HCV感染的献血者血清中病毒量的检测及分析

选取１６名经血清ＨＣＶ－ＲＮＡＰＣＲ测定为阳性的ＨＣＶ感染的献血者进行血清病毒含量的检测。这些献血者发生ＨＣＶ感染的期限约２年，其ＨＣＶＲＮＡ含量在１０３．５～１０５．５拷贝／ｍｌ，随着血清中ＨＣＶＲＮＡ含量的增加，ＡＬＴ水平异常者的数量似亦相应增加。由于这些ＨＣＶ感染的献血者均未经过任何与肝炎有关的治疗，所以继续追踪观察的结果将有助于评价血清中病毒含量与ＨＣＶ致病及预后的关系。     

丙型肝炎病毒抗体联合核酸定量检测对丙型肝炎患者的早期诊断价值研究

目的：探讨在丙型肝炎患者早期诊断中丙型肝炎病毒抗体联合丙型肝炎病毒核酸（HCV RNA）检测的临床价值。方法对116例鼓楼医院住院及门诊丙型肝炎患者采用实时荧光定量聚合酶链反应（FQ-PCR）测定HCV RNA、酶联免疫吸附试验（ELISA）和金标法测 HCV抗体、速率法测丙氨酸氨基转移酶（ALT ）。结果116例丙型肝炎患者中,ELISA HCV抗体阳性97例（占83．6％）,HCV RNA阳性85例（占73．3％）,HCV 金标阳性77例（占66．4％）,ALT阳性69例（占59．5％）,HCV抗体和 HCV RNA联合检测总阳性率（指任-指标阳性即为阳性）为100．0％。结论 HCV抗体和HCV RNA联合检测扩大了丙型肝炎检测范围,降低了丙型肝炎的漏诊率,有利于丙型肝炎的早期诊断。     

丙型肝炎抗原检测

目的探讨在HCV感染早期,HCV Ab为阴性时用酶联免疫法检测HCV核心抗原的试验方法的可行性。方法用重组HCV核心抗原,免疫小鼠制备单克隆抗体,对HCV核心抗原进行酶联免疫法检测。结果HCV核心抗原检测灵敏度高可达5ng/ml,用酶联法对11份HCV Ab阴性,HCV RNA阳性标本检测9份阳性。结论酶联免疫法检测HCV核心抗原可作为HCV感染早期的抗原检测方法,较HCV RNA检测法简便、快速,可以作为核酸检测法的一种简易替代方法。     

安徽、河南、山西3省自愿咨询检测人群HIV/HCV共感染及HCV基因亚型初步分析

目的了解目前我国安徽、河南、山西3省自愿咨询检测(VCT)人群HIV感染者中HIV/HCV共感染率及HCV亚型的分布情况。方法对来自安徽、河南、山西3省VCT人群中HIV阳性样本进行HCV抗体检测并对HCV阳性的样本进行HCVC/E1区RT-PCR扩增、基因测序,分析HCV的亚型分布。结果在HIV阳性的382份样本中,检出HCV阳性215份,3省VCT人群HIV感染者中HIV/HCV共感染率平均为56.3%,安徽、河南、山西3省分别为50.0%、59.3%、42.9%。其中,经血传播人群的HIV/HCV共感染率为72.1%,经性传播人群为33.3%,其它途径人群为36.6%。HCV PCR扩增成功98份,1b亚型69份(70%),2a亚型28份(29%),3a亚型1份(1%)。结论安徽、河南、山西VCT人群具有较高的HIV/HCV共感染率;经性传播人群HIV/HCV共感染率高于国外水平;HIV/HCV共感染对HCV亚型分布无显著影响。     

