氧化低密度和极低密度脂蛋白对单核细胞血小板源性生长因子B链表达的影响

在单核细胞的培养基中分别加入25mg·L^-1低密度脂蛋白(lowdensitylipoprotein,LDL)、氧化LDL(oxidizedLDL,OLDL)、极低密度脂蛋白(verylowdensiylipoprotein,VLDL)和氧化极低密度脂蛋白(oxidizedVLDL,OVLDL),培养24h后再用无血浆脂蛋白培养基收集条件培养基,并观察此条件培养基对￣3H-TdR投入血管壁平滑肌细胞DNA的影响。用抗血小板源性生长因子B链抗体(抗PDGF-B抗体)作疫组织化学染色。结果表明,单核细胞能表达PDGFB,OLDL和OVLDL能明显地促进单核细胞PDGF-B的表达,其条件培养基亦能促进￣3H-TdR掺入平滑肌细胞DNA内。上述结果提示,OLDL和OVLDL通过加强单核细胞分泌PDGF-B并促进平滑肌细胞增殖而在动脉粥样硬化的发病过程中起作用。     

氨氯地平对氧化型低密度脂蛋白诱导的人脐静脉内皮细胞血小板源性生长因子B mRNA表达的影响

目的 观察氨氯地平对氧化型低密度脂蛋白诱导的HUVEC-12内皮细胞中血小板源性生长因子B mRNA表达的影响,从一个新的角度探讨氨氯地平的抗动脉粥样硬化作用机制.方法 预实验筛选出氧化型低密度脂蛋白对血小板源性生长因子B表达适宜的处理浓度(50 mg/L)与时间(24 h).实验分为5组:对照组、氧化型低密度脂蛋白组和三个不同剂量(0.1、1.0和10.0 μmol/L)氨氯地平组,用RT-PCR检测血小板源性生长因子B mRNA的表达.结果 以50 mg/L氧化型低密度脂蛋白刺激HUVEC-12内皮细胞24 h.随着预处理氨氯地平浓度增加,细胞血小板源性生长因子B mRNA的表达逐渐降低,并呈现浓度依赖性,当浓度为10.0 μmol/L时作用更明显.结论 氧化型低密度脂蛋白可影响HUVEC-12内皮细胞中血小板源性生长因子B mRNA的表达,氨氯地平可下调氧化型低密度脂蛋白诱导的HUVEC-12内皮细胞中血小板源性生长因子B mRNA的表达.     

氧化低密度脂蛋白在血管平滑肌细胞增殖过程中对血小板源性生长因子的作用

低密度脂蛋白是动脉粥样硬化的危险因子,而低密度脂蛋白氧化修饰成氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)则增加了它的致动脉粥样硬化性。ox-LDL能诱导血管平滑肌细胞(VSMC)增殖,是致动脉粥样硬化的重要因素。近年来,从细胞信号、内含增殖活性成分、生长因子、及氧化效应等方面深入探讨了其作用机制。众所周知,血小板源性生长因子(PDGF)是强有力的促有丝分裂剂,在VSMC增殖及动脉粥样硬化发展过程中发挥重大作用,现就ox-LDL在致血管平滑肌细胞增殖过程中对PDGF的影响进行综述,揭示ox-LDL致动脉粥样硬化的机制,从而帮助了解临床药物治疗可能的途径。     

巨噬细胞氧化修饰极低密度脂蛋白及Cu2+修饰的极低密度脂蛋白对单核细胞与内皮细胞粘附的影响

极低密度脂蛋白(VLDL)与小鼠腹腔巨噬细胞温育24小时和48小时后,其硫代巴比妥酸反应物质值明显高于无细胞对照组,琼脂糖电泳速度也加快,两者一致。结果说明小鼠腹腔巨噬细胞可以氧化修饰极低密度脂蛋白。VLDL在体外用Cu~(2+)修饰后。硫代巴比妥酸反应物质明显增加,琼脂糖凝股电泳速度加快。比较正常的VLDL(n—VLDL)及Cu~(2+)氧化的VLDL(Ox—VLDL)对内皮细胞粘附单核细胞的影响时,发现在所用各种浓度下,Ox—VLDL单核细胞的粘附率比n—VLDL组大得多(P<0.0001),说明VLDL被氧化后明显增加单核细胞与内皮细胞的粘附。     

