低碘膳食对大鼠脑组织同源盒基因nkx2.1表达的影响

目的 研究低碘膳食对大鼠脑组织同源盒基因nkx2.1表达的影响.方法 雌性Wistar大鼠40只,按体质量随机分为低碘组和对照组,均饲以含碘量为13.66μg/kg的低碘饲料,分别饮用去离子水和200μg/L碘酸钾溶液,3个月后用化学发光免疫分析方法测定大鼠血清甲状腺激素(Tr3、Tr4、FT3、FT4),再将两组大鼠与健康雄鼠进行交配,在孕16 d、新生及20日龄时,取胎鼠或仔鼠脑组织,用实时荧光定量PCR(FQ-PCR)法检测脑组织nkx2.1 mRNA表达.结果 大鼠血清TT3、TT4、FT3、FT4水平,低碘组[(0.89±0.20)、(0.32±0.16)nmol/L、(3.33±0.61)、(3.28±0.80)pmol/L]明显低于对照组[(1.04±0.06)、(39.42±14.68)nmol/L、(4.83±0.33)、(26.99±4.48)pmol/L;t值分别为2.71、6.52、5.70、12.89,P<0.05或<0.01].对照组孕16 d、新生及20日龄大鼠脑组织nkx2.1 mRNA表达分别为(5.60±0.30)×10-3、(1.20±0.29)×10-3、(0.18±0.06)× 10-3,低碘组同日龄大鼠nkx2.1 mRNA表达分别为(3.00±0.55)×10-3、(1.90±0.21)×10-3、(0.69±0.15)×10-3.对照组、低碘组各日龄胎、仔鼠之间nkx2.1 mRNA表达水平比较,差异有统计学意义(F值分别为2102.07、162.40,P均<0.01),对照组、低碘组新生仔鼠nkx2.1 mRNA的表达比孕16 d胎鼠低(P均<0.01),20日龄仔鼠nkx2.1mRNA表达比孕16 d和新生降低(P均<0.01);低碘组与同日龄对照组比较.对照组孕16 d胎鼠nkx2.1 mRNA表达明显高于低碘组胎鼠(t=16.073,P<0.01),而新生及20日低碘组明显高于对照组(t值分别为7.537、12.227,P均<0.01).结论 低碘导致的脑发育迟滞与nkx2.1在腩组织中的差异表达密切相关.     

甲状腺素对甲状腺功能减低大鼠子代脑组织中同源盒基因Nkx6.1 mRNA表达的影响

目的 通过对妊娠期甲状腺功能减低(简称甲低)大鼠补充甲状腺素,探讨妊娠不同时间补充不同剂量甲状腺素对子代大鼠脑组织中同源盒基因Nkx6.1 mRNA表达的影响.方法 1月龄Wistar大鼠240只,雌雄各半,体质量100～120 g.按体质量将雌性大鼠随机分为8组:对照组,甲低组,甲低孕鼠妊娠早期(1～17 d)补充甲状腺素(妊早甲低)高、中、低剂量组,甲低孕鼠妊娠晚期(18～20 d)补充甲状腺素(妊晚甲低)高、中、低剂量组,每组15只.高、中、低剂量组每天补充的甲状腺索分别为3.5、2.0、0.5μg/100 g体质量.8组大鼠均饲以重度缺碘地区粮食配制的饲料,对照组饮用含碘200μg/L的碘酸钾溶液,7个甲低组饮用去离子水.雄性大鼠用正常食料饲养,3个月后按1:1交配.8组大鼠分别取孕17 d、新生、生后20 d子代大鼠脑组织,采用实时荧光定量PCR法检测脑组织中Nkx6.1 mRNA表达.结果 ①成功建立了甲低动物模型,8组大鼠血清TT_3、TT_4、FT_3、FT_4组间比较差异有统计学意义(F值分别为4.08、31.99、5.79、26.34,P均<0.01).②在孕17 d、新生、生后20 d,Nkx6.1 mRNA表达组间比较差异有统计学意义(F值分别为758.720、1121.589、144.716,P均<0.01);组内不同时间比较差异有统计学意义(F值分别为2898.863、325.605、716.285、56.329、236.727、196.678、7115.752、9152.306,P均<0.01).③时间因素和剂量因素对Nkx6.1 mRNA表达有影响(F值分别为1176.655、246.530,P均<0.01);时间与剂量因素间存在交互作用(F=1249.934,P<0.01).④在孕17 d、新生、生后20 d.甲低组Nkx6.1 mRNA表达与对照组比较,差异有统计学意义(P均<0.01).⑤在新生、生后20 d,6个甲低补充甲状腺素组Nkx6.1 mRNA表达与甲低组比较.差异有统计学意义(P均<0.01).⑥在孕17d、新生、生后20 d,除妊早甲低中剂量组外,其余5个甲低补充甲状腺素组Nkx6.1 mRNA表达与对照组比较,差异有统计学意义(P均<0.01).⑦在孕17 d、新生、生后20 d,妊早甲低高、低剂量组Nkx6.1 mRNA表达与中剂量组比较,差异有统计学意义(P均<0.01);在孕17 d、生后20 d,高剂量组与低剂量组比较,差异有统计学意义(肭<0.01).⑧在新生和生后20 d,妊晚甲低组组间Nkx6.1 mRNA表达比较,差异有统计学意义(P均<0.01).结论 甲低孕鼠子代大鼠脑组织同源盒基因Nkx6.1的表达受补充甲状腺素剂量及时间影响.     

