糖基化终产物对视网膜微血管周细胞内基质金属蛋白酶表达的影响

基质金属蛋白酶 (ｍａｔｒｉｘｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅｓ,ＭＭＰｓ)可以维持基底膜结构和功能稳定[1] 。Ｇｒａｎｔ等[2 ] 报告 ,ＭＭＰｓ功能异常在糖尿病视网膜病变的发生、发展中起着十分重要的作用。为了解视网膜微血管周细胞的丧失与基底膜增厚的关系 ,我们检测了ＭＭＰｓ在体外培养的牛视网膜微血管周细胞(ｂｏｖｉｎｅｒｅｔｉｎａｌｍｉｃｒｏｖａｓｃｕｌａｒｐｅｒｉｃｙｔｅｓ,ＢＲＰｓ)内的含量 ,同时观察糖基化终产物 (ａｄｖａｎｃｅｄｇｌｙｃｏｓｙｌａｔｉｏｎｅｎｄｐｒｏｄｕｃｔｓ,ＡＧＥｓ)对ＭＭＰｓ表达…     

糖基化终产物对牛视网膜毛细血管周细胞内抗氧化能力的影响

目的 通过测量糖基化终产物对培养的牛视网膜毛细血管周细胞抗氧化物酶和脂质过氧化物含量的影响, 以探讨氧化应激在糖尿病视网膜病变进程中的作用。 方法 不同浓度的糖基化终产物（0，8，32，125，500，2 000 μg/ml）与周细胞作用4 d后，以分光光度法测量细胞内过氧化氢酶的活性及过氧化脂质丙二醛的含量。 结果 糖基化终产物能以剂量依赖的方式降低周细胞内过氧化氢酶的活性(r=-0.714, P＜0.01)，增加丙二醛的含量(r=0.748, P＜0.01)，与对照组相比，当糖基化终产物浓度达到32 μg/ml时，两者比较差异有显著性的意义（P＜0.01）。 结论 氧化应激的增加可能是早期糖尿病视网膜病变中周细胞丧失的原因之一。 (中华眼底病杂志, 2002, 18: 143-145)     

视网膜微血管周细胞ET-1的分泌及影响

目的观察糖基化终产物(Advanced glycation end products,AGE)及低氧对培养的牛视网膜微血管周细胞(Bovine retinal microvascular pericytes,BRPs)内内皮素-1(Endothelin-1,ET-1)产生的影响.方法培养的BRPs分别与不同浓度的AGE(8,32,125μg/ml)共同培养4 d;低氧(10%O2,5%CO2,85%N2)条件下培养12、24、48 h;与不同浓度的AGE作用2 d后,再低氧培养48 h;培养结束后,分别收集培养液,离心,取上清液测定ET-1的含量.结果低氧能以时间依赖的方式促进BRPs分泌ET-1(γ=0.943,P＜0.01).AGE虽能使BRPs分泌ET-1轻微增加,但与对照组相比,差异无显著性(P＞0.05),而AGE能明显增强低氧对BRPs内ET-1分泌的诱导作用,两者具有协同效应.结论AGE和低氧能影响培养的BRPs内ET-1的产生,ET-1的产生异常可能是糖尿病视网膜病变中视网膜微循环血流动力学异常的原因之一.     

