口服连接于霍乱毒素A2/B亚单位的细菌蛋白抗原后的血清与唾液抗体应答持久性

作者通过采用将编码粘膜免疫原的基因融合到霍乱毒素(CT)A2亚单位基因(A2亚单位与一种有效免疫增强因子CTB亚单位相连)的方法开发了一种适合口服免疫的方案.用于评估的基于非毒性CTA2/B构建体的口服免疫原来自于变异链球菌AgⅠ/Ⅱ粘附素的唾液结合区(SBR).SBR与CTA2/B相连构成SBR-CT~(△Al).口服接种证实这种抗原有免疫原性,可诱生高水平的抗AgⅠ/Ⅱ分泌性IgA(S-IgA)及血清IgG抗体.作者对小鼠口服SBR-CT~(△Al)抗原后产生的抗AgⅠ/Ⅱ粘附素抗体应答进行了评估.第1组5只小鼠,口服3剂100μgSBR-CT~△Al及μg完整CT(作为佐剂);第2组3只小鼠,仅口服3剂SBR-CT~△Al;第3组6只小鼠,口服缓冲液作为对照.于末次免疫后11个月收集唾液和血清标本,并用100μgSBR-CT~(△Al)胃内加强接种所有小鼠,同时给予第1组小鼠及半数对照组小鼠CT佐剂5μg.于加强免疫后7天收集血清和唾液标本,用ELISA测定抗体应答.     

一种候选口服伤寒/霍乱杂交活菌苗对人体的免疫原性

本文报道,将稻叶型霍乱弧菌569B株O抗原基因插入到伤寒杆菌减毒菌苗株Ty21a中,制备成口服杂交菌苗.口服免疫10名志愿者,用ELISA测定周围血淋巴细胞(PBL)和血清对菌苗的特异性免疫应答.测定PBL结果表明,10名接种者对伤寒杆菌脂多糖(LPS)产生IgA抗体应答,并观察到IgG(7名)和IgM(10名)应答.血清IgA、IgG和IgM抗伤寒杆菌LPS抗体增加4倍以上者分别为7人、4人和3人.10人中有8人杀菌抗体滴度明显增加     

超声粉碎抗原免疫预防鼠幽门螺杆菌感染的研究

目的研究幽门螺杆菌超声粉碎抗原与霍乱毒素B亚单位组成的口服疫苗预防HP感染的作用,探讨其保护性免疫应答机制。方法用HP超声粉碎抗原2mg加CTB10μg作为免疫预防组,另设单纯HP超声粉碎抗原组、单纯CTB组和PBS组为对照组。免疫4周后以活菌攻击,观察各组小鼠的免疫保护率。攻击前后测定血清中IgA、IgG1和IgG2a抗体的变化,小鼠胃黏膜分泌性IgA抗体变化情况。结果免疫预防组小鼠免疫保护率为73.33%,而对照组全部感染HP(P<0.001);攻击前免疫预防组小鼠IgA、IgG1和IgG2a抗体均轻度升高,攻击后IgA、IgG1和IgG2a抗体进一步升高,以IgG2a抗体增高更为明显,IgG1/IgG2a比值从0.67下降至0.59。结论HP超声粉碎抗原加CTB可预防HP感染,并诱导出以Th1反应为主的保护性免疫应答。     

用于人疫苗抗原的非磷脂脂质体的佐剂特性

作者在小鼠和家兔中对作为人菌苗抗原破伤风类毒素(TT)和白喉类毒素(DT)佐剂的、由二氧乙烯鲸蜡醚、胆固醇和油酸组成的非磷脂脂质体进行了评估.分别将TT和DT混合或包被在脂质体、脂质体-单磷酸脂质A(MPL)/鲨烯和脂质体-鲨烯中制成不同的脂质体抗原制剂,以磷酸铝吸附的抗原、结合弗氏佐剂的抗原及可溶性抗原为对照.分别用上述抗原免疫小鼠(2剂TT)和家兔(3剂DT).于首剂TT免疫后4、6、10和15周及每剂DT免疫后2周采血.用ELISA法测定抗-TT IgG、IgG亚类和IgM抗体及抗-DT IgG抗体.用毒素中和试验测定小鼠血清中破伤风抗毒素水平,用Vero细胞测定兔血清白喉抗毒素.     

