、发展中的作用。方法36例移植肾穿刺标本分为正常组(N组),CAN组(C组),依Banff 97标准将C组按CANⅠ、Ⅱ、Ⅲ级分为C_1、C_2、C_3组,每组9例。免疫组化染色半定量分析比较α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、波形蛋白(VIM)、角质蛋白(CK_(AEI/AE3))和转化生长因子β1(TGF-β1)在各组中的表达,线性相关分析TGF—β1和α-SMA、VIM、CK_(AE1/AE3)表达的相关性。结果C_1、C_2、C_3组α-SMA表达积分分别为0.95±0.07、1.78±0.12、2.42±0.31,VIM表达积分分别为0.74±0.05、1.31±0.18、2.34±0.25,组间呈递增趋势,均明显高于N组α-SMA表达积分0.07±0.02、VIM表达积分0.09±0.02(P<0.05);移植肾组织中TGF-β1表达与α-SMA、VIM呈正相关(r分别为0.73、0.68,P<0.05),而与CKAE1/AE3表达呈负相关(r=-0.71,P<0.05)。结论肾小管上皮细胞-肌成纤维细胞转分化参与了CAN的发生、发展,而局部肾组织中TGF-β1的表达上调可能是介导肾小管上皮细胞转分化的重要原因。 相似文献
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转化生长因子β1对肾小管上皮细胞中结缔组织生长因子基因启动子活性的影响 总被引:2,自引:0,他引:2
目的探讨转化生长因子[β1(TCF-β1)对人近端肾小管上皮细胞系HK-2中结缔组织生长因子(CTGF)基因启动子活性的调控作用,以及丝裂原激活蛋白激酶(MAPK)途径对该生长因子作用的影响。方法构建含有人类CTGF基因启动子的报告基因pCTGF-luc,将其瞬时转染HK-2细胞。通过检测荧光素酶的活性观察TGF-β1和MAPK途径抑制剂对CTGF基因启动子活性的影响。结果TGF-β1以剂量和时间依赖方式上调HK-2中CTGF基因启动子的活性。最佳刺激浓度是5ng/ml,最佳刺激时间为12h,荧光素酶相对活性分别为对照组的1.82倍和2.10倍(P〈0.05)。应用PD98059、SB203580和SP600125分别特异性抑制MAPK途径的胞外信号调节蛋白激酶(ERK)、蛋白激酶p38(p38MAPK)和c-Jun-氨基末端激酶(JNK)通路,对TGF-β1上调CTGF启动子活性的作用有不同影响。PD98059显著增加HK-2中pCTGF-luc的基础活性.并在一定浓度范围内(0.5~10μmol/L)促进TGF-β1的上调作用。SB203580对pCTGF-luc基础活性无影响,但以剂量依赖方式显著抑制TGF-β1的激活效应。而SP600125对基础状态和TGF-β1刺激下CTGF基因启动子活性无影响。结论TGF-β1以剂量和时间依赖方式上调HK-2中CTGF基因启动子活性,在转录水平调节CTGF表达。MAPK途径的ERK和p38MAPK通路可影响TGF-β1的这一调控作用。 相似文献
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高糖通过转化生长因子β1-Smad信号传递途径诱导肾小管上皮细胞转分化 总被引:1,自引:0,他引:1
目的 通过观察高糖对肾小管上皮细胞转分化(EMT)的作用,探讨其与转化生长因子β1 (TGF-β1)的关系及糖尿病肾病肾小管间质纤维化的发病机制。 方法 以人肾小管上皮细胞株HKC细胞和高表达Smad7蛋白的HKC转染细胞株为研究对象。蛋白印迹法检测高糖(葡萄糖浓度分别为25和50 mmol/L)对α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、E钙黏蛋白 (E-cadherin)和纤连蛋白(FN)表达的影响。酶联免疫吸附(ELISA)法检测TGF-β1的水平。Boyden小室检测HKC细胞的迁移能力。抗TGF-β1抗体中和实验分析高糖对肾小管EMT作用及与TGF-β1的关系。 结果 持续的高糖作用(96 h)能够导致HKC表达α-SMA蛋白,其中25和50 mmol/L的葡萄糖分别增加表达α-SMA 2.8倍和8.2倍;降低E-cadherin的表达;刺激合成FN。25和50 mmol/L的葡萄糖刺激HKC 12 h后,细胞培养上清液中TGF-β1浓度分别为(408.5±198.6)和(939.3±311.8) ng/L,呈剂量依赖性。抗TGF-β1抗体能够显著抑制高糖导致的HKC高表达α-SMA蛋白和FN及降低E-cadherin表达的作用。高表达Smad7蛋白的HKC转染细胞株在高糖的持续作用下,不能表达α-SMA和FN蛋白,E-cadherin也未见降低。细胞迁移实验表明,25和50 mmol/L高糖能够增加HKC迁移至Boyden小室膜下侧面的细胞数[(12.4±3.7)和(18.6±4.4)细胞/HP)],与正常对照组[(3.0±0.8)细胞/HP]差异有统计学意义(P < 0.01)。抗TGF-β1多克隆抗体能够部分抑制高糖(50 mmol/L)造成的HKC细胞向Boyden小室膜下侧面的迁移[(11.9±5.2)细胞/HP]。高表达Smad7蛋白的HKC转染细胞株在高糖培养条件下迁移至Boyden小室膜下侧面的细胞数[(4.3±1.2)细胞/HP]与正常对照组差异无统计学意义。 结论 高糖能够诱导肾小管EMT,此作用与高糖刺激该细胞合成TGF-β1有关,阻止Smad信号途径能够拮抗TGF-β1介导的肾小管EMT的作用。 相似文献
