SHG－44细胞显微注射NDGA诱导分化的初步观察

采用显微注射系统对ＳＨＧ－４４细胞进行单细胞微量注射技术的探讨，并观察去甲二氢愈创木酸（ＮＤＧＡ）注射后的作用。结果显示，体积较小的肿瘤细胞显微注射成功的关键在于注射参数的正确设定、细胞标记、注射针下限值的确定、注射过程中防污染以及操作细致、迅速；ＮＤＧＡ注射ＳＨＧ－４４细胞后的诱导分化作用较其在细胞外培养基中的作用更直接、迅速和显著，亦更持久。     

SHG—44细胞显微注射NDGA诱导分化的初步观察

采用显微注射系统对ＳＨＧ－４４细胞进行单细胞微量注射技术的探讨，并观察云甲二氢愈创木酸（ＮＤＧＡ）注射后的作用。结果显示，体积较小的肿瘤细胞显微注射成功的关键在于注射参数的正确设定、细胞标记、注射针下限值的确定、注射过程中防污染以及操作细致、迅速；ＮＤＧＡＩＳＨＧ－４４细胞后的诱导分化作用较其在细胞外培养基中的作用更直接、迅速和显著，亦更持久。     

去甲二氢愈创木酸对人恶性胶质瘤细胞系SHG—44生长和分化的…

目的 探讨去甲二氢愈创木酸对胶质瘤生长和分化的作用及可能机理。结论 ＮＤＧＡ对恶性胶质瘤细胞具有抑制生长和诱导分化作用，对血管生成因子表达亦有抑制作用。     

去甲二氢愈创木酸对胶质瘤细胞诱导的内皮细胞迁移的影响

目的 观察去甲二氢愈创木酸（ＮＤＧＡ）对胶质瘤细胞诱导的内皮细胞迁移的影响。方法 采用微孔滤膜培养小室及室细胞联合培养法,进行人脐静脉内皮细胞系ＥＣＶ－３０４细胞与人恶性胶质瘤细胞系ＳＨＧ－４４细胞的联合培养,并以免疫组化ＳＰ方法检测ＳＨＧ－４４细胞血管内皮生长因子（ＶＥＧＦ）、碱性成纤维细胞生长因子（ｂＦＧＦ）的表达。结果 １００μｍｏｌ／Ｌ的ＮＤＧＡ作用１～３ｄ后,ＳＨＧ－４４细胞ＶＥＧＦ、ｂ     

去甲二氢愈创木酸对胶质瘤诱导的血管内皮细胞成型的作用

目的 观察去甲二氢愈创木酸（ＮＤＧＡ）对胶质瘤细胞诱导的内皮细胞成型的影响并初步探讨其机理。方法 采用在Ｉ型胶原凝胶上的细胞立体培养和内皮－胶质瘤细胞的联合培养法,观测人恶性胶质瘤细胞系ＳＨＧ－４４细胞或其条件培养基对人脐静脉内皮细胞ＥＣＶ－３０４细胞形成管腔样结构的影响,同时以免疫组织化学结合图像分析的方法检测ＳＨＧ－４４细胞ＶＥＧＦ、ｂＦＧＦ蛋白的表达。结果 １００μｍｏｌ／Ｌ的ＮＤＧＡ作用１     

血管紧张素Ⅱ和血小板源生长因子对心肌细胞周期素和p27蛋白表达量的调节

目的：细胞周期素（ｃｙｃｌｉｎ）和ＣＤＫ抑制蛋白（ＣＫＩ）是对细胞周期起正性和负性调节作用的两类物质。ｐ２７蛋白是ＣＫＩ的一种，主要对细胞外部促进或抑制增殖的信号起反应。本文观察血管紧张素Ⅱ（ＡｎｇⅡ）和血小板源生长因子（ＰＤＧＦ）对心肌细胞细胞周期素和ｐ２７蛋白表达量的影响。方法：培养的心肌细胞除血清２４ｈ使其处于静止状态，加入ＡｎｇⅡ１０－６ｍｏｌ／Ｌ、ＰＤＧＦ－ＢＢ２０ｎｇ／ｍＬ后不同时间收集细胞，用碘化丙啶（ＰＩ）标记细胞ＤＮＡ，以确定细胞所处的周期。用细胞周期素或ｐ２７蛋白的单抗和标记ＦＩＴＣ的二抗标记细胞，用流式细胞仪测定被激发出的荧光量来测定细胞周期素和ｐ２７蛋白表达的相对量。结果：ＡｎｇⅡ可促进细胞周期素的表达，但对ｐ２７蛋白的表达没有影响，不能促进心肌细胞增殖；ＰＤＧＦ明显促进心肌细胞细胞周期素的表达，也不能明显抑制ｐ２７的表达，也不能促进心肌细胞增殖。结论：细胞周期素的表达增加与心肌细胞能否进入细胞周期并不一致，ｐ２７蛋白是心肌细胞能否进入细胞周期并进行有丝分裂的重要调节因子。     

