凋亡抑制因子ARC抑制人成骨细胞的凋亡及促成骨分化的实验研究

目的 探讨凋亡抑制因子（Apoptosis repressor with caspase recruitment domain,ARC）对双磷酸盐作用下的人成骨细胞的影响。方法 建立ARC过表达的人成骨细胞,然后,用不同浓度的唑磷酸处理,MTT法用来检测细胞的增殖,流式细胞技术用来检测细胞凋亡情况,ALP染色及半定量等用来检测过表达ARC的成骨细胞的成骨分化。RT-PCR检测成骨相关基因BSP,Runx2,OCN及ALP的表达。结果 ARC能抑制唑磷酸引起的成骨细胞的凋亡,促进成骨细胞的成骨相关基因表达,促进成骨细胞的成骨分化。结论 ARC在调节唑磷酸处理的人成骨细胞中发挥了重要的作用。     

高浓度唑来膦酸对人成骨细胞成骨分化及凋亡影响的实验研究

目的研究高浓度唑来膦酸对体外分离的健康人下颌骨成骨细胞的影响。方法体外分离培养来源于健康人下颌骨的成骨细胞,取P3代成骨细胞,用1 μmol/L、5 μmol/L唑来膦酸分别处理,不加药组为空白对照。以CCK8检测细胞增殖,流式细胞技术检测细胞凋亡,ALP染色及定量分析检测细胞成骨分化,荧光定量PCR检测成骨相关基因ALP、OPN和Runx2的表达,Western免疫印迹检测OPN蛋白的表达。采用SPSS16.0软件包对数据进行统计学分析。结果唑来膦酸处理后的成骨细胞增殖减慢,5 μmol/L处理组较1 μmol/L组增殖更慢。药物处理后的细胞凋亡较对照组增加,且随着药物浓度的增加,凋亡百分比显著上升。1 μmol/L及5 μmol/L唑来膦酸处理后的成骨细胞的成骨分化能力较对照组显著下降。荧光定量PCR结果提示,药物处理后的成骨相关基因ALP、OPN和Runx2的表达显著降低。Western免疫印迹检测结果显示药物处理组OPN蛋白表达量显著下降。结论高浓度唑来膦酸抑制来源于人下颌骨成骨细胞的增殖及成骨分化,促进其凋亡发生。     

成骨生长肽对纯钛表面成骨细胞样细胞增殖和分化的影响

目的探讨成骨生长肽（osteogenic growth peptide,OGP）涂层对纯钛表面新生大鼠颅盖骨成骨细胞样细胞增殖和分化的影响。方法实验分为纯钛组（Cp-Ti组）、碱-热水陈化处理组（AW-Ti组）和碱热处理-OGP涂层组（OGP-Ti组）,将体外培养的新生大鼠颅盖骨成骨细胞样细胞接种于3组钛片表面,进行细胞培养,第1、3、5、7天通过四甲基偶氮唑盐光密度值检测法测定细胞在材料表面的增值情况,培养第7、11、15天通过检测碱性磷酸酶活性测定细胞在材料表面的分化成熟情况。结果培养第1、3、5、7天,AW-Ti组和OGP-Ti组的细胞光密度值均高于Cp-Ti组（P〈0.05）;培养第1、5、7天,OGP-Ti组细胞光密度值均高于AW-Ti组（P〈0.05）。培养7、11、15 d后,AW-Ti组和OGP-Ti组的ALP活性均高于Cp-Ti组（P〈0.05）;培养7 d时,AW-Ti组和OGP-Ti组ALP活性差异无统计学意义（P〉0.05）;培养11、15 d时,OGP-Ti组的ALP活性均高于AW-Ti组（P〈0.05）。结论钛表面OGP涂层具有良好的生物相容性,能够提高其表面生物学活性。     

应力作用下生长因子对成骨细胞增殖和分化的调节

成骨细胞在应力作用下骨改建的发生中起着重要的作用。应力作用下成骨细胞的增殖和分化受到系统因素和局部生长因子的调节,而局部生长因子在其增殖和分化过程中起着重要的作用本语文对ＴＧＦ－β、ＩＧＦ和ＰＤＧＦ对应力作用下成骨细胞增殖和分化调节的研究进展进行了综述。     

