胃癌细胞对TRAIL的敏感性与caspase-8基因甲基化状态的关系

目的探讨caspase-8基因启动子区5′CpG岛甲基化状态与TRAIL抗癌作用的关系.方法采用甲基化特异PCR方法检测5种胃癌细胞株caspase-8基因启动子区的甲基化状态;采用MTT方法检测TRAIL蛋白的抗癌活性.结果 5种胃癌细胞株对TRAIL的敏感性不尽相同,caspase-8基因启动子区均为非甲基化状态;5-Aza-CdR处理可提高耐药细胞对TRAIL的敏感性,但不影响胃癌细胞的甲基化状态.结论 5-Aza-CdR可提高多数胃癌细胞对TRAIL的敏感性,胃癌细胞对TRAIL的敏感性与caspase-8基因甲基化状态无关.     

5-Aza-CdR增强TRAIL对胃癌细胞的抗瘤活性与caspase-8表达的关系

目的探讨5-Aza-CdR对凋亡诱导分子TRAIL抗胃癌细胞活性的影响.方法采用MTT方法检测TRAIL蛋白的抗癌活性;采用RT-PCR方法检测caspase-8 mRNA的表达.结果 TRAIL 200 ng/ml作用72 h对SGc 7901、Kato 3和AGS胃癌细胞的生长抑制率分别为9.83%、11.94%和4.04%;经5-Aza-CdR处理后,对3株胃癌细胞的抑制率分别提高到38.98%、52.42%和30.72%;用5-Aza-CdR处理后3株胃癌细胞caspase-8 mRNA表达明显增加.结论 5-Aza-CdR能增强胃癌细胞对TRAIL的敏感性,其机制可能与caspase-8的表达上调有关.     

5-Aza-CdR可提高TRAIL对胃癌细胞Kato 3的抗瘤活性

目的 探讨5-Aza-CdR对TRAIL抗胃癌细胞活性的影响。方法 采用MTT方法检测TRAIL的抗癌活性；采用RT-PCR方法检测Caspase-8基因mRNA的表达。结果 未经5-Aza-CdR处理者只有20％胃癌Kato 3细胞对TRAIL敏感，经5-Aza-CdR处理可诱发Caspase-8 mRNA的表达，提高Kato 3细胞对TRAIL的抗瘤敏感性。结论 5-Aza-CdR可提高TRAIL对胃癌细胞的抗瘤作用，其机制可能与诱发Caspase-8的表达有关。     

同型半胱氨酸对人血管平滑肌细胞Fas、caspase-8蛋白表达的研究

目的探索同型半胱氨酸诱导血管平滑肌细胞凋亡的途径。方法组织贴块法培养血管平滑肌细胞,免疫细胞化学Envision二步法和western blot对平滑肌细胞Fas、caspase-8蛋白的表达进行观察。结果在胞膜和胞浆中可见到Fas表达的阳性产物,而caspase-8蛋白则在胞浆和胞核中见到阳性表达产物,同型半胱氨酸使血管平滑肌细胞Fas、caspase-8蛋白的表达呈浓度和时间依赖性上调（P〈0.05）。western blot方法的检测结果与上述结果相符。结论同型半胱氨酸诱导人血管平滑肌细胞凋亡受体Fas表达增加,Fas可介导凋亡启动子caspase-8表达增加,这可能是同型半胱氨酸诱导血管平滑肌细胞凋亡的途径之一。     

TRAIL基因在白血病原代细胞中的表达

目的：检测白血病原代细胞和正常人外周血淋巴细胞中TRAIL基因的表达情况，探讨TRAIL凋亡途径在肿瘤免疫中的作用。方法：通过RT-PCR检测TRAIL基因的表达。结果：83％（10/12)淋巴系白血病和80％(16／20)髓系白血病患者TRAIL基因表达阳性，正常人外周血淋巴细胞TRAIL基因表达阴性，IL-2能诱导PBL的TRAIL基因表达。结论：大多数白血病原代细胞TRAIL基因表达阳性，可能在肿瘤的自发坏死和凋亡以及免疫逃逸中发挥作用。另外，活化的T细胞表达TRAIL基因，TRAIL可能参与CD95非依赖性激活诱导的细胞凋亡。     

caspase-8在胶质母细胞瘤抵抗TRAIL诱导凋亡中的作用

目的:对人脑胶质母细胞瘤SC189细胞株中单克隆细胞株进行研究,探讨caspase-8在胶质母细胞瘤抵抗肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)诱导凋亡分子机制中的作用.方法:获取SC189单克隆细胞株,应用酸性磷酸酶法检测SC189单克隆细胞株对TRAIL敏感性;Western blotting检测各单克隆细胞株表...     