低碘膳食对大鼠脑组织同源盒基因Nkx-6.1和Nkx-6.2 mRNA表达的影响

Objective To study the influence of low-iodine diet on the expression of homeobox gene Nkx-6.1 and Nkx-6.2 in rat cerebrum tissue, and to explore the possible molecular mechanism of cerebrum development retardation caused by low-iodine. Methods Twenty female Wistar rats were randomly equally divided into two groups: low-iodine group and control group, both fed with low-iodine diet as low as 13.66 μg/kg determinated by spectrophotometry in Tianjin Institute of Endocrinology and the former with deionized water, the later 200 μg/L potassium iodate. Thyroid hormone level was detected using chemiluminescence immunoassay 3 months later and they were mated with male rats normally fed. Rats of 16-day pregnancy, new-born and 20th days old were detected the content of Nkx-6.1 and Nkx-6.2 mRNA in the cerebrum tissue by real-time fluorescence quantitative PCR 0.61), (3.28±0.80)pmol/L] were lower than the control group[(1.04±0.06), (39.42±14.68)nmol/L, (4.83±0.33), day pregnancy, new-born and 20th days old of control group was (1.90±0.23)×10-3,(1.86±0.40)×10-4, (1.11± 0.27)×10-4(F=827.58, P<0.01), Nkx-6.1 mRNA expression level gradually decreased along with aging(all P<0.05). The intra-group difference was significant (F=297.25, P<0.01) and the Nkxr.1 mRNA expression level during 16 days of pregnancy was the highest(P<0.01). It was higher in the control group than in the low-iodine group during 16 days of pregnancy (t=10.14, P<0.01) as well as in the low-iodine group than in the in 16-day pregnancy, new-born and 20th days old of control group was respectively(1.03±0.19)×10-2, (1.33± 0.10)×10-3, (8.79±0,87)×10-3, and that of low-iodine group was (0.31±0.03)×10-2, (1.53±0.13)×10-3, (7.51±0.86)×10-2. The intra-group difference was significant(F=1293.02,1065.83, all P<0.01). Nkx-6.2 expression level during 20th days old was the highest(P<0.01) and that of newborn was the lowest(P<0.01). The Nkx6.2 mRNA expression level in control group were higher than the low-iodine group during 16-day pregnancy and 20th days old(t=14.35, 4.05, all P<0.01). It was higher in the low-iodine group than in the control group during newboru(t=4.78, P<0.01). Conclusions The difference in the expression of Nkx-6.1 and Nkx-62 is highly related to the brain development retardation caused by low-iodine.     

不同孕期补充甲状腺激素对子鼠脑组织生长相关蛋白-43表达的影响

目的 研究不同孕期低碘孕鼠补充甲状腺激素对子鼠脑组织生长相关蛋白(GAP) - 43表达的影响,探讨甲状腺激素不足造成的脑发育落后现象的可能机制.方法 1月龄Wistar大鼠160只,雌、雄各半.雌性大鼠随机分为8组:正常组和7个低碘组,每组10只.各组均饲以低碘饲料,正常组饮用碘浓度为200 μg/L的碘酸钾溶液,总碘摄入量相当于大鼠生理碘需要量,低碘组饮用去离子水.3个月后,与正常Wistar雄鼠进行交配.选择1个低碘组不补充甲状腺激素作为阴性对照,其余6组分别在妊娠早期(孕1～17 d)和妊娠中、晚期(孕18 d～出生后20 d)补充高、中、低剂量甲状腺激素,剂量分别为:3.5、2、0.5 μg/100 g体重.8组分别取新生当天、生后7d、14 d、21 d、28 d的子鼠脑组织,应用SABC法检测GAP- 43在神经细胞中的表达,图像分析方法定量检测蛋白的含量.结果 低碘组不同日龄子鼠脑组织GAP-43的表达普遍低于同日龄正常组(P＜0.05),只有在28 d时大于正常组(P＜0.05);对低碘孕鼠给予中、高剂量的甲状腺激素,可以使子鼠脑组织GAP-43的表达接近正常水平,尤其是在孕早期补充甲状腺激素(P＜0.05).结论 孕鼠低碘导致子鼠脑组织GAP- 43表达降低,低碘孕鼠补充中剂量以上的甲状腺激素,可以使子代GAP-43的表达水平接近正常,在孕早期补充效果更好.     