生长因子网络调节对骨形成作用的研究Ⅰ、TGF—β对人胚成骨样细胞增殖及分化的影响

在对人胚成骨样细胞分离培养的基础上，进一步探讨不同剂量转化生长因子-β（TGF-β）对人胚成骨样细胞DNA，胶原蛋白和碱性磷酸酶合成的影响。结果表明：TGF-β对体外培养的人胚成髓样细胞DNA合成有抑制作用。对胶原蛋白和碱性磷酸酶合成有促进作用。这两方面的作用在TGF-β0.01-1ng/ml间呈剂量依赖性，1ng/ml时的作用达到最强，本研究提示TGF-β在骨形成中的主要作用可能在于介导机体系统因素对骨细胞的作用。以及调控局部骨生长因子之间的相互作用。     

碱性成纤维细胞生长因子对成骨细胞和牙周膜成纤维细胞迁移、增殖的影响

目的　明确碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对体外成骨细胞和牙周膜成纤维细胞迁移、增殖的影响,以 探讨在牙种植体组织界面局部应用bFGF诱导类牙周膜形成的可行性。方法　同一只SD大鼠来源的成骨细胞和 牙周膜成纤维细胞经传代培养至第4代,建立体外创伤模型,分别在普通培养基和含bFGF的培养基中培养,观察 细胞迁移情况,四唑盐比色实验(MTT)测定细胞的增殖速度。结果　普通培养基中,成骨细胞迁移速度快于成纤维 细胞。加bFGF培养基中牙周膜成纤维细胞迁移速度明显快于其他各组,同时MTT结果显示加入bFGF能明显促进 两种细胞的增殖。结论　bFGF能明显促进牙周膜成纤维细胞的增殖、移行。     

格列美脲对大鼠下颌骨成骨细胞增殖分化及矿化的影响

目的:研究格列美脲对大鼠下颌骨成骨细胞增殖、分化及矿化的影响.方法:原代培养分离下颌骨成骨细胞,将细胞接种于96孔板中,分两组:5.5mM葡萄糖(5.5mMG)(生理浓度葡萄糖)组,5.5mMG +10μmol/L格列美脲组,继续培养7d,1)MTT法检测大鼠下颌骨成骨细胞的增殖;2)生化法测定7d碱性磷酸酶(ALP)活性;3)Western blots检测Ⅰ型胶原(ColⅠ)的表达;4)RT-PCR检测骨钙素(OCN)的表达.结果:格列美脲能显著促进成骨细胞的增殖,ALP活性,ColⅠ的蛋白和OCN的mRNA的表达.结论:格列美脲能促进大鼠下颌骨成骨细胞增殖、分化及矿化.     

生长因子网络调节对骨形成作用的研究Ⅲ.bFGF对人胚成骨样细胞增殖及分化的影响

目的：研究不同剂量碱性成纤维细胞生长因子（ｂＦＧＦ）对人胚成骨样细胞ＤＮＡ、胶原蛋白和碱性磷酸酶合成的影响。方法：实验分为４组，每组６孔，每组分别加入浓度为０．１ｎｇ／ｍｌ，１ｎｇ／ｍｌ，１０ｎｇ／ｍｌ，１００ｎｇ／ｍｌ的ｂＦＧＦ，每组均设空白对照，在实验后第１，３，５，７天分别检测人胚成骨样细胞３Ｈ－ＴｄＲ和３Ｈ－脯氨酸的掺入量，以及碱性磷酸酶合成量。结果：ｂＦＧＦ可明显促进人胚成骨样细胞的ＤＮＡ合成，但却抑制其胶原蛋白和碱性磷酸酶的合成，ｂＦＧＦ对人胚成骨样细胞具有双重效应。在含量为０．１～１０ｎｇ／ｍｌ，呈剂量依赖性，１０ｎｇ／ｍｌ时ｂＦＧＦ的作用最强。结论：ｂＦＧＦ在骨形成中有一定作用，但仍需与其他细胞生长因子协同作用     

