吉林省汉城型汉坦病毒基因分型研究

目的 查明吉林省褐家鼠中汉城型汉坦病毒的基因亚型及其分布情况。方法 在吉林省的主要疫区采集啮齿类宿主动物，用免疫荧光法检测鼠肺标本，对汉坦病毒抗原阳性标本以RT-PCR法扩增部分M和S基因片段上的核苷酸序列并测序，将扩增片段的核苷酸序列与已知病毒序列进行系统发生分析并分型。结果 褐家鼠携带的汉坦病毒均为汉城病毒。序列分析发现在吉林省主要疫区褐家鼠流行的汉城病毒均为S3亚型，与辽宁、黑龙江省褐家鼠中的病毒株同源性较高，进化关系较近。结论 吉林省褐家鼠主要携带S3亚型的汉城型汉坦病毒。     

深圳市啮齿动物感染汉坦病毒的基因特征研究

目的 研究深圳市啮齿动物所携带的汉坦病毒分子流行病学特征,分析汉坦病毒基因型别。方法 采用笼日法布点捕鼠,收集鼠肺标本后研磨提取RNA。运用实时荧光PCR方法进行分型检测,进一步采用反转录-巢式PCR扩增部分M片段G2区和S片段核苷酸序列,并进行同源性和系统进化树分析。结果 共捕获200只鼠类动物,包含褐家鼠189只、黄胸鼠9只和小家鼠2只。汉坦病毒检出率为21.0%（42/200）,均为汉城病毒,其中宝安区鼠肺检出率最高,达45.7%（χ²=25.60,P<0.05）。从阳性鼠肺标本中分别扩增出25条汉坦病毒M片段G2区和S片段序列,核苷酸同源性分别为95.3%~100.0%和97.6%~100.0%,与来自广州市的参考序列核苷酸相似性较高。系统进化树显示此次研究深圳市鼠类动物所携带的汉坦病毒均为汉城病毒的S2亚型。氨基酸突变位点分析发现,在S基因编码的核衣壳蛋白中存在1个位点突变,为BA-111第973位由丙氨酸（Ala）变为苏氨酸（Thr）。结论 深圳市鼠类动物所携带的汉坦病毒为汉城病毒的S2亚型,与深圳市历年以及周边省市汉坦病毒代表病毒毒株相比变异不大。     

北京市北郊地区宿主动物感染汉坦病毒分子流行病学研究

目的 了解北京市北郊地区宿主动物携带肾综合征出血热病毒状况和病毒型别。方法夹夜法捕鼠,计算鼠密度,确定鼠种构成。应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)扩增M片段部分序列并测序,并用Clustal X(5.0)和DNAClub软件对序列进行分析。检测结果应用SPSS软件进行统计学分析。结果 共捕获宿主动物414只,褐家鼠为优势鼠种,占74.32％。其次为小家鼠,占22.72％。RT-PCR检测宿主带病毒率,海淀区褐家鼠为13.14％,小家鼠为0,昌平区褐家鼠为17.46％,小家鼠为3.57％。对6份扩增阳性标本进行序列测定并对其核苷酸序列进行分析显示,它们均为汉城型(SEO)汉坦病毒。毒株基于M片段部分序列所构建的系统进化树显示,它们可分为两个小进化分支。所测序列在此片段推导出的氨基酸序列多数与标准株完全相同,少数有1.40％～2.16％的差异。结论 北京市北郊地区汉坦病毒的主要宿主动物是褐家鼠,不同宿主动物携带的汉坦病毒之间的核苷酸序列及其推导的氨基酸序列同源性较高,但也存在一定的差异。这种差异形成的原因有待进一步研究。     

辽宁省汉城型汉坦病毒基因亚型分析

目的 分析辽宁省汉城型汉坦病毒(HV)的基因亚型及其分布情况.方法 收集辽宁省内主要肾综合征出血热(HFRS)流行地区的鼠肺和病人血清标本,采用间接免疫荧光法(IFA)检测鼠肺中HV抗原,应用HV特异性引物以RT-PCR方法扩增标本中M和S基因片段的特异性核苷酸序列,测序后与已知病毒序列进行比较分析,构建系统发生树,以明确其型别和亚型及其地理分布情况.结果 辽宁省HFRS疫区褐家鼠携带的病毒均为汉城型病毒(SEOV);对鼠肺及病人携带HV的部分M片段及部分S片段进行核苷酸序列分析表明,发现SEOV的同源性较高,变异较小,稳定性较高,而且地理位置相近地区基因组核苷酸序列的同源性很高(＞98.8％),具有小范围的地理聚集现象.结论 辽宁省流行的SEOV均为S3亚型,基因亚型分布比较单一.     

