修订Bethseda标准筛选遗传性非息肉病性结直肠癌患者的队列研究

目的研究修订Bethseda标准筛选遗传性非息肉病性结直肠癌（HNPCC）的价值及在结直肠癌中的构成比。方法对2004年8月至2005年12月进行手术治疗的连续110例患者建立队列、多重荧光聚合酶链反应方法检测肿瘤的微卫星不稳定（MSI）状态,对于MSI结直肠癌患者检测hMSH2、hMLH1和hMSH6基因种系突变。结果110例患者中共检出MSI结直肠癌患者23例（20．9％）。在23例MSI结直肠癌患者中,共发现病理性突变7个（30．4％）,占所有结直肠癌6．4％;其中hMSH6基因种系突变3个,hMSH2基因突变3个,hMLH1基因突变1个。结论以修订Bethesda标准,MSI结直肠癌检出率为20．9％,HNPCC检出率6．4％;在中国人错配修复基因种系突变中hMSH2和hMSH6错义突变比较多见。     

肝细胞癌患者血浆循环DNA微卫星变异的研究

目的 探讨肝细胞癌（HCC）患者血浆循环DNA微卫星变异的特点及其与肿瘤组织的一致性。方法 选择位于染色体8p上3个具有高度多态性的微卫星标记,对62例肝细胞癌血浆、组织标本的DNA进行了杂合性缺失（LOH）和微卫星不稳定（MSI）检测。结果 在联合检测的3个微卫星位点上,39例发生了LOH的组织标本其对应的血浆标本中有33例在相应位点检测到了相同的改变,一致性为84．6％;在19例MSI阳性的组织标本中,其对应的血浆中有14例检测到了相同的MSI,一致性为73．7％;62例HCC血浆DNA在至少一个位点的LOH阳性率（58．1％,36／62）明显高于MSI（29．0％,18／62）（P〈0．01）;HCC组织、血浆DNA在D8S277位点的MSI阳性率皆明显高于其他两个位点（P均〈0．05）。结论 HCC血浆循环DNA与肿瘤组织微卫星变异有较高的一致性变化,血浆循环DNA可以用来反映肿瘤组织的微卫星变异;LOH方式在HCC的发生发展过程中起着重要作用,MSI的作用次之;D8S277是HCC中对MSI敏感的一个检测位点。     

结直肠癌中nm23-H1异常表达与淋巴结转移的关系

目的:探讨结直肠癌nm23基因异常表达与淋巴结转移的关系.方法:收集结直肠癌患者癌组织及其同源正常(癌旁)组织标本63对,使用小鼠抗入nm23-H1蛋白单克隆抗体,经流式细胞仪检测63对结直肠癌组织及其癌旁组织nm23-H1蛋白表达.结果:nm23-H1基因蛋白表达癌组织明显低于正常(癌旁)黏膜组织(P＜0.01),大肠癌伴转移(20/63)的表达水平明显低于未发生转移的癌组织(43/63)(P＜0.01).结论:nm23-H1基因蛋白水平的表达下调与结直肠癌转移潜能相关.     

结、直肠癌中MGMT基因多位点甲基化的定量分析

目的探讨O^6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶（O^6-methylguanine-DNA methyltransferase，MGMT）基因不同位点的甲基化与结、直肠癌发生、进展的关系。方法应用DNA微阵列技术对20例结、直肠癌标本及癌旁组织进行MGMT基因启动子区5种高甲基化模式的定量检测分析。结果20例样本中有17例无论是肿瘤组织还是癌旁组织其各位点均有不同程度的甲基化，且肿瘤组织启动子区各CpG位点甲基化水平均高于其对应的癌旁组织（P〈0．05），其中CpG13—15、20-23位点甲基化水平明显增高。MGMT基因各CpG位点的甲基化水平在不同的病理分级和肿瘤淋巴结转移中差异无显著性（均P〉0．05）。结论结、直肠癌中存在高频MGMT基因启动子高甲基化，且其甲基化模式不止一种。MGMT基因表型遗传性失活可能在结、直肠肿瘤发生过程中起重要作用。MGMT基因启动子的异常甲基化与肿瘤发展水平并无直接相关性。     

