非瑟酮调节AMPK/NLRP3信号通路对LPS诱导的牙周膜干细胞炎性损伤的影响

目的:研究非瑟酮(FIS)对脂多糖(LPS)刺激的人牙周膜干细胞(hPDLSC)炎性损伤的影响,并确定其潜在的分子机制。方法:CCK-8检测FIS单独或联合LPS处理hPDLSC的细胞活力。将hPDLSC分为对照组、LPS诱导(LPS)组、FIS治疗(LPS+FIS)组和腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)抑制剂(LPS+FIS+CC)组。ELISA评估炎症因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素(IL)-1β和IL-6水平;流式细胞术检测细胞凋亡水平。免疫印迹检测Bcl-2、Bax、cleaved caspase-3以及NLRP3信号通路相关蛋白表达。结果:浓度40μmol/L的FIS可显著降低hPDLSC活力,20或40μmol/L FIS可明显恢复受LPS抑制的hPDLSC活力(P<0.05)。LPS刺激后hPDLSC上清液中TNF-α、IL-1β和IL-6含量升高;细胞凋亡率升高,Bax和cleaved caspase-3的水平上调,Bcl-2水平下调;p-AMPK/AMPK和p-ACC/ACC比值和NLRP3、Caspase 1和IL-1β蛋白水平均增加(P<0.05...     

盐酸米诺环素对脂多糖诱导人牙周膜成纤维细胞白细胞介素-1β mRNA 表达的影响

目的研究盐酸米诺环素对内毒素脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)作用下人牙周膜成纤维细胞白细胞介素-1β(interleukin 1β,IL-1β)mRNA表达的影响。方法培养人牙周膜成纤维细胞,实验分为5组:对照组(未加药品)、模型组(加入10μg/mL LPS)、低剂量干预组(加入10μg/mL LPS和50μg/mL盐酸米诺环素)、中剂量干预组(加入10μg/mL LPS和100μg/mL盐酸米诺环素)、高剂量干预组(加入10μg/mL LPS和200μg/mL盐酸米诺环素)。实时荧光定量PCR检测盐酸米诺环素对LPS作用下人牙周膜成纤维细胞IL-1βmRNA表达的影响。结果 IL-1βmRNA相对表达量:模型组高于对照组,对照组高于3个剂量干预组,其差异均有统计学意义(P<0.01);但高剂量干预组、中剂量干预组、低剂量干预组3组间的相对表达量,组间比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论盐酸米诺环素能够降低LPS作用下人牙周膜成纤维细胞IL-1βmRNA的表达,这可能是盐酸米诺环素治疗牙周炎的作用机制之一;本研究未发现盐酸米诺环素对LPS作用下人牙周膜成纤维细胞IL-1βmRNA表达的干预作用与药物剂量之间存在正相关关系。     

西格列汀激活基质细胞衍生因子-1/CXC趋化因子受体4信号通路对脂多糖诱导的人牙周膜干细胞增殖、凋亡、炎症和成骨分化的影响

目的 探讨西格列汀对脂多糖（LPS）诱导的炎症微环境下人牙周膜干细胞（hPDLSCs）增殖、凋亡、炎症和成骨分化的影响及分子机制。方法 体外培养hPDLSCs,用不同浓度的西格列汀处理后检测细胞活力,以确定后续西格列汀实验浓度。采用1μg/mL LPS刺激诱导24 h建立hPDLSCs炎症模型并分为空白组、对照组、西格列汀低浓度组（0.5μmol/L）、西格列汀中浓度组（1μmol/L）、西格列汀高浓度组（2μmol/L）、西格列汀高浓度+基质细胞衍生因子-1 (SDF-1)/CXC趋化因子受体4 (CXCR4)通路抑制剂（AMD3100）组（2μmol/L+10μg/mL）。细胞计数试剂盒-8检测培养24、48、72 h后的hPDLSCs增殖活性;流式细胞术检测培养72 h后hPDLSCs凋亡情况;诱导成骨分化21 d后茜素红染色检测hPDLSCs成骨分化能力,试剂盒测定hPDLSCs中碱性磷酸酶（ALP）活性;酶联免疫吸附检测hPDLSCs培养上清液中炎症因子肿瘤坏死因子（TNF）-α、白细胞介素（IL）-1β、IL-6水平;实时荧光定量聚合酶链反应（RT-qPCR）检测hPDLS...     