IFN—γ抑制血管成形术后兔血管平滑肌细胞增殖和PDGF—A的表达

目的和方法：采用体外细胞培养，进行氚标胸腺嘧啶核苷（３Ｈ－ＴｄＲ）掺入和原位杂交。结果：发现γ－干扰素（ＩＦＮ－γ）能抑制体外培养新西兰兔血管平滑肌细胞（ＶＳＭＣ）的ＤＮＡ合成和血小板衍化生长因子Ａ链（ＰＤＧＦ－Ａ）的基因表达；整体实验中，用４ＦＦｏｇａｒｔｙ导管气囊拉伤新西兰兔的腹主动脉内皮后，随即连续肌注ＩＦＮ－γ（１６５万Ｕ·ｋｇ１·ｄ１）３天，结果发现肌注ＩＦＮ－γ能明显抑制受损部位ＶＳＭＣ的３Ｈ－ＴｄＲ的标记率及ＰＤＧＦ－Ａ的表达。结论：ＩＦＮ－γ对血管成形术引起的血管挛缩有一定的舒张作用。     

转化生长因子α，β对人结肠腺癌细胞株HT_（29）细胞生长调节影响的研究

用生长曲线、３Ｈ－ＴｄＲ参入及细胞周期分析等方法，研究了ＴＧＦ－α，β在体外对人结肠腺癌细胞株ＨＴ（２９）细胞的生长调节作用，为进一步探讨ＴＧＦ－α，β对ＨＴ（２９）细胞的生长调节作用机制，采用Ｄｏｔ杂交分析探讨了ＴＧＦ－α，β对ＨＴ（２９）细胞ｃ－ｍｙｃ基因ｍＲＮＡ表达的影响。结果发现ＴＧＦ－α可促进ＨＴ（２９）细胞生长和增殖，而ＴＧＦ－β则抑制其生长和增殖，ＴＧＦ－α可增加其ｃ－ｍｙｃ基因表达，而ＴＧＦ－β则抑制其ｃ－ｍｙｃ基因表达。本研究还采用肿瘤细胞无血清培养技术以及分子生物学方法，观察了ＨＴ（２９）细胞自分泌生长以及在其自分泌生长调控中ＴＧＦ－α，β，βｍＲＮＡ表达。研究发现ＨＴ（２９）细胞具有自分泌调控生长能力，在无血清培养条件下ＴＧＦ－αｍＲＮＡ表达增加，而ＴＧＦ－βｍＲＮＡ表达则受到某种程度的抑制。上述研究结果表明ＴＧＦ－α，β分别作为正、负生长调节因子在ＨＴ（２９）细胞自分泌生长调节中可能具有重要作用。ＴＧＦ－α，β平衡失调同结、直肠癌发生、发展具有密切关系。     

胶质瘤增殖活性和肿瘤基因蛋白表达及其意义

目的探讨胶质瘤增殖活性和肿瘤基因蛋白表达与分化和预后间的关系。方法应用免疫组化和图像分析技术对１２４例脑胶质瘤增殖细胞核抗原（ＰＣＮＡ）和几种肿瘤基因蛋白进行定性、定量研究。结果ＰＣＮＡ反应强度与级别和预后显著相关;ｃ－ｅｒｂＢ－２蛋白表达在分化程度高的胶质瘤强于分化程度低者,存活５年以上的病例阳性强于存活５年以下者。ＥＧＦ（４０．０％）、ＥＧＦＲ（９１．４％）和ｐ２１ｒａｓ（５３．３％）与分级和预后无显著关系。３种ｐ５３蛋白抗体阳性率均以Ⅱ～Ⅳ级胶质瘤为高;ｐ５３与ＰＣＮＡ反应强度平行。结论ｐ２１ｒａｓ、ｃ－ｅｒｂＢ－２、ＥＧＦ和ＥＧＦＲ改变在胶质瘤发生、发展过程中可能是早期事件,恶变后不再随级别增加而加重,而ｐ５３基因突变涉及胶质瘤发展各个阶段;ＰＣＮＡ能较好地反映胶质瘤的恶性程度。     

