端粒酶RNA反义寡核苷酸对人肺癌细胞端粒酶活性和细胞增殖的影响

目的 观察脂质体介导的端粒酶RNA反义寡核苷(ASODN)对人肺癌细胞系端粒酶活性的作用及其对癌细胞增殖的影响。方法 合成与人类端粒酶RNA模板区碱基序列互补的ASOND，并用阳离子脂质体转染剂DO-SPER介导，作用于人肺癌细胞系，空白组和正义寡脱氧核苷酸(SODN)作为对照。用以PCR为基础的端粒重复序列扩增法(TRAP)结合ELISA方法检测肺癌细胞的端粒酶活性。台盼蓝拒染法细胞计数、噻唑蓝(MTT)试验观察癌细胞增殖情况。结果 脂质体介导的抗端粒酶ASODN对肺癌细胞的端粒酶活性具有抑制作用；细胞计数和MTT试验显示肺癌细胞增殖速度明显减慢。结论 针对端粒酶模板区的ASODN可显抑制端粒酶活性和肺癌细胞的增殖，可运用于抗肿瘤实验性治疗和相关研究。     

白花蛇舌草对宫颈癌Hela细胞周期、凋亡及端粒酶活性的影响

目的研究中药白花蛇舌草（Hedyotic diffusa,HD）对人宫颈癌Hela细胞端粒酶活性、细胞周期及凋亡的影响,以探讨HD抑制Hela细胞肿瘤活性与端粒酶的关系。方法分别以不同的药物浓度作用于体外培养的Hela细胞,用PCR-TRAP-ELISA方法定量检测HD处理Hela细胞后其端粒酶活性水平,同步采用流式细胞仪检测细胞周期的变化及凋亡率。结果 Hela细胞端粒酶呈阳性,一定浓度的HD作用于Hela细胞一定时间后可使Hela细胞阻滞于S期,并可诱导其凋亡,而端粒酶活性明显降低。结论 HD可能通过改变Hela细胞周期分布（S期阻滞）并同时诱导细胞凋亡,下调其端粒酶活性而达到抗肿瘤作用。     

端粒酶反义寡核苷酸对膀胱癌端粒酶活性及细胞增殖的影响

目的 :探讨端粒酶反义核苷酸对膀胱癌的治疗作用。方法 :以端粒酶 RNA模板区为靶点 ,不同剂量的序列为 TAGGGTTAGACAA的硫代磷酸修饰的反义寡核苷酸 ( PS- ASON)作为实验组 ( A、B、C) ,以硫代磷酸修饰 1 3个核苷酸的随机引物作为对照组 ( D) ,仅加入培养基作为空白对照组 ( E) ,与人膀胱癌细胞株 BIU87细胞共同孵育 ,TRAP- ELISA方法检测端粒酶活性变化 ,计数1～ 30 d细胞数 ,计算细胞倍增时间 ,MTT法测定 ASON对细胞的抑制率。结果 :2 5例膀胱癌组织中 ,2 4例 ( 96% )表达端粒酶活性 ,4例癌旁组织无端粒酶活性表达。与随机引物及空白对照组比较 ,实验组的 ASON能明显降低端粒酶活性 ,减少细胞增殖数目 ,增加抑制率及延长倍增时间 ,并显示剂量的依赖性 ( P<0 .0 1 )。结论 :以端粒酶 RNA模板区为靶点的反义寡核苷酸引起膀胱癌 BIU87细胞端粒酶活性下降 ,增殖抑制 ,引起细胞退化 ,对膀胱癌的治疗有潜在的意义。     

人类端粒酶逆转录酶基因的反义寡核苷酸对HeLa细胞的端粒酶活性的研究

目的：研究人类端粒酶逆转录酶RNA(hTR)的反义寡核苷酸对HeLa细胞端粒酶活性的影响。方法：采用PCR-ELISA法检测Hela细胞在反义寡核甘酸处理前后端粒酶活性的变化。结果：经反义寡核苷酸处理后,HeLa细胞的生长受到抑制,端粒酶活性明显降低。结论：hTR的反义寡核苷酸显抑制肿瘤细胞的端粒酶活性,为恶性肿瘤治疗提供了一条新的有效的途径。     

脂质体介导端粒酶反义RNA对人乳腺癌细胞MCF-7活性及增殖的影响

目的:探讨经脂质体介导转染端粒酶反义RNA对MCF-7细胞端粒酶活性及细胞增殖的影响。方法:用脂质体介导法将pBBS212-hTR(反义端粒酶RNA真核表达载体)导入人乳腺癌细胞MCF-7中,采用TRAP-PCR-ELISA法测定端粒酶活性,四唑盐比色(MTT)法检测MCF-7细胞的增殖,FCM分析等方法观察其对MCF-7细胞的增殖影响。结果:端粒酶反义RNA能显著抑制MCF-7细胞的端粒酶活性,抑制MCF-7细胞的增殖并诱导其凋亡。结论:脂质体转染反义端粒酶RNA在封闭细胞端粒酶活性表达的同时,可促进MCF-7细胞凋亡。     