rhBMP-7对大鼠成骨细胞增殖及分化能力的影响

目的研究重组人骨形态发生蛋白-7（recombinant human bone morphogenetic proteins,rhBMP-7）对大鼠成骨细胞增殖和分化能力的影响。方法从SD大鼠取材进行原代培养,经碱性磷酸酶（alkaline phosphatase,ALP）和矿化结节检测鉴定为成骨细胞后传代至第3代,接种至96孔培养板。分为A、B、C、D、E、F共6组,每组3个复孔,rhBMP-7浓度分别为0．000、0．500、1．000、5．000、10．000、50．000mg/L。应用四甲基偶氮唑盐（methyl thiazolyl tetrazolium,MTT）法及PNPP偶氮法,分析不同浓度rhBMP-7作用72h后对大鼠成骨细胞增殖和ALP活性的影响,应用单因素方差分析和LSD法统计数据。结果作用72h后,6种浓度rhBMP-7对大鼠成骨细胞ALP活性促进作用的差异有统计学意义（F=11．840,P=0．000）,B组成骨细胞ALP活性高于A组,但差异无统计学意义（P=0．078）,C、D、E、F组大鼠成骨细胞ALP活性均高于A组（P值均为0．000）,rhBMP-7浓度为50．000mg／L时对ALP活性的影响最明显（P=0．000）。作用72h后6种浓度rhBMP-7对大鼠成骨细胞增殖影响的差异有统计学意义（F=2．726,P=0．026）;rhBMP-7能促进大鼠成骨细胞的增殖和分化,同A组（rhBMP-7浓度为0．000mg／L）相比,当rhBMP-7浓度为50．000mg／L时并作用至第3天时,大鼠成骨细胞增殖最显著（P=0．000）。结论一定剂量的rhBMP-7明显促进了大鼠成骨细胞的增殖和分化。     

Hedgehog通路对成骨细胞增殖和分化的作用

目的:研究Hedgehog通路因子Shh和Ihh对成骨细胞增殖和分化的影响.方法:体外分离和培养新生大鼠颅顶骨成骨细胞,RT-PCR检测Shh和Ihh信号的表达;用HedgehogN端重组蛋白(N-Shh)及Hedgehog通道抑制剂Cyclopamine(cy)对成骨细胞进行干预,分别采用MTT比色法、流式细胞仪、碱性磷酸酶(ALP)定性定量、茜素红染色检测成骨细胞的增殖、分化及基质钙化情况:实时定量PCR检测Hedgehog通路相关基因Ptch和Smo的表达.采用SAS8.0软件包对数据进行t检验.结果:在成骨细胞体外生长过程中,Shh的表达逐渐减弱,而Ihh的表达逐渐增强;N-Shh促进成骨细胞的增殖(P<0.05)和S期细胞比例增加(P<0.05),促进ALP的活性并促进Ptch和Smo表达(P<0.05);cy则抑制成骨细胞的增殖和分化(P<0.05).结论:Hedgehog通路参与对成骨细胞增殖和分化的调节.     

淫羊藿苷对MC3T3-E1增殖及成骨分化的影响研究

目的：研究传统中药淫羊藿的主要活性成分淫羊藿苷(icariin,ICA)对小鼠颅顶前成骨细胞(preosteoblasts in mice calvarium,MC3T3-E1)的细胞活性及成骨分化的影响。方法：筛选出ICA的最佳干预浓度,将MC3T3-E1细胞分为空白对照组及不同浓度的实验组,实验组以含10^-9、10^-8、10^-7、10^-6、10^-5 mol/L的ICA完全培养液分别处理MC3T3-E1细胞。分别于培养2、4、6 d后用CCK8试剂盒检测MC3T3-E1细胞增殖能力;于培养3、6、9 d后用碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)试剂盒检测其ALP活性;根据检测结果,分别用完全培养液、成骨诱导液、含10^-7 mol/L的ICA完全培养液处理MC3T3-E1细胞21 d后,再分别作茜素红染色。结果：与空白对照组相比,药物处理组明显抑制了MC3T3-E1细胞的增殖,但促进了MC3T3-E1细胞的ALP活性;而不同浓度的I...     