树舌多糖对小鼠HepA瘤细胞的caspase-8、TNF-α及MAP-2的表达的影响

目的 研究树舌多糖抑制肿瘤的作用机制.方法 通过随机分组实验,测定树舌多糖对小鼠HepA瘤的抑瘤率,经Western blot检测caspase-8与TNF-α的表达,免疫荧光法检测MAP-2的表达,并通过电镜观察树舌多糖作用后细胞结构的变化.结果 树舌多糖的抑瘤率为51.82%,经其作用后,Western blot显示caspase-8、TNF-α表达均显著增加,免疫荧光法检测MAP-2的表达也显著增加.电镜下观察到树舌多糖作用后细胞结构发生改变并形成凋亡细胞.结论 树舌多糖通过促进caspase-8 的表达,刺激TNF-α表达增加,进一步影响细胞骨架的重排从而促进细胞凋亡抑制小鼠HepA瘤的生长.     

桔梗皂苷D通过促进DISC的形成增强TRAIL对肺癌细胞的凋亡诱导效应

目的: 探讨中药活性成分桔梗皂苷D对抗肿瘤药物TRAIL抗肺癌活性的影响并研究其机制。方法: 用桔梗皂苷D联合TRAIL体外治疗肺癌细胞系A549,MTT法检测肿瘤细胞的细胞活力,Annexin V/PI染色检测肿瘤细胞的凋亡,免疫共沉淀法检测RIP1-FADD-caspase-8复合物的形成,western blot法检测A549细胞caspase-8的活化。结果: 对照组,桔梗皂苷D组,TRAIL组,桔梗皂苷D+TRAIL组对A549细胞活力的抑制率分别为0,(7.6±0.7)%,(13.4±1.0)%,(60.3±4.2)% (P<0.05)。对照组,桔梗皂苷D组,TRAIL组,桔梗皂苷D+TRAIL组对A549细胞凋亡的诱导率分别为(1.6±0.2)%,(4.5±0.3)%,(7.2±0.5)%,(40.2±2.8)% (P<0.05)。免疫共沉淀及western blot结果发现联合桔梗皂苷D后,TRAIL治疗的A549细胞内的RIP1-FADD-caspase-8复合物水平及caspase-8的活化程度显著提高。RIP1 siRNA及z-IETD-fmk能显著抑制桔梗皂苷D对TRAIL的协同作用。对照组,桔梗皂苷D+TRAIL组,桔梗皂苷D+TRAIL+RIP1 siRNA组,桔梗皂苷D+TRAIL+z-IETD-fmk组对A549细胞活力的抑制率分别为0,(61.2±5.0)%,(24.5±1.9)%,(17.5±1.7)% (P<0.05)。对照组,桔梗皂苷D+TRAIL组,桔梗皂苷D+TRAIL+RIP1 siRNA组,桔梗皂苷D+TRAIL+z-IETD-fmk组对A549细胞的凋亡诱导率分别为(1.8±0.2)%,(39.5±2.6)%,(12.3±1.1)%,(9.4±0.8)% (P<0.05)。结论: 桔梗皂苷D通过促进死亡受体复合物的形成增强TRAIL对肺癌细胞的凋亡诱导效应。     

川楝素上调肝癌细胞死亡受体5的表达提高TRAIL的抗肿瘤活性

目的: 探讨天然药物活性成分川楝素对TRAIL抗肝癌活性的影响并研究其机制。方法：将HepG2人肝癌细胞按对照组,川楝素组,TRAIL组,川楝素+TRAIL组及川楝素+TRAIL+DR5 siRNA组进行分组,CCK-8法检测HepG2的细胞活力,流式细胞术检测HepG2细胞的凋亡和线粒体膜电位,Western blot实验和流式细胞术检测HepG2细胞表面DR5的表达水平及caspase-8、caspase-3的活化水平。结果：TRAIL+川楝素组HepG2的相对细胞活力(0.42±0.04)显著低于TRAIL单治疗组(0.84±0.07, P<0.05)和川楝素+TRAIL+DR5 siRNA组(0.76±0.06, P<0.05)。TRAIL+川楝素组HepG2的细胞凋亡率(32.7±2.4)显著高于TRAIL单治疗组(9.3±0.9, P<0.05)和川楝素+TRAIL+DR5 siRNA组(13.8±1.1, P<0.05)。川楝素处理对HepG2细胞Bcl-2家族蛋白的表达无明显影响但能显著提高HepG2细胞表面DR5的表达水平。TRAIL+川楝素组HepG2细胞的相对线粒体膜电位(0.26±0.02)显著低于TRAIL单治疗组(0.78±0.06, P<0.05)和川楝素+TRAIL+DR5 siRNA组(0.68±0.05, P<0.05)。TRAIL+川楝素组HepG2细胞的cleaved caspase-8表达水平(0.37±0.04)及cleaved caspase-3表达水平(0.42±0.04)均显著高于TRAIL单治疗组cleaved caspase-8表达水平(0.11±0.04, P<0.05)及cleaved caspase-3表达水平(0.13±0.02, P<0.05)和川楝素+TRAIL+DR5 siRNA组cleaved caspase-8表达水平(0.14±0.02, P<0.05)及cleaved caspase-3表达水平(0.17±0.02, P<0.05)。结论：川楝素上调肝癌细胞死亡受体5的表达提高TRAIL的抗肿瘤活性。     