结直肠癌ZIC1和KLOTHO基因启动子甲基化检测的临床价值初探

目的:观测ZIC1和KLOTHO基因在结直肠癌组织中的表达情况,探讨检测ZIC1和KLOTHO基因启动子甲基化在结直肠癌临床诊断中的价值.方法:选取25对(包括癌和癌旁组织)结直肠癌患者手术标本组织,通过实时荧光定量RT-PCR检测ZIC1和KLOTHO mRNA在结直肠癌和癌旁相对正常组织中的表达;通过甲基化特异性PCR(MSP)检测结直肠癌和癌旁相对正常组织中ZIC1和KLOTHO基因启动子甲基化阳性率,并分析其与结直肠癌患者临床病理资料(年龄,性别,分化程度和TNM分期)的关系.结杲:ZIC1和KLOTHO mRNA在结直肠癌组织中表达较正常组织明显下调(P均<0.0001);在25例结直肠癌患者癌组织中,ZIC1甲基化阳性率为80%,KLOTHO甲基化阳性率为76%,联合检测ZIC1和KLOTHO甲基化阳性率为64%.结论:ZIC1和KLOTHO基因在结直肠癌中表达下调,肿瘤组织基因启动子甲基化高频率发生,联合检测ZIC1和KLOTHO基因甲基化有助于结直肠癌的诊断.     

结直肠癌组织微卫星不稳定状态与其临床病理特征的关系

目的：探讨结直肠癌组织微卫星不稳定（MSI）状态与病理特征的关系。方法：纳入江西省中西医结合医院2017年1月-2022年1月收治的结直肠癌患者89例开展回顾性研究,经多重荧光聚合酶链式反应（PCR）法对结直肠癌组织的微卫星状态进行检测,记录MSI、微卫星稳定（MSS）状态的检出情况,分析MSI与患者病理特征的关系。结果：在89例患者中,错配修复（MMR）蛋白表达缺失率为38.20%(34/89),未缺失率为61.80%(55/89),MSI占比为39.33%(35/89),MSS占比为60.67%(54/89),患者微卫星状态与MMR蛋白表达有相关性（P<0.05）。患者MSI与年龄、肿瘤部位、分化程度、肿瘤最大径、癌结节、淋巴结转移、远处转移相关（P<0.05）。结论：结直肠癌患者MSI除与年龄有关外,还具备独特的病理特征,以右半结肠、中低分化、肿块大及无癌结节、无淋巴结转移、无远处转移的患者居多,能为该病评估提供参考。     

EZH2和Bmi-1基因在结直肠癌组织中的表达及其意义

目的：研究EZH2和Bmi-1基因在结直肠癌组织中的表达,探讨其与结直肠癌临床病理因素的关系及两者间的联系.方法：收集黑龙江省医院病理科2009～2012年结直肠癌存档蜡块45例,另取正常组织20例,应用免疫组织化学SP法结合图像分析软件检测45例结直肠癌、癌旁组织及20例正常对照组织中EZH2和Bmi-1基因的表达及半定量测定,采用SPSS13.0统计软件对所得数据进行x2检验及Sperman秩检验做相关性分析.结果：EZH2基因和Bmi-1基因在结直肠癌组织中高表达,在癌旁及正常组织中低表达或无表达.差异有显著性（P＜0.05）.两者的表达与性别、年龄、肿瘤大小未见相关（P＞0.05）,与转移及浸润密切相关（P＜0.05）.两者间在组织中表达呈正相关（P＜0.05）.结论：EZH2基因和Bmi-1基因的表达与结直肠癌的发生发展可能密切相关,在结直肠癌的发生发展中发挥着重要作用.     

结直肠癌与溶质载体家族第5家族8基因甲基化相关性研究

目的  研究结直肠癌组织中溶质载体家族第5家族8（SLC5A8）基因甲基化现象。方法  采集结直肠癌患者标本中的癌组织、癌旁组织和正常组织,应用甲基化特异性聚合酶链式反应（PCR）法检测SLC5A8基因甲基化水平。结果  结直肠癌组织、癌旁组织及正常组织中SLC5A8基因甲基化率,差异有统计学意义（P < 0.05）,其中结直肠癌组织中SLC5A8基因甲基化阳性率与癌旁组织及正常组织之间差异有统计学意义（P <0.05）。SLC5A8的表达与其甲基化状态成负相关（r =-0.682）。结论  SLC5A8基因的甲基化是结直肠癌发生过程中的重要事件,与其发生、发展可能存在密切关联。

     