某部驻区鼠类感染肾综合征出血热病毒的分子流行病学调查

目的 了解某部驻区鼠类感染肾综合征出血热病毒状况和病毒型别.方法 夹夜法捕鼠,计算鼠密度,确定鼠类的种群构成.应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)扩增鼠类脏器模板的M片段基因序列,用BLAST软件进行序列分析,并用Clustal X(1.8)进行聚类分析.结果 共发现六种鼠类,分别为褐家鼠、大仓鼠、大林姬鼠、黑线姬鼠、棕背鼠平和花鼠,褐家鼠为优势鼠种,占35.85%;RT-PCR检测结果显示,2只大林姬鼠的肺和肝组织检测出了汉坦病毒,对一份阳性标本进行序列测定并分析其核苷酸序列,显示它为汉城型汉坦病毒.结论 该部驻区鼠类携带汉城型汉坦病毒,主要宿主动物为大林姬鼠.     

呼和浩特市鼠类携带汉坦病毒的基因分型

目的对呼和浩特市流行的汉坦病毒进行基因分型,为制定肾综合征出血热防制对策提供科学依据。方法对经间接免疫荧光试验初筛为阳性的鼠肺标本用汉坦病毒型特异性引物,以巢式逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)扩增部分M和S基因片段上的目的核苷酸序列,纯化回收测序后,将扩增片段的核苷酸序列与已知病毒的核苷酸序列进行比较,以明确汉坦病毒的基因型及基因亚型。结果呼和浩特市33份阳性鼠肺中,其中32份为褐家鼠肺,1份为小家鼠肺,经巢式RT-PCR扩增,用汉城病毒型特异性引物共扩增出部分S、M片段(G1、G2区)69个,经同源性和系统发生分析,褐家鼠和小家鼠所携带汉坦病毒均为汉城型S1亚型。结论呼和浩特市家鼠中流行的汉坦病毒为汉城型,与流行病学分型一致。     

应用逆转录聚合酶链反应和序列分析对褐家鼠肺汉坦病毒进行分型研究

对来自北京西客站附近一集装箱仓库的2份汉坦病毒免疫荧光抗原阳性褐家鼠肺组织进行分型研究。方法；采用逆转录聚合酶链反应（RT．PCR）和序列分析。结果：这两份褐家鼠肺标本均携带汉城型（SEO）汉坦病毒（HV）。RT－PCR扩增其中1份标本所携带病毒的M基因330bp片段，通过pGEM－T载体克隆进入大肠杆菌JM109，并进行核着酸序列测定，经与其它HV核着酸序列的同源性比较，其与SEO型毒株相应片段核着酸序列的同源性在93.9％～96.4％之间，而与其它血清型毒株的同源性在61.5％～75.8％之间。结论：首次证实北京地区宿主动物携带SEO型HV.     

浙江省温州市啮齿动物中汉坦病毒的分子流行病学研究

目的 研究浙江省温州市啮齿动物中汉坦病毒(HV)流行情况及病毒型别,为该地区肾综合征出血热(HFRS)的预防控制提供科学依据.方法 采用间接免疫荧光法(IFA)检测鼠肺中HV抗原;用RT-PCR法扩增阳性样品中HV的部分S片段及部分M片段;构建系统发生树进行系统发生分析及分型.结果在温州市HFRS疫区共捕获啮齿动物96只,在6份鼠肺样品中检测到HV抗原,其中4只褐家鼠,1只黄胸鼠与1只黄毛鼠,病毒携带率为6.3%.用汉城病毒(SEOV)特异引物从其中5份HV抗原阳性样品中扩增出部分S片段(620～999nt)及部分M片段(2001～2301nt)并测定序列.对扩增出的部分S及M片段的核苷酸序列分析发现,5株病毒与现有的SEOV有高同源性,均为汉城型HV.但在用部分S片段及部分M片段核苷酸序列所构建的系统进化树上,5株病毒的聚集模式不同.结论温州市的褐家鼠、黄胸鼠、黄毛鼠均携带汉城型HV,并可能发生基因片段的重排.     