电离辐射对人HepG2肝癌细胞caspase-3蛋白表达的影响

目的:观察电离辐射对人HepG2肝癌细胞Caspase-3蛋白表达的影响.方法:采用6MV-X射线照射人HepG2肝癌细胞,Western blotting蛋白印迹法检测细胞凋亡蛋白Caspase-3的表达.结果:6MV-X照射后48小时,2Gy、4Gy、6Gy剂量组HepG2细胞Caspase-3蛋白的表达明显高于假照射对照组(0Gy)(P＜0.05,P＜0.01).结论:电离辐射可诱导HepG2细胞Caspase-3蛋白表达增高.     

间充质干细胞介导的TRAIL可控性表达及其杀伤人肝癌细胞的活性研究

目的 研究肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)在间充质干细胞中可控性表达及其对肿瘤细胞的杀伤活性,探索间充质干细胞用于肿瘤治疗的前景.方法 构建TRAIL可控性表达的腺病毒载体Ad-Tet-TRE-TRAIL,包装获得重组腺病毒后,感染小鼠间充质干细胞,免疫印迹法和酶联免疫吸附法测定间充质干细胞TRAIL可控性表达和分泌.四甲基偶氮唑盐(MTT)法测定TRAIL抑制肝癌细胞生长的能力.膜联蛋白(Annexin)-V/碘化丙啶(PI)染色和流式细胞术测定TRAIL对肝癌细胞的杀伤活性.结果 重组腺病毒Ad-Tet-TRE-TRAIL感染的小鼠间充质干细胞能够在强力霉素的控制下表达和分泌TRAIL,并显著抑制SMMC-7402人肝癌细胞生长,其机制是诱导肝癌细胞凋亡,结果显示SMMC-7402细胞在杀伤24、48 h后的存活率分别为66.5%±4.8%和42.9%±6.5%,而对照组(未加强力霉素)的细胞存活率分别为97.3%±2.2%和99.4%±4.7%.结论 间充质干细胞介导TRAIL可控性表达进而有效诱导肝癌细胞凋亡并抑制肝癌细胞生长,为肿瘤的细胞治疗提供了新的策略.

Abstract：

Objective To study the controllabe expression of soluble tumor necrosis factor-related apoptosis-iuducing ligand (TRAIL) in mesenchymal stem cells and evaluate its potential tumoricidal effects in cancer therapy. Methods The controllable TRAIL expression vector of Ad-Tet-TRE-TRAIL was established in an adenovirus vector for transfection into murine mesenchymal stem cells. The controllable expression and secretion of TRAIL were detected by Western blot and enzyme-linked immunosorbent assay.The viability of hepatocellular carcinoma cells was determined by MTT assay. The tumoricidal activity of TRAIL was determined by Annexin-V/PI staining and flow cytometry. Results The murine expression model of TRAIL was successfully established in the presence of doxycycline. The secreted TRAIL in cell culture medium could efficaciously suppress the growth of human hepatocellular carcinoma SMMC-7402 by induced apoptosis. The cell viability of SMMC-7402 was 66. 5% ± 4. 8% and 42.9% ± 6. 5% at post-treatment versus 97.3% ±2. 2% and 99. 4% ±4. 7% in the control group at 24 h and 48 h. Conclusion The controllable TRAIL expression mediated by mesenchymal stem cells kills human hepatocellular carcinoma cells effectively. And it may provide a novel therapeutic strategy for hepatocellular carcinoma.     