端粒酶反义寡核苷酸对MCF-7细胞端粒酶活性及细胞生长的影响

为探讨端粒酶反义寡核苷酸对人乳腺癌MCF-7细胞端粒酶活性及细胞生长的影响,应用与人端粒酶RNA组分(hTR)模板区互补的硫代反义寡核苷酸处理MCF-7细胞.发现经反义hTR寡核苷酸作用后,细胞端粒酶活性明显受到抑制,至作用后72 h,端粒酶活性较对照组降低61.0%(P<0.05);细胞生长明显受到抑制;细胞周期发生显著变化,G0/G1期细胞数增多,S期及G2/M期细胞数则减少;细胞增殖指数由0.46降低至0.29;并可观察到凋亡细胞的出现,凋亡发生率为10.7%;而无义寡核苷酸处理组及空白对照组以上各指标均无明显变化.提示端粒酶反义寡核苷酸可明显抑制乳腺癌细胞端粒酶活性,抑制细胞生长和增殖,诱导细胞凋亡;表明应用反义技术抑制端粒酶活性治疗乳腺癌可能具有广阔的前景.     

端粒酶RNA反义寡核苷酸对鼻咽癌HNE-1细胞生长的影响

目的检测针对端粒酶RNA的反义寡核苷酸对鼻咽癌HNE-1细胞株生长的影响。方法用PCR—ELISA法检测细胞内端粒酶活性。采用MTT法及平板集落形成实验评价细胞增殖活性。采用电镜观察细胞超微结构的改变。结果端粒酶RNA反义寡核苷酸作用HNE-1细胞后,细胞端粒酶活性受到明显抑制;细胞增殖受到明显抑制,此作用有剂量、时间依赖性和序列特异性;电镜发现少量细胞肿胀坏死,但未见细胞凋亡和大片坏死灶。结论端粒酶RNA反义寡核苷酸可抑制鼻咽癌HNE-1细胞的生长。     

降低端粒酶表达对人喉癌细胞系Hep-2生长的影晌

目的：用表达端粒酶反义RNA的方法研究端粒酶在喉癌细胞生长中的作用。方法：将端粒酶反义RNA真核表达载体，pBBS212-hTR转染入人喉癌Hep-2细胞系中，采用端粒重复扩增法测定端粒酶活性，用MTT法及流式细胞仪检测细胞周期，并用电镜观察细胞生长状况。结果：端粒酶反义RNA表达后能抑制Hep-2细胞的端粒酶活性，抑制细胞增殖并促进其凋亡.结论：以端粒酶反义RNA降低端粒酶的方法对人喉癌细胞系Hep-2的生长有明显抑制作用。     

MMP-2、CD44v6、端粒酶活性与宫颈癌的相关性研究

目的：探讨MMP-2、CD44v6、端粒酶活性与宫颈癌的关系。方法：采用免疫组织化学S-P法和银染色端粒酶重复扩增法分别检测62例宫颈癌对MMP-2、CD44v6、端粒酶的表达情况并进行统计学分析。结果：正常宫颈组织对MMP-2、CD44v6呈低表达，其端粒酶活性低。而在宫颈癌组织中MMP-2、CD44v6均呈高表达，其端粒酶的活性增强。有淋巴结转移组其MMP-2、CD44v6呈过高表达，端粒酶活性明显增强，与无淋巴结转移组比较有显著性差异。结论：MMP-2、CD44v6、端粒酶的表达与宫颈癌有关。且MMP-2、CD44v6、端粒酶阳性表达组织具有淋巴结转潜能。     

端粒酶反义RNA对人髓性白血病细胞系HL-60的作用

目的 探讨抗端粒酶在急性白血病治疗中的意义。方法 用脂质体介导法将pBBS212-hTR(反义端粒酶RNA真核表达载体）导入人髓性白血病细胞系HL-60中,采用TRAP法测定端粒酶活性,细胞生长动力学检测,电镜,DNA片段分析等方法观察其对HL-60细胞的端粒酶活性、细胞增殖及细胞凋亡影响。结果 端粒酶反义RNA能显抑制HL-60细胞的端粒酶活性,抑制HL-60细胞的增殖并促进其凋亡。结论 以端粒酶反义RNA抑制端粒酶活性是治疗白血病的潜在途径。     

Effect of antisense oligonucleotides of telomerase on the growth of RCZ cells derived from renal cell carcinoma in culture