TSC2基因的表达产物tuberin在结直肠癌中的表达及其意义

目的研究TSC2基因的表达产物tuberin在结直肠癌中mRNA和蛋白水平的表达及其与临床病理特征的关系,探讨其在结直肠癌发生中的作用。方法采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应方法检测40例结直肠癌与癌旁正常肠黏膜组织中tuberin mRNA的表达,应用免疫组织化学方法检测60例结直肠癌与癌旁正常肠黏膜组织tuberin蛋白的表达,分析tuberin mRNA和蛋白表达与临床病理特征的关系。结果40例结直肠癌中tuberin mRNA表达量与患者年龄、性别、肿瘤大小、组织学分级、临床分期、淋巴结转移、远处转移无相关性（P〉0.05）,但显著低于癌旁正常组织,差异有高度统计学意义（P﹤0.01）。tuberin蛋白在60例结直肠癌与癌旁正常肠黏膜组织中的阳性表达率分别为41.6%、75%,差异有统计学意义（P﹤0.05）。tuberin蛋白阳性表达率与性别、组织学分级相关。结论tuberin在结直肠癌中表达下调,可能参与结直肠癌的发生。     

PD-L1在结直肠癌组织中的表达及临床意义

目的：观察程序性死亡配体-1（PD-L1）在结直肠癌组织及癌旁组织中的表达,探索其与患者临床病理特征之间的相关性,并探讨PD-L1表达水平在结直肠癌中的临床意义。方法：选取2016年1月至2017年1月温州医科大学附属第一医院50例结直肠癌患者,手术中获取癌组织及癌旁组织,采用PCR及Western blot检测结直肠癌及癌旁组织中PD-L1 mRNA及蛋白水平,并分析其与临床病理特征之间的相关性。结果：与癌旁组织相比,结直肠癌组织中PD-L1基因及蛋白表达量均显著升高（P＜0.05）。癌组织中PD-L1蛋白阳性率与癌组织分化程度和淋巴转移相关（P＜0.05）。结论：PD-L1在结直肠癌组织中表达增高,并与结直肠癌患者的临床病理特征密切相关。     

低龄大肠癌患者MSH2和MLH1基因的变异分析

目的　探讨错配修复基因MSH2、MLH1功能和结构改变在低龄大肠癌患者发病中的作用。方法　配对提取 4 2例低龄 (<5 0岁 )大肠癌患者的正常细胞和肿瘤细胞DNA ,在错配修复基因功能状态分析的基础上 ,对伴有微卫星DNA不稳定 (MSI+ )患者 ,应用变性高效液相色谱技术(DHPLC)、DNA序列分析技术及定量多重PCR技术系统分析MSH2、MLH1基因的微小突变和大片段DNA缺失。结果　 2 2 / 4 2 (5 2 .4 % )的患者肿瘤细胞检出MSI+ ,其中 10 / 4 2为高度不稳定 (MSI+ H) ,12 / 4 2低度不稳定 (MSI+ L)。对MSI+ 患者的进一步突变分析揭示 ,在 9例患者存在MSH2、MLH1基因的 8个位点遗传性单个碱基的改变 ,其中 3/ 8为新发现的点突变 ,5 / 8为基因的多态位点 ;在 2例存在MSI+ H的肿瘤组织检出MSH2基因大片段DNA(exon 1 6 )缺失或MLH1基因的错义突变Met2 4 2Ile。结论　中国人低龄大肠癌患者中MSH2、MLH1基因的遗传性和体细胞性突变为频发事件。     

食管癌BAT-26位点微卫星不稳的分析

目的 探讨食管粘膜BAT-26位点微卫星不稳定性(Microsatellite Instability，MSI)及其单态性的情况。方法 组织DNA提取后PCR扩增，扩增产物行9％变性聚丙烯酰胺凝胶电泳，最后银染等方法，分析45例食管癌及正常切缘组织BAT-26位点微卫星不稳的情况。结果 所有正常组织在BAT-26位点DNA电泳条带长度无明显改变，45例食管癌中有3例MSI改变。结论 食管粘膜BAT-26具有较好的单态性，食管癌细胞BAT-26位点对识别高频率MSI不十分敏感。     

