艾滋病病人脑组织细胞凋亡及HIV核心蛋白p24的原位检测

为研究细胞凋亡与艾滋病两者之间的关系及探讨艾滋病的发病机理，采用细胞ＤＮＡ片段特异性标记法及免疫组织化学方法对艾滋病病人及对照组病人脑组织中的凋亡细胞及ＨＩＶ核心蛋白Ｐ２４（ＨＩＶ－Ｐ２４）进行原位检测。观察组２３例艾滋病病人，其中有８例合并艾滋病脑病，另１５例无脑病。８例（８／８）艾滋病脑病的脑组织标本及１３例（１３／１５）无脑病艾滋病脑组织标本中均可检出凋亡细胞及ＨＩＶ－Ｐ２４。对照组１９例非艾滋病病人，仅３例（３／１９）脑组织中可检出凋亡细胞。无脑病艾滋病病人的脑组织凋亡细胞阳性率（８６．７％）高于ＨＩＶ－Ｐ２４的阳性率（６０．０％），并且艾滋病人神经原细胞ＨＩＶ－Ｐ２４阳性率较低。实验结果揭示艾滋病脑病的发生与细胞凋亡具有一定的关系，ＨＩＶ可能通过某些中间环节而诱导神经组织发生细胞凋亡。     

双抗体夹心ELISA法检测HIV-1 p24抗原的初步建立

目的 建立敏感、特异的艾滋病病毒Ⅰ型(HIV-1) p24抗原的酶联免疫吸附试验(ELISA)检测方法,为试剂盒的研制奠定基础.方法 用纯化的基因工程p24表达抗原免疫小鼠及兔子,获得单克隆抗体(单抗)及多克隆抗体(多抗),用单抗包被酶标板,辣根过氧化物酶标记多抗,初步建立HIV-1 p24抗原的ELISA检测方法.进一步与美国杜邦公司的HIV-1 p24抗原检测试剂同时检测88份HIV感染者血清和50份健康献血员血清中的p24抗原,确定其特异性;采用倍比稀释法的p24抗原标准品,测定试剂的灵敏度.结果 两种方法检测88份HIV感染者血清和50份献血员血清中的p24抗原.结果 均为阴性(符合率为100%);自建ELISA法检测HIV-1 p24抗原的灵敏度为100pg/ml.结论 初步建立了检测HIV-1 p24抗原的ELISA法,与国外同类试剂比较,本法的特异性和灵敏度均接近国外同类试剂,有较好的特异性和灵敏度,为进一步研制HIV-1 p24抗原ELISA检测试剂盒打下了基础.     

HIV p24抗原的检测及意义

艾滋病 (ＡｃｑｕｉｒｅｄＩｍｍｕｎｏｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙＳｙｎｄｒｏｍｅ ,ＡＩＤＳ)在全球广泛流行 ,亚洲是继北美、非洲之后成为全球ＨＩＶ (ＨｕｍａｎＩｍｍｕｎｏｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙＶｉｒｕｓ)感染上升最迅速、流行最严重的地区之一。我国ＡＩＤＳ也呈加速流行的趋势 ,截止到 2 0 0 0年 9月 ,共报告ＨＩＶ感染者 2 0 711例。据专家估算 ,我国实际感染人数超过 60万人。ＨＩＶ主要通过性、母婴和血液三种途径传播。为监控流行情况 ,评价新的疫苗和药物 ,建立简便、灵敏、特异的检测方法特别关键。理想的检测试剂应该是拥有一套…     

HIV-1 RNA定量检测在HIV感染诊断中的应用

目的 通过采用HIV-1 RNA定量检测,对HIV筛查试验有反应但WB结果为阴性或不确定的样本进行诊断分析,探讨HIV-1 RNA定量检测在实际HIV感染诊断临床验证工作中的应用。方法 回顾性地对2020年江西省确证实验室收集的172例WB阴性和138例WB不确定的样本进行HIV-1 RNA定量检测,以HIV-1 RNA定量结果>5 000拷贝/mL为HIV感染诊断标准,将核酸诊断结果与病例追踪复检的WB确证结果进行比较分析。结果 WB阴性的样本有4.65%(8/172)检出HIV-1 RNA阳性,WB不确定的样本有64.49%(89/138)检出HIV-1 RNA阳性。其中96例（8例WB阴性、88例WB不确定）样本HIV-1 RNA定量结果>5 000拷贝/mL,另有1例WB不确定样本HIV-1RNA定量结果在20～5 000拷贝/mL之间,该97例样本随访的WB结果均为阳性;HIV-1 RNA定量结果低于检出限者213例（164例阴性、49例不确定）,随访WB结果均为阴性。以5 000拷贝/mL为阳性诊断阈值,本研究中HIV-1 RNA定量检测应用于HIV感染诊断的敏...     

