一种新型肽核酸基因传感器阵列检测系统的构建

目的构建针对乙型肝炎病毒(HBV)的肽核酸(PNA)压电基因传感器(PGS)阵列检测系统. 方法设计针对HBV的bis-PNA探针,将其固定在PGS阵列表面,具体摸索了bis-PNA探针与HBV基因组DNA杂交时的最佳pH值、最佳离子浓度、最佳探针固定量,并结合自激式振荡电路,PESA V2.0频率记录分析软件构建出PNA-PGS阵列检测系统. 结果杂交缓冲液pH值为6.8、离子浓度为20 mmol/L、探针浓度为1.5 μmol/L时杂交条件最为适宜. 结论成功地构建出了HBV PNA-PGS阵列检测系统,为临床标本中HBV的直接检测奠定了良好的实验基础.     

乙型肝炎病毒靶序列浓度对新型肽核酸压电基因传感器阵列的影响

目的探索乙型肝炎病毒(HBV)靶序列浓度值对肽核酸压电基因传感器阵列杂交效应的影响.方法压电基因传感器阵列表面先固定上1.5μmol/L的bis-PNA探针,观察终浓度为1pg/L至100μg/L的HBV DNA与探针,进行杂交所引起的频率变化及反应所需时间.并对频率下降值与靶序列浓度做线性回归,确定其线性范围.结果靶序列浓度为1pg/L时,传感器未能检测出任何频率的改变.随着浓度从10 pg/L增加到100μg/L,杂交反应引起的频率下降值呈先增加后趋于缓和的趋势,以10μg/L为分界线,而杂交平衡时间并没有显现出一定的变化趋势.在10pg/L到10μg/L的浓度范围内,浓度与频率下降值的线性回归方程为lgC=-2.7455 0.0691×△F,相关系数r=0.9923.结论随着靶序列浓度的升高,杂交反应引起的频率下降值呈典型饱和曲线趋势,靶序列浓度的线性检测范围为10pg/L～10μg/L.     

肽核酸探针在生物传感器检测中的研究进展

利用生物传感器进行病原微生物的快速检测是近年发展起来的新型检测技术，生物传感器是生物活性材料（如酶、蛋白质、DNA、抗原、抗体、生物膜等）与物理化学换能器有机结合的一中新型检测装置，其原理是利用生物识别和生物学反应，产生的信息被物理或化学换能器转变成可定量和可处理的电信号，且信号的强度与靶标物的浓度成正比比例。     

DNA生物传感器检测电路的设计

设计一种用于检测某种DNA杂交反应的石英晶体传感器及其放大、显示电路。将单链DNA作为探针点在电极表面,测量晶振频率的改变量,并设计出后续处理电路。该设计能实时动态显示出DNA杂交反应中频率的变化。     

乙型肝炎病毒DNA检测结果分析

聚合酶链反应 (ＰＣＲ)检测乙型肝炎病毒ＤＮＡ(ＨＢＶ -ＤＮＡ) ,是确定乙型肝炎病毒 (ＨＢＶ)感染及其病毒复制的指标 ,作者采用ＰＣＲ法检测ＨＢＶ -ＤＮＡ，以探讨ＨＢＶ感染者的不同感染状态是否存在传染性和病毒复制。１材料和方法１．１血清来源对健康查体者１８５０人 (初筛ＨＢｓＡｇ阳性者 )取静脉血３ｍｌ,筛选乙肝５项指标不同组合者 ,分离血清 -２０℃保存。１．２检测方法 (１)ＨＢｓＡｇ、抗 -ＨＢｓ、ＨＢｅＡｇ、抗 -ＨＢｅ、抗 -ＨＢｃ用ＥＬＩＳＡ法。试剂为上海科华生物制品工程公司生产 ,有效期内按说明书操作。使用Ｃ…     

