人脐带Wharton's Jelly来源间充质干细胞与人牙周膜干细胞成骨分化能力的对比研究

目的:比较人脐带Wharton's Jelly来源间充质干细胞(human umbilical cord Wharton's Jelly-derived mesechymal stem ceils,hUCWJMSCs)与人牙周膜干细胞(periodontal mesenchymal stem cells,hPDLSCs)成骨分化能力.方法:体外培养hUC-WJMSCs和hPDLSCs.MTT法检测细胞增殖情况;成骨诱导后测定细胞的ALP活性,茜素红染色检测细胞矿化能力,Real-timePCR分析OPN和Runx2基因的表达.结果:hUCWJMSCs增殖能力高于hPDLSCs;经矿化诱导后hPDLSCs ALP表达、矿化结节形成高于hUCWJMSCs(P＜0.05);Runx2在hPDLSCs中表达高于hUCWJMSCs(P ＜0.05);而hUCWJMSCs中OPN表达高于hPDLSCs(P＜0.05).结论:hUCWJMSCs、hPDLSCs均具有成骨分化能力,hPDLSCs成骨分化能力较强.     

共培养诱导人脐带间充质干细胞(hUCMSCs)向牙周膜细胞(hPDLs)分化的体外实验研究

目的:研究人脐带间充质干细胞(hUCMSCs)向人牙周膜细胞(hPDLs)分化的可能性。方法:原代培养获得hUCMSCs和hPDLs;应用Transwell小室将两种细胞进行非接触式共培养;使用流式细胞仪检测共培养过程中hUCMSCs干细胞标记物CD146、SOX2、SSEA和Stro-1的变化情况;通过免疫荧光技术和Western Blot技术检测共培养过程中波形蛋白(Vimentin)在hUCMSCs中的变化情况。结果:共培养过程中hUCMSCs中的CD146、SOX2、SSEA和Stro-1持续降低;而Vimentin持续增高。结论:通过与hPDLs共培养,可以成功地将hUCMSCs诱导分化成为牙周膜样细胞,进一步证明了hUCMSCs可用于牙周损伤修复的可能。     

炎症环境下线粒体自噬与大鼠骨髓间充质干细胞成骨分化相关性研究

目的：探索高浓度肿瘤坏死因子-α(Tumor necrosis factor-α,TNF-α)诱导的炎症环境下线粒体自噬与大鼠骨髓间充质干细胞(Rat Bone marrow mesenchymal stem cells,rBMSCs)成骨分化能力的相关性。方法：利用100ng/ml TNF-α构建体外炎症微环境。探讨在炎症微环境下,线粒体自噬与成骨分化的相关性,将实验分为T组(TNF-α 100ng/ml组)、T+促进剂组(TNF-α 100ng/ml+雷帕霉素(Rapamycin)组)和T+抑制剂组(TNF-α 100ng/ml+3-甲基腺嘌呤(3-MA)组)。使用免疫荧光观察线粒体自噬变化,通过CCK-8,碱性磷酸酶(alkaline ph osph atase, ALP)活性测定、茜素红染色法检测线粒体自噬的变化对细胞增殖与成骨分化的影响,利用RT-PCR、Western Blot分别检测成骨与线粒体自噬相关基因和蛋白的表达情况,以期探索炎症环境下线粒体自噬对成骨分化能力的影响。结果：TNF-α 100ng/ml成功构建体外炎症微环境。Mito-tracker与LC3共定位PC...     