湖南省啮齿动物携带汉坦病毒的分子流行病学研究

目的研究湖南省啮齿动物中汉坦病毒(HV)流行情况及病毒型别。方法采用IFA法检测鼠肺中HV抗原;用RT-PCR法扩增阳性标本中HV的部分S和M片段;构建系统发生树进行系统发生分析及分型。结果在湖南省HV流行的地区共捕获啮齿动物344只,其中6份标本HV抗原阳性,病毒携带率为1.74%。对扩增出的部分S与M片段的核苷酸序列分析表明,5份标本中的病毒为汉城型HV(SEOV),1份为汉滩型HV(HTNV)。用S(620～990 nt)与M片段G2区(2001～2301 nt)核苷酸序列所构建的系统进化树显示,湘乡褐家鼠、黄胸鼠及黄毛鼠携带的病毒均为SEOV的S4亚型;宁远褐家鼠携带的病毒为SEOV的一个新亚型;石门小家鼠携带的病毒为HTNV的H4亚型。结论湖南省为混合型HV疫区,以汉城病毒为主,并具有宿主多样性。     

广西北部地区汉坦病毒基因型研究

目的查明广西北部地区汉坦病毒的基因型及其基因亚型。方法用RT-PCR方法检测鼠肺中的汉坦病毒并对M和S片段进行扩增和测序。下载已知毒株序列并进行比较,以明确其基因型及其亚型。结果 2011年采集宿主动物肺组织标本356份,RT-PCR检测阳性12份。S片段与汉城型汉坦病毒(SEOV)的同源性较高,在86.6%~88.9%之间,与汉滩型汉坦病毒(HTNV)的同源性较低,在73.5%~74.0%之间。系统进化分析显示属于汉城型汉坦病毒的S6亚型。结论广西北部地区汉坦病毒基因型为汉城型汉坦病毒S6亚型。     

深圳市2005年鼠间汉坦病毒感染的鼠情监测及病毒株SZ2083的分离鉴定

目的 了解深圳市啮齿动物自然感染汉坦病毒（HV）状况和病毒型别，为制订防制措施提供科学依据。方法 收集宿主动物资料，采用酶联免疫吸附试验和间接免疫荧光试验分别检测鼠血清特异性总抗体和IgG抗体，直接免疫荧光检测鼠肺汉坦病毒抗原。将阳性鼠肺标本接种长爪沙鼠分离HV，阳性鼠肺标本提取病毒RNA，应用型特异性引物进行逆转录-巢式PCR扩增及核苷酸序列测定从而进行分型鉴定。结果 共捕获鼠形动物472只，其中以褐家鼠为优势鼠种，带病毒率为9．96％。鼠血标本总抗体阳性76例，IgG阳性56例。成功分离到1株HV，命名为SZ2083。经逆转录一巢式PCR扩增并进行序列测定显示为汉城（SEO）型。序列比较分析发现SZ2083核苷酸序列与L99同源性为97％，而与HTN76—118株的同源性仅为76％。结论 深圳市存在着以家鼠型为主的肾综合征出血热自然疫源地。     

北京市海淀区啮齿类动物中汉坦病毒自然感染状况调查

目的调查海淀区。肾综合征出血热（HFRS）疫源地啮齿类动物中汉坦病毒（HV）的自然感染情况,为HFRS针对性的预防和控制提供科学依据。方法用夹夜法在海淀区捕鼠,捕获的啮齿动物进行分类鉴定并解剖取肺脏,同时用间接免疫荧光法检测HV。结果在辖区内共捕获啮齿类动物2属3种225只,褐家鼠为优势鼠种。该区HV自然感染率范围为4．60％-20．00％,平均6．22％。其中不同鼠种自然感染率褐家鼠为6．96％,小家鼠为6．06％,黑线姬鼠为0。结论海淀区啮齿类动物自然感染HV普遍,主要存在以家鼠属为宿主的HV感染。     

