约氏疟原虫卵囊、唾液腺子孢子差异表达蛋白的二维电泳—质谱分析

目的分离和鉴定约氏疟原虫卵囊、唾液腺子孢子差异表达蛋白，找出疟原虫子孢子侵入相关蛋白。方法采用二维蛋白电泳技术分离感染和未感染约氏疟原虫的斯氏按蚊中肠和唾液腺差异表达蛋白，考马斯亮蓝染色，BIOIRAD凝胶扫描仪和PDQUest图象软件分析，差异蛋白点用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱测定其肽质指纹图谱，用Mascot在相应的查询条件下搜索NCBInr数据库。结果获得了分辨率和重复性均较好的一维和二维蛋白图谱。凝胶扫描结果发现未感染蚊中肠有135个蛋白点，感染蚊中肠有158个蛋白点，相同有107个，pI偏酸性。未感染蚊唾液腺有178个蛋白点，感染蚊唾液腺有201个蛋白点，相同有167个，pI分布较均匀。选择7个差异蛋白点进行分析，得到了6个蛋白肽质指纹图谱，查询数据库初步鉴定疟原虫来源的蛋白质有5个，另1个来源于蚊组织。疟原虫来源蛋白为一些表面蛋白、代谢和运动相关的蛋白等。结论建立了一种较好的疟原虫子孢子蛋白分离和鉴定方法，并证明约氏疟原虫唾液腺子孢子表达大量差异表达蛋白，部分可能与其识别、侵入宿主细胞有关。     

MALDI-TOF-MS技术应用于非肝癌肝病蛋白质组学的研究进展

蛋白质组学是以蛋白质组为研究对象的一门新兴学科,其研究技术主要包括双向凝胶电泳、质谱（主要包括MALDI-TOF-MS和SELDI-TOF-MS技术）和生物信息学技术。目前我国慢性肝病主要是以乙型肝炎病毒和丙型肝炎病毒感染所导致的慢性肝炎、肝纤维化、肝硬化以及肝癌等为主,蛋白质组学技术在肝癌中的研究较多,而对非肝癌肝病文献较少也比较零散。因此,本文从MALDI-TOF-MS技术在该领域研究应用方面对肝病蛋白质组学研究作一综述。     

MALDI-TOF-MS技术应用于肝细胞癌蛋白质组学的研究进展

蛋白质组学（proteomics）是从整体水平对蛋白质进行研究的一门重要学科。蛋白质组学技术为开展HCC研究建立了新的技术平台并已经做了大量工作，筛选出有潜在价值的用于HCC诊断和预后的蛋白及发现新的治疗药物靶点，为HCC的诊断和治疗带来新的机遇。基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱是蛋白质组学研究的核心技术之一。作者拟从MALDI—TOF-MS技术在肝细胞癌蛋白质组学研究中的应用方面作一综述。     

MALDI-TOF-MS技术应用于消化道肿瘤蛋白组学的研究进展

基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(matrix-assisted laser desorption ionization time-of-flight mass spectrometry, MALDI-TOF-MS)技术作为一种生物质谱技术,可广泛应用于基因突变检测、基因多态性研究、微生物鉴定、肿瘤生物学标志物检测等方面,其对于早期疾病的发现、治疗以及评估预后有着重要指导意义,已成为精准医学领域不可缺少的分子诊断技术。本文对MALDI-TOF-MS技术在消化道肿瘤蛋白质组学的应用方面进行综述。     

约氏疟原虫卵囊、唾液腺子孢子差异表达蛋白的二维电泳-质谱分析

目的分离和鉴定约氏疟原虫卵囊、唾液腺子孢子差异表达蛋白,找出疟原虫子孢子侵入相关蛋白。方法采用二维蛋白电泳技术分离感染和未感染约氏疟原虫的斯氏按蚊中肠和唾液腺差异表达蛋白,考马斯亮蓝染色,BIORAD凝胶扫描仪和PDQUest图象软件分析,差异蛋白点用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱测定其肽质指纹图谱,用Mascot在相应的查询条件下搜索NCBInr数据库。结果获得了分辨率和重复性均较好的一维和二维蛋白图谱。凝胶扫描结果发现未感染蚊中肠有135个蛋白点,感染蚊中肠有158个蛋白点,相同有107个,pI偏酸性。未感染蚊唾液腺有178个蛋白点,感染蚊唾液腺有201个蛋白点,相同有167个,pI分布较均匀。选择7个差异蛋白点进行分析,得到了6个蛋白肽质指纹图谱,查询数据库初步鉴定疟原虫来源的蛋白质有5个,另1个来源于蚊组织。疟原虫来源蛋白为一些表面蛋白、代谢和运动相关的蛋白等。结论建立了一种较好的疟原虫子孢子蛋白分离和鉴定方法,并证明约氏疟原虫唾液腺子孢子表达大量差异表达蛋白,部分可能与其识别、侵入宿主细胞有关。     