牙髓、牙周膜及脐带间充质干细胞三系分化能力的体外比较研究

目的:比较牙髓、牙周膜和脐带三种不同来源间充质干细胞的(Mesenchymal stem cells,MSCs)三系分化潜能.方法:培养分离人脐带间充质干细胞(Umbilical cord mesenchymal stem cells,UCMSCs)、牙髓干细胞(Dental pulp stem cells,DPSCs)和牙周膜干细胞(Periodontal ligament stem cells,PDLSCs);倒置显微镜观察细胞形态,体外诱导这3种MSCs向成骨、成脂和成软骨方向分化,通过茜素红染色、油红O染色、阿尔辛蓝染色分别鉴定细胞成骨、成脂和成软骨分化能力,进一步实时荧光定量PCR检测比较3种细胞成骨相关基因OCN和RUNX2及成脂相关基因PPAR-γ的表达水平.结果:这3种MSCs细胞形态略有不同,三者均可向成骨、成脂和成软骨方向分化,但其分化潜能有所差异,DPSCs成骨和成脂向分化能力强,UCMSCs则更适于成脂和成软骨向分化,而PDLSCs成软骨向分化较具优势.结论:DPSCs,PDLSCs和UCMSCs三系分化潜能不同,本研究为干细胞临床转化中选择理想细胞来源提供实验依据.     

TNF-α对颌骨骨髓间充质与牙周膜两种干细胞自噬水平的影响

目的探讨肿瘤坏死因子-α(TNF-α)对颌骨骨髓间充质与牙周膜两种干细胞自噬水平的影响。方法分离培养人颌骨骨髓间充质干细胞(JBMMSCs)、牙周膜干细胞(PDLSCs),以0、20、50、100ng/mL TNF-α作用于细胞,采用流式细胞仪检测细胞凋亡,并以定时定量RT-PCR、Western blot检测细胞自噬、凋亡表达。结果 100ng/mL TNF-α下JBMMSCs、PDLSCs细胞凋亡明显增加,且高于20、50ng/mL (P<0.05);TNF-α作用1d后,JBMMSCs、PDLSCs LC3表达升高,P62表达降低,Bcl-2表达升高;TNF-α作用7d后,LC3表达降低,P62表达升高,Bcl-2表达下降。结论 TNF-α可在一定条件下激活JBMMSCs、PDLSCs自噬,调控细胞凋亡。     

炎症微环境影响牙周膜干细胞成骨分化的信号通路

牙周膜干细胞(PDLSC)应用于组织工程学是目前治疗牙周炎骨缺失最有前景的方法之一,然而目前体内应用PDLSC再生牙周组织的效果并不理想,这可能是PDLSC所处的炎症微环境影响其命运所致.因此,本文从信号通路方面,探讨炎症微环境对PDLSC成骨分化潜能的影响,为其应用于牙槽骨的再生修复提供理论依据.     

人脐带间充质干细胞在壳聚糖温敏凝胶中增殖和成骨分化的实验研究

目的:研究人脐带间充质干细胞(human umbilical cord mesenchymal stem cells, hUCMSCs)在壳聚糖温敏凝胶中的增殖和成骨分化。方法:体外分离培养hUCMSCs。制备壳聚糖温敏凝胶并使用扫描电镜观察其超微结构。用壳聚糖温敏凝胶浸提液培养细胞,MTT法检测细胞增殖情况。使用成骨诱导培养液诱导壳聚糖温敏凝胶中生长的hUCMSCs向成骨方向分化,在诱导过程中进行茜素红法染色钙结节(21 d)。结果:hUCMSCs在壳聚糖温敏凝胶浸提液中的增殖情况与常规培养液中相近,无显著性差异。壳聚糖温敏凝胶中生长的hUCMSCs成骨诱导21d时可见到橘红色的钙结节。结论:hUCMSCs在壳聚糖温敏凝胶中可以正常增殖,经过诱导后可以向成骨方向分化。[关键词] 脐带间充质干细胞 壳聚糖温敏凝胶 增殖 成骨分化     