漏声表面波生物传感器直接快速检测病原体DNA的实验研究

目的应用漏声表面波生物传感器直接检测从临床标本中提取的HPV基因组DNA。方法选取36例临床确诊为宫颈癌的患者,提取其生殖器分泌物的基因组DNA,并经荧光定量PCR检测为HPV阳性的标本,以14例健康志愿者为阴性对照;利用漏声表面波生物传感器检测临床样本,并与荧光定量PCR法进行方法学比较。结果传感器法检测35例标本为阳性,阳性率为97.22%,而荧光定量PCR法检测36例均为阳性;14例阴性对照标本中,两种方法的检测结果均为阴性;传感器法的检测限为1.21pg/L。结论传感器法与荧光定量PCR法差异无统计学意义,一致性较好,且漏声表面波生物传感器实现了对临床标本中HPV基因组DNA的直接快速检测。     

肽核酸探针技术在赤潮生物检测中的应用

肽核酸（peptide nucleic acid,PNA）是一类不带电荷的类似于肽链骨架结构并携带有碱基的新人工信息分子,该分子主链骨体为N-（2-氨乙基）-甘氨酸间通过酰胺键反复连接而成的长链,侧链则是利用亚甲羰酰键将碱基与主链骨架相连而形成.自PNA被发现10余年来,作为一种优良的寡核苷酸取代物而被广泛地应用于分子生物学研究及相关领域,被认为是非常有前景的探针工具.     

血痕中乙型肝炎病毒DNA检测

目的 探讨血痕标本检测乙型肝炎病毒DNA(HBV-DNA)的方法。方法 以血痕标本为检材,采用Chelex-100法制备模板DNA,再以巢氏PCR法扩增HBV目的片段,建立并优化反应条件,分析该法的特异性与敏感性,并将该法检测乙肝病毒感染者的结果与酶联免疫吸附法(ELISA)的检测结果利用配对χ²检验进行比较。结果 Chelex-100法与巢式PCR法相结合的检测方法,可从仅3 mm×3 mm的乙肝病毒感染者血痕标本中扩增出193 bp的HBV-DNA特异片段,最低检出量(灵敏度)为5拷贝/μL;本检测法与ELISA法的阳性检出率比较差异无统计学意义(P>0.05);2种方法的检测结果一致(Kappa系数=0.727)。结论 建立了一种灵敏、特异、检材用量少的检测方法,弥补了常规检测方法需以新鲜血液为检材的不足,可用于血痕标本的HBV-DNA检测,对大规模的分子流行病学调查及血液银行的建立提供技术支持。     

884例乙型病毒性肝炎HBV—DNA检测

为了探索HBV-DNA阳性与乙型肝炎病毒标志物(HBVM)和ALT、r-球蛋白等的关系,将884例乙型肝炎的检测结果进行分析,现报告如下。材料与方法1．血清标本:于1995年1月~1996年12月就诊的乙型肝炎,其中HBsAg 、HBeAg 、抗-HBc (即“大三阳”)359例;HBsAg 、抗-HBe 、抗-HBc (即“小三阳”)525例。2．检验方法:HBV标志物的检测,采用ELISA,试剂由上海科华提供,按说明书操作。HBV-DNA检测,采用PCR,试剂由军事医学科学院提供,按说明书操作。r-球蛋白(r-EP)检测,采用醋酸纤维薄膜电泳法,按《浙江省医院管     