TGF-β1对炎症状态下人牙周膜成纤维细胞的调控作用

目的 探讨转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)对在牙龈卟啉单胞菌来源脂多糖（lipopolysaccharide from Porphyromonas gingivalis,Pg-LPS）刺激模拟炎症状态下的人牙周膜成纤维细胞（human periodontal ligament fibroblasts,hPDLFs）的调控作用。方法 获取hPDLFs并进行免疫组化鉴定,通过qRT-PCR与CCK-8确定Pg-LPS的刺激浓度。将hPDLFs分成4组：空白对照组,单纯100μg/mL Pg-LPS;低浓度组,1 ng/mL TGF-β1+100μg/mL Pg-LPS;中浓度组,10 ng/mL TGF-β1+100μg/mL Pg-LPS;高浓度组100 ng/mL TGF-β1+100μg/mL Pg-LPS。CCK-8检测细胞增殖情况;划痕实验与Transwell小室实验检测hPDLFs细胞迁移能力;流式细胞术检测hPDLFs的细胞周期;qRT-PCR检测hPDLFs的转录因子叉头盒p3(forkhead/winged h...     

茶多酚对脂多糖诱导人牙周膜成纤维细胞凋亡及炎症因子的影响

目的:探讨茶多酚对脂多糖(LPS)诱导人牙周膜成纤维细胞(HPDLFs)凋亡及肿瘤坏死因子-α-(TNF-α)、白介素6(IL-6)分泌的影响。方法:体外培养HPDLFs,MTT法筛选茶多酚浓度梯度,再分别用LPS(1μg/ml)和LPS(1μg/m1)+茶多酚(10μg/ml、50μg/ml、100μg/ml)刺激HPDLFs,流式细胞仪检测细胞凋亡,Elisa法检测TNF一α、IL-6分泌。结果:LPS可显著诱导HPDLFs凋亡,上调TNF一α、IL-6表达。茶多酚可显著降低LPS诱导的细胞凋亡和TNF-α、IL-6表达,且呈量效依赖性。结论:茶多酚可通过有效降低LPS诱导的细胞凋亡和TNF一α、IL-6表达。     

LPS刺激对体外培养人牙周膜细胞产生IL-8和MCP-1的影响

目的:检测脂多糖(LPS)刺激对体外培养人牙周膜细胞分泌炎症趋化因子IL-8和MCP-1改变的影响.方法:组织块法原代培养人牙周膜细胞,MTT法观察不同浓度LPS对其增殖的影响;取第4代牙周膜细胞在10 μg/mL LPS刺激条件下进行培养,分别于培养后4、8、12、24 h用酶联免疫吸附(ELISA)法检测牙周膜细胞培养上清中IL-8和MCP-1的含量;结果采用单因素方差进行统计分析.结果:10 μg/mL LPS刺激可使牙周膜细胞的增殖速度略减低,刺激后24 h内细胞形态和数量未见明显变化.ELISA结果显示LPS刺激后牙周膜细胞在10 μg/mL培养上清中IL-8和MCP-1含量均明显高于对照组(P＜0.05);且两种蛋白含量均随培养时间延长而增加(P＜0.05),呈时间依赖性.结论:10μg/mL LPS刺激可使牙周膜细胞培养上清中IL-8和MCP-1含量呈时间依赖性增加,提示牙周膜细胞具有免疫调节功能.     