碘对哺乳期大鼠甲状腺和乳腺钠碘转运体、胰岛素样生长因子Ⅰ及转化生长因子βmRNA表达的影响

目的 观察碘对哺乳期大鼠甲状腺和乳腺钠碘转运体(NIS)、胰岛素样生长因子Ⅰ(IGF-Ⅰ)、转化生长因子β (TGF-β)mRNA表达的影响,探讨NIS、IGF-Ⅰ 、TGF-β mRNA在哺乳期大鼠甲状腺和乳腺摄碘中的作用.方法 选择Wistar大鼠101只,其中雌性80只,雄性21只,体质量80- 100g.按体质量将雌性大鼠随机分为5组:对照组(正常饲料、饮含碘50μg/L去离子水),低碘1组、2组(低碘饲料,分别饮用去离子水、含碘5 μg/L去离子水),高碘1组、2组(正常饲料,分别饮用含碘3000、10 000 μg/L去离子水),每组16只.在喂养3个月后,将雌鼠与雄鼠按3∶1合笼交配,在产后第5、10天,分别处死各组雌鼠,取甲状腺和乳腺,采用实时荧光定量PCR检测哺乳期大鼠甲状腺和乳腺NIS、IGF-Ⅰ 、TGF-β mRNA表达.结果 产后第5天,哺乳期大鼠甲状腺和乳腺的NIS、IGF-Ⅰ 、TGF-β mRNA表达组间比较差异均有统计学意义(NIS:F值分别为631.46、64.91,P均＜0.01;IGF-Ⅰ:F值分别为11.45、6.56,P均＜0.01;TGF-β:F值分别为291.83、304.53,P均＜0.01).与对照组大鼠甲状腺和乳腺NIS、IGF-Ⅰ 、TGF-β mRNA[NIS:0.0066±0.0023、(0.1481±0.0711)×10-2;IGF-Ⅰ:0.0419±0.0062、0.0542±0.0044;TGF:0.1416±0.0277、0.1670±0.0499]比较,低碘1组[NIS:0.0447±0.0110、(0.3030±0.1831)× 10-2;IGF-Ⅰ:0.0662±0.0078、0.0902±0.008;TGF-β:0.5514±0.0508、0.6942±0.0367]、2组[NIS:0.0317±0.0081 、(0.3017±0.1601)×10-2;IGF-Ⅰ:0.0645±0.0054、0.0894±0.0093;TGF-β:0.5292±0.0332、0.6704±0.0277]表达明显升高(P均＜0.01);高碘1组NIS mRNA[0.0043±0.0011、(0.1233±0.0954)×10-2]、2组NIS mRNA[0.0037 ±0.0017、(0.1058±0.0854)×10-2]表达降低(P均＜0.05),但IGF-Ⅰ [0.0521±0.0910、0.0715±0.0026;0.0516±0.0078、0.0697±0.0038] 、TGF-β mRNA[0.2087±0.0425、0.2361±0.0425;0.1971±0.0237、0.2257±0.0752]表达升高(P均＜0.05).产后第10天,哺乳期大鼠甲状腺和乳腺的NIS、IGF-Ⅰ 、TGF-β mRNA表达组间比较差异均有统计学意义(NIS:F值分别为103.55、116.32,P均＜ 0.01;IGF-Ⅰ:F值分别为67.67、11.98,P均＜0.01;TGF-β:F值分别为74.30、381.30,P均＜0.01).与对照组大鼠甲状腺和乳腺NIS、IGF-Ⅰ 、TGF-β mRNA[NIS:0.0069±0.0011 、(0.1337±0.0599)× 10-2;IGF-Ⅰ:0.0390±0.0071、0.0534±0.0056;TGF-β:0.1351±0.0336、0.1534±0.0320]比较,低碘1组[NIS:0.0432±0.0165、(0.2962±0.0985)× 10-2;IGF- Ⅰ:0.0643±0.0088、0.0873±0.0055;TGF-β:0.5042±0.0912、0.6408±0.0420]、2组[NIS:0.0287±0.0111、(0.2873±0.0862)×10-2;IGF-Ⅰ:0.0621±0.0094、0.0862±0.0038;TGF-β:0.4893±0.0504、0.6372±0.0389]表达明显升高(P均＜0.01);高碘1组NIS mRNA [0.0042±0.0029、(0.1006±0.0909)× 10-2]、2组NIS mRNA [0.0035±0.0020、(0.0890±0.0119)×10-2]表达降低(P均＜0.01),但IGF-Ⅰ [0.0516±0.0078、0.0668±0.0071;0.0508±0.0089、0.0621±0.0064] 、TGF-β mRNA [0.2007±0.0546、0.2175±0.0370;0.1959±0.0393、0.2097±0.0425]表达升高(P均＜0.05).各组大鼠产后第5天与第10天比较,无论是甲状腺还是乳腺,NIS、IGF-Ⅰ 、TGF-β mRNA表达差异无统计学意义(P均＞0.05).结论 哺乳期大鼠甲状腺和乳腺对碘存在调控机制,低碘时甲状腺和乳腺NIS 、IGF-Ⅰ 、TGF-β mRNA表达增多,摄碘能力增强,满足机体的需要;高碘时甲状腺和乳腺NIS mRNA表达减少,由于摄碘能力降低,碘的摄入减少,减轻了高碘对仔鼠的危害.     

不同碘摄入量对子代大鼠脑神经递质及其相关酶活性的研究

目的通过研究子代大鼠脑组织中神经递质含量及相关酶活性,探讨不同碘摄入量对脑功能的影响。方法断乳后1月的W istar大鼠随机分为4组:低碘组,适碘组,10倍碘组,50倍碘组,分别饮用含不同碘浓度的水,饲养3月后随机交配,仔鼠饲养28 d后,断头取其大脑组织,称重,测定单胺氧化酶(MAO)和胆碱酯酶(ChE)活性。结果与适碘组相比,其它各组大鼠脑重量均明显降低(P<0.05或P<0.01),但低碘组最明显;20%脑组织匀浆中蛋白质含量,低碘组明显降低(P<0.01);低碘组仔鼠脑内MAO活性明显升高(P<0.01),ChE活性明显降低(P<0.01);50倍碘组大鼠MAO活性明显升高(P<0.01)。结论碘缺乏和严重碘过量可影响子代大鼠脑的神经递质及其相关酶活性,但碘缺乏的影响远比碘过量严重。     