肾综合征出血热病毒基因型和流行特点分析

目的探讨山东省汉坦病毒(HV)主要流行株的基因型和流行特点。方法采集山东地区有代表性的鼠肺标本，应用逆转录聚合酶链反应(RT—PCR)扩增技术及核苷酸序列测定方法对免疫荧光抗原阳性的标本进行HV G2基因扩增并测序，与原有山东毒株一起进行同源性分析、系统发生树分析。结果山东省新分离18株HV均为汉城(SEO)型，与以往山东SEO型HV有较高同源性，在95．7％以上，属于同一亚型。山东省汉滩(HTN)型HV同源性较低，在77．9％以上，属于不同亚型。结论山东省HV是以SEO型为主的SEO和HTN混合型疫区。SEO型基因变异率低，有较高的稳定性。而HTN型HV变异率高，稳定性差。     

北京地区流行性出血热SEO型汉坦病毒基因差异的研究

目的 提示北京地区啮齿类动物所携带的流行性出血热（ＥＨＦ）汉坦病毒的基因型、毒株差异,追溯其传染来源。方法 本研究应用逆转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）扩增技术及核苷酸序列测定方法对免疫荧光抗原阳性的标本进行研究分析。结果 对５个阳性标本的３００ｂｐ部分Ｍ基因组片段序列分析表明均为ＳＥＯ型汉坦病毒;毒株核苷酸序列比较表明：与其他ＳＥＯ型毒株同源性均达９４％以上,而与其他ＨＮＴ型毒株同源性均低于７     

福建口岸啮齿类动物携带汉坦病毒分子流行病学调查

目的了解福建口岸汉坦病毒的基因型别和分子特征。方法对2010年福建口岸捕获的鼠形动物进行汉坦病毒检测,对部分阳性标本进行M基因片段序列分析。结果 2010年福建口岸共捕获鼠形动物839只,以褐家鼠为优势鼠种,占58.52%;鼠形动物携带汉坦病毒阳性率5.84%,均为汉城型(SEO),阳性鼠种为褐家鼠和黄胸鼠,阳性率分别为8.96%和3.09%。汉坦病毒检出呈较明显的冬春季高峰。用M基因片段(nt2001～2301)核苷酸序列构建系统进化树,将福建口岸SEOV分为S2和S3两个亚型。结论 S3亚型SEOV为福建口岸优势流行亚型。     

山东省汉坦病毒分子流行病学研究

目的探讨山东省汉坦病毒（HV）的分子流行病学特点。方法用反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）及核苷酸序列测定技术,对肾综合征出血热（HFRs）监测点的阳性鼠肺标本进行目的基因扩增并测序,与国内外的HV毒株进行同源性分析及系统发生树分析。结果有15份标本扩增出汉城（SEO）型S、M片段,对其中10份扩增片段进行序列分析认为均为SEO型HV,S片段之间的同源性≥96.3％,其推导的氨基酸序列同源性（JN5-153S和DY1S除外）≥96．8％;M片段之间及与山东省以往分离的ZB8同源性≥97．5％,其推导的氨基酸序列同源性为98．6％～100％。结论近年来山东省流行的HV仍以SEO型S3亚型为主。同一地区或地理位置相邻的地区病毒基因组同源性较高,具有明显的地区聚集性,基因型别较为稳定。     