炎症微环境下可溶性环氧化物酶抑制剂对人根尖牙乳头干细胞增殖及分化的影响

目的:探讨在炎症微环境下,可溶性环氧化物酶抑制剂(TPPU)对人根尖牙乳头干细胞(hSCAPs)增殖和分化的影响.方法:采用流式细胞仪以及成骨诱导后茜素红染色鉴定hSCAPs;1 mg/mL脂多糖(LPS)处理hSCAPs模拟炎症微环境,然后用10μmol/L TPPU作用于hSCAPs,分别在第1、3、5、7天,通过CCK-8法观察TPPU对hSCAPs增殖能力的影响;在第24小时,实时定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测炎症相关因子表达.在成骨诱导后的第7、12天,通过qRT-PCR检测成骨分化相关基因的表达;第8天通过碱性磷酸酶染色来分析碱性磷酸酶活性,第21天用茜素红染色观察矿化结节形成.结果:流式细胞仪结果与茜素红染色鉴定实验细胞为hSCAPs.用1 mg/mL LPS处理hSCAPs后,在第1、3、5、7天时,TPPU+LPS组、LPS组和vehicle组细胞增殖无差异(P>0.05).在用LPS处理hSCAPs 24 h后,相对于vehicle组,LPS组白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)表达显著上调(P<0.05),LPS+TPPU组IL-1β、IL-6的表达明显低于LPS组(P<0.05).成骨诱导液培养hSCAPs一定时间后,检测发现相对于LPS组,LPS+TPPU组碱性磷酸酶(ALP)、牙本质涎磷蛋白(DSPP)、骨钙素(OCN)、Runt相关转录因子2(RUNX2)的表达显著上调(P<0.05).且TPPU处理组较LPS组碱性磷酸酶染色和茜素红染色均加深.结论:在体外炎症微环境下,TPPU可以抑制hSCAPs炎性因子的表达.其次,在炎症微环境下TPPU对hSCAPs的增殖可能并没有明显的促进作用,但TPPU可在一定程度上促进hSCAPs的成牙/成骨分化.     

罗红霉素对人牙周膜成纤维细胞TNF-α、IL-6释放的影响

目的:探讨罗红霉素对脂多糖诱导的人牙周膜成纤维细胞肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)释放的影响。方法:采用ELISA方法,检测在不同剂量的罗红霉素作用下,脂多糖诱导的人牙周膜细胞中IL-6、TNF-α释放的变化。结果:LPS刺激后人牙周膜细胞TNF-α的释放显著高于正常对照组(360 pg/m l vs 80 pg/m l,3 h,P<0.05)。与L组相比,罗红霉素组(20μg/m l)TNF-α水平12 h显著降低,3~6 h与L组无明显差异,而12 h(520 pg/m l vs 710 pg/m l)、24 h(220 pg/m l vs 680 pg/m l)显著降低(P<0.05)。LPS组IL-6水平显著高于正常对照组(360 pg/m l vs 105 pg/m l,P<0.05),罗红霉素组(20μg/m l)IL-6分泌量在6 h(420 pg/m l vs 670 pg/m l)、12 h(590 pg/m l vs 810 pg/m l)和24 h(340 pg/m l vs 630 pg/m l)较L组均显著降低(P<0.05)。结论:罗红霉素能显著抑制LPS刺激后人牙周膜细胞IL-6、TNF-α的释放。     

IL-1β对人牙周膜成纤维细胞OPG、RANKL mRNA表达的影响

目的:以体外培养的人牙周膜成纤维细胞(HPDLF)为研究对象,观察不同浓度的白细胞介素-1β(IL-1β)对人牙周膜成纤维细胞(HPDLF)中骨保护素(OPG)、核因子κB受体活化剂配体(RANKL)mR-NA表达的影响。方法:组织块法体外原代培养HPDLF并鉴定,以第5代HPDLF作为实验靶细胞,分别用不同浓度(0、0.01、0.1、1、10、100 ng/mL)的IL-1β进行干预,半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测HPDLF中OPG、RANKL mRNA的表达。结果:IL-1β在0.01～10 ng/mL浓度范围内能明显上调HPDLF中OPG mRNA的表达(P<0.05),并在0.1 ng/mL时上调作用达到最大(P<0.05)。此后,随着IL-1β浓度的增加,OPG mRNA的表达量逐渐减少。IL-1β在0.01～100 ng/mL浓度范围内均可明显上调HPDLF中RANKL、RANKL/OPGmRNA的表达(P<0.05),且呈剂量依赖性,即随着IL-1β浓度增加,HPDLF中RANKL、RANKL/OPG mRNA的表达也逐渐增加,各浓度组两两比较除10 ng/mL与100 ng/mL相比无显著性差异外,其余各组间差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:IL-1β可促进HPDLF中RANKL mRNA的表达,上调RANKL/OPG mRNA的比值。     