目的 :研究端粒酶反义抑制剂对肿瘤细胞的影响。方法 :以端粒酶 RNA模板区为靶点 ,序列为 TAGGGTTAGACAA的硫代磷酸修饰的反义寡核苷酸 ( PS- ASON)及 1 3个寡核苷酸的随机引物与肾癌细胞株 RCZ细胞共同孵育 ,计数 1～ 43d细胞数 ,计算细胞倍增时间 ,通过 MTT法测定 ASON对细胞生长的抑制率。结果 :ASON实验组与随机引物对照组比较能明显减少细胞增殖数目 ( P<0 .0 1 )、增加抑制率 ( P<0 .0 1 )及延长倍增时间 ( P<0 .0 0 5) ;并且其抑制效果显示出剂量的依赖性 ( P<0 .0 5) ,具有序列选择特异性。结论 :以端粒酶 RNA模板区为靶点的反义寡核苷酸抑制肾癌 RCZ细胞增殖 ,可能对肿瘤治疗有潜在的意义     

端粒酶反义寡核苷酸对膀胱癌治疗作用的体外实验

目的：探讨端粒酶反义核苷酸对膀胱癌的治疗作用。方法：用TRAP-银染方法检测25例膀胱癌组织和4例癌旁组织中端粒酶活性的表达。以端粒酶RNA模板区为靶点,不同剂量的序列为TAGGGTTAGACAA的硫代磷酸修饰的反义寡核苷酸（PS-ASON）作为实验组（A、B、C）,以硫代磷酸修饰 13个核苷酸的随机引物作为对照组（D）,仅加入培养液作为空白对照组（E）,与人膀胱癌细胞株BIU87细胞共同孵育1~30 d,计细胞数,光镜及电镜观察,DNA凝胶电泳检测、流式细胞仪测定和分析细胞的凋亡和坏死。结果：25例膀胱癌组织中,24例（96%）表达端粒酶活性,4例癌旁组织无端粒酶活性表达。与随机引物及空白对照组比较,实验组的ASON能明显减少细胞增殖数目,实验组细胞在第2、8天及8天后出现较明显的凋亡峰和DNA梯状电泳带,并出现退化、老化、凋亡和坏死的形态学变化,凋亡率明显增高（P<0.001）,并显示剂量的依赖性（P<0.01）。 结论：以端粒酶RNA模板区为靶点的反义寡核苷酸引起膀胱癌BIU87细胞增殖抑制,退化、老化、凋亡和坏死,对膀胱癌的治疗有潜在的意义。     

人类端粒酶基因反义核酸对Hep-2细胞端粒酶活性的影响

目的 :研究人类端粒酶RNA(hTR)的反义核酸对Hep 2细胞端粒酶活性的影响。方法 :采用TRAP法检测Hep 2细胞在反义核酸处理前后端粒酶活性的变化。结果 :hTR反义核酸能有效抑制Hep 2细胞的端粒酶的活性。结论 :hTR反义核酸能显著抑制肿瘤细胞的端粒酶活性 ,为恶性肿瘤治疗提供了一条新的有效的途径     

反义hTR对人胃癌细胞株SGC-7901恶性表型的逆转作用

目的 探讨反义ｈＴＲ基因转染对胃癌细胞系ＳＧＣ－７００１恶性有型的逆转作用及其在肿瘤基因治疗中的价值。方法 构建包含端粒重复序列模板区的反义ｈＴＲ基因真核表达载体用脂质体法将其转染率胃癌细胞系ＳＧＣ－７９０１,比较观察反义ｈＴＲ基因转染后７９０１细胞的ｈＴＲＲＮＡ表达、端粒酶活性、体外生长增殖降低,体外生长增殖能力降低,接触抑制恢复、细胞凋亡率增加、软琼脂集落形成能力和裸鼠体内致瘤能力完全消失。结     

反义寡核苷酸对胆囊癌细胞端粒酶活性的作用

目的：探讨反义寡核苷酸对胆囊癌细胞端粒酶活性的影响及对胆囊癌细胞生长增殖的作用。方法：设计针对端粒酶RNA亚基模板序列并经硫代磷酸修饰的反义、正义和随机序列寡核苷酸，并以正常人成纤维细胞作对照，观察其对人胆囊癌细胞(GBC-SD)端粒酶活性和细胞生长增殖的影响以及对正常人成纤维细胞的作用。结果：反义寡核苷酸可有效地抑制GBC-SD的端粒酶活性，呈剂量依赖性，并明显地抑制GBC-SD的生长，对正常人成纤维细胞生长无明显作用。结论：硫代反义寡核苷酸对胆囊癌端粒酶活性有明显的抑制作用。