不同剂量碘对小鼠大脑和血液中乙酰胆碱的影响

目的　研究不同剂量高碘、缺碘动物模型仔鼠、成鼠脑组织和血液中乙酰胆碱 (Ach)的含量。方法　用随机区组实验设计方法将初断乳昆明小鼠随机分为 5组 ,用碘酸钾配制成含碘 0 (缺碘 ) ,5 0 (适碘对照 ) ,5 0 0(高碘 ) ,15 0 0 (高碘 ) ,30 0 0 (高碘 ) μg/ L 溶液 ,喂养 10 0 d后复制成高碘、缺碘动物模型 ,交配生仔 ,选择 2 0日龄仔鼠、90日龄成鼠测定大脑和全血中 Ach含量。结果　不同剂量高碘和缺碘均使仔鼠、成鼠脑组织和血液中Ach含量明显降低 (P <0 .0 5 ) ;高碘 组仔鼠和成鼠脑组织中 Ach含量显著降低 (P <0 .0 5 ) ;高碘 组仔鼠和成鼠血液中 Ach含量显著降低 (P <0 .0 5 ) ;成鼠脑组织、血液中 Ach含量较仔鼠含量高 ,有的组间差异有显著意义。结论　高碘、缺碘均可引起小鼠脑组织和血液中 Ach含量明显降低 ,90日龄成鼠较 2 0日龄仔鼠脑组织和血液中 Ach含量高     

不同碘营养水平大鼠妊娠期甲状腺和胎盘胰岛素样生长因子-Ⅰ及转化生长因子-β1mRNA表达水平的研究

目的 观察不同碘营养水平下大鼠妊娠期甲状腺和胎盘胰岛素样生长因子(IGF)-Ⅰ及转化生长因子(TGF)-β1 mRNA表达水平的变化.方法 雌性Wistar大鼠150只,体质量80～100g,按体质量随机分为5组,每组30只,分别饮用含碘50(对照组,NI)、0(低碘1组,LI1)、5(低碘2组,LI2)、3000(高碘1组,HI1)、10 000 μg/L(高碘2组,HI2)的去离子水.饲养12周将雌鼠同雄鼠合笼交配,分别于孕早期(第6、7天),孕中期(第12、13天)、孕晚期(第19、20天)处死,取甲状腺及胎盘.利用实时荧光定量PCR方法测定大鼠甲状腺和胎盘的IGF-Ⅰ及TGF-β1 mRNA表达水平.结果 ①LI1组和LI2组甲状腺绝对质量[(12.17±5.41)×10-2、(3.54±1.21)×10-2g]均高于NI组[(2.05±0.50)×10-2 g,P均＜0.05];HI1组、HI2组甲状腺绝对质量[(1.64±0.27)×10-2、(1.66±0.29)×10-2 g]与NI组比较,差异无统计学意义(P均＞0.05).②大鼠甲状腺IGF-Ⅰ mRNA表达:孕早期,LI1组、LI2组(1.98±0.35、1.47±0.22)均高于NI组(1.01±0.18,P均＜0.01),HI1组、HI2组(0.68±0.16、0.75±0.09)均低于NI组(P均＜0.05);孕中期,HI2组(1.14±0.17)低于NI组(1.58±0.33,P＜ 0.01);孕晚期,LI2组、HI2组(1.47±0.20、1.45±0.35)均低于NI组(2.20±0.37,P均＜0.01).NI组,孕早期、孕中期、孕晚期的IGF-Ⅰ mRNA表达水平(1.01±0.18、1.58±0.33、2.20±0.37)呈增高趋势,任意两组间比较差异均有统计学意义(P均＜ 0.01).③大鼠甲状腺TGF-β1 mRNA表达:孕早期,H1组(1.37±0.13)高于NI组(1.05±0.18,P＜ 0.01),HI1组、HI2组(0.50±0.09、0.44±0.11)均低于NI组(P均＜0.01);孕中期,LI1组LI2组(1.39±0.28、1.17±0.12)均高于NI组(0.63±0.22,P均＜0.01);孕晚期,LI1组、LI2组(1.57±0.30、1.23±0.20)均高于NI组(0.68±0.17,P均＜0.01).NI组孕中期、孕晚期(0.63±0.22、0.68±0.17)均低于孕早期(1.05±0.18,P均＜0.01).④大鼠胎盘IGF-Ⅰ mRNA表达:孕中期,HI1组、HI2组(1.48±0.16、1.45±0.25)均高于NI组(1.00±0.10,P均＜0.01);孕晚期,HI1组(1.75±0.15)高于NI组(1.54±0.29,P＜ 0.05);HI2组(1.94±0.31)高于NI组(P＜0.01).NI组孕晚期高于孕中期(P＜0.01).⑤大鼠胎盘TGF-β1 mRNA表达:孕中期、孕晚期各组间比较差异均无统计学意义(P均＞0.05);NI组孕晚期(0.83±0.16)低于孕中期(0.98±0.20,P＜ 0.05).结论 妊娠期碘缺乏条件下甲状腺上调IGF-ⅠmRNA表达,这种作用在孕早期尤为显著;同时增高TGF-β1 mRNA表达,且此抑制作用随碘缺乏程度加深逐渐显著.碘过量情况下甲状腺IGF-Ⅰ、TGF-β1作用则相对较弱.随着孕程增长胎盘组织中IGF-Ⅰ发挥促进组织生长分化的作用逐渐显著,相反TGF-β1的抑制作用则减弱.     