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目的探讨上调TGF-β抑制性信号蛋白Smad7表达对大鼠腹膜纤维化模型腹膜间皮细胞转分化的影响。方法30只160~170 g SD雄性大鼠.随机分为4组:正常对照组(n=6);腹膜纤维化模型组(n=12):予腹腔注射4.25%腹膜透析液与脂多糖;空载体组(n=6):模型成功后转染pTRE与pEFpurop-Tet-on质粒;Smad7治疗组(n=6):模型成功后转染pTRE- m2 Smad7与pEFpurop-Tet-on质粒。第14、28天杀检大鼠,取脏层腹膜组织,用RT-PCR方法检测TGF-B1、α-SMA、E-钙黏蛋白(E-cadherin)基因的表达;用Western杂交或间接免疫荧光的方法检测TGF-β1、Smad7、磷酸化(p)-Smad2/3、α-SMA、E-cadherin的表达。结果与正常对照组比较,模型组TGF-β1、p-Smad2/3及α-SMA的表达显著上调(p〈0.01);E-cadherin的表达显著下调(P〈0.01)。与模型组、空载体组比较,Smad7治疗组p-Smad2/3及α-SMA表达水平显著下调(P〈0.01);E-cadherin的表达显著上调,但仍低于正常对照组(P〈0.05)。结论Smad7可通过抑制受体调控信号蛋白Smad2/3的活化,阻止高糖透析液及脂多糖介导的腹膜间皮细胞转分化,从而防止腹膜纤维化的发生和发展。 相似文献
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肝细胞生长因子下调Smurf2拮抗肾小管上皮细胞-间充质细胞转分化 总被引:1,自引:0,他引:1
目的 通过观察肝细胞生长因子( HGF)对正常大鼠肾上皮细胞(NRK-52E)转化生长因子β1( TGF-β1)诱导的Smad泛素化调节因子2(Smurf2)表达的影响,探讨HGF拮抗肾小管上皮细胞-间充质细胞转分化(EMT)的分子机制.方法 以NRK-52E细胞为研究对象,给予TGF-β1(5μg/L)处理0~24 h;或部分细胞经HGF(20 μg/L)预处理30 min后,再予TGF-β1(5μg/L)处理1h或48 h;另外部分细胞予以Smurf2质粒表达载体或Smurf2 siRNA 转染24 h后,再予HGF处理24 h.应用Western印迹及间接免疫荧光染色方法检测Smurf2、SnoN、E钙黏蛋白(E-cadherin)、α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和纤连蛋白(FN)的表达.结果 与对照组相比,TGF-β1处理后迅速上调NRK-52E细胞中Smurf2蛋白表达(P<0.01);同时显著诱导FN和α-SMA蛋白表达,并下调E-cadherin表达.而予HGF预处理细胞后,可快速抑制TGF-β1诱导的Smurf2表达上调(P<0.01);并逆转TGF-β1介导的SnoN(P<0.01)、E-cadherin(P<0.05)、α-SMA(P<0.01)和FN(P<0.01)表达变化.此外,在NRK-52E细胞中过表达Smurf2蛋白可部分抑制HGF诱导的SnoN蛋白上调;而抑制Smurf2表达则可进一步促进HGF诱导的SnoN蛋白表达.结论 在肾小管上皮细胞中,HGF可能通过下调Smurf2表达抑制SnoN蛋白发生泛素-蛋白酶体依赖性降解,进而拮抗TGF-β1介导EMT形成. 相似文献
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BI Hui-xin LIU Rui-hong SUN Lin LIU Hong YUAN Shu-guang HUANG Gu-xiang CHEN Nan-lan. 《中华肾脏病杂志》2013,29(10):775-781
Objective To detect the expression of heat shock protein 47(HSP47) in renal proximal epithelial cell lines (HK-2) and to investigate the role of HSP47 in the progress of transforming growth factor β1 (TGF-β1) induced epithelial-mesenchymal transdifferentiation (EMT) in HK-2 cells. Methods HK-2 cells were exposed to TGF-β1 (0, 2.5, 5, 10 μg/L) for different time (0, 12, 24, 48 h). The expression of HSP47 was examined by Western blotting. Then HK-2 cells were exposed to 10 μg/L TGF-β1, the expressions of vimentin, zona occludens-1 (ZO-1) were examined by Western blotting and real-time PCR. Furthermore, the expressions of p-Smad3 and Smad3 were examined by Western blotting. HK-2 cells were transfected with HSP47 siRNA and siRNA negative control before exposing to TGF-β1. Then the expressions of vimentin, ZO-1 were detected by Western blotting and real-time PCR, meanwhile Western blotting for HSP47, p-Smad3 and Smad3. Results Stimulating HK-2 with TGF-β1resulted in a significant increased expression of HSP47 in time-and concentration-dependent manner (P<0.05). Meanwhile, TGF-β1up-regulated the protein and mRNA expression of vimentin (P<0.05), and down-regulated the protein and mRNA expression of ZO-1 (P<0.05), all in time-dependent manner. Stimulating HK-2 with TGF-β1 resulted in phosphorylation of Smad3, which was peaked at 30 min, slightly decreased at 1 h, and then increased again between 24 and 48 h (P<0.05). Compared to the TGF-β1group, inhibition of HSP47 expression in HK-2 up-regulated the protein and mRNA expression of ZO-1, down-regulated the protein and mRNA expression ofvimentin (P<0.05) and down-regulated the ratio of p-Smad3/Smad3. HSP47 siRNA negative control had no significant effect on the expressions of ZO-1, vimentin and p-Smad3/Smad3 (P>0.05). Conclusion HSP47 can promote the EMT of renal tubular epithelial cell which is possibly via the TGF-β1-Smad3 pathway. 相似文献
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目的 探讨红细胞生成素(EPO)对高糖诱导下的肾小管上皮细胞转分化的影响。 方法 体外培养人肾小管上皮细胞株(HK-2细胞),分为正常对照组、渗透浓度对照组、高糖组、高糖+EPO(5 U/ml)组和高糖+EPO(10 U/ml)组。RT-PCR法检测各组细胞α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、转化生长因子β1(TGF-β1)、Smads信号蛋白2(Smad2)及整合素连接激酶(ILK)的mRNA表达。细胞免疫荧光法检测细胞TGF-β1及α-SMA的蛋白表达。 结果 RT-PCR结果显示,相对于对照组,高糖组细胞α-SMA、TGF-β1、Smad2、ILK的mRNA表达均显著上调(P < 0.01)。细胞免疫化学也显示,高糖组TGF-β1和α-SMA的蛋白表达较对照组显著上调(P < 0.01),而高糖+EPO(5 U/ml)组和高糖+EPO(10 U/ml)组上述指标的表达均显著低于高糖组(均P < 0.01)。 结论 EPO能抑制高糖诱导的肾小管上皮细胞转分化,可能与其抑制TGF-β1、Smad2及ILK表达有关。 相似文献
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Objective To explore the effect of suramin on the epithelial-mesenchymal transition (EMT) and the excretion of transforming growth factor-β1 (TGF-β1) in peritoneal mesothelial cells (PMCs) induced by high concentrations of glucose solution (GS). Methods Cultured PMCs were divided into three groups: (1) normal