内毒素耐受对人牙龈上皮细胞分泌IL-1β、IL-6和IL-8的影响

目的:观察脂多糖(lipopolysaccharides,LPS)反复刺激细胞,诱导产生的内毒素耐受对人牙龈上皮细胞(human gingival epithelial cells,HGECs)分泌细胞因子IL-1β、IL-6和IL-8的影响。方法:采用1mg/L牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis,P.gingivalis)LPS或1mg/L大肠杆菌(Escherichia coli,E.coli)LPS刺激HGECs 24h,洗涤细胞后,分别采用相同的LPS再次刺激24h,构建内毒素耐受模型。采用ELISA技术检测细胞条件培养液中IL-1β、IL-6和IL-8分泌水平的变化。结果:P.gingivalis LPS或E.coli LPS刺激HGECs 24h后,3种细胞因子的分泌水平均较刺激前明显增高(P<0.05)。2种LPS重复刺激,诱导细胞耐受后,IL-6和IL-8的分泌水平较第1次刺激后明显降低(P<0.05),但P.gingivalis LPS重复刺激后,IL-1β的分泌水平与第1次刺激后无明显差别。结论:内毒素耐受能抑制HGECs分泌细胞因子IL-6和IL-8,进而可能影响牙周组织的炎症和免疫反应。     

牡荆素对脂多糖诱导牙髓干细胞表达炎症因子的影响

目的：探讨牡荆素（vitexin,VTX）对脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）诱导的人牙髓干细胞（human dental stem pulp cells,hDPSCs）表达炎症因子的影响,并初步探讨其相关作用机制。方法：分离、培养hDPSCs,以CCK-8法检测VTX对hDPSCs增殖的影响,检测VTX毒性浓度范围。铺种hDPSCs,分为4组,空白组以不含LPS和VTX的无血清DMEM,LPS组仅加入含LPS终浓度为2 μg/mL的无血清DMEM培养,VTX处理组1(V1组)加入2 μg/mL LPS+25 μmol/L VTX,VTX处理组2(V2组)加入2 μg/mL LPS + 50 μmol/L VTX。培养48 h,实时荧光定量PCR检测各组细胞中IL-1β、IL-6及IL-8基因转录,蛋白质免疫印迹检测hDPSCs内MPAK信号通路及COX-2等蛋白的变化。采用SPSS 16.0软件包对数据进行统计学分析。结果：VTX在200 μmol/L范围内时细胞活力不受影响(P>0.05);VTX抑制LPS刺激hDPSCs转录IL-1β、IL-6及IL-8,抑制效果与VTX的浓度呈正相关;VTX可显著抑制LPS激活p38及ERK信号通路。结论：VTX可能通过抑制p38及ERK信号通路的激活,降低LPS诱导的hDPSCs转录IL-1β、IL-6及IL-8。     

西格列汀通过阻断核因子-κB信号通路抑制脂多糖诱导的人牙龈成纤维细胞炎症反应

目的 明确西格列汀对牙龈卟啉单胞菌脂多糖(LPS)诱导的人牙龈成纤维细胞(HGF)炎症反应的影响,并探讨其发挥作用的分子学机制,为未来西格列汀在牙周炎治疗中的应用提供初步的实验依据.方法 收集临床患者健康牙龈组织标本,利用酶消化法分离培养HGF并进行细胞来源鉴定;采用细胞增殖-毒性检测试剂盒检测LPS和西格列汀与HGF...     