血小板源生长因子BB二聚体对单核细胞粘附血管内皮的影响

为探讨曾被认为是单核细胞趋化物的血小板源生长因子ＢＢ二聚体是否可促进单核细胞粘附血管内皮，用单层血管内皮细胞作为血管内皮模型，进行经或未经致炎因子（１００ｇ／Ｌ脂多糖和５０ｇ／Ｌ肿瘤坏死因子）预处理的单核细胞粘附试验。结果发现，致炎因子可明显促进单核细胞粘附于单层内皮细胞。１、１０和１００ｇ／Ｌ的血小板源生长因子ＢＢ二聚体对单核细胞粘附血管内皮均无直接影响。但１０ｇ／Ｌ和１００ｇ／Ｌ的血小板源生长因子ＢＢ二聚体可明显增强致炎因子对单核细胞粘附单层血管内皮细胞的促进作用。此实验结果提示，血小极源生长因子ＢＢ二聚体本身不是单核细胞趋化物，但可与某些单核细胞活化因子协同作用，促进单核细胞粘附于血管内皮。     

血小板源性生长因子受体表达和活性的调控机制

PDGF-A、PDGF-B及相应受体于20多年前已经分离成功。随着PDGF-C和PDGF-D等新家族成员的不断发现,PDGF系统越来越复杂。与PDGF在细胞生长和生存中的重要作用相一致的是,PDGF受体的表达和活性受到正反馈及负反馈机制的严密调控。调控机制下调可能导致慢性炎症反应和肿瘤等严重疾病的发生。正确认识PDGF及其受体有助于疗效更佳的药物出现。     

血小板源性生长因子影响血管弹性蛋白酶表达

探讨球囊损伤后血管平滑肌细胞丝氨酸弹性蛋白酶表达增加的机理。用球囊导管损伤Wistar系雄性大鼠主动脉或颈总动脉。以血小板源性生长因子A和大鼠胰腺丝氨酸弹性蛋白酶的地高辛标记RNA探针进行原位杂交，并用抗5-溴脱氧尿嘧啶抗体进行双重染色。用抗血小板源性生长因子从、抗血小板源性生长因子BB、抗胰腺弹性蛋白酶、抗人增殖细胞核抗原等抗体进行免疫染色或免疫双重染色。电镜观察细胞的超微结构。结果发现：①在球囊损伤后O．5～4h，血小板源性生长因子mRNA表达细胞多于弹性蛋白酶mRNA表达细胞；②增殖细胞和迁移细胞既有血小板源性生长因子mRNA和其蛋白表达，又有弹性蛋白酶mRNA和其蛋白表达；③迁移细胞多为增殖细胞核抗原染色阳性．细胞内可见到核分裂像。提示血小板源性生长因子可能是刺激中膜平滑肌细胞增殖、迁移并使其弹性蛋白酶增加的影响因子之一。     

血小板源性生长因子B及其受体在豚鼠哮喘模型气道中的表达

血小板源性生长因子Ｂ及其受体在豚鼠哮喘模型气道中的表达戚好文吕坤聚李焕章李玉松王文勇血小板源性生长因子Ｂ（ＰＤＧＦ－Ｂ）是一种由ｃ－ｓｉｓ原癌基因编码的多肽类生长因子，参与多种疾病的发病过程，但其是否参与哮喘发病目前尚未完全阐明。本研究应用免疫组织化...     