WCX磁珠联合MALDI-TOF-MS技术在结直肠癌诊断中的应用

目的:比较结直肠癌与正常人血清蛋白质谱的变化,筛选特异性蛋白标志物,建立结直肠癌诊断分类树模型.方法:收集血清样本133例(其中结直肠癌67例,正常人66例),随机分为建模组和验证组.运用弱阳离子纳米磁珠(magnetic bead-weak cation exchange,MB-WCX)联合基质辅助激光解吸离子飞行质谱(matrix-assistedlaser desorption/ionization time-of-flight massspectrometry,MALDI-TOF-MS),建立结直肠癌与正常人血清蛋白质谱.用Flex Analysis2.4软件收集数据,应用ClinproTools2.2软件对建模组34例结直肠癌和33例正常人血清差异蛋白质谱进行定量分析,应用Genetic Algorithm算法建立结直肠癌诊断模型,应用所获取的诊断模型对验证组样本(33例结直肠癌和33例正常人)进行分类诊断,以评价诊断模型的诊断价值.结果:通过比较分析结直肠癌与正常人血清蛋白质谱,发现共有33个差异蛋白峰(P<0.05),其中在结直肠癌中表达上调25个,表达下调8个.利用其中5个差异峰(Mr分别为759,3316,4645,4248,2645Dr)建立诊断模型,获得了94.12%(32/34)敏感性和96.97%(32/33)的特异性,经独立样本双盲验证,其灵敏度为93.94%(31/33),特异度为96.97%(32/33).结论:基于磁珠分离和MALDI-TOF-MS技术能直接检测出结直肠癌患者血清差异表达蛋白,建立的诊断模型具有较高的敏感性和特异性,对提高结直肠癌的诊断具有一定的临床意义.     

基质辅助激光解析电离飞行时间质谱快速鉴定沙门菌临床分离株

目的评估基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)在沙门菌鉴定中的临床应用,并研究其影响因素。方法用传统血清学方法鉴定沙门菌的血清型,用MALDI-TOF MS对哥伦比亚血平板、HE平板、SS平板和麦康凯平板分别培养24h、72h、120h和168h的179株沙门菌进行鉴定。结果 179株沙门菌可分为38种血清型,肠炎沙门菌(21.2%)、斯坦利沙门菌(17.3%)和Ⅰ4,5,12:i:-沙门菌(16.2%)居前3位。所有菌株在血平板、HE平板、SS平板和麦康凯平板分别培养24h和72h均能被MALDI-TOF MS准确鉴定为沙门菌。MALDI-TOF MS的耗材成本约为微生物自动生化鉴定系统(Vitek 2)的1/3,检测时间约为Vitek 2的1/7。结论在血平板、HE平板、SS平板和麦康凯平板培养3d以内的沙门菌,MALDI-TOF MS均可以准确鉴定。与Vitek 2相比,MALDI-TOF MS检测的速度更快,消耗的成本更低,并且可以直接鉴定生长在选择性培养基的沙门菌。     

应用SELDI-TOF-MS技术建立肝癌筛选血清蛋白质指纹图谱模型

目的:建立肝癌筛选血清蛋白质指纹图谱模型．方法:用表面加强激光解析电离飞行时间质谱技术(SELDI-TOF-MS)及WCX2蛋白芯片获得新发肝癌、肝硬化患者和正常人血清的蛋白质指纹图谱,用计算机软件进行比较分析,建立肝癌的筛选模型．结果:肝癌患者与健康对照组血清蛋白质指纹图谱之间有5个标志蛋白(4477,8943,5181, 8617,13 761 Da)在肝癌患者血清中高表达,肝癌患者与肝硬化患者血清蛋白质指纹图谱之间2个标志蛋白(4477,13 761 Da)在肝癌患者血清中高表达,1个标志蛋白(4097 Da)在肝癌患者血清中低表达．SELDI-TOF-MS技术的特异性(60／60,100％);敏感度(18／20,90％)．分析系统筛选出4477,8943,13 761,4097 Da标志蛋白建立的肝癌诊断模型．结论:建立的血清蛋白质指纹图谱模型能够区分肝癌与非肝癌患者,SELDI-TOF-MS在肝癌的诊断及肿瘤特异性蛋白质生物标志分子的筛选等方面具有一定价值．     