大肠杆菌LTB加痕量LT用作鼻腔接种流感疫苗的佐剂

本文讨论了大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位(LTB)加痕量全毒素(LT)是否可作为鼻腔接种流感疫苗的有效佐剂.Balb/c小鼠鼻腔接种1.5μg流感血凝素(HA)灭活疫苗(以流感病毒明PR8株制备),分不加佐剂组、加2μg LTB组、加痕量LT组和同时加2μg LTB及痕量LT组(2～20ng),免疫后用ELISA方法检测小鼠的IgA和IgG抗体.结果发现,前三组诱导了临界水平的抗-HA IgG抗体应答,而最后一组诱导了较高水平的抗-HA IgG抗体应答.     

对口服和注射伤寒菌苗的免疫应答的比较分析

将60名年龄为16～22岁的健康男性志愿者分为两组,一组30人于0和28天两次皮下接种伤寒菌苗(TAB),另一组30人于0、2和4天3次口服伤寒菌苗(Ty21a),每次剂量为10~9菌体。免疫前所有受试者血清中抗脂多糖(LPS)抗体水平很低或为0,粪便伤寒杆菌培养阴性。免疫后当天、15、30和240天收集血样,测定血清IgG-、IgA-和IgM-类风湿因子(RF)和IgG、IgA和IgM抗-脂多糖(LPS)。结果表明口服和注射菌苗引起的免疫应答不同。体液免疫:接受Ty21a或TAB的志愿者在免疫后30天,IgG抗-LPS浓度都有增加,而唯口服Ty21a者IgA抗-LPS略有升高。第     

口服可生物降解微球后唾液、肠道、阴道和鼻腔中的抗体应答

作者用聚丙交酯和乙交酯共聚物(PLG)制成微球包裹不同剂量的卵清蛋白(OVA).于0和4周用微球经口免疫雌性BALB/c 小鼠,初免和加强免疫均为连续口服3天.于初免后2、4、6和8周取小鼠唾液、肠道和阴道洗液及血清,用ELISA法测定IgA、IgG抗体.并于初免后1、5、9和13周取小鼠唾液腺和鼻粘膜组织.用酶联免疫斑点法(ELISPOT)检测抗体形成细胞(AFC).对照小鼠则口服可溶性抗原.结果显示,可溶性抗原初免或加强免疫后,血清中均未测得IgA抗体,IgG抗体可于第8周测得;初免含抗原微球后2周小鼠产生显著的血清IgA抗体应答,加强免疫后应答显著增强,8周时达最高峰,IgG抗体滴度也明显高于对照组.可溶性抗原初免后,可在小鼠唾液中检得IgA抗体,加强免疫后抗体滴度升高;而试验组小鼠2次免疫后的唾液IgA抗体均明显高于对照组.可溶性抗原免     

细菌ADP核糖基化外毒素、亚单位和无关佐剂的经皮免疫接种

最近作者报告了一种无需注射器的免疫接种方法——经皮免疫接种 ,即将疫苗抗原涂于完整皮肤上。大多数蛋白质对皮肤是弱免疫原 ,已证实加入粘膜佐剂霍乱毒素 ( CT)能使机体对佐剂和共同接种抗原产生细胞和体液免疫应答。作者以白喉类毒素 ( DT)和破伤风类毒素 ( TT)为模型抗原研究了对皮肤具有活性的佐剂范围。　　小鼠局部剃毛后 ,作者将 DT+ CT或大肠杆菌不耐热肠毒素 ( LT)免疫液涂于小鼠局部皮肤 3次 ,每次间隔 4周。结果显示 ,第2次免疫后 ,DT+ CT和 DT+ LT组均能产生抗 DT Ig G抗体。第 3次免疫后 ,抗体滴度升高 1 0～ 1 0 …     