Efficacy of HCV core antigen detection during the preseroconversion period

BACKGROUND: The purpose of this study was to compare the performances of HCV core antigen (HCV Ag) testing with HCV RNA detection during the preseroconversion period. STUDY DESIGN AND METHODS: Six HCV antibody (HCV Ab)-negative and HCV RNA-positive blood samples from 6 donors and 135 serial samples from 28 patients who had undergone hemodialysis, collected a mean of 90 days before the detection of HCV Ab, were tested by ELISA for the detection of HCV Ag and by PCR to quantify HCV RNA. RESULTS: Five of the six donors were positive for HCV Ag. The donor with a negative HCV Ag test had the lowest viral load. In the hemodialysis patients, the 43 first specimens of the series were HCV RNA negative. Of the 92 specimens that were HCV RNA positive, 81 (88%) were positive for HCV Ag. Among the 74 samples with more than 10(5) RNA copies, 71 (96%) were HCV Ag positive. Average time from first viremic bleed to first HCV Ag-positive bleed was estimated at 2.0 days and that to first HCV Ab-positive bleed at 50.8 days. CONCLUSION: HCV Ag testing permits the detection of an HCV infection about 1.5 months earlier than the HCV Ab screening tests and an average of only 2 days later than quantitative HCV RNA detection in individual specimens.     

Performance comparison of new generation HCV core antigen test versus HCV RNA test in management of hepatitis C virus infection

The study has evaluated the performance of HCV core antigen (Cag) test by comparing HCV RNA PCR assay which is considered the gold standard for management of HCV infection.Totally, 132 samples sent for HCV RNA (real-time PCR) test were included in the study. Anti-HCV antibody test and HCV Cag test were performed by chemiluminescent enzyme immunoassay (CMEI).Anti-HCV test was positive in all samples. HCV RNA was detected in 112/132 (84.8%) samples, and HCV Cag in 105/132 (79.5%). The most common HCV genotype was genotype 1 (86%). Considering the HCV RNA test as gold standard; the sensitivity, specificity, positive predictive value, negative predictive value and accuracy of Cag test were found to be 93.75%, 100%, 100%, 74.07% and 94.69%, respectively, and paired test results were detected as highly concordant. A high level of correlation was seen between HCV RNA and Cag tests, however, the concordance between the two tests appeared to be disrupted at viral loads lower than 10³ IU/mL. On the contrary, the correlation reached significance for the values higher than 10³ IU/mL. Viral loads were in the 17–2500 IU/mL range for the negative results for Cag test. Pearson's correlation coefficient revealed a considerably high correlation.The concordance between HCV RNA and Cag tests was disrupted under a viral load lower than 10³ IU/mL. Therefore, it would be appropriate to consider cost effectiveness, advantages and limitations of the HCV RNA and Cag tests during the decision on which method to use for patient management.     

HCV核心抗原酶联免疫检测与HCV—RNA定量检测敏感性的比较

[目的]比较ELISA法测定总HCV—cAg与荧光定量PCR法测定HCV—RNA两种检测方法对诊断HCV感染的敏感性,分析HCV—cAg ELISA法诊断试剂的重要意义。[方法]ELISA法测定血清样本中的HCV抗体,改进型ELISA法测定血清样本中的HCV—cAg,实时荧光定量PCR法测定血清样本中的HCV—RNA,阳性样本经重复实验确认。[结果]通过用HCV抗体检测试剂对门诊病人或献浆员进行筛查,获得HCV抗体阳性血清样本264例。对这些病例别进行ELISA法测定总HCV—cAg实验和荧光定量PCR法测定HCV—RNA实验,测到HCV—cAg阳性病例101例,HCV—RNA阳性病例115例。经统计学分析,两种检测方法的敏感性差别不太大（0．01〈P〈0．05）。[结论]HCV—cAgELISA法检测和HCV—RNA定量检测具有相近的敏感性,日存某种稗序上HCV—cAg ELISA法榆测可以作为HCV—RNA定量榆测的有效替代。     