人脐带间充质干细胞与牙髓细胞体外共培养对细胞生物学的影响

目的: 研究人脐带间充质干细胞（human umbilical cord mesenchymal stem cells, hUCMSCs）与经骨形态发生蛋白2（bone morphogenetic protein 2,BMP2）诱导后的人牙髓细胞（human dental pulp cells,hDPCs）共培养对细胞生物学特性的影响。方法: 分别取原代培养的hUCMSCs和hDPCs,分别通过流式细胞术、成骨诱导、成脂诱导以及免疫组织化学染色鉴定细胞;使用BMP2诱导hDPCs,14 d后检查其DSPP、ALP、DMP1的mRNA表达情况;按照1∶1、1∶5、5∶1的比例直接共培养hUCMSCs与经BMP2诱导后的hDPCs,实时定量PCR检测其DSPP、ALP、DMP1、OCN、VEGF、HGF、Nanog的mRNA表达情况。根据实时定量PCR结果选取1∶1组与单独培养hUCMSCs组、hDPCs组比较,分别培养21 d后进行茜素红染色,在酶标仪上于562 nm处检测沉淀物形成情况。采用SPSS21.0软件包对数据进行统计学分析。结果: 直接共培养14 d后,1∶1细胞组的DSPP、ALP、DMP1、OCN、VEGF、HGF的mRNA表达量比单独培养的hUCMSCs组显著升高（P<0.05）,而Nanog mRNA表达量比单独培养的hUCMSCs组降低（P<0.05）。茜素红染色结果显示,1∶1组的OD值显著高于hUCMSCs组（P<0.05）。结论: 将hUCMSCs与经BMP2诱导后的hDPCs按照1∶1比例共培养,可以诱导细胞向成牙本质细胞方向分化,并促进血管生成因子的表达。     

炎症微环境对牙周组织再生的影响

慢性牙周炎是一种以牙周组织破坏为特征的慢性炎症性疾病。牙周病的最终治疗目的是牙周组织再生。而牙周炎时形成的局部炎症微环境,不仅造成牙周组织的破坏,而且会影响牙周组织再生过程,比如影响牙周膜干细胞的增殖分化以及生长因子的作用等。本文就炎症微环境对牙周组织再生的影响作一综述。     

炎症微环境下芦丁对牙周膜干细胞成骨分化能力的影响

目的 研究芦丁（rutin）对炎症微环境下牙周膜干细胞成骨分化能力的影响。方法 采用有限稀释法分离纯化获得牙周膜干细胞,采用流式细胞术鉴定牙周膜干细胞。以脂多糖（lipopolysaccharide, LPS）刺激牙周膜干细胞,建立体外炎症模型。实验分为4组,第1组使用α-MEM培养基培养牙周膜干细胞,第2组使用含有脂多糖的α-MEM培养基培养牙周膜干细胞,第3组在含有脂多糖的α-MEM培养基加入芦丁培养牙周膜干细胞,第4组使用含有芦丁的α-MEM培养基培养牙周膜干细胞。通过碱性磷酸酶染色、碱性磷酸酶活性测试、茜素红染色、RT-PCR以及蛋白免疫印迹等方法检测成骨分化能力的改变。采用SPSS 17.0软件包对数据进行统计分析。结果 CCK-8和碱性磷酸酶活性测试结果显示,10 μmol/L芦丁对炎症状态下牙周干细胞增殖和成骨分化作用最明显。碱性磷酸酶染色和茜素红染色结果显示,10 μmol/L芦丁可以改善炎症微环境下牙周膜干细胞的成骨分化能力。RT-PCR、蛋白免疫印迹结果显示,芦丁可以增强炎症状态下COL1、ALP、RUNX2等成骨基因和成骨蛋白的表达。结论 芦丁可以增强炎症微环境下牙周膜干细胞的成骨分化能力。     

间充质干细胞非分化性增殖的研究进展

间充质干细胞系多潜能干细胞,其多向分化能力具有广泛的临床应用前景.非分化性增殖即指在增殖的同时保持其多向分化潜能.目前,间充质干细胞在增殖过程中仍存在增殖潜力和多向分化潜力逐渐丧失的问题,而人血清、生长因子、细胞外基质培养基、生物反应器和中药等逐渐成为此类研究的热点.下面从间充质干细胞非分化性增殖的意义、问题、方法等就间充质干细胞非分化性增殖的研究进展作一综述.     