应用全自动核酸检测系统MPLC-COBAS筛查献血员HIV-1 RNA

目的建立一套全自动核酸检测系统筛检献血员艾滋病病毒1型(HIV-1)核糖核酸(RNA)。方法应用MagNAPureLC(MPLC)系统提取核酸,COBASAmplicor系统进行基因扩增与检测,再应用国际标准品和临床标本验证MPLC-COBAS系统。结果该系统的检测灵敏度(95%CI)HIV1RNA病毒为45～67IU/ml,5124份标本混样检测结果为阴性,81份HIV抗体(抗HIV)酶联免疫吸附试验(ELISA)假阳性混样检测结果及6份追踪样本核酸检测结果均为阴性。结论该系统具有全自动检测、灵敏度高、特异性好的特点,可进一步扩大临床标本检测量,探索出切实有效的核酸检测系统进行献血员筛查HIV1RNA。     

Nuclisens EasyQ HIV-1和COBAS AMPLICOR HIV-1 MONITORTM Test检测集合在HIV-1“窗口期”诊断的比较应用

目的将Nuclisens EasyQ HIV-1方法与COBAS AMPLICOR HIV-1MONITORTM Test方法检测集合的结果进行比较,并将集合HIV RNA Nuclisens EasyQ方法应用于艾滋病病毒Ⅰ型(HIV-1)"窗口期"的检测。方法采用50:1、10:1二级集合HIV RNA COBAS和EasyQ方法进行检测。结果 (1)两种方法在54份定值血清和质控血浆的阳性检出率均为100%,方法的一致性为94.44%,两方法之间具有显著相关性,相关系数为r=0.855。(2)检测感染者配偶、静脉吸毒者(IDU)及男男性行为人群(MSM)样本集合2 426人份,两种方法检测结果一致,发现3例"窗口期"感染者。结论集合HIV RNA Nuclisens EasyQ方法具有很好的实验性能,可应用于HIV高危人群的"窗口期"检测。     

179例HIV／AIDS病人肝脏损害的临床研究

目的探讨艾滋病病毒（HIV）感染者／艾滋病（AIDS）病人的肝脏功能损害情况及其影响因素。方法回顾分析179例HIV／AIDS病人临床资料,根据肝脏功能损害程度,分为肝功能正常组、肝功能轻度损害组、中度损害组、重度损害组,比较各组间相关情况。结果肝功能损害组使用肝毒性药物、合并HBV和／或HCV感染的比例均高于肝功能正常组,两者比较差异有显著的统计学意义（P值分别为0．039、0．030、0．003）。中重度肝功能损害组使用肝毒性药物的比例高于轻度损害组,两者比较差异有显著的统计学意义（P=0．037）。结论HIv／AIDS病人肝脏损害发生率高,而男性、使用肝损害药物、合并HBV和／或HCV是HIV／AIDS病人发生肝脏损害的危险因素。     

区分HIV-1p24抗原和HIV抗体检测方法的临床应用

目的了解艾滋病病毒(HIV)-1p24抗原和抗体联合检测在临床应用的价值。方法总结从2012-2016年HIV-1p24抗原和抗体联合检测并且能区分是抗原还是抗体阳性的临床结果,并和不能区分抗原抗体的四代酶联试剂结果比较,对其中HIV-1p24抗原阳性的样本进行CD4+T淋巴细胞及HIV核糖核酸(RNA)的检测。结果 2012-2016年共检测HIV-1p24抗原和抗体联合检测样本10 476例,其中HIV抗体阳性777例,HIV-1p24抗原阳性36例,其中抗原抗体同时阳性8例,单独HIV-1p24抗原阳性28例。结论 HIV-1p24抗原和抗体联合检测敏感性高、特异性强,尤其是能将抗原和抗体阳性区分开来,大大缩短了窗口期,提高了HIV急性期感染的检出率。     

提高对HIV-1急性感染和HIV-2诊断能力的检测策略北大核心

针对多年使用的艾滋病病毒(HIV)检测策略存在的问题,以及目前的检测技术研发和应用状况,美国疾病控制和预防中心在2014年6月提出了新的HIV检测策略,联合使用HIV抗原和抗体检测试剂、能够区分HIV-1和HIV-2抗体的诊断试剂以及HIV-1核酸定性诊断试剂,提高对HIV-1急性感染和HIV-2的检出效能,同时减少需要随访的不确定结果,缩短等待时间。文章对这个检测策略进行了全面介绍,并提出制定适合我国的HIV检测策略的建议。     

