L6565小鼠白血病病毒诱发小鼠白血病

为探讨病毒与白血病发生的关系 ,我们用Ｌ65 65小鼠白血病病毒 (Ｌ65 65ＭＶＬ)悬液感染乳鼠 ,每周观察小鼠的发病情况及病理变化 ,并用逆转录一聚合酶链反应 (ＲＴ -ＰＣＲ)动态检测小鼠体内病毒核酸的分布。结果发现 :小鼠感染病毒后 3～ 5周 ,其脾脏和淋巴结呈早期白血病的病理改变。至第 1 0～ 1 2周小鼠发生淋巴细胞白血病 ,表现出耸毛、活动减少、腹膨胀等症状。病毒核酸于感染后第 2周首先在小鼠胸腺、脾脏检测到 ,随时间延长、病毒核酸广泛分布在外周血、胸腺、脾脏、淋巴结等多种脏器组织中。本实验表明Ｌ65 65小鼠白血病可诱发小…     

小鼠L6565白血病克隆细胞株的建立及其生物学特性

目的建立Ｌ６５６５白血病克隆细胞株,为白血病的生物学、病毒学和实验治疗学提供体外研究模型。方法有限稀释法建成克隆细胞,从生长情况、染色体、形态、超微结构、Ｘ－Ｃ检测、癌基因表达及分化标志等方面了解其生物学特性。结果Ｌ６５６５细胞生长旺盛,形态大小不一,染色体条数从３８到１４４条不等,众数为４２条,有标记染色体Ａ、Ｂ、Ｍ。超微结构细胞内核仁清楚,细胞器丰富,核占３／４左右,细胞内有Ａ型和Ｃ型病毒颗粒,Ｘ－Ｃ检测阳性,ｃｍｙｃ、ｃｆｏｓ癌基因高表达,分化标志ＣＤ４和ＣＤ８阴性。结论我们成功地建立了含有致白血病病毒的Ｌ６５６５克隆细胞株,该细胞性质属于淋巴干细胞性白血病细胞。     

急性白血病复发时克隆演化的研究

为研究克隆演化在急性白血病复发发病机制中作用，应用聚合酶锭反应（ＰＣＲ）联合Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交检测７５例及其中３６例复发急性非淋巴细胞白血病（ＡＮＬＬ）ＩｇＨ重排基因，ＰＣＲ检测８１便及其中３５例复发急性淋巴细胞病（ＡＬＬ）ＩｇＨ、ＴＣＲＶｘ２－Ｊｘ、ＴＣＲＶδ－Ｄδ３重排基因及ｂｃｒ／ａｂｌｍＲＮＡ，配合形态学和免疫学检查发现８例ＡＬＬ（２２．９％）和４例（１１．１％）ＡＮＬＬ复发时形态学，免     

急性白血病复发时克隆演化的研究

为研究克隆演化在急性白血病复发发病机制中作用，应用聚合酶链反应（PCR）联合Southern杂交检测75例及其中36例复发急性非淋巴细胞白血病（ANLL）IgH重排基因，PCR检测81例及其中35例复发急性淋巴细胞白血病（ALL）IgH、TCRVγ2－Jγ、TCRVδ－Dδ3重排基因及bcr／ablmRNA，配合形态学和免疫学检查发现8例ALL（22．9％）和4例（11．1％）ANLL复发时形态学，免疫学或／和重排基因类型发生改变（克隆演化）。克隆演化是某些急性白血病复发的主要原因，克隆演化发现对于白血病治疗改进有重要意义，其选择机制尚需进一步研究。     

白血病患者重排基因检测的临床意义

白血病患者重排基因检测的临床意义徐兵周淑芸孙竞王时书免疫球蛋白重链（ＩｇＨ）或Ｔ细胞受体（ＴＣＲ）基因重排可作为淋巴细胞系克隆的标志。本研究采用聚合酶链反应（ＰＣＲ）方法，检测了９０例急性白血病患者ＩｇＨ／和ＴＣＲ重排基因，并对部分病例进行追踪检测，...     