碘对体外培养哺乳期乳腺细胞钠碘转运体表达的作用及肿瘤坏死因子α对其的影响

目的 观察不同碘营养水平时体外培养哺乳期乳腺细胞钠碘转运体(NIS)表达水平,以及肿瘤坏死因子α(TNF-α)对其的影响作用.方法 体外培养小鼠原代哺乳期乳腺细胞,分为低碘1组、低碘2组、适碘组、高碘1组、高碘2组,分别加入含碘0、5、50、3000、10 000μg/L的DEME/F12培养液培养24 h,然后部分换成含对应剂量的碘加TNF-α(10-2 mg/L)的DEME/F12培养液,继续培养24 h.用实时荧光定量PCR方法检测哺乳期乳腺细胞NIS mRNA表达水平,并用In-Cell Western方法检测NIS蛋白表达水平.结果 单纯加碘时低碘1组[(64.66±14.99)×10-4]乳腺细胞NIS mRNA表达水平高于适碘组[(22.76±7.36)×10-4,P＜0.05],高碘1组[(10.18±3.53)×10-4]、高碘2组[(8.59±2.89)×10-4]低于适碘组(P均＜0.05);随着碘剂量升高,乳腺细胞NIS mRNA表达水平呈下降趋势.在碘加TNF-α时,低碘1组、低碘2组、适碘组[(2.72±0.45)、(2.69±0.68)、(1.80±0.67)×10-4]乳腺细胞NIS mRNA表达水平低于单纯加碘时对应各组[(64.66±14.99)、(29.82±4.47)、(22.76±7.36)×10-4,P均＜0.05];高碘1组[(6.58±2.87)×10-4]、高碘2组[(7.04±.1.36)×10-4]高于适碘组(P均＜0.05);随着碘缺乏和碘过量程度加重,乳腺细胞NIS mRNA表达水平呈上升趋势.随着碘剂量升高,单纯加碘时乳腺细胞NIS蛋白表达水平呈下降趋势.碘加TNF-α时各组乳腺细胞NIS蛋白表达水平与单纯加碘时对应各组比较有降低的趋势.碘加TNF-α时,随着碘缺乏和碘过量程度加重,乳腺细胞NIS蛋白表达水平均呈上升趋势.结论 随着碘剂量升高,哺乳期乳腺细胞NIS mRNA和蛋白表达水平均呈下降趋势.TNF-α对不同碘营养水平下哺乳期乳腺细胞NIS mRNA和蛋白表达具有抑制作用.     

碘过量对大鼠脑神经元特异性烯醇化酶基因表达的影响

目的 观察碘过量对大鼠脑神经元特异性烯醇化酶(NSE)基因表达的影响.方法 选用150只断乳1月龄的健康Wistar大鼠,按5×2析因设计分为10组.每组15只.按摄碘量分为正常碘(NI)、5倍碘(5HI)、10倍碘(10HI)、50倍碘(50HI)、100倍碘(100HI)5个水平,饲喂时间为3、6个月.实验期满后,取全部大鼠血样,用放射免疫分析方法测定血清总甲状腺素(TT4)、总三碘甲状腺原氨酸(TT3)、游离甲状腺素(FT4)、游离三碘甲状腺原氨酸(FT3)、反三碘甲状腺原氨酸(rT3)水平;取大鼠脑组织,采用RT-PCR方法检测脑组织NSE mRNA的表达.结果 各碘水平组TT4、TT3变化明星(F值分别为18.867、27.287,P<0.01),时间和碘水平对TT4存在交互作用(F=2.486,P<0.05);100HI组TT4、TT3均低于同时间NI、5HI、10HI、50HI组(P均<0.01).血清FT4、FT3、rT3水平,在3、6个月时变化明显(F值分别为4.968、27.046、59.776,P<0.05或<0.01),各碘水平组间变化明显(F值分别为33.058、28.420、17.482,P均<0.01),时间和碘水平对FT3、rT3存在交互作用(F值分别为6.894、5.233,P均<0.01);100HI组FT4、FT3、rT3低于同时间其他组(P<0.01或<0.05).各碘水平间NSE mRNA变化明显(F=29.006,P均<0.05);3、6个月100HI组大鼠脑中NSE mRNA水平(0.61±0.19、0.61±0.22),与NI(0.73±0.13、0.72±0.26)、5HI(0.72±0.15、0.72±0.16)、10HI(0.73±0.32、0.70±0.13)、50HI(0.71±0.18、0.69±0.31)组比较降低(P均<0.05).3、6个月时血清FT3、FT4与NSE mRNA水平均存在相关关系(r值分别为0.987、0.969及0.890、0.910,P均<0.05).结论 NSE基因的表达对过量碘摄入呈现出耐受性且有一定的阈值;当过量碘摄人为正常100倍时,在转录水平影响NSE基因的表达,表现为抑制NSE mRNA水平;在过量碘引发NSE转录减低的调控中,FT4和FT3可能均起着重要作用.     

脐带间充质干细胞移植治疗MRL/lpr狼疮鼠的疗效

目的 探讨脐带间充质干细胞(UC-MSCs)对MRL/lpr狼疮鼠的治疗作用.方法 24只18周龄雌性MRL/lpr小鼠,分为3组:UC-MSCs 1次治疗组(G1)、UC-MSCs 3次治疗组(G2)、对照组(G3).观察体质量,考马斯亮蓝法榆测尿蛋白定量(24 h),酶联免疫吸附法(ELISA)检测抗双链DNA(dsDNA)抗体水平,观察肾脏、肺病理改变.结果 ①尿蛋白定量(24 h)25周时G1组(2.3±1.9)mg和G2组(1.8±1.4)mg显著低于对照组(3.8±2.1)mg(P<0.05),27周时G1组(2.5±1.5)mg和G2组(1.9±1.2)mg也显著低于对照组(5.4±2.4)mg(P<0.01).②24周时治疗组体质量显著高于对照组(P<0.05),29周时血清肌酐G1组(7.2±3.2)μmol/L和G2组(6.2±2.8)μmol/L显著低于对照组(12.5±2.3)μmol/L(P<0.05).③移植1周时,抗dsDNA抗体滴度G1组(46±11)×102 U/ml和G2组(49±43)×102 U/ml显著低于对照组(99±42)×102 U/ml(P<0.05);29周时G2组(36±15)×102 U/ml显著低于对照组(68±32)×102 U/ml.④肾小球新月体形成率G1组(0.12±0.07)和G2组(0.08±0.02)显著低于对照组(0.20±0.06)(P<0.05),G2组较G1组显著减低(P<0.05).⑤间质性肺炎G1组和G2组较对照组减轻.结论 UC-MSCs对MRL/lpr狼疮鼠有显著疗效,安全且无排斥反应.     