hMLH1甲基化在散发性大肠癌中的临床意义

目的:了解散发性大肠癌中hMLH1基因启动子区域5'端CpG岛的过度甲基化现象,探讨其与微卫星不稳定性(MSI)在散发性大肠癌发生中的相关性.方法:取散发性大肠癌患者肿瘤组织及其正常对照组织(阴性切缘组织,距肿瘤10 cm以上)标本41对,提取DNA后,以甲基化特异性PCR方法检测标本中hMLH1启动子的甲基化情况,并与相应的临床病理学资料进行统计学分析;将BAT25、BAT26作为检测位点,以自动荧光DNA序列分析法检测MSI,并与甲基化情况进行相关分析.结果:41例散发性大肠癌标本中,75.6%(31/41)存在hMLH1启动子过度甲基化,非甲基化患者年龄(49.2岁)与甲基化患者年龄(63.6岁)相比差异有显著性(P<0.05);43.9%(18/41)的标本表现为MSI阳性;在MSI阳性标本中,94.4%(17/18)有甲基化现象存在,明显高于MSI阴性标本(60.9%,14/23),两者相比差异有显著性(P<0.05).结论:散发性大肠癌中普遍存在年龄相关的hMLH1基因启动子过度甲基化现象,由此引起的MSI可能是老年人大肠癌发病的相关因素之一.     

Colorectal carcinomas from Middle East. Molecular and tissue microarray analysis of genomic instability pathways

OBJECTIVE: To evaluate the overall incidence of microsatellite instability (MSI), hereditary non polyposis colorectal cancer, and tumor supressor gene (TP53) mutations in Saudi colorectal carcinomas. METHODS: We studied the MSI pathway in Saudi colorectal cancers (CRC) from 179 unselected patients using 2 methods: MSI by polymerase chain reaction, and immunohistochemistry detection of mutL homologs 1 and mutS homologs 2 proteins. The TP53 mutations were studied by sequencing exons 5, 6, 7, and 8. RESULTS: Of the 150 colorectal carcinomas analyzed for MSI, 16% of the tumors showed high level instability (MSI-H), 19.3% had low-level instability (MSI-L) and the remaining 64% tumors were stable. Survival of the MSI-H group was better as compared to the MSI-L or microsatellite stable group (p=0.0217). In the MSI-H group, 48% were familial MSI tumors, which could be attributable to the high incidence of consanguinity in the Saudi population. The TP53 mutations were found in 24% of the cases studied. CONCLUSION: A high proportion of familial MSI cases and a lower incidence of TP53 mutations are some of the hallmarks of the Saudi colorectal carcinomas, which need to be explored further.     

乳腺癌微卫星不稳定性及其与临床病理关系的研究

目的：探讨乳腺癌的微卫星不稳定性及其与乳腺癌临床病理的关系,寻找更有效的判断乳腺癌预后的分子标志,为乳腺癌的发生及预后判断提供理论依据。方法：提取18例正常乳腺组织,39例乳腺良性肿瘤组织和78例乳腺癌组织的DNA,参考文献选取D2S443、D11S988、D21S1436、D3S1766、D2S2739这5个微卫星位点,在基因库中查出相应的引物序列,PCR扩增位点的DNA,然后用12%聚丙烯酰胺凝胶电泳,银染显色后进行微卫星不稳定性的分析。用免疫组化S-P法检测HER2、ER、PR在乳腺癌中的表达情况。结果：18例正常乳腺组织未见微卫星不稳定（microsatellite instability,MSI）发生,39例乳腺良性肿物组织中有5例至少1个位点发生MSI,MSI的发生率为12.82%（5/39）。78例乳腺癌中有35例至少1个位点出现MSI,MSI的发生率为44.87%（35/78）,3组比较差异均有统计学意义（χ2=^20.365,P=0.000）,MSI的发生率与乳腺癌的腋窝淋巴结转移、临床分期及HER2表达有相关性（分别为P=0.018,P=0.04,P=0.039）。结论：乳腺癌中普遍存在着MSI,并且MSI更多发生在有腋窝淋巴结转移、HER2表达及临床分期晚的病例中,提示预后较差的乳腺癌病例中MSI的发生率更高,MSI可能是判断乳腺癌临床分期的一个分子标志,有助于对乳腺癌的预后评估。     