克隆演化与中枢神经系统白血病复发的关系

应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术检测４５份急性淋巴细胞白血病（ＡＬＬ）脑脊液标本ＩｇＨ、ＴＣＲＶγＩ－Ｊγ及ＴＣＲＶδ２－Ｄδ３基因重排，从２２份标本（４８．９％）发现基因重排阳性，而用形态学方法检查，阳性率为２４．４％（１１／４５）；２２例阳性病人中的２例（９．１％）脑脊液白血病细胞基因重排类型同骨髓标本不一致，此两例均为中枢神经系统白血病（ＣＮＳＬ）复发。上述结果表明，应用ＰＣＲ技术检测ＡＬＬ脑脊液标本重排基因有助于隐匿ＣＮＳＬ诊断；克隆演化现象可能是某些单独ＣＮＳＬ复发的主要原因     

系列PCR方法检测淋巴细胞白血病克隆性基因重排的选择应用

以１次、半巢式及多重ＰＣＲ方法扩增５８例淋巴细胞白血病ＩｇＨ及ＴＣＲＶγＩ－Ｊγ－克隆性基因重排，结果显示：多重ＰＣＲ和Ｉ次ＰＣＲ的敏感度为１０－１０＾５水平；半巢式ＰＣＲ敏感度可达１０＾－５－１０＾－６水平。ＩｇＨ和ＴＣＲＶγＩ－Ｊγ重排阳性率为６７．２％和６２．０％；半巢式ＰＣＲ检测ＩｇＨ重排阳性率为７０．７％。上述结果表明，多重ＰＣＲ可同时检测两对目的基因，适于初治病例检测，而地缓解病例的检     

小鼠SRS白血病病毒前病毒DNA片段的分子克隆

从重组质粒pSF_(11)中提取SRS白血病病毒(SRSV)5kb DNA片段,用双脱氧法对其两末端进行测序,每端测得约150bp,从中筛选出PCR引物。SRSV新鲜感染NIH/3T3细胞,从感染细胞的胞质内提取前病毒DNA。用PCR法对SRSV前病毒DNA中的约3.4kb片段进行扩增,扩增产物用BamHⅠ酶切后与碱性磷酸单酯酶处理的pUC_(19)载体连接,并转化大肠杆菌JM_(103),得到含约3.4kb前病毒DNA片段插入子的重组质粒,并经Southern Blot证实,定名为pSF_(12),该克隆的SRSV DNA片段含有部分的env和pol基因。pSF_(12)和pSF_(11)构成SRSV的完整基因克隆。     

白血病细胞培养上清液中肿瘤免疫抑制因子的分离与初步鉴定

从HL_(60)人早幼粒细胞白血病细胞株培养上清液(HL_(60)-SUP)中,经10％～50％饱和硫酸铵沉淀、DEAE-52(DE-52)阴离子交换柱层析、凝胶过滤及聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)分离出一种肿瘤免疫抑制因子(TDSF),分子量约为87kD(1D=0.992 1μ)。该因子是瘤细胞恶性增殖过程中的基因产物,但其分泌不完全被抗急非淋白血病药物所阻断。肿瘤细胞培养上清液无细胞毒作用。TDSF有兔疫抑制作用:能够抑制T淋巴细胞对PHA的增殖反应,抑制T淋巴细胞分泌IL_2,抑制外源性IL_2的淋巴细胞的增殖反应,其化学本质为蛋白质。     

急性白血病细胞p53基因表达

目的：检测急性白血病细胞内ｐ５３基因表达情况。方法：３Ｈ－ｄＡＴＰ标记基因探针的斑点杂交。结果：急性淋巴细胞白血病（ＡＬＬ）表达ｐ５３ＲＮＡ水平与正常对照类似，急性非淋巴细胞白血病（ＡＮＬＬ）中５９．４％表达低水平ｐ５３或表达缺失，ｐ５３表达缺失在Ｍ４、Ｍ５中多见。结论：急性白血病细胞中存在ｐ５３ＲＮＡ表达异常。     

白血病细胞在无血清体系中增生能力的探讨

采用无血清甲基纤维素半固体培养方法,对白血病细胞系和原代白血病细胞进行一次集落培养,将形成的集落细胞重新悬浮,进行二次集落培养、计数。结果白血病细胞系的二次植入效率为３１．３０％,原代髓系白血病细胞的二次植入效率为２２．６６％。提示白血病细胞存在具有高增殖能力的干细胞性细胞群;原代白血病细胞的再增殖能力低于白血病细胞系。     

急性髓系白血病细胞多药耐药相关基因的筛选

目的筛选急性髓系白血病细胞多药耐药相关基因。方法在建立HL-60／DNR多药耐药（MDR）细胞系的基础上，采用抑制消减杂交的方法结合基因芯片技术建立HL-60／DNR抑制消减杂交文库，并挑选其中部分克隆进行序列测定和同源性分析。结果HL-60／DNR对多种化疗药物均产生了不同程度的耐受。在所构建的HL-60／DNR抑制消减杂交文库中，经过基因芯片筛选出明显差异表达克隆共有14个；进一步分析发现这些基因在白血病细胞多药耐药中的作用大多未见报道。结论多种基因（已知的或未知的）均参与了急性髓系白血病细胞多药耐药的调节,大规模筛选与克隆这些基因为进一步研究急性髓系白血病细胞多药耐药产生的机制奠定了必要的理论基础.     