氟对小鼠成骨细胞增殖与分化及骨保护蛋白和核因子κβ受体活化因子配体mRNA 表达的影响

目的 观察氟对体外培养的小鼠成骨细胞增殖、分化、骨保护蛋白(OPG)mRNA及核因子κβ受体活化因子配体(RANKL)mRNA表达的影响.方法 取出生1～2 d昆明小鼠颅盖骨,分离成骨细胞后进行传代培养.按培养液中加入不同浓度氟化钠(NaF)将成骨细胞分为0(对照)、10-8、10-7、10-6、10-5、10-4、10-3 mol/L组,分别在培养72 h或120 h后检测氟对成骨细胞增殖、分化(碱性磷酸酶,ALP)的影响;提取成骨细胞总mRNA,采用RT-PCR方法分析成骨细胞OPG mRNA、RANKL mRNA表达,并进行半定量分析.组间比较采用单因素方差分析,两两比较采用LSD-t检验.结果 培养72 h后,成骨细胞增殖组间比较差异有统计学意义(F=13.806,P<0.05);与对照组(0.434±0.010)比较,10-7～10-4mol/L组成骨细胞增殖明显增加(0.448±0.010、0.453±0.013、0.454±0.016、0.449±0.018,P均<0.05),10-3 mol/L组成骨细胞增殖降低(0.401±0.009,P<0.05).成骨细胞ALP活性组问比较差异有统计学意义(F=9.021,P<0.05);其中10-7～10-5 mol/L组[(2.447±0.756)×106、(2.603±0.183)×106、(2.687±0.886)×106 U/L]ALP活性明显高于对照组[(1.677±0.682)×106U/L,P<0.05或<0.01];10-4mol/L组[(1.479±0.366)×106 U/L]ALP活性明显低于对照组(P<0.05).OPG mRNA表达组间比较差异有统计学意义(F=11.299,P<0.05);与对照组(11000±0.000)比较,10-7～10-4 mol/L组表达增强(1.058±0.027、1.053 ±0.026、1.088±0.055、1.069±0.008,P<0.05或<0.01),10-3mol/L组表达降低(0.941±0.029,P<0.05).成骨细胞RANKL mRNA表达组间比较差异无统计学意义(F=1.311,P>0.05).RANKL mRNA/OPG mRNA比值,在104～10-5mol/L组逐渐降低,10-4、10-3mol/L组升高,但组间比较差异无统计学意义(F=1.376,P>0.05).结论 氟对小鼠成骨细胞增殖、分化呈双向调节作用,表现为低剂量刺激而高剂量抑制.低剂量染氟可能通过增加成骨细胞OPG的表达来抑制破骨细胞的分化和成熟,抑制骨吸收;而高剂量可能通过降低OPG的表达来促进破骨细胞的分化、成熟,促进骨吸收.

Abstract：

Objective To investigate the effect of sodium fluoride(NaF) on proliferation, differentiation and the mRNA expression of osteoprotegerin (OPG) and receptor activator of nuclear factor κβ ligand (RAN KL) of mouse osteoblasts. Methods Osteoblasts were isolated from calvarias of Kunming mice born in 1 - 2 d and cultured. Various concentrations of NaF(0, 10-8, 10-7, 10-6, 10-5, 10-4, 10-3mol/L) were added to the culture medium, the proliferation and activity of alkaline phosphatase(ALP) was determined after 72 h or 120 h. The expression of OPG mRNA and RANKL mRNA was analyzed by semi-quantification RT-PCR. Difference among groups was analyzed by One-Way AN0VA. Difference between two groups was analyzed by LSD-t test. Results There was significant difference in cell proliferation among groups after 72 h(F = 13.806, P < 0.05). Compared with control group(0.434 ± 0.010) , the proliferation was significantly induced in 10-7 - 10-4 mol/L groups treated osteoblasts (0.448 ± 0.010, 0.453 ± 0.013, 0.454 ± 0.016, 0.449 ± 0.018, all P< 0.05), and was significantly suppressed in 10-3 mol/L group(0.401 ± 0.009, P < 0.05). There was statistic difference in the activity of ALP among groups(F = 9.021, P < 0.05). Compared with control group (1.677 ± 0.682), the activity of ALP significantly increased in 10-7 - 10-5 mol/L groups[ (2.447 ± 0.756) × 106, (2603 ± 0.183) × 106, (2.687 ± 0.886) × 106 U/L, P < 0.05 or P < 0.01 ] and significantly decreased in 10-4 mol/L group[ (1.479 ± 0.366) × 106 U/L, P < 0.05 ]. There was significant difference in the expression of OPG mRNA among groups(F = 11.299, P< 0.05). Compared with control group (1.000 ± 0.000), the expression of OPG mRNA was significantly increased in 10-7 - 10-4 mol/L groups( 1.058 ± 0.027, 1.053 ± 0.026, 1.088 ± 0.055, 1.069 ± 0.008, P < 0.05 or P < 0.01) , while significantly decreased in 10-3 mol/L group (0.941 ± 0.029, P< 0.05). There was no difference in RANKL mRNA expression among groups (F= 1.311, P> 0.05). The ratio of RANKL/OPG decreased with increasing doses of fluoride and increased in 10-4, 10-3 mol/L groups, but there was no difference between groups(F = 1.376, P> 0.05). Conclusions A biphasic pattern of proliferation and differentiation has been induced in mouse osteoblasts, which manifests stimulation effect in low doses and suppression in higher doses. Low doses of sodium fluoride suppress differentiation and maturation of osteoblasts by increasing expression of OPG mRNA, while high doses of sodium fluoride enhance differentiation and maturation of osteoblasts by decreasing expression of OPG mRNA.     