BAX基因在遗传不稳定的大肠癌,胃癌突变的研究

目的：了解Ｂａｘ基因在大肠癌,胃癌的突变情况。方法：用ＱＩＡａｍｐ方法提取肿瘤和正常组的ＤＮＡ,选择５对引物,经ＰＣＲ扩增,走ＤＮＡ序列胶电泳,检测其ＭＩ及Ｂａｘ基因编码区序列。结果：胃癌有８例ＭＩ阳性,其中３例Ｂａｘ基因有突变,大肠癌有１４例ＭＩ阳性,其中６例Ｂａｘ基因有突变。结论：Ｂａｘ基因突变在胃癌和大肠癌的发生过程中起重要作用,Ｂａｘ基因是胃癌、大肠癌ＭＩ＾＋的遗传改变受累的一个靶基因。     

B细胞淋巴瘤中18号染色体上微卫星位点与bcl-2/IgH基因重排的相关性

目的探讨B细胞淋巴瘤中18号染色体上微卫星位点D18S64、D18S61与bcl-2/IgH基因重排的相关性。方法采用巢式PCR方法对37例B细胞非霍奇金淋巴瘤bcl-2/IgH基因重排主要断裂点（MBR）进行检测,PCR-SSCP方法检测bcl-2基因内部、基因周围微卫星位点D18S64、D18S61的MSI和LOH情况。采用DNA抽提试剂盒提取石蜡包埋组织基因组DNA、全血基因组DNA-PCR扩增-变性聚丙烯酰烯酰胺凝胶垂直电泳-银染法-全自动凝胶成像系统对样本进行MSI和LOH分析。结果 37例B细胞非霍奇金淋巴瘤中,bcl-2/IgH基因重排阳性率为24.3%（9/37）。各位点MSI、LOH频率分别介于16.2%-18.9%和16.2%-21.6%。D18S61位点MSI阳性组的bcl-2基因重排阳性率均高于MSI阴性组（P〈0.05）,而D18S64位点则与之相反（P〉0.05）;D18S61位点LOH阳性组的bcl-2基因重排阳性率明显高于LOH阴性组（P〈0.05）,D18S64位点与之相反（P〉0.05）。结论 bcl-2/IgH基因重排与微卫星位点D18S61的MSI/LOH有显著相关性,表明D18S61可能是bcl-2基因周围区域与bcl-2基因关系较为密切的微卫星位点。     

Expression of Cyclooxygenase-2 and Its Relationship with Mismatch Repair and Microsatellite Instability in Hereditary Nonpolyposis Colorectal Cancer

Objective To investigate cyclooxygenase-2 （COX-2） expression and its relationship with mismatch repair （MMR） protein expression and microsatellite instability （MSI） in hereditary nonpolyposis colorectal cancer （HNPCC）. Methods A total of 28 cases of colorectal adenoma and 14 cases of colorectal carcinoma were collected between July 2003 and July 2007 from 33 HNPCC families. Sporadic colorectal adenoma （n=32） and carcinoma patients （n=24） served as controls. With samples of tumor tissues and normal colonic mucosa collected from the patients, the protein expressions of COX-2 and MMR （hMLH1, hMSH2, and hMSH6） were examined with immunohistochemical assay. Frequency of MSI in five standard MSI loci BAT25, BAT26, D2S123, D5S346, and D17S250 were analyzed by means of polymerase chain reaction. Results The rate of COX-2 high-expression was 53.6% （15/28） and 42.9% （6/14） in HNPCC adenoma and carcinoma; 62.5% （20/32） and 91.7% （22/24） in sporadic adenoma and carcinoma, respectively. That rate was lower in HNPCC carcinoma than in sporadic carcinoma （P〈0.05）. MMR-deletion rate and percentage of high-frequency MSI （MSI-H） in HNPCC carcinoma were higher than those in sporadic colorectal carcinoma [both 71.4% （10/14） vs. 12.5% （3/24）, both P〈0.01]. Among the 10 MMR-deficient HNPCC carcinoma patients, COX-2 low-expression was observed in 8 cases （80.0%）, while COX-2 high-expression was observed in all of the 4 MMR-positive HNPCC carcinoma cases （P〈0.05）. In comparison to MMR positive HNPCC carcinoma, HNPCC adenoma, and sporadic carcinoma, COX-2 expression was significantly lower in corresponding MMR-deficient cases （all P〈0.05）. The rates of COX-2 low-expression in HNPCC adenoma, HNPCC carcinoma, and sporadic carcinoma with MSI-H were significantly higher than those in the cases with microsatellite stability （all P〈0.05）. Conclusion COX-2 is expressed at a low level in HNPCC carcinoma, different from the high COX-2 expression in sporadic carcinoma.