rhVEGF对大鼠成骨细胞增殖及功能的影响

目的:研究rhVEGF对成骨细胞增殖和分化能力的影响。方法:采用细胞培养技术,应用光镜、MTT法及PNPP偶氮法,分别从细胞形态、细胞增殖及分化等特性,分析不同浓度的rhVEGF对成骨细胞增殖和碱性磷酸酶活性的影响。结果:rhVEGF能促进成骨细胞的增殖和分化,其中,在加入3.125ng/ml浓度的rhVEGF并于第3天时,成骨细胞增殖最显著;而12.5ng/ml组对碱性磷酸酶活性的影响最明显。结论:一定剂量的rhVEGF可明显促进成骨细胞的增殖和分化。     

染料木黄酮对成骨细胞增殖、分化和凋亡影响的实验研究

目的研究染料木黄酮对成骨细胞增殖、分化和凋亡的影响，以阐明其对骨形成的作用机制。方法酶消化和组织块相结合培养获得原代成骨细胞，并以成骨肉瘤细胞株UMR-106细胞作对照，加入不同浓度的染料木黄酮后，流式细胞仪和噻唑蓝比色法(MTT)检测成骨细胞细胞周期比例的改变以及凋亡情况；生化法检测细胞内碱性磷酸酶含量的改变。结果流式细胞分析和MT观测结果表明：染料木黄酮促进了原代成骨细胞由G0(G1)期向S期、G2期和M期的移行过渡，从而促进了原代成骨细胞的增殖。染料木黄酮对成骨肉瘤细胞株UMR-106细胞周期无影响，但可诱导UMR-106细胞凋亡。碱性磷酸酶检测结果表明：染料木黄酮可促进原代成骨细胞的分化。结论染料木黄酮可在一定程度上促进成骨细胞的增殖和分化，诱导成骨肉瘤细胞凋亡。     

格列美脲对高糖环境下大鼠下颌骨成骨细胞增殖、分化及矿化的影响

目的:探讨格列美脲对高糖培养的大鼠下颌骨成骨细胞增殖、分化和矿化功能的影响。方法:分离培养大鼠下颌骨成骨细胞,分别给予5.5 mmol/L(生理糖浓度)、16.5 mmol/L葡萄糖浓度的培养液培养,加入或不加入10μmol/L格列美脲后,用噻唑蓝法(MTT)观察成骨细胞7 d时的增殖情况,生化法测定7 d时的碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性,Western免疫印迹检测7 d和14d时Ⅰ型胶原(collagenⅠ,ColⅠ)的表达,实时定量PCR检测21 d时的骨钙素(osteocalcin,OCN)mRNA的表达,采用SPSS13.0软件包对数据进行统计学分析。结果:高糖浓度降低了成骨细胞的增殖、ALP活性和OCN的mRNA表达,提高了14 d时的ColⅠ的表达。格列美脲能够促进2种糖浓度下的成骨细胞增殖、ALP活性、ColⅠ的蛋白表达和OCN的mRNA表达。结论:高糖浓度降低了大鼠下颌骨成骨细胞的增殖、分化和矿化能力,在2种糖浓度下,格列美脲促进大鼠下颌骨成骨细胞的增殖、分化和矿化。     

静磁场对大鼠成骨细胞增殖分化功能的影响

目的研究静磁场刺激对成骨细胞的增殖和分化的影响,为临床选择合适的磁场参数,科学利用磁场疗法提供实验依据。方法体外培养Wistar大鼠颅骨成骨细胞,实验分为5组,分别置于0、40、62、83、108mT不同磁场强度的静磁场中作用24、48和72h,用噻唑兰(MTT)法检测成骨细胞的增殖情况;化学方法测定ALP酶的活性。结果随着细胞培养时间的增加,各组细胞出现不同程度的增殖和ALP活性增高,,以40mT和62mT组成骨细胞的增殖明显,与0mT组比较有显著性差异,P<0.05。结论一定强度的静磁场可以促进成骨细胞的增殖和分泌ALP的能力。     