幽门螺杆菌动物模型驯化菌株SS1与其初始菌株的差异蛋白质组分析

目的: 比较H pylori动物模型适应菌株SS1与其初发菌株10700间蛋白质组差异, 试图获得H pylori在小鼠体内适应过程中可能与定植能力增强相关的蛋白特征.方法: 在相同件下培养SS1菌株及其初始菌株, 并制备全菌蛋白样品, 相同实验条件下重复3次, 样品经二维电泳分离, 扫描获得数字化的电泳胶图像并用ImageMaster2D图像分析软件比较分析, 识别SS1与初始菌株间的差异蛋白点. 取3次制备的样品间的共同差异点进行胶内酶解, 经基质辅助激光电离解析飞行时间质谱(MALDI-TOF-TOF/MS)获得肽质量指纹图谱, 用Mascot软件在Swiss-Prot和NCBI数据库中搜索匹配蛋白.结果: 表达量有明显下降的11个点, 经鉴定对应10个蛋白: 4个属于H pylori的氧化还原系统, 即过氧化氢酶、超氧化物双歧酶、硫氧环蛋白和环氧蛋白还原酶;5个蛋白与代谢有关,即脯氨酸肽酶(proline peptidase)、果糖磷酸氢盐醛缩酶(fructose-bisphosphate aldolase)、无机焦磷酸酶(inorganic pyrophosphatase)、3-含氧酸辅酶A转移酶亚单位B(3-oxoacid CoAtransferasesubunit B)和延伸因子(elongationfactor P);另1个蛋白为假想蛋白HPAG0942.结论: H pylori在小鼠体内的定植适应过程中,伴有代谢酶表达的降低和抗氧化水平的减弱,提示代谢和抗氧化能力适度下调可能与菌株的定植力增强相关.     

应用蛋白质组学技术对脂肪肝患者血清标志物的筛选

目的:用纳米磁珠与基质辅助激光解析离子化飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)技术检测脂肪肝患者血清蛋白质组,筛选候选标志物并建立诊断模型,初步探讨所建立的诊断模型在脂肪肝早期诊断中的临床意义.方法:95例中度和76例轻度脂肪肝患者均经B超证实,99名健康人血清.用WCX(弱阳离子交换型)纳米磁珠检测各血清标本获得血清蛋白指纹图谱.用Biomarker Wizard软件分析所获得的蛋白图谱找出差异蛋白,再用Biomarker Patterns建立诊断模型.扩大样本量,通过盲法分析进一步验证诊断模型的可靠性.结果:初始建模时,建立了由m/z为7626.2、24147.7、6118.2这3个差异蛋白峰组成的中度脂肪肝诊断模型,其敏感性为90.2%,特异性为93.9%.扩大样本盲法验证的敏感性为90.9%,特异性为92.0%.另选取了m/z为7626.2、3286.0、2760.7、2543.1、2746.1这5个差异蛋白峰组成的模型,能把轻度从中度脂肪肝患者中区分出来:选取m/z为7626.2、11721.0、24141.7、8529.1、9042.7这5个差异蛋白峰组成的模型,能将轻度脂肪肝患者从健康对照中区分出来.结论:蛋白质组学技术可筛选出有意义的血清生物标志差异蛋白.由三个差异表达蛋白及其特定组合构成的诊断模型可以区分中度脂肪肝患者与健康人,由五个特定组合构成的差异表达蛋白的模型能区分轻度、中度脂肪肝患者及区分轻度脂肪肝患者与健康对照.     