用呼吸道合胞病毒亚单位疫苗粘膜免疫接种小鼠

作者评价了用纯化的呼吸道合胞病毒（RSV）融合(F）蛋白和霍乱毒素（CT）佐剂疫苗粘膜免疫接种小鼠的保护效力。 取4周龄小鼠进行实验。用于鼻内接种的10μl疫苗中含CT2.5μg、F蛋白3μg;肌肉接种的0.1ml明矾疫苗中含F蛋白3μg,用PBS作安慰剂。活病毒疫苗为2.5μl中含2×10~6空斑形成单位（PFU）病毒。在0和4周各免疫1次,8周时用RSV Long株5×10~6PFU攻击。病毒攻击后4天杀死小鼠,取血清,用酶免疫试验测定抗F蛋白和CT的IgG抗体,并作微量中和试验。无菌取鼻洗液,一部分立刻用HEp-2细胞滴定病毒滴度,一部分测定IgA。 动物共分9组,每组6只。实验结果表明,鼻内接种活RSV组血清中有高滴度抗F特异IgG具有强的中和力,鼻洗液中有IgA,病毒攻击后,所有小鼠均未检出病毒。鼻内和肌肉同时接种PBS组,无抗体产生,不能阻止病毒复制,鼻内病毒滴度为log_210.1±0.2PFU。鼻内或肌肉接种F蛋白组,鼻洗液中均无IgA,不能阻止病毒复制,但后者有血清抗体。鼻内和肌肉同时接种F蛋白组亦有高滴度血清抗体但无鼻洗液IgA,病毒复制力比PBS组低。鼻内单独接种CT组,虽无抗F抗体,但能轻度抑制病毒复制,鼻洗液中病毒滴度为log_26.8±2.2 PFU,每只小鼠皆查到病毒说明与免疫接种无关。鼻内接种F+CT组,血清中有高滴度F和CT特异性IgG并     

大肠杆菌不耐热肠毒素的粘膜免疫原性(英)

大肠杆菌不耐热肠毒素（LT）是一种有效的粘膜免疫原，口服或鼻内接种后可诱导高分泌性和全身性抗体应答。此外，LT在抗其他共服抗原的抗体应答中起到佐剂作用。为了研究LT亚单位的粘膜免疫原性和佐剂作用，作者从超量产生的大肠杆菌培养基中分别克隆和提纯LT全毒素和无毒性B亚单位（LTB），并分别用重组 LT、LTB及两者混合物鼻内免疫小鼠，检测它们诱导血清LTB特异性IgG、IgA和粘膜S-IgA的能力。     

荆豆凝集素修饰的牛血清白蛋白脂质体的免疫学性质

目的对荆豆凝集素修饰的牛血清白蛋白脂质体进行免疫学评价。方法 3组小鼠分别于0、7、14、21 d口服免疫牛血清白蛋白溶液(bovine serum albumin,BSA)、BSA脂质体及荆豆凝集素修饰的BSA脂质体,建立ELISA法测定小鼠在7、14、21、28、35及42 d时体内产生的系统及黏膜免疫应答。结果与BSA溶液组相比,将抗原包裹于脂质体、尤其是荆豆凝集素修饰的脂质体中免疫小鼠后,可在小鼠血清及小肠分泌液中检测到较高的IgG及IgA水平。其中,免疫后42 d,凝集素修饰脂质体组的IgG和IgA水平分别为BSA溶液组产生相应抗体值的4.33倍和4.74倍。结论荆豆凝集素修饰脂质体口服免疫小鼠后可同时诱导机体产生黏膜及系统免疫应答,可以作为口服疫苗的载体。     

志愿者口服霍乱菌苗后产生的肠道分泌性抗体应答

作者报道18名法国志愿者口服一种由脂多糖-外膜蛋白复合物组成的霍乱弧菌新菌苗后产生的血清和粘膜抗体应答。将志愿者随机分成3组,各口服4剂菌苗,服苗时间:A组为第0和7天;B组为0、7和14天;C组为0、14和28天。于免疫前和第1次免疫后7、14、28和35天采血,测定血清杀弧菌抗体和菌苗抗原成分特异性抗体,并用ELISA法测定免疫前后唾液和空肠液中IgM、IgG和IgA浓度。3组唾液和空肠液标本采集时间分别为0、7天,0、21天和0、35天。结果表明,口服菌苗后,志愿者血清杀     