HCVRNA定量及HCV核心抗原和丙氨酸氨基转移酶结果分析

目的分析丙型肝炎病毒(HCV)RNA定量检测结果与HCV核心抗原及丙氨酸氨基转移酶(ALT)检测结果的相关性。方法收集涪陵监狱卫生所94例住院和门诊患者血清,采用逆转录聚合酶链反应荧光探针法定量检测标本中的HCV RNA,同时采用酶联免疫吸附试验检测HCV核心抗原,采用全自动生化分析仪检测ALT水平。结果 94例样本中HCV RNA阳性率为56.4%(53/94),HCV核心抗原阳性率为53.2%(50/94),经统计学分析,两种方法的阳性率差异无统计学意义(P>0.05),符合率为84.9%(45/53);ALT异常率为62.3%(33/53),随着HCV RNA含量的升高而增加。结论 HCV RNA定量检测结合HCV核心抗原及ALT检测,可帮助临床了解HCV在体内的复制水平及肝脏的炎性反应状态,以指导临床用药及疗效观察。     

双抗原夹心酶联免疫技术检测丙型肝炎病毒抗体

1993年3月，国家卫生部下发文件要求对献血员进行抗HCV抗体的检测，随后有10几家检测HCV抗体的ELISA试剂上市，并进行批批检定，但全是间接ELISA法。由于间接法技术自身的缺陷及各生产厂家的产品存在一定的质量问题，导致了一些误诊和漏检。为此，应从根本上解决试剂本身的质量问题，建立双抗原夹心ELISA技术检测抗HCV抗体可大大提高检测试剂的特异性和敏感性。目前双抗原夹心法大多用于检测抗HIV和Tp抗体。此类试剂的敏感性和特异性均优于标记抗人免疫球蛋白的间接法。而丙型肝炎病毒抗体的检测仍采用间接ELISA技术，目前已有快速金标试剂采用双抗原夹心法原理，通过免疫层析检测抗HCV抗体。但灵敏度较低，不能用于献血员的筛选。我们通过对基因工程抗原进行改造，以适应标记辣根过氧化物酶，建立双抗原夹心ELISA法检测抗HCV抗体。     

丙型肝炎病毒E1基因的克隆、表达、序列分析及定点突变

目的 :为了获得具有完整框架的HCVE1基因。方法 :用RT PCR从HCV(+)血清中扩增出E1基因 ,在原核系统中进行表达、测序及定点突变 ,并对表达的E1蛋白进行纯化及初步的活性鉴定。结果 :在 86株阳性克隆中 ,11株表达了不完整的HCVE1蛋白 ;使用表达出来分子量最大的蛋白作为抗原 ,在HCV(+)血清中抗 E1的检出率为 16 .7% (2 / 12 ) ,对其插入的E1基因 (HCVe118)测序 ,表明 134 7位的C→T而形成终止密码 ,用“大引物”法对HCVe118作定点突变 ,使T→C ,从而获得具正确框架的HCVE1基因。结论 :在原核表达系统中 ,去除C末端的HCVE1基因可获得高效表达 ;表达的HCVE1蛋白抗原性很弱。“大引物”法用于基因改构工作简便而又快速。     

HCV抗体检测临界值附近样本传播HCV风险的研究

目的用尽可能低的消耗，达到HCV感染早期诊断，尽量缩短ELISA HCV抗体检测的“窗口期”，防止和减少经输血传播丙型肝炎的风险。方法采集初次检测抗-HCV（S／CO）样本测定值／临界值0．40～0．99的样本310份，采用“HCV抗体分片段酶联免疫确认试剂盒”进行补充旁证检测，对检测阳性及可疑阳性样本再进行HCV—PCR和RIBA及HCV—cAg检测。结果310份样本共检出单片段阳性样本25份，2个片段以上阳性样本3份，共计28份。HCV—PCR阳性3份，HCV—cAg阳性4份，RIBA检测3个条带阳性2份，1个条带阳性22份。28份样本中，抗-HCV分片段、PCR、HCV—cAg以及RIBA共同阳性1份，HCV—cAg与PCR共同阳性2份，HCV—cAg和RIBA共同1份。结论加强对抗-HCV检测阴性高值样本的重视，尽量缩短ELISA—HCV抗体检测“窗口期”。     