乳汁样本乙型肝炎病毒DNA提取方法探讨

目的 探讨不同样本处理方法对乳汁样本中HBV DNA定量结果的影响,筛选出适合临床实验室检测病毒DNA的样本前处理方法.方法 分别采用专用DNA提取液法、碱裂解法、酸化法、无水乙醇法和冷藏法,提取不同HBV DNA载量的乳汁样本中的HBV DNA,然后进行荧光定最PCR检测.结果乳汁样本中的HBV DNA>10~4 IU/mL时,以专用DNA提取液法、碱裂解法、冷藏法处理的乳汁样本HBV DNA结果阳性率达100%,HBV DNA阳性血清用乳汁稀释与用阴性血清稀释的定量结果符合率100%,酸化法和无水乙醇法处理的乳汁样本HBV DNA均为阴性;当乳汁样本中的HBV DNA<10~4 IU/mL时,以碱裂解法(NaOH浓度为0.4%～1.0%)处理的乳汁样本HBV DNA检测结果阳性率100%,HBV DNA阳性血清用乳汁稀释与用阴性血清稀释的定量结果符合率100%,其余方法处理的乳汁样本HBV DNA均为阴性.结论 碱裂解法提取乳汁样本中的HBV DNA适用临床样本检测,且NaOH浓度应控制在0.4%～1.0%之间. HBV DNA阳性血清用乳汁稀释与用阴性血清稀释的定量结果符合率100%,酸化法和无水乙醇法 理的乳汁样本HBV DNA均为阴性;当乳汁样本中的HBV DNA<10~4 IU/mL时,以碱裂解法(NaOH浓度为0.4%～1.0%)处理的乳汁样本HBV DNA检测结果阳性率100%,HBV DNA阳性血清用乳汁稀释与用阴性血清稀释的定量结果符合率100%,其余方法处理的乳汁样本HBV DNA均为阴性.结论 碱裂解法提取乳汁样本中的HBV DNA适用临床样本检测,且NaOH浓度应控制在0.4%～1.0%之间. HBV DNA阳性血清用乳汁稀释与用阴性血清稀释的定量结果符 率100%,酸化法和无水乙醇法 理的乳汁样本HBV DNA均为阴性;当乳汁样本中的HBV DNA<10~4 IU/mL时,以碱裂解法(NaOH浓度为0.4%～1.0%)处理的乳汁样本HBV DNA检测结果阳性率100%,HBV DNA阳性血清用乳汁稀释与用阴性血清稀释的定量结果符合率100%,其余方法处理的乳汁样本HBV DNA均为阴性.结论 碱裂解法提取乳汁样本中的HBV DNA适用临床样本检测,且NaOH浓度应控制在0.4%～1.0%之间. HBV DNA阳性血清用乳汁稀释与用阴性血清稀释的定量结果符 率100%,酸化法和无水乙醇法 理的乳汁样本HBV DNA均为阴性;当乳汁样本中的HBV DNA<10~4 IU/mL时,以碱裂解法(NaOH浓度为0.4%～1.0%)处理的乳汁样本HBV DNA检测结果阳性率100%,HBV DNA阳性血清用乳汁稀释与用阴性血清稀释的定量结果符合率100%,其余方法处理的乳汁样本HBV DNA均为阴性.结论 碱裂解法提取乳汁样本中的HBV DNA适用临床样本检测     

PNA与DNA探针对漏声表面波传感器特异性的影响

目的探讨以PNA作为杂交探针与普通的DNA探针相比,在漏声表面波生物传感器生物杂交反应中的优越性。方法用巯基固定法将PNA、DNA两种探针分别固定在漏声表面波生物传感器的金膜表面,分别与完全匹配、1个及2个碱基错配的靶序列进行杂交反应,观察两种不同的探针与靶序列反应所引起的相位变化及反应平衡时间。结果与DNA探针相比,PNA探针识别碱基错配的能力显著提高,且杂交平衡时间更短。结论 PNA探针可提高漏声表面波生物传感器的检测特异性。     

应用压电生物传感器检测HBV感染相关SNP位点的实验研究

目的建立压电生物传感器单核苷酸多态性(SNP)检测方法,检测乙型肝炎病毒(HBV)感染相关SNP位点ESR1 T29C,期望为临床提供一种准确、可靠、快速、简便的SNP检测方法。方法以合成DNA序列target-A和target-G为检测靶序列,建立压电传感器检测SNP的模式实验,并确定最低检测灵敏度;收集临床患者外周血样本,提取基因组DNA,经测序方法鉴定SNP位点基因型,对不同基因型样本ESR1 T29C位点所在片段进行PCR扩增后,应用压电生物传感器进行检测。结果检测靶序列为target-A时,频率下降(416.0±21.5)Hz;检测靶序列为target-G时,频率下降(9.4±5.0)Hz,两者频率下降值差异有统计学意义(P<0.01),并最低可检测到2×10-11mol/L,以基因组DNA PCR扩增产物为检测靶序列时,基因型TT频率下降(109.4±13.4)Hz;TC型频率下降(52.0±11.4)Hz;CC型频率下降(7.2±4.5)Hz,3者频率下降值差异有统计学意义(P<0.05)。结论该方法能够特异、灵敏地检出临床标本中SNP位点的不同基因型。     