双色荧光原位杂交技术检测B系急性淋巴细胞白血病IgH基因重排

目的研究急性B淋巴细胞白血病（B-ALL）中免疫球蛋白重链基因（IgH）重排的发生率,并分析其临床特点及其他细胞遗传学特征。方法选取158例初诊B-ALL患者的骨髓标本,应用短期培养法制备染色体悬液,采用R显带技术进行核型分析。选用位于14q32 IgH基因两端的序列特异性探针,应用荧光原位杂交技术（FISH）对158例患者的染色体悬液进行IgH基因重排检测。结果 158例中,检出IgH基因重排阳性11例（6.9%）,其阳性细胞比例为10.5%～88.2%。结合染色体核型分析发现,11例中同时伴随染色体核型异常的有9例,其中8例为复杂异常。9例染色体异常病例中明确累及14q32的有5例。不同染色体核型异常患者IgH基因重排阳性率差异有统计学意义（P〈0.05）,其中染色体复杂异常患者IgH基因重排阳性率（14.5%）高于正常核型（3.8%）及非复杂异常（1.9%）。而不同性别、年龄及不同白细胞、血红蛋白、血小板水平患者IgH基因重排阳性率差异均无统计学意义（均P〉0.05）。结论 IgH基因重排在B-ALL中有较高的发生率。FISH技术以其较高的敏感性和特异性对提高IgH基因重排的检出率起着重要的作用。     

儿童急性淋巴细胞白血病MOST-1基因表达研究

目的 研究MOST-1基因在儿童急性淋巴细胞白血病骨髓单个核细胞中的表达,了解其与免疫分型和治疗反应的关系。方法 采用半定量RT-PCR方法测定了17例新发儿童急性淋巴细胞白血病(其中ALL-L3 3例)患者骨髓单个核细胞MOST-1基因的表达水平;PCR产物经DNA序列测定证实。结果 MOST-1基因仅表达于儿童急性淋巴细胞白血病L3型,而L1和L2均无表达;3例ALL-L2患者治疗前外周血幼稚细胞比例分别为72％、67％和12％,骨髓白血病细胞比例分别为98％、94％和67％,前两例L2患者MOST-1 mRNA的表达水平分别为另一例L3患者的3倍和2倍。2例L3患者经正规诱导完全缓解后无MOST-1基因表达。结论 MOST-1基因表达于儿童急性淋巴细胞白血病L3型,其表达水平与患者治疗前外周血幼稚细胞比例可能有关。     

用导入嗜亲性病毒受体基因的S~＋L~－貂细胞建立的鼠嗜亲性MuLV的病灶形成实验

命名为ＩＤ的Ｓ＋Ｌ－貂细胞是通过用磷酸钙沉淀法导入嗜亲性鼠白血病病毒受体基因而建立的。用嗜亲性鼠白血病病毒感染ＩＤ细胞引起的转化病灶与由嗜异性和双嗜性白血病病毒引起的转化病灶相似。这种ＩＤ细胞可用于滴定不能形成ＸＣ蚀斑的嗜亲性病毒，并可同时检测不同宿主范围的病毒。     

RbAp46基因修饰K562白血病细胞系的实验研究

目的建立RbAp46基因修饰的白血病细胞系。方法应用电穿孔法将RbAp46表达载体转染白血病细胞系K562，经G418筛选以获得单克隆，用PCR检测RbAp46整合，用台盼兰拒染法判定细胞活力，细胞计数判定细胞生长速率。结果得到RbAp46基因修饰的K562／RbAp46，并经PCR证实RbAp46整合，K562／RbAp46的生长速率要比对照组低2倍左右。结论RbAp46能够抑制K562的增殖。     

硫化砷对急性早幼粒白血病细胞PNAS-2基因表达的影响

目的探讨硫化砷诱导急性早幼粒细胞白血病(APL)细胞凋亡的分子机制。方法应用基因表达谱芯片、RT-PCR技术，检测硫化砷作用前后NB4细胞、APL原代细胞PNAS-2基因表达的变化。结果基因表达谱芯片杂交显示，硫化砷作用于NB4细胞后，PNAS-2基因表达下调；RT-PCR结果发现，NB4细胞在硫化砷作用后PNAS-2表达有明显下调，并呈时间依赖性；APL原代细胞经硫化砷作用后，PNAS-2表达也呈下降趋势。结论硫化砷能够下调PNAS-2基因在NB4细胞株和APL原代细胞中的表达，推测PNAS-2基因可能是硫化砷治疗APL的靶基因之一。