NS5B区核酸序列测定的丙型肝炎病毒基因分型研究

目的了解昆明市丙型肝炎感染者HCV基因型分布特征。方法用RT-PCR法扩增40例HCVRNA阳性的患者血清样本丙型肝炎病毒NS5B区段,PCR产物纯化后进行测序分析,测序结果与参考序列共同构建系统进化树,得到丙型肝炎病毒基因型和基因亚型。结果丙型肝炎病毒NS5B区段基因序列的系统进化树分析能对丙型肝炎病毒感染者样本进行很好的分型;分型结果显示,昆明地区丙型肝炎病毒主要的基因型是3b型占45.0%,其次2a型占22.5%,1b型占20.0%,3a型占7.5%,6n型及6a型各占2.5%。结论构建丙型肝炎病毒NS5B区系统进化树分析能得到准确的HCV基因型和亚型;昆明地区的丙型肝炎病毒基因型以3型为主,其次2a、1b型,同时发现6型;昆明丙型肝炎感染者中HCV基因型分布更接近于中国香港和东南亚国家的丙型肝炎病毒基因分布。     

HCV-NS3抗原基因的克隆表达及活性测定

[目的]研制新的更符合我国HCV感染株的NS3抗原，以进一步提高HCV免疫检试剂的灵敏度。[方法]对HCV／NS3（1192-1457aa）片段序列进行在线Blast分析，根据共有序列（consensus）设计并合成引物。以Trizol法从病人血清中提取总RNA，经反转录PCR扩增获得NS3相应目的基闪，插入载体、经测序正确后，克隆表达，表达产物经纯化后用间接ELISA法测定其反应活性。[结果]从病人血清中获得了NS3部分基闪片段，测序证明所获得的序列和我们以前的la型NS3序列有18个不同的氨基酸残基。重组新NS3抗原经活性测定，反应灵敏度有较大提高。[结论]新获得的HCV-NS3可用于试剂盒抗原，以提高对我国HCV感染病人检测的灵敏度。     

重庆地区无偿献血者丙肝病毒感染及对献血者招募的影响

近年来，中国的献血者招募模式正在从有偿献血到单位组织献血，进而到完全无偿献血的模式转变。有关真正的无偿献血者中丙型肝炎感染的资料还较少报道。本研究对重庆地区2003年的首次献血者进行丙型肝炎感染及病毒分型的调查，共有13620份血清标本进行ELISA丙型肝炎抗体检测，其中抗体阳性标本再经RT—PCR扩增HCVRNA的核心区／＆区片段进行基因分型。结果发现，HCV抗体阳性率为0．49％（67／13620），其中在40—49岁年龄段的阳性率（0．86％）最高；高学历人群和大城市生活人群的阳性率相对为高。丙肝病毒的基因分型结果显示，在22份基因分型阳性标本中有基因型1b，2a，3a和3b等四种，分别占4（18％）、5（23％）、9（41）和4（18％），以基因型3（包括3a和3b）为流行。结论：重庆地区无偿献血人群中丙型肝炎抗体阳性率较低；由于本地及周边地区静注毒品人群中丙型肝炎感染以基因型3为主，提示可能在献血人群中有静注吸毒者的存在。因此，随着献血模式的转变，在献血者的招募中应注意排除吸毒者这一高危人群。     

海洛因依赖者HBV和HCV感染及相关知识认知情况调查

目的了解海洛因依赖者HBV、HCV感染现状及对相关知识的认知情况,以便制定对策,进行有效的预防和健康宣教。方法对2007年12月-2008年2月在药物维持治疗门诊服药的98例海洛因依赖者进行HBV、HCV检测和问卷调查,调查内容包括对吸毒危害、传染病及其防护知识的认知情况。结果98例海洛因依赖者中,感染HBV者21例,感染率21％;感染HCV者79例,感染率81％;感染者占注射吸毒人数的96％（77/80）。海洛因依赖者对吸毒危害的知晓率较高,但对传染病及其防护的认识不足。结论海洛因依赖者HBV、HCV感染率高,传染病知识缺乏,防护意识薄弱,需加强毒品和传染病防护知识的宣传和教育。     