胶质瘤细胞血小板源生长因子B链的纯合二聚体与其受体基因表达和受体活化水平的研究

目的探讨胶质瘤细胞血小板源生长因子Ｂ链的纯合二聚体（ＰＤＧＦＢＢ）及其受体（ＰＤＧＦＲ）基因表达和ＰＤＧＦＲ活化水平在胶质瘤发生、发展中的作用。方法用原位杂交和免疫组化染色观察了７３例不同级别的人胶质瘤组织标本。结果６２例（８４９％）的肿瘤细胞表达ＰＤＧＦＢｍＲＮＡ，其阳性率和阳性肿瘤细胞含量均随肿瘤恶性程度升高而递增。ＰＤＧＦＲα、ＰＤＧＦＲβ和这两种受体及其信号传递通路活化标记物酪氨酸磷酸化蛋白（ＰＴｙｒ）的阳性率均为１００％。这３种阳性肿瘤细胞密度（个／００５ｍｍ２）彼此间均呈正相关（ｒ＝０８３８～０８９７，Ｐ＜００１），并均随肿瘤恶性程度及肿瘤细胞ＰＤＧＦＢｍＲＮＡ表达水平升高而同步增加，差异均有显著性（Ｐ＜００５～００１）。但各肿瘤组内两种受体阳性肿瘤细胞密度间无显著性差异（Ｐ＞００５）。结论胶质瘤细胞普遍存在ＰＤＧＦＢＢ自分泌环，ＰＤＧＦＲα和ＰＤＧＦＲβ在该自分泌环中均起重要作用，该自分泌环活性异常增加可能对ＰＤＧＦＢＢ及其受体表达有正反馈诱导作用，并可能在胶质瘤发生及恶性进展过程中发挥重要作用。     

PML—RARα基因在早幼粒细胞性白血病发病中的作用研究

目的：通过封闭ＰＭＬ－ＲＡＲα融合基因对ＮＢ４细胞生长分化作用的影响，探讨ＰＭＬ－ＲＡＲα融合基因与ＡＰＬ发病的关系。方法：用反义核酸封闭ＰＭＬ－ＲＡＲα融合基因的表达。ＮＢ４细胞的生长、分化及功能，通过细胞生长曲线、形态学、细胞表面标志及ＮＢＴ还原试验判定；细胞周期应用流式细胞仪分析。结果：ＰＭＬ－ＲＡＲα融合基因的封闭能够抑制ＮＢ４细胞生长，促进其分化成熟，同时可降低Ｓ期细胞的百分比（由５６％降至３７％）。结论：急性早幼粒细胞性白血病（ＡＰＬ）特征性的染色体易位ｔ（１５；１７）形成的ＰＭＬ－ＲＡＲα融合基因，是ＡＰＬ发病的分子基础。     

IGF－I受体对细胞生长和转化的作用

近年来对类胰岛素生长因子Ｉ（ＩＧＦ－Ｉ）受体的分子生物学研究进展较快。已经对其在细胞生长和细胞转化的作用有了清楚的认识。ＩＧＦ－Ｉ受体对于理想的细胞生长是必需的。在细胞周期运转过程中需要ＩＧＦ－Ｉ受体的存在。ＩＧＦ－Ｉ受体的正常表达在细胞转化和肿瘤发生方面也起到更为重要的作用。其它生长因子（ＰＤＧＦ和ＥＧＦ）、癌基因（ＳＶ４０Ｔ抗原和Ｃ－ｍｙｂ），肿瘤抑制因子（ＷＴ＿１和ＲＢ）可以调节ＩＧＦ－Ｉ受体及其配体的表达。     

α—干扰素对正常与甲亢甲状腺细胞生成c—AMP的调节作用

采用甲状腺细胞单层培养及标记免疫分析法，对比研究α－干扰素（ＩＦＮ－α）对正常与Ｇｒａｖｅｓ病（ＧＤ）甲状腺细胞生成ｃＡＭＰ的影响，结果显示：（１）基础状态下，１０＾－３、１０＾－１和１０ｕ／ｍｌ的ＩＦＮ－α可刺激正常甲状腺细胞产生ＣＡＭＰ，刺激强度随ＩＦＮ－α浓度的增大而减弱，当试验剂量达１０＾３ｕ／ｍｌ时，ＣＡＭＰ的生成量与无刺激的对照组比较无统计学差异，此浓度区间的ＩＦＮ－α对ＧＤ甲状腺细胞     