弓形虫感染对大鼠脑组织神经丝mRNA表达和细胞免疫水平的影响

目的 探讨弓形虫感染对大鼠大脑组织神经丝(NF)mRNA表达和细胞免疫水平的影响.方法 将4周龄雄性SD大鼠分成两组(每组10只):弓形虫感染组腹腔感染2×10~(10)个/L弓形虫速殖子悬液2 ml;对照组腹腔注射灭菌生理盐水2 ml.9周后,应用RT-PCR法检测大鼠大脑组织中高相对分子质量NF(NF-H)、中相对分子质量NF(NF-M)和低相对分子质量NF(NF-L)mRNA表达水平:流式细胞术检测大鼠外周血CD3~+、CD4~+、CD8~+T淋巴细胞;酶联免疫吸附试验测定其血清γ干扰素(IFN-γ)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素4(IL-4)水平.结果 大鼠弓形虫感染9周后,大脑组织NF-L、NF-H mRNA表达量(0.51±0.06、0.68±0.05)较对照组(0.79±0.03、0.76±0.05)明显下降(t值分别为3.41、2.17,P<0.01或<0.05);NF-M mRNA表达量(0.69±0.02)与对照组(0.72±0.03)比较.差异无统计学意义(t=2.09,P>0.05).弓形虫感染组大鼠的CD4~+T细胞[(32.19±5.01)%]和CD8~+T细胞[(20.06±2.28)%]与对照组[(35.82±3.71)%、(22.06±3.90)%]比较,差异均无统计学意义(t值分别为1.69、1.88,P均>0.05).弓形虫感染组大鼠血清IFN-γ[(6.03±0.16)ng/L]、TNF-α[(18.05±1.93)ng/L]、IL-4[(15.76±1.59)ng/L]水平均高于对照组((4.77±0.13)、(9.54±1.57)、(5.67±0.42)ng/L,t值分别为2.81、2.74、2.63,P均<0.05].结论 弓形虫感染可导致大鼠大脑组织中NF亚单位mRNA表达水平下降,血清IFN-γ、TNF-α、IL-4水平升高.     

链脲佐菌素诱导的糖尿病大鼠骨转换变化及其分子机制的研究

目的 探讨链脲佐菌素(STZ)诱导的糖尿病大鼠骨转换变化及其分子机制.方法 单次尾静脉注射STZ制造糖尿病大鼠模型.成模后与正常对照组大鼠同步饲养8周,处死后测定两组大鼠血钙、磷、碱性磷酸酶、骨钙素、24 h尿钙水平和尿I型胶原氨基末端交联肽(NTx)/肌酐(Cr)比值,双能X线吸收法(DEXA)测定大鼠离体腰椎和股骨骨密度.骨形态计量学方法分析大鼠骨量和骨转换变化情况,并用实时荧光定量RT-PCR方法检测骨组织中标志骨吸收的NF-κB受体活化因子配体(RANKL)/骨保护素mRNA比值和标志骨形成的骨钙素以及调控成骨的核结合因子1(Cbfa1)、osterix(OSX)mRNA表达水平.结果 与正常对照组相比,糖尿病大鼠血钙、磷、碱性磷酸酶水平无显著差异,骨钙素水平显著减低[(3.03±0.52)对(6.18±0.71)ng/ml,P<0.01],24 h尿钙水平显著增加[(16.84±0.71)对(4.98±0.58)mg/24 h,P<0.01],尿NTx/Cr比值显著下降[(5.67±0.86)对(5.23±0.98)nmol/g Cr,P<0.05].糖尿病大鼠腰椎骨密度显著减低[(0.107±0.011)对(0.149±0.009)g/cm~3,P<0.01],股骨骨密度亦显著减低[(0.099±0.013)对(0.139±0.013)g/cm~3,P<0.01].骨形态计量学分析提示糖尿病大鼠骨小梁骨量减少,骨小梁矿化表面减少,骨形成速率减低[(0.44±0.11)对(0.78±0.14)μm/d,P<0.01].实时荧光定量RT-PCR提示糖尿病大鼠骨组织中RANKL/骨保护素mRNA比值[(0.57±0.11)对(0.89±0.13),P<0.01]、骨钙素[(2.25×10~(-4)±1.19×10~(-4))对(3.43×10~(-4)±1.63×10~(-4)),P<0.01]、Cbfa1[(26.68×10~(-4)±6.53×10~(-4))对(37.21×10~(-4)±7.14×10~(-4)),P<0.01]、OSX[(1.93×10~(-4)±0.65×10~(-4))对(4.19×10~(-4)±0.71×10~(-4)),P<0.01]mRNA水平均较正常对照组显著减低.结论 糖尿病大鼠是一种低转换型骨量减少,其骨组织中调控破骨的RANKL/骨保护素mRNA水平和调控成骨的Cbfa1、OSX、骨钙素mRNA水平均下降.     