TRAIL联合5-氟脲嘧啶体外杀伤胆管癌细胞作用的研究

目的:探讨肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)对人胆管癌的作用及联合化疗药物5-氟脲嘧啶(5-FU)共同作用胆管癌细胞对TRAIL抗瘤活性的影响。方法:应用四氮唑蓝快速比色(MTT)检测单独应用不同浓度TRAIL(1、10、100、1000ng/ml)及不同浓度(1、10、100、1000ng/ml)TRAIL 10mmol/ml5-FU对胆管癌细胞QBC939活性的抑制作用。结果:单独应用(1、10、100、1000ng/ml)TRAIL作用于QBC939细胞后抑制率分别为15.6%、31.2%、37.5%、40.6%(1、10、100、1000ng/ml)TRAIL 10mmol/ml5-FU作用于QBC939细胞后抑制率分别为46.9%、62.4%、68.7%、78.1%,5-FU与TRAIL联合应用对QBC939细胞抑制率明显高于单独应用TRAIL(P<0.05)。结论:TRAIL通过诱导胆管癌细胞凋亡而起到抑癌作用,化疗药物5-FU能加强TRAIL的抗癌活性。     

TRAIL联合化疗药物诱导神经母细胞瘤细胞凋亡的研究

目的：探讨肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（TRAIL）联合化疗药物治疗神经母细胞瘤（NB）的作用及其可能机制。方法：不同浓度的TRAIL、化疗药物或TRAIL和化疗药物联合处理NB细胞株SMS-KCNR，应用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测细胞毒作用，应用流式细胞仪（FCM）检测细胞凋亡率，透射电镜对凋亡细胞进行形态学观察。结果：KCNR细胞对TRAIL不敏感，对化疗药物相对敏感，存在剂量依赖性细胞毒效应；TRAIL与亚毒性浓度的化疗药物联用对细胞的杀伤作用显著增强：透射电镜可见到典型的细胞凋亡特征。结论：KCNR对TRAIL不敏感，但TRAIL与亚毒性浓度化疗药物联用可增强杀伤效应，这种细胞毒作用主要由凋亡介导。     

Effects of methylation status of caspase-8 promoter on antitumor activity of TRAIL to human gastric cancer cells

To study the effects of the methylation status of caspuse-8 promoter on the antitunlor activity of TRAIL to the human gastric cancer cells. Methods: The methylation of caspuse-8 was measured with methylation specific PCR (MSP) and the antitomor capability of TRAIL to human gastric cancer cells was determined with MTT. Results: No methylation of caspase-8 in the human gastric cancer cells was found. The sensitivity of 5 lines of gastric cancer cells to the antitumor activity of TRAIL was different. The administration of the demethylation agent 5-Aza-2‘-deoxycytidine (5-Aza-CdR) increased the sensitivity of gastric cancer cells to TRAIL but did not change the methylation status of caspuse-8 promoter in gastric cancer cells. Conclusion: 5-Aza-CdR increases the sensitivity of most of gastric cancer cells to TRAIL butcaspuse-8 is not involved in the antitumor activity of TRAIL.     

肿瘤坏死因子相关诱导凋亡配体与肿瘤治疗的关系进展

 肿瘤坏死因子相关诱导凋亡配体（tumor necrosis factor-related apoptosis-inducing ligand, TRAIL）能选择性诱导肿瘤细胞和转化细胞凋亡,对机体正常组织细胞无毒副作用,有望成为新型的抗肿瘤制剂。探讨TRAIL的生物学特点及其对肿瘤的治疗策略,能够为其临床应用于肿瘤治疗提供理论基础。     

TRAIL受体在胆管癌组织中的表达及意义

目的 :探讨肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体 (TRAIL)的受体在人胆管癌组织、癌旁胆管组织和胆管癌细胞株 (QBC939)的表达及其临床意义。 方法 :应用原位杂交组织化学法检测TRAIL受体mRNA在人胆管癌组织、癌旁胆管组织和胆管癌细胞株 (QBC939)中的表达。 结果 :DR4mRNA、DR5mRNA在人胆管癌组织、癌旁胆管组织和胆管癌细胞株 (QBC939)均呈阳性表达。只有 3例DcR1(3/5 2 )和 7例DcR2 (7/5 2 )在人胆管癌组织呈弱阳性表达。DcR1、DcR2 mRNA在癌旁胆管组织呈阳性表达 ,而在胆管癌细胞株 (QBC939)均不表达。 结论 :TRAIL死亡受体和诱捕受体在人胆管癌、癌旁胆管组织和胆管癌细胞株 (QBC939)的表达不同 ,这些受体表达的变化可能在调控人胆管癌凋亡中发挥重要作用。     

抗TRAIL死亡受体抗体及其在肿瘤治疗中的研究进展

肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（tumor necrosis factor related apoptosis-inducing ligand,TRAIL）是近几年发现的肿瘤坏死因子（tumor necrosis factor,TNF）超家族成员。TRAIL能与他的死亡受体（death receptor,DR）TRAIL-R1（DR4）和TRAIL-R2（DR5）结合并特异性地诱导许多肿瘤细胞凋亡,但对大多数正常细胞没有毒性。一些抗TRAIL死亡受体抗体也能先择性杀伤肿瘤细胞,并在癌症治疗上显示了良好的治疗效果。本文就TRAIL的凋亡诱导途径以及抗TRAIL受体抗体在肿瘤治疗中的研究进展作一综述。