小分子多肽与人类免疫缺陷病毒感染的关系

目的 探讨人类免疫缺陷病毒（HIV-1）感染者体内可能存在的保护性中和抗体。方法 方法 应用ELISA等方法检测正常对照人群，HIV-1感染无症状组，长期生存组和艾滋病患者体内小分子多肽抗体（抗-R7V）分布状况。结果 抗R7V在无症状组和长期存活组中检出率较高，而在进展者和艾滋病患者中存在较低，并发现抗-R7V能中和HIVRNA。结论 抗-R7V的存在与病情进展有密切关系。能够使HIV感染者长期处于无进展状态，延缓或者阻止感染者发展为艾滋病。     

用HIV抗原/抗体联合试剂筛查吸毒者中窗口期HIV感染者

目的筛查窗口期艾滋病病毒(HIV)感染者,并验证HIV抗原/抗体联合试剂(第四代试剂)的检测性能。方法用HIV抗原/抗体联合试剂对经HIV抗体筛查呈阴性反应的吸毒者样本进行检测,并与HIV抗原检测及HIV-1 RNA检测的结果作比较,以证实其为窗口期感染样本。结果1 934份HIV抗体阴性样本中发现3例窗口期HIV感染者;所用第四代试剂检出窗口期样本的敏感性为100%,特异性为99.28%,假阳性率为0.77%。结论用第四代试剂检测虽然可以在某种程度上缩短检测窗口期,但该试剂有一定的假阳性结果,尤其是在S/CO值较低时其假阳性比率增高,故检测时应注意S/CO值的高低,如有条件可进一步做HIV-1 RNA检测。     

HIV唾液快速检测在公园场所MSM人群中的应用

目的探索在公园场所男男性行为人群（MSM）中开展艾滋病病毒（HIV）唾液快速检测的可行性,为进一步推广使用提供基础依据。方法由经过培训的9名MSM同伴教育志愿者,在北京市各个MSM活动的公园开展HIV唾液快速检测,收集受检者的姓名、年龄、身份证号、联系方式、文化程度、婚姻状况以及户籍所在地等一般人口学特征。结果 2个月共为1 076名MSM提供了HIV唾液快速检测服务,发现阳性53例,快检阳性率为4.9%。其中44人采集血液进行复测和确认,42人确认HIV阳性,确认阳性率为3.9%。HIV唾液快检与确认检测的一致性为95.5%。结论 HIV唾液快速检测方法在公园场所MSM人群中有很强的实用性,接受性好,值得推广使用。     

献血者HIV的筛查模式探讨

目的:通过酶联免疫吸附试验(ELISA)第3代、第4代试剂与NAT的不同组合模式的比较,评价和探讨HIV核酸检测的意义,选择适合无偿献血者血液筛查HIV的检测模式。方法:采用第3代和第4代2种ELISA试剂与NAT(诺华单人份检测)平行检测无偿献血标本,初筛HIV阳性标本送市疾病预防控制中心确证。结果:采用ELISA第3代试剂、NAT或(第3代试剂+NAT)组合检测,假阳性率均较低,而特异性均较高,假阳性率分别为0.01%、0、0,特异性分别为99.99%、100%、100%;而所有含ELISA第4代试剂的筛查模式其假阳性率均较高,而特异性均较低,与前者相比差异有统计学意义(P0.01)。采用1种ELISA试剂或2种(3代+4代)联合检测模式,灵敏度均为87.50%,而NAT灵敏度为100%。ELISA试剂与NAT组合检测互补性相对较好;NAT在检出窗口期的HIV感染方面具有优势,其早期检测灵敏度优势可替代ELISA第4代试剂。结论:采用第3代ELISA试剂与NAT同时筛查HIV具有较高的可靠性,可降低经血源传播HIV的风险;同时减少假阳性,避免血液资源浪费。     

抗HIV p24多肽单克隆抗体和抗血清的制备及初步应用

检测p2 4抗原的诊断试剂在AIDS研究和防治方面具有重要意义。为研制国产HIVp2 4抗原诊断试剂 ,根据国内外文献 ,合成了HIVp2 4抗原的六个肽段 :G -A 12 ,D -R 16 ,P -S 18,A -G 2 3(HIV - 2ROD) ,P -S 18,N -I 15以及D -C 2 2。六个肽段中 ,N -I 15肽和D -C 2 2肽用于制备McAb ,其余 4个用于制备山羊抗血清。除D -R 16肽的滴度较低 (1∶2 0 0 0 )外 ,其余三个肽的抗血清滴度都在 1∶10 0 0 0以上。McAb中 ,N -I 15肽的反应比D -C 2 2肽要强 ,但两者的腹水滴度相同 ,均为 1∶10 0 0。单抗铺板检测病毒 p2 4抗原的非特异性反应比较强。用山羊抗血清铺板 ,1∶80 0 0的稀释度检测效果最好。用我们研制的抗体检测不出裂解HIV - 1ⅢB中 p2 4 ,却能够测出Abbott公司p2 4抗原诊断试剂盒的阳性对照 (HIVAG - 1)。用北海道大学免疫科学研究所研制的单抗和人阳性血清做的交叉对照实验表明 ,可能是由于合成肽免疫产生的抗体与裂解病毒p2 4的亲和力较差引起     