control group; (2) GS-treated group: cells were treated with 1.5%, 2.5%, 4.25% GS for 12 h, 24 h, 48 h, respectively; (3) Suramin-treated group: PMCs cultured with 4.25% GS were exposed to different doses of suramin (25, 50, 100 μmol/L) for 48 h. Expression levels of α-smooth muscle actin (α-SMA) and E-cadherin were detected by Western blotting and the concentration of TGF-β1 in the culture supernatant was determined by ELISA. Results Compared with normal control group, GS-treated PMCs exhibited a time-dependent increase in the expression of α-SMA, and decrease in the expression of E-cadherin. GS also stimulated PMCs to secrete TGF-β1. In the presence of suramin, GS-induced α-SMA expression and TGF-β1 production were reduced, E-cadherin expression was increased. Conclusions Suramin can inhibit high glucose-induced EMT of PMCs by down-regulating the expression of TGF-β1. Suramin may be a novel therapeutic agent for the treatment of peritoneal fibrosis. 相似文献
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JNK对转化生长因子β1所致大鼠腹膜间皮细胞转分化的调控作用 总被引:1,自引:0,他引:1
目的 探讨c-Jun 氨基末端激酶(JNK)在转化生长因子β1(TGF-β1)诱导大鼠腹膜间皮细胞(RPMC)转分化中的调控作用。 方法 采用腹腔注射胰蛋白酶法分离培养RPMC,取第2代腹腔间皮细胞用于实验研究。观察TGF-β1对α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Ⅰ型胶原(ColⅠ)、E钙黏蛋白(E-cadherin)以及磷酸化(p)JNK表达的影响;应用JNK特异性抑制剂SP600125预处理细胞后,观察其对TGF-β1所致上述作用的影响。RT-PCR法检测α-SMA、ColⅠ及E-cadherin mRNA表达;Western印迹法检测α-SMA、ColⅠ、E-cadherin及p-JNK蛋白表达;间接免疫荧光检测α-SMA在细胞内的表达和分布。 结果 TGF-β1刺激RPMC能导致α-SMA、ColⅠ蛋白表达上调,E-cadherin蛋白表达下调,呈时间依赖性。TGF-β1刺激RPMC 5 min出现p-JNK表达上调,10 min达高峰(P < 0.01)。SP600125能够抑制JNK的磷酸化(P < 0.05),也能抑制TGF-β1诱导的α-SMA、ColⅠmRNA和蛋白的高表达以及E-cadherin表达的下调 (均P < 0.05)。间接免疫荧光结果显示,TGF-β1刺激RPMC 48 h,胞内α-SMA表达明显增多,SP600125能有效抑制其高表达。 结论 JNK在TGF-β1诱导大鼠腹膜间皮细胞转分化中具有重要的调控作用,JNK特异性抑制剂的应用可能为临床防治腹膜纤维化提供新的途径。 相似文献
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目的 探讨热休克蛋白72肽结合区在肾小管上皮间质转分化(EMT)过程中的作用和可能机制.方法 应用质粒转染方法分别诱导热休克蛋白72(HSP72)野生型、肽结合区缺失型(HSP72-△PBD)和肽结合区(PBD)的表达.用转化生长因子β1(TGF-β1)刺激大鼠肾小管上皮细胞(NRK-52E)48 h,Western印迹和免疫荧光染色检测细胞E-钙黏蛋白(cadherin),α-平滑肌肌动蛋白(SMA),HSP72和Smad3/磷酸化(p)-Smad3蛋白表达.结果 TGF-β1(10 μg/L)刺激NRK-52E细胞48 h后上调α-SMA和下调E-cadherin蛋白表达水平.Western印迹及细胞免疫荧光显示,过表达HSP72和PBD能明显减轻TGF-β1诱导的NRK-52E细胞E-cadherin蛋白表达下调和α-SMA蛋白表达上调,而过表达HSP72-△PBD不能改变上述蛋白的表达.此外,过表达HSP72和PBD显著抑制Smad3的磷酸化.结论 HSP72抑制Smad3活化和EMT的发生可能与PBD的功能有关. 相似文献