原位杂交法检测艾滋病尸检组织中病毒核酸

对曾用免疫组织化学方法检测了人免疫缺陷病毒１型（ＨＩＶ－１）抗原的１例艾滋病尸检病例的脑、肝、肾、心、肺、胰、肠、脾、胸腺、淋巴结和兰尾等组织标本，采用地高辛标记的ＨＩＶ－１ｃＤＮＡ探针检测病毒ＲＮＡ。结果发现在脑组织神经胶质细胞和星形细胞，肠上皮细胞以及淋巴结、脾和胸腺的淋巴细胞ＨＩＶ－１ＲＮＡ阳性。     

应用流式细胞术和原位杂交技术检测HIV-1感染者T淋巴细胞内病毒的初步研究

目的 建立检测艾滋病病毒1型(HIV-1)感染者外周血单核细胞内HIV-1的方法，并初步探讨其临床应用价值。方法 应用流式细胞仪和荧光原位杂交半定量检测记忆性T细胞(CD4^ CD45RO^ )内的HIV-1，同时测定HIV-1感染者外周血CD4^ T淋巴细胞绝对数和血浆病毒载量。结果 7例病人中6例有阳性结果，波动范围0～6．29％。细胞内病毒含量的结果与血浆病毒载量完全一致。结论 荧光原位杂交检测细胞内HIV-1的方法敏感性高，重复性好，检测速度快，可以成为评价艾滋病病程进展和抗病毒治疗的重要方法。     

腱蛋白在四氯化碳大鼠肝纤维化形成过程中的动态表达

目的：探讨腱蛋白（Tenascin,Tn)在肝纤维化形成中的作用。方法：以CCl4诱发大鼠肝损伤期（4周），肝纤维化早期（8周）和肝纤维化晚期（12周）模型；采用免疫组织化学及核酸原位分子杂交技术对大鼠肝组织中Tn mRNA及其蛋白质表达进行观察，并进行计算机图像分析。结果：正常肝组织有少量Tn分布；肝损伤期及肝纤维化早期，Tn的mRNA及蛋白质表达均显著增高。肝纤维化晚期，Tn的mRNA及蛋白质表达相对减少，核酸原位杂交提示肝间质细胞是Tn的主要合成细胞。结论：Tn是肝内重要的细胞外基质成分，参与了肝纤维化的早期形成。     

适于HIV-1 p24抗原检测试剂的单抗制备与筛选

目的制备抗HIV-1p24单克隆抗体(单抗,McAb),并利用双抗体夹心ELISA法建立HIV-1p24抗原检测试剂。方法以基因工程原核重组抗原HIV-1p24蛋白免疫BALB/c小鼠,利用常规杂交瘤技术和间接ELISA法制备单克隆抗体,单抗经纯化和HRP标记后,利用双抗体夹心ELISA筛选检测p24蛋白的最佳配伍单抗以期建立HIV-1p24抗原检测试剂。结果成功筛选到16株稳定分泌抗HIV-1p24单抗的杂交瘤细胞株,并从中筛选出最佳单抗配伍组合“16G12+2F2b-HRP”,该组合对p24蛋白的检测灵敏度为20pg/mL,对感染性克隆pNL4-3表达的HIV病毒培养上清检测呈阳性,对100份HIV阴性人血清无非特异性反应,显示出良好的检测灵敏度和特异性。结论本研究初步成功地建立了HIV-1p24抗原的检测试剂,并为最终建立HIV第四代诊断试剂(HIV Ag/Ab Assay)奠定了坚实的基础。     

地高辛标记的RNA探针原位杂交检测急性白血病多药耐药基因表达

目的：将简便可靠的非同位素原位杂交方法应用于急性白血病多药耐药基因（Ｍｄｒ１）的临床检测。方法：自行构建ＲＮＡ探针,经地高辛标记,直接在骨髓涂片上进行原位杂交,检测４５ 例急性白血病骨髓细胞Ｍｄｒ１ ｍ ＲＮＡ。对部分Ｍｄｒ１ 高表达者调整临床治疗。结果：杂交信号清晰,重现性好。复治组中Ｍｄｒ１ 阳性８８．２％ ,初治组４２．８％ ,差异有极显著性。经标准化疗２ 疗程后初治组中Ｍｄｒ１ 阳性组完全缓解（ＣＲ）率２２．２％ ,阴性组６３．６％ （ Ｐ＜ ０．００１）。对Ｍｄｒ１ 阳性病例调整化疗方案或加用逆转剂可改善预后。结论：Ｍｄｒ１ 高表达确为白血病不良预后的主要指标。本方法操作简便,结果可靠,可用于急性白血病Ｍｄｒ１ 常规检测,辅助临床治疗并及断预后。     