������ŵ���ض�֬����������������Ĥ����άϸ��IL-6 mRNA���Ӱ���о�

目的研究盐酸米诺环素对脂多糖（LPS）作用下人牙周膜成纤维细胞（HPDLF）的白细胞介素-6（IL-6）mRNA表达的影响。方法本研究于2011年10月至2012年2月在井冈山大学医学院重点实验室进行。培养HPDLF并分为以下5组：对照组（未加药）、高剂量组（0．01g／LLPS＋0．2班盐酸米诺环素）、低剂量组（0．0lg／LLPS＋0．05g/L盐酸米诺环素）、中剂量组（0．01g／LLPS＋0．1g／L盐酸米诺环素）、模型组（0．0lg／LLPS）,每组均复种3孔。实时荧光定量PCR检测各组HPDLF中的IL-6mRNA表达情况。结果对照组、高剂量组、低剂量组、中剂量组、模型组的IL-6mRNA相对表达量分别为：0．61±0．08、0．62±0．10、0．88±0．17、0．49±0．21、1．88±0．07。模型组IL-6mRNA的相对表达量高于对照组、高剂量组、低剂量组、中剂量组,且差异有统计学意义（P〈0．01）。对照组及低、中、高剂量组的IL-6mRNA相对表达量两两比较,差异均无统计学意义（P〉0．05）。结论盐酸米诺环素能够降低LPS作用下HPDLF中的IL-6mRNA的表达,这可能是盐酸米诺环素治疗牙周炙的作用机制之一。     

牙龈卟啉单胞菌脂多糖对高脂血症兔腹腔巨噬细胞炎症相关因子基因表达的影响

目的 比较牙龈卟啉单胞菌脂多糖(Porphyromonas gingivalis on lipopolysaccharide,Pg-LPS)对健康和高脂血症兔腹腔巨噬细胞炎症相关因子基因表达的影响.方法 将健康新西兰兔12只随机分为2组,分别给予普通饲养喂养(健康兔)和高脂饲料喂养,6周后建立高脂血症模型(高脂兔).采用腹腔灌洗法分别获得健康和高脂兔巨噬细胞,将健康和高脂兔巨噬细胞均随机分为对照组、Pg-LPS组(1μg/mL)及阳性对照组大肠杆菌-脂多糖(Escherichia,E.coli-LPS)组(1μg/mL),24 h后采用实时PCR法分别检测各组巨噬细胞中C-反应蛋白(C-reaction protein,CRP)、白介素1β(interleukin-1β,IL-1β)、白介素6(interleukin-6,IL-6)、白介素8(interleukin-8,IL-8)、肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)mRNA的表达水平.结果 高脂兔对照组巨噬细胞的CRP、IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α水平高于健康兔对照组巨噬细胞;相较于对照组,高脂兔和健康兔Pg-LPS组巨噬细胞的CRP、IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α表达均升高,且高脂兔Pg-LPS组巨噬细胞以上因子的表达水平高于健康兔Pg-LPS巨噬细胞(P<0.05).结论 Pg-LPS可增强高脂血症兔巨噬细胞炎症相关因子mRNA的表达.     