CKIs蛋白在视黄酸诱导HL-60细胞分化中的作用研究

从细胞周期调控这一途径探讨视黄酸抑制细胞增殖、诱导细胞分化的分子机制。结果显示：５×１０－６ｍｏｌ／Ｌ全反式视黄酸（ＡＴＲＡ）及芳维甲（ＡＥ）处理的ＨＬ－６０细胞生长受抑,４ｄ后９０％细胞停滞于Ｇ０／Ｇ１期,Ｇ１→Ｓ期转换受阻,同时ＮＢＴ还原反应增强,ＷｅｓｔｅｒｎＢｌｏｔ分析及免疫细胞化学染色表明处理后的细胞ｐ１６、ｐ２１两种细胞周期素依赖激酶抑制物（ＣＫＩｓ）表达增加,而ＣｙｃｌｉｎＤ１和ｐＲｂ蛋白则降低,其中尤以ＡＴＲＡ作用为明显。结果提示,细胞周期调控相关蛋白可能在视黄酸及其衍生物抑制细胞增殖、诱导细胞分化过程中起重要作用。     

内毒素、地塞米松对体外培养大鼠肺泡巨噬细胞中NF_(-k)B活化的影响

目的 探讨内毒素（ＬＰＳ）和地塞米松（Ｄｅｘ）对体外培养的大鼠肺泡巨噬细胞（ＡＭ）中ＮＦ－ＫＢ活化的影响，以及ＡＭ中ＮＦ－ＫＢ活化在急性肺损伤中的可能作用。方法 通过建立大鼠ＡＭ体外培养技术，应用免疫组化染色法，观察ＬＰＳ和Ｄｅｘ寸 ＡＭ中 ＮＫ－ＫＢＰ～（６５），ＩＫＢ－α、ＴＮＦ－α和 ＩＣＡＭ－ｌ蛋白表达的动态变化。结果 ＬＰＳ能使培养的ＡＭ中 ＮＦ－ＫＢＰ～（６５），ＴＮＦ－α和ＩＣＡＭ－ｌ的表达增加，ＩＫＢ－α的表达降低；Ｄｅｘ的作用与 ＬＰＳ恰相反。结论ＬＰＳ促进ＡＭ中的ＮＦ－ＫＢ活化，可能是急性肺损伤肺内炎症损害发生的启动及促进因素；Ｄｅｘ抑制 ＮＦ－ＫＢ的活化，可能是其抗炎作用的重要机制之一。     

API_(0134)对LDL诱导单核细胞表达PDGF-B、bFGF及平滑肌细胞增殖的抑制作用

目的和方法：应用免疫细胞化学方法，观察穿心莲成分ＡＰＩ０１３４对轻度氧化低密度脂蛋白（ｍｍＬＤＬ）诱导人血单核细胞表达血小板源生长因子Ｂ链蛋白（ＰＤＧＦ－Ｂ）和碱性成纤维细胞生长因子（ｂＦＧＦ）的影响；并进行平滑肌细胞（ＳＭＣ）有丝分裂试验，观察ＡＰＩ０１３４作用后的单核细胞条件培养基（ＣＭ）对３Ｈ－ＴｄＲ掺入ＳＭＣＤＮＡ的影响。结果：ｍｍＬＤＬ可显著促进单核细胞表达ＰＤＧＦ－Ｂ和ｂＦＧＦ，ｍｍＬＤＬ作用后的ＣＭ亦可显著增加３Ｈ－ＴｄＲ的掺入量。ｍｍＬＤＬ的上述作用可被不同剂量的ＡＰＩ０１３４和ＡＰＩ０１３４作用后的ＣＭ所抑制。结论：ＡＰＩ０１３４的作用可能是抗动脉粥样硬化的机理之一。     