原位杂交法检测老年急性白血病多药耐药基因表达

目的 将简便可靠的非同位素原位杂交方法应用于老年急性白血病多药耐药基因(mdrl)的临床检测。方法 经光敏生物素标记的RNA探针，直接在细胞甩片上进行原位杂交，检测40例老年急性白血病骨髓细胞mdrlmRNA。结果 杂交信号清晰，重现性好。难治复发病人中mdrl阳性率77．27％，初治病人33．33％，差异有显著性。结论 光敏生物素标记的RNA探针原位杂交方法简便、快速、安全、可靠，可在临床用于老年急性白血病mdrl常规检测，辅助临床治疗方案设计及判断预后。     

巨噬细胞移动抑制因子在乙型肝炎病毒感染相关性肝病中的表达

巨噬细胞移动抑制因子(MIF)存在于多种器官的正常组织中,并参与多种疾病的病理形成过程,近年研究发现其在胃癌、肝癌及食管癌等肿瘤组织中呈高表达。本研究的目的在于检测MIF在CHB、重症肝炎、肝炎肝硬化和HCC中的表达差异,探讨MIF参与HBV感染相关性病变的可能机制。一、资料与方法1.对象:病理肝组织标本取自1996年10月至2005年     

Biological effects of types I and III collagens in human hepatocellular carcinoma tissue

AIM: To explore the biological effects of type I and III collagens in human hepatocellular carcinoma (HCC) and the relationship between the collagens and tumor behavior. METHODS: The distribution of types I and III collagens was determined by immunohistochemistry in 25 specimens of human HCC and surrounding liver tissue, as well as six normal liver specimens. In addition, the expression of types I and III collagens were studied by in situ hybridization in nine HCC and two normal liver specimens. Collagen content in the tissues was calculated according to the theory of sterology. RESULTS: The content of types I and III collagens was significantly lower in HCC than in the surrounding liver tissue. In addition, the collagen content was significantly lower in invasive/metastatic HCC tissue than in non-invasive/metastatic HCC tissue. However, collagen gene expression and protein synthesis were increased in HCC tissue. CONCLUSION: The decrease in collagen content in HCC tissue likely resulted from collagen degradation. Collagens may be inhibitors of tumor invasion and metastasis.     

胃肠病患者肝组织中经输血传播病毒的检出

检测非肝病(胃肠病)患者肝组织中经输血传播病毒(TTV)感染情况,探讨其致病性。采用免疫组织化学方法检测患者肝组织中TT病毒抗原(TTVAg)的表达与分布,观察肝组织学变化,部分病例经原位杂交予以证实。32例胃肠病患者肝组织中检出TTVAg阳性11例(34.4％)。阳性病例的切片经光镜组织学检查,8例有轻微的肝组织病理改变,包括肝细胞胞浆疏松化、嗜酸性变以及汇管区的扩大和淋巴细胞浸润等。而21例TTVAg阴性者中,仅4例有轻微的病理变化(x~2=8.999,P<0.01)。11例免疫组化阳性病例中7例原位杂交呈阳性。TTV感染在胃肠病患者中较为常见,感染者血清生化指标尽管无异常,但多数仍存在有轻微的病理改变。     

基质金属蛋白酶组织抑制因子mRNA及蛋白在肝硬化组织中的定位

目的：了解基质金属蛋白酶组织抑制因子TIMP－1和TIMP－2蛋白及mRNA在肝硬化组织中的表达和分布状态。方法：以抗TIMP－1和TIMP－2单克隆抗体及TIMP－1和TIMP－2 cDNA探针为试剂,采用免疫组织化学法和原位杂交技术检测肝硬化组织中TIMP－1和TIMP－2蛋白和mRNA,结果：40例肝硬化患者肝组织中TIMP－1和TIMP－2蛋白以及mRNA表达的阳性率为100％,TIMP－1阳性的组织TIMP－2亦为阳性,且TIMP－1强度高于TIMP－2,而正常肝组织未见阳性表达,TIMP－1和TIMP－2蛋白及mRNA表达的阳性信号均位于肝细胞胞浆中,细胞核中无表达,结论：肝硬化患者的肝细胞中存在TIMP－1和TIMP－2蛋白及mRNA的表达,其表达强度与肝组织病理改变呈正相关,这可能是通过抑制基质金属蛋白酶（MMPs)的活性,使得细胞外基质（ECM）降解减少而引起肝硬化。