转化生长因子β3对脂多糖诱导的成骨细胞中IL-6表达的影响

目的:探讨转化生长因子β3 (transforming growth factor β3,TGF-β3)对成骨细胞内炎性细胞因子IL-6表达的影响,及其发挥抗炎作用的机制.方法:20 μg/mL牙髓卟啉单胞菌脂多糖(lipopolysaccharide of Porphyromonas endodontalis,Pe-LPS)刺激人成骨肉瘤细胞系MG63,构建成骨细胞炎症模型.取不同浓度(5～20 ng/mL)的人重组蛋白生长因子TGF-β3和TGF-β1,分别与20 μg/mL P.e-LPS共同作用于MG63细胞24 h后,利用实时荧光定量PCR检测细胞内IL-6 mRNA的表达,ELISA法检测培养液上清中IL-6的表达水平.以10 ng/mL TGF-β3预处理细胞30 ain后,再与20 μg/mL P.e-LPS共同作用20 min,Western印迹法检测细胞内ERK1/2蛋白磷酸化的表达.采用SPSS13.0软件包对数据进行统计学分析.结果:实时荧光定量PCR结果显示,单独20 μg/mL P.e-LPS作用下,MG63细胞内IL-6的表达显著增高(P＜0.01);TGF-β1在低浓度条件下(5～10 ng/mL)对IL-6的表达无显著作用,仅在20 ng/mL时可显著抑制IL-6的表达(P＜0.05).不同浓度的TGF-β3与Re-LPS共同作用均可显著抑制IL-6的表达(P＜0.01).ELISA结果显示,10～20 ng/mL TGF-β3可在蛋白水平上对IL-6有显著抑制作用(P＜0.05).单独P.e-LPS作用时,可使MG63细胞内ERK1/2蛋白的磷酸化水平升高(P＜0.01);而当TGF-β3与P.e-LPS共同作用时,ERK1/2的磷酸化被抑制(P＜0.05).结论:相同浓度条件下,TGF-β3比TGF-β1对成骨细胞炎症的抑制作用更为显著,ERK1/2信号机制参与了TGF-β3的抗炎过程.     

LPS刺激小鼠骨细胞RANKL/OPG和IL-6表达的实验研究

目的: 探讨LPS对体外培养的小鼠MLO-Y4细胞RANKL/OPG和IL-6表达的影响。方法: 以5 mg/L的LPS刺激细胞,用CCK-8法于(12、24、48 h)后检测细胞的增殖;以不同浓度(1、10、100、500、1000 μg/L)的LPS刺激细胞,分别在作用4 h和1.5 h后用RT-PCR检测细胞对RANKL/OPG和IL-6的相对表达;以100 μg/L的LPS刺激细胞,分别在作用(0.5、1、2、4、8 h)和(0.5、1、1.5、2、4 h)两种不同时间后用RT-PCR检测细胞对RANKL/OPG和IL-6的相对表达。结果: LPS对MLO-Y4细胞增殖无影响;100 μg/L的LPS能显著上调细胞对RANKL和IL-6的相对表达,与(500, 1000 μg/L)LPS的上调结果无统计学差别;除0.5 h外其余时间点LPS均上调细胞对RANKL和IL-6的相对表达,并分别在4 h和1.5 h达到峰值;所有样本LPS对细胞OPG的相对表达均无影响。结论: 一定浓度的 LPS上调了MLO-Y4 细胞对RANKL和IL-6的表达,而对OPG的表达无影响。     

˫�ȷ����ƶ�֬�����յ���������Ĥ����άϸ��IL-1β��TNF-α����Ӱ���о�

目的 探讨双氯芬酸钠对脂多糖（LPS）诱导的人牙周膜成纤维细胞（HPDLFs）白细胞介素-1β（IL-1β）和肿瘤坏死因子-α（TNF-α）表达的影响。方法 本研究于2013年3—5月在山西医科大学口腔实验室进行。将复苏培养冻存的HPDLFs进行形态学鉴别后,用10 μg/mL的LPS进行诱导,分别以0.1、1、10、50、100 mg/L的双氯芬酸钠进行干预,酶联免疫吸附试验法（ELISA法）检测HPDLFs表达IL-1β和TNF-α水平的变化。结果 对同一质量浓度LPS诱导的HPDLFs而言,双氯芬酸钠能下调HPDLFs表达IL-1β和TNF-α的水平,并且随着双氯芬酸钠质量浓度的增加,IL-1β和TNF-α的表达量呈逐渐减弱的趋势（P＜0.05）。结论 双氯芬酸钠可能对于LPS诱导的HPDLFs IL-1β和TNF-α的表达有重要的抑制作用,这为牙周病的临床治疗提供了新的思路。