436例糖尿病足截肢相关因素分析

目的 研究与糖尿病足溃疡截肢相关的重要因素.方法 回顾性分析436例糖尿病足溃疡患者的人口学资料、糖尿病及相关疾病治疗、足溃疡严重程度、溃疡大小、是否合并感染和血生化结果.根据是否截肢将436例患者分为未截肢组和截肢组.结果 436例患者中有97例患者被截肢,截肢率为22.2%.与未截肢组患者相比,截肢组患者的年龄、性别、足病病程和血糖水平差异无统计学意义.但截肢组的外周血管疾病发病率更高(94.8%vs 86.1%,P<0.05),血白细胞计数[(10.80±6.03 vs 8.09±3.59)×10~9/L,P<0.01]、超敏C反应蛋白[(10.2+6.2 vs 6.9+6.1)mmol/L,P<0.01]明显增高,血浆白蛋白[(35.0±5.1 vs 36.8±5.0)g/L,P<0.01]、血红蛋白[(104.3±18.9 vs 114.1±21.0)g/L,P<0.01]、血清总胆固醇[(4.2±0.9 vs 4.7±1.3)mmol/L,P<0.01]、甘油=三酯[(1.2±0.5 vs 1.6±1.3)mmol/L,P<0.01]、高密度脂蛋白胆固醇[(1.1±0.5 vs 1.2±0.3)mmo/L,P<0.01]、低密度脂蛋白胆固醇[(2.7±0.8 vs 3.0±1.0)mmol/L,P<0.05]明显降低.多因素逐步logistic回归分析显示,外周血管病变、血白细胞计数、血清总胆同醇、超敏C反应蛋白为截肢的独立危险因素.结论 足溃疡严重程度、外周血管病变、炎症因素和营养不良可能是截肢相关的重要因素.     

人类免疫缺陷病毒感染者T淋巴细胞亚群增殖、活化与疾病进展的相关性

目的 探讨慢性未治疗HIV/AIDS患者T淋巴细胞增殖活化与疾病进展的相关性.方法 以16例健康人及49例慢性未治疗的HIV/AIDS患者为研究对象,HIV/AIDS患者根据CD4+T淋巴细胞计数分为CD4+T淋巴细胞<200×106/L组、(200～350)X106/L组、>350X106/L组.分离患者外周血单个核细胞(PBMC),Ki-67标记细胞增殖,CD38标记细胞活化,流式细胞仪检测各项指标.数据采用单因素方差分析.结果CD4+T淋巴细胞<200×106/L组Ki-67+CD4+T 淋巴细胞比例为7.92%±4.37%,高于健康对照组的0.39%±0.24%、(200～350)×106/L组的2.61%±2.12%和>350X 106/L组的2.65%±2.13%,差异均有统计学意义(F=21.961,P<0.01);CD4+T淋巴细胞<200X106/L组Ki-67+CD8+T淋巴细胞比例为2.87%±1.13%,高于健康对照组的0.15%±0.90%、(200～350)×106/L组的1.40%±1.17%和>350×106/L组的1.22%±0.80%,差异均有统计学意义(F=19.203,P<0.01).且Ki-67+CD4+和Ki-67+CD8+T淋巴细胞比例与CD4+T淋巴细胞计数呈负相关(r=-0.654,r=-0.539;均P<0.01),而与病毒载量无关.CD4+T淋巴细胞<200×106/L组CD38+CD4+、CD38+CD8+T淋巴细胞比例分别为44.14%±20.65%和50.64%±21.08%,健康对照组为10.22%±3.98%和6.46%±3.99%,(200～350)×106/L组为16.03%±10.20%和19.33%±13.43%,>350×106/L组为13.69%±10.70%和16.98%±15.75%(F=14.333,F=15.412;均P<0.01),且CD4+和CD8+T淋巴细胞Ki-67的表达程度与CD38呈正相关(r=0.527,r=0.391;均P=0.002).结论 随着慢性HIV/AIDs疾病的进展,T淋巴细胞的增殖与活化均显著增高,T淋巴细胞活化可能是免疫持续激活的结果.     

生长分化因子-11促进小鼠诱导性多能干细胞向心肌细胞定向分化的研究

目的 明确生长分化因子（GDF）-11对小鼠诱导多能干细胞（miPSCs）向心肌细胞定向分化的促进作用,为心肌再生的细胞生物学治疗提供种子细胞和实验依据。方法 常规培养小鼠miPSCs,分为对照组和GDF-11组。GDF-11组在普通分化培养基中加用10 ng/ml的GDF-11。悬滴法诱导培养形成拟胚体（EBs）,每日观察搏动拟胚体数目。采用实时荧光定量PCR检测多能干细胞标志物Oct-4、心脏中胚层标志物Flk-1、心脏祖细胞标志物Nkx2.5、和心肌特异性标志物cTnT的表达变化。用免疫荧光染色观察心肌结构蛋白cTnI的表达水平。结果 GDF-11组的Oct-4表达水平在诱导分化的第3、7天分别为同期对照组的（0.55±0.31）倍（P<0.01）和（0.41±0.57）倍（P<0.05）;诱导分化的第10天,GDF-11组的Flk-1和Nkx2.5表达相分别为对照组的（2.09±0.8）倍（P<0.05）和（2.47±0.22）倍（P<0.01）;cTnT的表达在分化后第10天和第14天分别为对照组的（1.81±0.19）倍（P<0.01）和（1.61±0.20）倍（P<0.01）;两组均出现了心肌样搏动细胞团,GDF-11组搏动EBs百分比要显著高于对照组（P<0.01）。免疫荧光染色显示,GDF-11组的cTnI阳性率要显著高于对照组（P<0.01）。结论 GDF-1能够显著促进miPSCs的心肌定向分化。