牙周膜干细胞的表型分析

目的:分析人牙周膜干细胞(PDLSCs)的表型特点,为分离、鉴定和应用PDLSCs提供有效途径.方法:采用免疫磁珠法分离PDLSCs,制备细胞爬片.分别采用免疫荧光、免疫细胞化学染色法检测PDLSCs表面蛋白STRO-1、CD44、Vimentin、CK、COL-Ⅰ、BSP的表达.收集PDLSCs,采用RT-PCR法检...     

骨髓间充质干细胞外泌体调控STAT3通路促进牙周膜干细胞成骨分化

目的:研究骨髓间充质干细胞(BMMSCs)外泌体调控信号转导与转录激活因子3(STAT3)通路促进牙周膜干细胞(PDLSCs)成骨分化的作用及机制.方法:原代培养BMMSCs和PDLSCs,取第3代BMMSCs细胞分离外泌体,取第3代PDLSCs细胞进行成骨诱导并分组,外泌体组加入15μg/mL重悬于磷酸盐缓冲液(PB...     

间接共培养诱导大鼠骨髓间充质干细胞向牙周膜成纤维样细胞分化

目的：探讨通过间接共培养诱导骨髓间充质干细胞（Bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs）向牙周膜成纤维细胞（Periodontal ligament fibroblasts,PDLFs）分化的可行性。方法：将大鼠BMSCs与PDLFs间接共培养,分别于不同时间段检测碱性磷酸酶（Alkaline phosphatase,ALP）活性以及骨钙素（Osteocalcin,OCN）、Ⅲ型胶原（Collagen typeIII,COLⅢ）mRNA表达的变化。结果：间接共培养后的BMSCs表现出类似PDLFs的性质,各检测指标与单独培养的PDLFs无统计学差异,与单独培养的BMSCs有统计学差异。结论：牙周膜成纤维细胞通过旁分泌机制可以诱导骨髓间充质干细胞向其分化。     

处理的牙本质基质对骨髓间充质干细胞成骨分化影响的研究

目的 采用体外研究的方法评价处理的牙本质基质（TDM）对骨髓间充质干细胞（BMSCs）增殖及成骨分化的影响。方法 将获取的牙本质颗粒进行梯度脱矿处理,制备TDM浸提液。分离培养人BMSCs后,将BMSCs培养于TDM浸提液中,CCK-8法检测细胞的增殖情况,培养7 d后提取细胞总蛋白采用Western blot检测成骨相关蛋白：Ⅰ型胶原蛋白（ColⅠ）、Runt相关转录因子-2（Runx2）的表达情况。结果 TDM浸提液培养后,与空白对照组及羟磷灰石/β-磷酸三钙组相比,细胞增殖明显;培养7 d后,TDM组的ColⅠ、Runx2蛋白的表达量明显增高。结论 TDM可以促进BMSCs的增殖及成骨向分化,提示其应用于骨组织工程的可行性。     

氯化锂对人牙周膜干细胞增殖和成骨分化的影响

目的:探讨Wnt/β-catenin通路激活剂—氯化锂(lithium chloride,LiCl)对体外培养的人牙周膜干细胞(human periodontal ligament stem cells,hPDLSCs)增殖和成骨分化的影响。方法:低密度多克隆法分离培养人PDLSCs,分别与不同浓度的LiCl(5、10、20、40 mmol/L)共同培养。分别检测各组细胞的增殖情况、碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性、钙化结节形成量以及Col-1、OCN、Runx-2等成骨相关基因的表达水平。结果:LiCl无促细胞增殖作用,且高浓度LiCl能明显抑制细胞的增殖。浓度为5 mmol/L的LiCl可促进hP-DLSCs成骨性分化,表现为提高细胞的ALP活性、促进钙化结节的形成、上调Col-1、OCN、Runx-2的mRNA表达水平,与对照组相比,差异均具有统计学意义(P<0.05)。而高浓度(≥10 mmol/L)LiCl则对成骨分化具有抑制作用。结论:终浓度为5 mmol/L的LiCl可明显促进hPDLSCs的成骨分化。