北京市城区鼠间汉坦病毒感染的流行病学研究

目的了解北京城区中心地带鼠间汉坦病毒（Hv）感染状况及其病毒型别差异。方法选取北京城区某方圆约1km两街区之内的食物资源丰富、场所隐蔽的中、小餐饮行业、蔬菜集贸市场及周边垃圾堆、卫生死角等生态环境，从2003年12月至2004年11月每月连续采用夹夜法捕鼠，计算鼠密度和鼠种构成。应用间接ELISA法检测鼠血清IgG抗体；针对汉坦病毒M基因部分片段设计汉城型汉坦病毒（SEOV）特异性引物，应用RT-PCR法检测宿主动物携带HV情况，阳性标本直接测序。利用Excel和SPSS软件分析宿主动物HV感染的动态特征。最后用DNASTAR软件对获得序列进行比较分析。结果共捕获啮齿动物229只，平均鼠密度6．41％（229／3570），褐家鼠和小家鼠分别为餐饮业、农贸市场生境的优势鼠种。褐家鼠血清抗体阳性率3．51％（6／171），带病毒率为0．58％（1／171）；小家鼠血清抗体阳性率为6．90％（4／58），带病毒率为172％（1／58）。病毒检出率以11、12月最高，抗体水平冬春季（1、4月）最高，与春季人群肾综合征出血热（HFRS）流行季节基本一致。2份扩增阳性标本（分别来源于小家鼠和褐家鼠）均为SEOV，差异为5．40％，系统发育分析显示他们位于2个不同的较小分支，但均位于Z37支系。结论北京城区2种主要的HV宿主在一些鼠害重点行业密度仍较高，虽然HV基础感染率不高，但持续存在，为春季人群HFRS发病高峰的重要影响因素。来自2个不同宿主的HV基因有一定的差异。小家鼠的传播作用有所加强，应予重视。     

湖南省2006年肾综合征出血热病原学监测研究

目的 了解湖南省啮齿动物中汉坦病毒带病毒率、基因型别和分布.方法 采用直接免疫荧光(DFA)法检测鼠肺汉坦病毒抗原,从汉坦病毒阳性鼠肺标本中提取病毒RNA,应用汉坦病毒型特异性引物进行逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)扩增、核苷酸序列测定以及基因分型和同源性分析.结果 总鼠密度为3.15%,鼠带病毒率为1.31%,在室内捕获的7只褐家鼠、黑线姬鼠、小家鼠、黄胸鼠鼠肺标本中均发现携带SEO型病毒,在室外捕获的1只黑线姬鼠鼠肺标本则携带HTN型病毒.成功对6份阳性PCR产物进行了序列分析,浏阳市1、2、4、6号标本同源性较高为100%,邵东市的7、8号标本同源性也较高为100%,但两地区间的同源性差异为89.3%,L99株与浏阳分离株的同源性为94.4%,与邵东分离株的同源性为88.3%.结论 湖南省汉坦病毒存在HTN和SEO型,以SEO型为主.     

北京地区汉坦病毒宿主动物生态流行病学调查

目的了解北京地区啮齿动物问汉坦病毒（HV）感染状况、HV基因型及其与宿主动物的关系。方法夹夜法捕鼠，计算鼠密度，确定鼠种构成。针对HV基因M片段部分序列设计2种型特异性引物，应用RT—PCR法检测宿主动物带毒情况，并用ClustalX（5．0）和DNAClub软件对序列进行分析。采用SPSS软件分析宿主动物HV感染的流行病学特征。结果共捕获宿主动物295只，褐家鼠为优势鼠种，占71．53％。其次为小家鼠。占14．58％。RT—PCR检测宿主带病毒率，其中褐家鼠阳性率为18．01％，小家鼠为2．33％。对5份扩增阳性标本进行序列测定并对其核苷酸序列进行分析，结果显示均为汉城型（SEO）病毒。不同性别的褐家鼠HV感染率之间差异无统计学意义（X^2=0．032，P〉0．05）；不同体重的褐家鼠HV感染率之间差异有统计学意义（X^2=16．900，P〈0．001），体表有、无疤痕的褐家鼠之间HV感染，差异有统计学意义（X^2=30．441，P〈0．001）。结论北京地区存在较为广泛的汉城型HV感染，目前尚未发现汉滩型HV疫源地。褐家鼠为北京地区HV优势宿主和主要带毒鼠，宿主动物种群特征与HV感染具有不同程度的相关性。