探针浓度值对LSAW-bisPNA传感器检测系统的影响

目的探讨双体肽核酸（bisPNA）探针浓度值对漏声表面波（LSAW）-bisPNA基因传感器检测系统的影响。方法LSAW基因传感器表面分别固定终浓度为0.001、0.005、0.01、0.05、0.5、1.0、1.5、2.0、3.0、4.0μmol/L的bisPNA探针后,分别观察其与相应的HPV靶序列杂交时相位变化及反应所需时间。结果与HPV靶序列杂交所引起的相位变化值是先升后降,以1.0μmol/L探针浓度为分界线;杂交平衡时间上各组间未见明显的变化趋势。结论1.0μmol/L bisPNA探针固定浓度最为适宜。     

乙型肝炎病毒的亚克隆及其应用

目的 应用酶切pBP₁₃₂₂HBV,回收HBVDNA,将其克隆到高拷贝载体,获得亚克隆株pUC₁₉HBV,再酶切、HBVDNA标记探针,核酸杂交检测临床血清标本72份,与定量PCR,定性PCR方法对比.方法 由此获得了亚克隆株pUC₁₉HBV,用地高辛标记的HBVDNA探针杂交、定量PCR、定性PCR方法同时检测临床血清标本72份.结果 阳性标本份数分别为40、51、49份,阳性率分别为55.6%、70.8%、68.1%.阳性符合率分别为88.9%、84.6%、80.8%.结论 3种HBV核酸检测方法的比较,以定量PCR法最为敏感,地高辛标记HBVDNA探针检法为特异.     

无症状HBsAg携带者尿中HBV—DNA的检测

本文以斑点分子杂交法检测了龙症状HBsAg携带者尿中HBV DNA,检出率为12%。血清HBeAg阳性时其检出率则为21.1%。说明HBV可随尿排出,并可能借日常生活接触传播乙型肝炎.     

一种简易基因水平鉴定HBV亚型的方法

ＨＢＶＳ基因５１３ｂｐ的ＰＣＲ扩增产物，用限制性内切酶ＭｓｐＩ和ＢａｍＨＩ消化，ａｄｒ亚型基片段，用ＭｓｐＩ可交其切割成为两个分别为３２０ｂｐ和１９３ｂｐ的片段，ａｙｗ亚型可被ＭｓｐＩ消化切割成为３２６ｂｐ和１８７ｂｐ的两个片段，ａｙｗ的ＨＢＶ的扩增产物，也可用限制性内切酶ＢａｍＨＩ切割成２９５ｂｐ和２１８ｂｐ两条片段，ａｄｗ亚型Ｓ基因无ＭｓｐＩ的酶切位点，不被切割，ａｄｗ，ａｄｒ亚型ＨＢＶ的Ｓ基     

Genomic Detection of Schmallenberg Virus,Israel

We discuss genomic detection of Schmallenberg virus in both Culicoides midges and affected ruminants during June 2018–December 2019, demonstrating its circulation in Israel. This region is a geographic bridge between 3 continents and may serve as an epidemiologic bridge for potential Schmallenberg virus spread into Asia.     

梅毒患者肝炎病毒标志物的检测

目的:调查梅毒患者的病毒性肝炎的感染状况。方法:用酶联免疫吸附实验(ELISA)对320例梅毒患者的乙型肝炎病毒(HBV)两对半、丙型肝炎病毒抗体(抗-HCV)进行检测。结果:320例梅毒患者中,乙肝表面抗原(HBsAg)、抗-HCV、的阳性率分别为15.3%(49/320)、5.6%(18/320),均高于对照组。梅毒组"大三阳"比例59.2%(29/49)高于对照组30.3%(10/33),而"小三阳"低于对照组。结论:梅毒患者HBV、HCV感染率高于普通人群,应加强梅毒患者的肝炎标志物的检测。