生长因子网络调节对骨形成作用的研究Ⅳ.PDGF对人胚成骨样细胞增殖及分化的影响

目的：研究不同剂量血小板衍生性生长因子（ＰＤＧＦ）对人胚成骨样细胞增殖与分化的影响。方法：实验分为４组，每组６孔，每组分别加入浓度为０．１ｎｇ／ｍｌ、１ｎｇ／ｍｌ、１０ｎｇ／ｍｌ、１００ｎｇ／ｍｌ的ＰＤＧＦ，每组均设空白对照，在实验后第１、３、５、７天分别检测人胚成骨样细胞３Ｈ－ＴｄＲ和３Ｈ－Ｐｒｏｌｉｎｅ的掺入量，以及碱性磷酸酶合成量。结果：ＰＤＧＦ对人胚成骨样细胞的ＤＮＡ合成有明显的促进作用，０．１～１０ｎｇ／ｍｌＰＤＧＦ刺激成骨样细胞合成ＤＮＡ的作用最强，ＰＤＧＦ对人胚成骨样细胞胶原蛋白和碱性磷酸酶合成没有明显的促进和抑制作用。结论：ＰＤＧＦ在骨形成过程中不起主要作用或需与其它因子共同作用。     

生长因子网络调节对骨形成作用的研究Ⅰ.TGF-β对人胚成骨样细胞增殖及分化的影响

在对人胚成骨样细胞分离培养的基础上，进一步探讨不同剂量转化生长因子－β（ＴＧＦ－β）对人胚成骨样细胞ＤＮＡ、胶原蛋白和碱性磷酸酶合成的影响。结果表明：ＴＧＦ－β对体外培养的人胚成骨样细胞ＤＮＡ合成有抑制作用，对胶原蛋白和碱性磷酸酶合成有促进作用。这两方面的作用在ＴＧＦ－β０．０１～１ｎｇ／ｍｌ间呈剂量依赖性，１ｎｇ／ｍｌ时的作用达到最强。本研究提示ＴＧＦ－β在骨形成中的主要作用可能在于介导机体系统因素对骨细胞的作用，以及调控局部骨生长因子之间的相互作用     

牵张成骨对山羊下颌骨成骨细胞增殖节律的影响

目的　研究山羊下颌骨牵张成骨术后牵张区成骨细胞的增殖节律性。方法　选取48只健康山羊, 分为牵张成骨组和对照组2组,牵张成骨组进行牵张成骨术,术后4周,分别在0:00、4:00、8:00、12:00、16:00、 20:00时点处死两组动物,并取牵张成骨组右下颌骨颏孔区新骨组织、对照组右侧颏孔区骨组织各2 cm×2 cm× 0.5 cm进行原代细胞培养成骨细胞,采用流式细胞术对成骨细胞的增殖指数(PI)进行定量测定,并采用余弦分析法对两组细胞增殖的节律性进行分析。结果　牵张成骨组和对照组的PI均可拟合余弦曲线,牵张成骨组的调整值和振幅显著高于对照组(P<0·05),两组峰值相位无显著性差异(P>0·05),其峰值出现在19:47。结论　牵张成骨可增加成骨细胞的增殖活性,牵张后成骨细胞仍具有昼夜节律性变化。     

促矿化液对大鼠成骨细胞增殖分化的影响

目的比较大鼠成骨细胞在矿化条件与非矿化条件下增殖和分化的过程,评价促矿化液对其生理功能的影响,明确促矿化液加入细胞培养环境的适宜时间。方法取SD大鼠头盖骨做成骨细胞原代培养,将增殖稳定后的第4代细胞分别在矿化条件和非矿化条件下培养,检测其形态、碱性磷酸酶活性、细胞周期等。结果大鼠成骨细胞增殖基本稳定后促矿化液组与无促矿化液组细胞分裂增殖指数相似,但前者碱性磷酸酶活性明显较高且持久。结论成骨细胞增殖基本稳定后加入促矿化液对细胞增殖无影响,但可明显促进细胞矿化功能,是加入促矿化液诱导细胞矿化功能的较好时机。