HIV感染者的自身抗体检测分析

目的分析人免疫缺陷病毒（HIV）感染者中出现的自身抗体和自身免疫现象。方法回顾性分析经间接免疫荧光法检测过自身抗体的HIV感染者的临床和相关实验室指标。结果共有19例HIV感染者检测了自身抗体,明确合并银屑病、溃疡性结肠炎、特发性血小板减少性紫癜（ITP）的患者各1例;8例出现风湿性症状,主要表现为原因不明的皮疹（5例）、关节疼痛（2例）和肌痛（1例）。10例自身抗体检测结果阳性,出现的自身抗体分别为抗核抗体（ANA）、抗平滑肌抗体（SMA）、抗线粒体抗体（AMA）、抗细胞骨架抗体（CS）、抗胃壁细胞抗体（AP—CA）。自身抗体阳性组患者的IgG和IgA水平明显高于自身抗体阴性组（P〈0．05）。结论HIV感染者中可检测出自身抗体,而且可以合并有自身免疫病或免疫亢进的现象。     

天津市MSM HIV感染窗口期检测策略的研究

目的探索适用于男男性行为人群（MSM）的艾滋病病毒（HIV）早期感染筛查策略,并对利用早期感染数据估测新发感染率的可行性进行评价。方法常规HIV抗体检测结合集合核酸检测,样品集合及分拆方法按50∶5∶1进行。结果 5 287份MSM血样中,5 073份HIV抗体检测阴性,5份样品为HIV抗体不确定,209份HIV抗体阳性。经核酸检测,5 073份HIV抗体阴性样品中,检出10份阳性;5份HIV抗体不确定样品均为阳性。15份核酸阳性样品中,有8例进行随访检测,均出现HIV抗体阳转。结论常规HIV抗体检测结合集合核酸检测可以发现更多的感染者,降低检测成本,对MSM中HIV感染窗口期诊断和HIV发病率的估测有重要意义。     

不同途径感染HIV人群的心理状态分析

综合近年来国内外对艾滋病病毒(HIV)感染者及艾滋病(AIDS)病人心理健康的研究,分别对有偿献血、吸毒和经性途径感染HIV人群的心理状态进行分类分析,由此得出不同传播途径感染HIV人群的心理感受和心理状态是不同的。有偿献血人群存在严重的抑郁、焦虑情绪障碍;吸毒人群存在较严重的强迫、敌对、焦虑、抑郁、精神病性问题,可能丧失生活信心,产生报复社会的情绪;女性性工作者人际关系敏感、强迫症、偏执等表现较为突出,有更强烈的社会支持的心理需求;男男性行为者会产生强烈的负罪感,感到焦虑,羞耻、难以适应,产生自杀念头。文章提出,要掌握不同途径感染HIV人群的心理特点,心理干预工作才能事半功倍,才能更好地提高HIV感染者及AIDS病人的生存质量。     

TOPSIS法在HIV感染者随访管理工作质量评价中的应用

目的应用TOPSIS法,对福州市等9个市艾滋病病毒(HIV)感染者随访管理指标进行综合评价,确定不同市之间HIV感染者随访管理工作质量。方法运用TOPSIS法从HIV感染者/病人的随访干预比例、CD4检测率和配偶/固定性伴HIV抗体检测率,对HIV感染者的随访管理工作质量进行综合评价。结果泉州市的HIV感染者随访管理工作指标相对接近度(Cij)值为0.876 403,高于全省其他8个市,提示泉州市HIV感染者随访管理工作质量要比其他市好。TOPSIS法综合评价结果与泉州市实际工作开展情况基本一致。结论 TOPSIS法可简单、有效地对HIV感染者随访管理工作质量有关的多项指标进行综合评价,并为制定措施提供参考依据。