丙肝患者治疗前后HCV RNA与抗-HCV及丙氨酸氨基转移酶水平的分析

目的分析丙型肝炎患者治疗前血清HCV RNA、抗-HCV和丙氨酸氨基转移酶(ALT)水平及治疗后HCV RNA和ALT水平的变化规律。方法对87例丙型肝炎患者血清进行实时荧光定量法(PCR)检测HCV RNA、ELISA法检测抗-HCV和酶速率法检测ALT浓度水平,并对所得数据进行统计学分析。结果丙型肝炎患者血清抗-HCV抗体滴度显著高于健康对照组,大部分患者的ALT水平均有显著性升高;HCV RNA含量与ALT水平具有显著相关性(r=0.673,P0.01),而与抗-HCV的S/OD值无显著相关性(r=0.122,P0.05);在治疗早期,患者HCV RNA含量在第2天显著性下降,而ALT浓度呈一过性上升。结论在HCV诊断与疗效观察中,血清HCV-RNA、抗-HCV和ALT指标各有利弊,3者有机结合在正确诊断和预测肝脏损伤及早期疗效观察中具有重要的临床意义。     

用国产重组不同优势抗原研制丙型肝炎病毒抗体确认试剂

采用基因工程技术,构建了人IL-1β融合表达的原核表达载体pBVIL1,在大肠杆菌中表达了丙型肝炎病毒不同区优势抗原,研制出了丙型肝炎病毒抗体酶联免疫确认试剂。四种抗原混合包被对国家40份阳性参比血清检出率为39/40。40份阴性参比血清的检测均未出现假阳性。探讨了确认试剂生产的各种最佳条件。     

血清转换样本丙型肝炎病毒核酸、核心抗原及抗体检测对比研究

目的探讨丙型肝炎病毒(HCV)核心抗原酶联免疫诊断试剂检测早期HCV感染“窗口期”样本的可行性。方法用新研制的丙型肝炎病毒核心抗原(HCV-cAg)酶联免疫诊断试剂检测11份系列血浆转换样本的抗-HCV、HCV-cAg、HCV RNA,并与病毒核酸及抗体检测方法做对比研究。结果HCV-cAg较抗-HCV检出提前14~51d,平均32.7d;HCV RNA较抗-HCV检出提前19~51d,平均36.0d。结论HCV-cAg酶联免疫诊断试剂可用于HCV早期感染“窗口期”样本的检测,降低输血风险度。     

中国部分民族献血者抗-HCV阳性率的调查

目的了解中国不同民族献血者抗-HCV阳性率差异和分布情况。方法选择国内8个省、市、自治区41个民族的30余万名献血者,用ELISA法测定抗-HCV。结果①首次献血者血清样本抗-HCV阳性率0.98%(676/68782),≥2次献血者血清样本抗-HCV阳性率0.71%(1750/245137),全部献血者血清样本抗-HCV阳性率0.77%(2426/313919);首次献血者抗-HCV阳性率明显高于多次献血者和全体献血者(P<0.01)。②汉族与少数民族献血者抗-HCV阳性率分别为0.75%(1834/245501)和0.87%(592/68418),两组抗-HCV阳性率有明显差异(P<0.05)。③汉族献血者与各个少数民族献血者抗-HCV阳性率分别比较:高于汉族的少数民族有:壮族(1.07%),朝鲜族(1.07%),维吾尔族(1.65%),仫佬族(2.26%);低于汉族的少数民族有:回族(0.51%),白族(0.10%);与汉族无明显差异的少数民族有:蒙古族(0.79%),苗族(0.73%),满族(0.89%),藏族(0.87%),瑶族(0.99%),哈萨克族(0.83%)。8省(自治区)之间献血者抗-HCV阳性率比较,有明显差异(0.10%~1.69%)。结论8省(自治区)和41个民族献血者抗-HCV阳性率差异明显;此资料可供各地采供血机构参考。