定居因子和不耐热肠毒素经皮免疫诱导抗ETEC的保护性免疫

产肠毒素性大肠杆菌 ( ETEC)引起的腹泻常见 ,对 ETEC定居因子 ( CF)和不耐热肠毒素 ( L T)的免疫应答与保护性免疫相关。此项研究探讨了 CF与佐剂 L T或霍乱毒素( CT)一起经皮免疫 ( TCI)的效果。　　实验以重组 CS6 ( r CS6 ,CF的组分之一 )为抗原 ,CT为佐剂。剃去 BABL/c和C57BL /6小鼠背毛 ,将含有抗原或抗原加佐剂的溶液涂于去毛的皮肤 1小时。结果显示 ,r CS6加 CT TCI能诱生高滴度的抗 CS6和CT抗体。而单纯 r CS6 TCI不能诱生持久的抗 CS6抗体应答。对不同免疫方案的小鼠用CT口服攻击 ,对照小鼠口服 1 0 %碳…     

粘膜免疫途径中明胶对抗SOD-IgA抗体应答的影响

目的 了解明胶作为粘膜疫苗佐剂的可能性，动态观察不同浓度明胶对抗S0D-IgA抗体应答的影响。方法 以鼠伤寒沙门氏菌SOD作为抗原，分别加不同浓度明胶经灌胃途径免疫小鼠，用间接ELISA法测定免疫后10、15、20、30天血清中及30天后肠液中抗S0D-IgA抗体效价。结果 2％明胶组血清及肠液中抗SOD-IgA抗体效价均显著高于元明胶组(P＜0．01)。结论 明胶可促进IgA抗体应答，且此种促进作用可能与明胶浓度有关。     

对恒河猴轮状病毒疫苗MMU18006的全身和粘膜免疫应答

业已证明,恒河猴轮状病毒(RV)疫苗MMU 18006(3型)能引起同型中和抗体应答。作者将34名3～20月龄儿童随机分成三组,分别口服10~5、10~4和10~3空斑形成单位(PFU)的MMU18006疫苗病毒,然后测定其血清中和抗体,血清IgG、IgM和IgA以及粪IgA水平,以评价该疫苗诱导的异型全身和粘膜免疫应答,并确定产生的Ig类型。服苗后,34名儿童中31人(91%)产生同型血清中和抗体应答。无应答的3人都是服低剂量(10~3)者,其中2人服苗后排毒。而产生异型中和抗体应答者仅有3人(3/21、14%),且都是先前已感染过RV的。 34名儿童中,仅23人(68%)产生血清IgG应答。IgG应答不佳的原因可能是幼婴     

小鼠口服微囊化可溶性抗原后的B细胞激活型式

口服可溶性蛋白抗原易造成免疫耐受,为此作者采用可生物降解的、抗酸性丙烯酸聚合物包裹可溶性抗原卵白蛋白(OVA),并经口免疫BDF_1小鼠.结果显示,小鼠口饲5mg微囊化OVA后产生强免疫应答,IgA、IgG和IgG1同种型抗体滴度显著升高;而免疫5mgOVA溶液的小鼠的抗体水平则很低.对粘膜免疫系统激活的研究显示,在口饲微囊化OVA小鼠的集合淋巴结、肠系膜淋巴结、脾脏和固有层中,可见OVA特异性IgA、IgG和IgG1同种型抗体分泌细胞的激活.免疫第7天,在集合淋巴结和肠系膜淋巴结中出现抗原特异性抗体分泌细胞的激活     

抗螺杆菌免疫接种能刺激长期免疫力

为了解猫螺杆菌(Hf)和霍乱毒素共同免疫小鼠能否产生长期保护作用,作者分别在第1、3、6、30、54天用1mg超声处理的Hf菌体加10μg霍乱毒素口饲7～8周龄的SPF雄性BALB/c小鼠.分别于末次免疫后1、3、6、13、15个月用Hf活菌攻击小鼠,攻击后21天杀死动物,取其胃组织进行尿素酶试验和Giemsa染色,检测有无螺杆菌存在;同时用ELISA测血清IgG和唾液IgA抗Hf抗体.结果表明,在免疫后1、6、13、15个月时,所有免疫小鼠均能抵御Hf攻击,Hf清除率达100%,3个月时清除率为86%(尿素酶法)或93%(Giemsa法).与注射生理盐水的对照组相比,两组间的清除率有显著差异.免疫组和对照组的IgG抗体水平因个体免疫应答不同而都有变化,但免疫后1、6、15个月时的三次检测显示,免疫组的IgG抗体水平均显著高于对照组.免疫组小鼠1和15个月时的IgG抗体水平显著高于6个月时,而对照组间则无显著差异.唾液IgA抗Hf抗体     