胶质瘤细胞血小板源生长因子B链的纯合二聚体与其受体基因？…

目的 探讨胶质瘤细胞血小板源生长因子Ｂ链的纯合二聚合（ＰＤＧＦＢＢ）及其受体（ＤＧＦＲ）基因表达和ＰＤＧＦＲ活化汪洋在胶质瘤发生、发展听作用。方法 用原位杂交和免疫组化染色观察了７３例不同级别的人胶质瘤组织标本。结果 ６２例（８４．９％）的肿瘤细胞表达ＰＤＧＦＢｍＲＮＡ,基阳性率和阳性肿瘤细胞含量均随肿瘤恶性程度升高而递增。ＰＤＧＦＲα、ＰＤＧＦＲβ和这两种受体及其信号传递通路活化标记物酪氨酸磷酸     

gadd153基因对卵巢癌细胞生长抑制作用的研究

目的　研究生长抑制ＤＮＡ损伤基因（ｇｒｏｗ ｔｈ ａｒｒｅｓｔ ａｎｄ ＤＮＡ ｄａｍ ａｇｅ, ｇａｄｄ）对卵巢癌细胞生长抑制和凋亡的作用。　方法　ＲＴ－ＰＣＲ鉴定卵巢癌ＳＫＯＶ３ 和３ＡＯ细胞株ｇａｄｄ１５３ 基因表达。通过目的基因的克隆、载体构建技术,将目的基因ｇａｄｄ１５３ 重组于ｐｌＸＳＮ－ｎｅｏ 逆转录病毒表达载体;构建的ｐＬＸＳＮ－ｇａｄｄ１５３载体采用脂质体（ｌｉｐｏｆｅｃｔｉｎ）（ＤＯＴＡＰ）的方法,分别转染ＳＫＯＶ３ 和３ＡＯ细胞株;经Ｇ４１８ 抗性筛选;ＲＴ－ＰＣＲ表达鉴定;足叶乙甙（ＶＰ１６）诱导,采用流式细胞仪分析（ＦＣＭ）的方法检测转染前后肿瘤细胞的生长抑制和凋亡。　结果　ＳＫＯＶ３－ｇａｄｄ１５３ 细胞生长抑制在Ｇ１／Ｇ０ 期,部分细胞进入凋亡的状态;３ＡＯ－ｇａｄｄ１５３ 细胞生长抑制,未引起凋亡。　结论　转染ｇａｄｄ１５３ 基因的肿瘤细胞系,诱导表达后可诱发肿瘤细胞生长抑制在Ｇ１／Ｇ０期,并有细胞进入凋亡状态。证实ｇａｄｄ１５３ 基因参与了细胞生长抑制和凋亡过程。     

TGF—β及其受体和SMAD在肝硬化,肝癌时的表达变化

正常肝细胞无转化生长因子β（ＴＧＦβ） 但有受体（ＴβＲ） 表达，通过ＴβＲ 将ＴＧＦβ信号转导至ＳＭＡＤ。ＳＭＡＤ 蛋白家族是ＴＧＦβ在细胞内信号传递分子的一种， 可通过激活特定基因调节肝细胞生长、分化。肝硬化时间质细胞内及细胞外基质ＴＧＦβ增加。肝癌时ＴβＲ 减少并由正常细胞膜分布转变为胞浆内核周分布。ＳＭＡＤ 在肿瘤中可发生突变     

DEFINITION AND MECHANISM RESEARCH OF NK CELLS AC-TIVATION THROUGH THE CD45 PATHWAY

为鉴定介导ＮＫ细胞激活的表面分子及其作用机制，本研究用一系列粘附分子单抗及配体体外刺激ＮＫ细胞，定量检测ＮＫ细胞ＩＦＮ－γ的分泌；检测了ＮＫ细胞经ＩＬ－２诱导后其异构体的变化及其不同异构体单抗对ＮＫ细胞的刺激作用；以ＣＤ２２α、ＣＤ２２β基因导入Ｂ７８Ｈ１细胞后观察转染细胞对ＮＫ细胞的粘附和刺激效应。结果表明：ＩｇＧ２ａ和ＩｇＧ１亚类ＣＤ４５单抗及其Ｆ（ａｂ）２均可独立刺激ＮＫ细胞释放ＩＦＮ－γ；ＮＫ细胞经ＩＬ－２培养诱导后其表面ＣＤ４５分子异构体的表达呈ＲＯ逐渐增加，而ＲＡ逐渐减少的特征；ＣＤ４５ＲＯ单抗可刺激ＮＫ细胞释放ＩＦＮ－γ；ＣＤ２２α、ＣＤ２２β转染细胞可粘附，但不能刺激ＮＫ细胞激活。结果提示：ＮＫ细胞可经ＣＤ４５ＲＯ途径激活并释放ＩＦＮ－γ，该途径与ＣＤ１６分子无关，ＣＤ４５分子的特异性配体并非既往所报道的ＣＤ２２，尚待进一步鉴定