氧化低密度和极低密度脂蛋白对单核细胞的趋化性研究

用改良的Boyden小室微孔滤膜法检测低密度脂蛋白、极低密度脂蛋白及氧化低密度脂蛋白和极低密度脂蛋白对人血单核细胞的趋化作用。结果表明,低密度脂蛋白对单核细胞具有趋化活性,而且当其被氧化后,对单核细胞的趋化活性明显增强。极低密度脂蛋白对单核细胞无趋化活性,而氧化极低密度脂蛋白对单核细胞有明显的趋化活性。     

天然和氧化型极低密度脂蛋白对巨噬细胞胞内游离钙浓度的影响

为了更好地阐明极低密度脂蛋白，尤其是氧化型极低密度脂蛋白在动脉粥样硬化发病过程中的作用机制，本文利用双波长显微分光光度计，检测了天然和氧化型极低密度脂蛋白对巨噬细胞内游离钙浓度（Ｃａ＾２＋）的影响，结果表明，极低密度脂天蛋和氧化型极低密度脂蛋均能刺激巨噬细胞（Ｃａ＾２＋）ｉ升高，极低密度脂蛋白可增加巨噬细胞（Ｃａ＾２＋）ｉ的５７％，而氧化型极低密度脂蛋白则增加巨噬细胞（Ｃａ＾２＋）ｉ的１１５％。这     

氧化型低密度脂蛋白促进单核细胞-内皮细胞体外粘附反应

体外培养猪胸主动脉内皮细胞，观察氧化型低密度脂蛋白对内皮细胞－单核细胞体外粘附反应的影响同时观察氧化型低密度脂蛋白对内皮细胞表面粘附分子颗粒膜蛋白－１４０及内皮细胞分泌前列环素的影响。     

内源性高甘油三酯血症患者体内存在氧化型低密度脂蛋白、极低密度脂蛋白和高密度脂蛋白

为探讨内源性高甘油三酯血症患者体内低密度脂蛋白、极低密度脂蛋白及高密度脂蛋白是否发生氧化修饰，对25例内源性高甘油三酯血症患者与25例年龄性别相匹配的正常人的血糖、血脂、载脂蛋白及脂过氧化物进行了分析，并对其血浆低密度脂蛋白、极低密度脂蛋白及高密度脂蛋白的电泳迁移率、234nm光吸收和硫代巴比妥酸反应物质含量的改变进行了测定。结果表明，内源性高甘油三酯血症患者血浆甘油三酯、脂过氧化物和载脂蛋白B100、CⅢ、CⅢ及E显著升高（P＜0．01），高密度脂蛋白和载脂蛋白AⅠ显著降低（P＜0．01），低密度脂蛋白、极低密度脂蛋白和高密度脂蛋白电泳迁移率均较正常人相应脂蛋白的迁移率增加，234nm光吸收及硫代巴比妥酸反应物质含量均显著增加（P＜0．01）。说明内源性高甘油三酯血症患者不仅血浆低密度脂蛋白、而且极低密度脂蛋白和高密度脂蛋白均发生了氧化修饰。     

内源性高甘油三酯血症患者体内存在氧化型低密度脂蛋白、极低密度脂蛋白和高密度脂蛋白

为探讨内源性高甘油三酯血症患者体内密度脂蛋白、极低密度脂蛋白及高密度脂蛋白是否发生氧化修饰，对２５例内源性高甘油三酯血症患者与２５例年龄性别相匹配的下沉人的血糖、血脂、载脂蛋白及脂过氧化物进行了分析，并对其血浆低密度脂蛋白、极代旨蛋白及高密度脂蛋白的电泳移率、２３４ｎｍ光吸收和硫代巴比妥酸反应物质含量的改变     

氧化型低密度脂蛋白促进单核细胞－内皮细胞体外粘附反应

体外培养猪胸主动脉内皮细胞，观察氧化型低密度脂蛋白对内皮细胞－单核细胞体外粘附反应的影响，同时观察氧化型低密庆脂蛋白对内皮细胞表面粘附分子颗粒膜蛋白－１４０及内皮细胞分泌前列环素的影响。结果发现氧化型低密度脂蛋白（０、５０、１００和２００ｍｇ／Ｌ）增加内皮细胞－单核细胞粘附率并呈剂量依赖性，其中以１００ｍｇ／Ｌ作用最强；氧化型低密度脂蛋白（１００ｍｇ／Ｌ）与内皮细胞孵育０．５ｈ，粘附率上升但无显著性，１ｈ后显著升高，３ｈ达高峰，４８ｈ回复接近正常水平。同时发现１００ｍｇ／Ｌ氧化型低密度脂蛋白使内皮细胞表面颗粒膜蛋白－１４０含量从９２．８±４７．６上升到２９３．０±１４０．７μｇ／Ｌ（Ｐ＜０．０５），内皮细胞分泌前列环素量从８４．６±１８．７降低到６．０±３．１ｎｇ／Ｌ（Ｐ＜０．０１）．结果表明氧化型低密度脂蛋白可显著促进单核细胞－内皮细胞粘附，其作用机制可能同内皮细胞表面粘附分子颗粒膜蛋白－１４０增加有关。关键词     