灌洗法检测减毒鼠伤寒杆菌疫苗对幽门螺杆菌的免疫应答

目的应用高渗灌洗液法(灌洗法)检测表达幽门螺杆菌(Hp)尿素酶B亚单位(UreB)的减毒鼠伤寒杆菌活菌重组疫苗口服免疫小鼠后的免疫应答状况。方法将能表达UreB的重组减毒鼠伤寒杆菌SL326l/pTC01-UreB口服免疫Balb/c小鼠,12周后应用灌洗法或将小鼠处死直接获取小鼠肠液,检测小鼠的肠液和血清中针对UreB的特异性IgA和IgG抗体反应。结果疫苗组小鼠的肠液和血清中可分别检测到针对UreB的特异性IgA和IgG抗体,与对照组存在显著性差异(P<0.01)。灌洗法获取的小鼠肠液中的IgA抗体含量较将小鼠处死后直接获取的肠液中的IgA抗体含量明显为高(P<0.01)。病理学检查显示疫苗组小鼠胃粘膜炎症指数无改变。结论高渗灌洗液法是获取肠道抗体的理想方法;表达HpUreB的减毒鼠伤寒杆菌SL326l/pTC01-UreB可用作抗Hp感染的口服疫苗。     

茯苓多糖PCP-Ⅰ和PCP-Ⅱ作为疫苗佐剂的免疫原性

目的研究茯苓多糖(PCP)中PCP-Ⅰ和PCP-Ⅱ作为疫苗佐剂的免疫原性。方法 1采用钥孔戚血蓝蛋白(KLH)和牛血清白蛋白(BSA)为载体蛋白分别与PCP-Ⅰ或PCP-Ⅱ连接制备免疫抗原KLHPCP-Ⅰ和KLH-PCP-Ⅱ及筛选抗原BSA-PCP-Ⅰ和BSA-PCP-Ⅱ。KLH-PCP-Ⅰ和KLH-PCP-Ⅱ分别与弗氏佐剂联用id免疫家兔2次,ELISA检测家兔血清中抗多糖抗体。2PCP-Ⅰ或PCP-Ⅱ单独im免疫小鼠2次,ELISA检测小鼠血清中抗多糖抗体。3PCP-Ⅰ或PCP-Ⅱ为佐剂分别配伍重组乙肝病毒表面抗原(HBs Ag)和猪繁殖与呼吸综合征病毒灭活疫苗(PRRSV)im或sc免疫小鼠2次,ELISA检测小鼠血清中抗多糖抗体。结果1KLH-PCP-Ⅰ或KLH-PCP-Ⅱ与弗氏佐剂联用免疫2次,可产生抗KLH和抗多糖抗体。2PCP-Ⅰ或PCP-Ⅱ单独im免疫小鼠2次,检测出低水平Ig M抗体,未检测出IgG抗体。3HBs Ag或PRRSV抗原联用PCP-Ⅰ或PCP-Ⅱ免疫小鼠2次,未检出抗多糖IgG抗体。结论 PCP-Ⅰ和PCP-Ⅱ本身免疫原性较弱,作为疫苗佐剂可能具有良好的安全性。     

流感HA和霍乱毒素B亚单位联合疫苗经鼻内、口腔或非肠胃途径免疫的比较

本文用不同剂量流感病毒A/PR/8/34HA疫苗和霍乱毒素B亚单位(CTB)联合免疫小鼠,比较了鼻内、非肠胃、腹腔或皮下接种小鼠4周后的抗体应答和用A/PR/8/34小鼠适应株鼻腔攻击3天后的保护作用的观察。作者首先检测呼吸道洗液和血清中抗PR8病毒IgA抗体,发现鼻内接种比其它途径产生较高水平的抗病毒IgA抗体。同时,分析呼吸道洗液和血清中抗PR8病毒IgG抗体,发现当CTB的剂量为0.1μg时,鼻内与非肠胃接种产生的IgG抗体水平相似;当