高密度脂蛋白对氧化型低密度脂蛋白抑制的血管平滑肌细胞一氧化氮释放的影响

为观察高密度脂蛋白是否能损坏抗氧化型低密度脂蛋白对血管平滑肌细胞释放一氧化氮的抑制作用，培养了人脐动脉平滑肌细胞并用脂多和γ－博古纱诱导一氧化氮的释放。应用ＧＲＩＥＳＳ试剂测定细胞培养基中亚硝酸盐的含量，以免疫组织化学染色和逆转录－聚合酶链反应分析导型一氧化氮合酶基因的表达。结果发现，氧化型低密度脂蛋白可使脂多糖和γ－干扰素诱导的平滑肌细胞一氧化氮合酶及其ｍＲＮＡ水平下降，抑制一氧化氮释放。而高密     

高密度脂蛋白对氧化型低密度脂蛋白抑制的血管平滑肌细胞一氧化氮释放的影响

为观察高密度脂蛋白是否能拮抗氧化型低密度脂蛋白对血管平滑肌细胞释放一氧化氮的抑制作用，培养了人脐动脉平滑肌细胞并用脂多糖和γ-干扰素诱导一氧化氮的释放。应用GRIESS试剂测定细胞培养基中亚硝酸盐的含量．以免疫组织化学染色和逆转录--聚合酶链反应分析诱导型一氧化氮合酶基因的表达。结果发现，氧化型低密度脂蛋白可使脂多糖和γ-干扰素诱导的平滑肌细胞一氧化氮合酶及其mRNA水平下降、抑制一氧化氮释放。而高密度脂蛋白能拮抗氧化型低密度脂蛋白对平滑队细胞释放一氧化氮的抑制作用。0．25g／L高密度脂蛋白即能显著增加一氧化氮的释放（P＜0．05），高密度脂蛋白浓度达到1．5g／L可使得一氧化氮的释放增加4．5倍。结果表明，高密度脂蛋白能提高一氧化氮合酶基因表达水平，促进一氧化氮的释放。高密度脂蛋白的作用具有浓度效应。     

氧化型低密度脂蛋白对人血单核细胞基质金属蛋白酶表达及活性的影响

探讨氧化修饰低密度脂蛋白对人单核细胞源巨噬细胞基质金属蛋白酶的表达及其活性的影响。采用体外培养人单核细胞源巨噬细胞，分别应用逆转录聚合酶链式反应和蛋白印迹检测基质金属蛋白酶2和基质金属蛋白酶9基因和蛋白表达，酶谱法检测基质金属蛋白酶活性。结果发现，不同浓度(10、20、40mg/L)氧化修饰低密度脂蛋白对人单核细胞源巨噬细胞基质金属蛋白酶2和基质金属蛋白酶9基因表达的影响均明显高于相应浓度低密度脂蛋白组；基质金属蛋白酶2和基质金属蛋白酶9蛋白表达也明显高于相应浓度低密度脂蛋白组；基质金属蛋白酶2和基质金属蛋白酶9的活性明显高于相应剂量低密度脂蛋白组，又随剂量增加而增高。提示氧化修饰低密度脂蛋白可刺激人单核细胞源巨噬细胞基质金属蛋白酶2、基质金属蛋白酶9基因及蛋白的表达，增强其活性，因而有可能促进动脉粥样硬化斑块内基质降解，形成易损斑块，而易损斑块破裂可引起急性冠状动脉事件。