培养的牛视网膜毛细血管周细胞产生一氧化氮的影响

目的 观察糖基化终产物(ACE)、脂多糖(LPS)及低氧对培养的牛视网膜毛细血管周细胞(BRPs)内一氧化氮(NO)产生的影响。方法 培养的BRPs分别与不同质量浓度的AGE(8、32、125、500μg/ml)共同培养4d;LPS(10、20、40μg/ml)共同培养24h;低氧(5％O_2、5％CO_2、90％N_2)条件下培养12、24、48h。培养结束后,分别收集培养液,离心取上清液,用硝酸还原酶法检测其NO的浓度。结果 基础状态下,BRPs上清液中NO浓度为(37.25±4.37)μmol/L。低剂量的AGE(8μg/ml)与BRPs共同培养4d后,其上清液中NO的浓度为(68.37±9.92)μmol/L,是基础状态下BRPs上清液中NO浓度的1.8倍,随着AGE质量浓度的增加,BRPs上清液中NO的浓度迅速减少(r=0.835,P<0.01)。LPS及低氧能使BRPs产生NO明显增加(t=2.88,P<0.05及t=4.56,P<0.01),随着LPS质量浓度的增加和低氧时间的延长,BRPs上清液中NO的浓度也迅速上升(r=0.951,P<0.01和r=0.955,P<0.01)。结论 AGE、LPS和低氧能调节BRPs中NO的产生,NO与视网膜微循环血流动力学的调节有关。     

超氧化物歧化酶在视网膜毛细血管周细胞凋亡中的活性及意义

目的通过检测糖基化终产物（AGE）诱导培养的牛视网膜毛细血管周细胞凋亡及凋亡周细胞中超氧化物歧化酶（SOD）的活性及意义，进一步探讨糖尿病视网膜病变（DR）的发生机制。方法周细胞分别与不同浓度的AGE（0．47、1．88、7．5μmol／L）共同培养4d后，分别检测细胞凋亡、SOD活性，以及SOD对细胞凋亡及凋亡调节基因Bcl-2／Bax比率的影响。结果AGE能以浓度依赖的方式诱导周细胞凋亡（r=0．878，P〈0．01）、降低细胞内SOD的活性（r=-0．878，P〈0．01），而应用SOD能明显抑制AGE作用下的周细胞凋亡及提高凋亡调节基因Bcl-2／Bax的比率.结论凋亡及氧化应激的增加是DRP中周细胞选择性丧失的主要原因，SOD活性的下降是AGE诱导周细胞发生凋亡的关键因素。     

微血管周细胞及其与糖尿病视网膜病变

概述了微血管周细胞的命名、定位、形态、常见标记物及来源;介绍了周细胞在微血管的生理、病理活动中所起的重要作用;总结了周细胞与糖尿病视网膜病变的相关性.深化对周细胞的认识是未来微血管疾病研究的方向,亦是挑战.     

糖基化终产物诱导牛视网膜毛细血管周细胞凋亡及凋亡调节基因的表达

目的　研究糖基化终产物 (advancedglycosylationendproducts,AGE)对培养的牛视网膜毛细血管周细胞凋亡及凋亡调节基因Bax、bcl 2表达的影响 ,以探讨糖尿病视网膜病变的发病机制。方法　在体外培养 3～ 6代近融合的视网膜毛细血管周细胞中加入不同浓度的AGE(8、32、12 5、5 0 0及2 0 0 0mg/L)液 ,于 4d后检测不同浓度AGE对牛视网膜毛细血管周细胞凋亡及凋亡调节基因Bax、bcl 2表达的影响。结果　周细胞与AGE作用 4d后 ,呈现出典型的细胞凋亡特征 ;AGE促周细胞凋亡(r=0 878,P <0 0 1)和凋亡调节基因Bax的表达 (r=0 85 5 ,P <0 0 1)及抑制凋亡调节基因bcl 2的表达 (r=- 0 85 0 ,P <0 0 1)呈剂量依赖性 ;而周细胞凋亡率与Bax/bcl 2的比率呈正相关 (r=0 80 8,P<0 0 1)。结论　AGE能以剂量依赖的方式促进周细胞的凋亡 ,周细胞的凋亡率取决于凋亡调节基因Bax/bcl 2的比率。细胞凋亡是糖尿病视网膜病变中毛细血管周细胞早期丧失的一种方式。     

周细胞与糖尿病视网膜病变

随着对周细胞生理，生化的研究进展，研究者们发现视网膜细血管周细胞与糖尿病视网膜病变的关系越来越密切，通过对周细胞的研究有助于阐明糖尿病视网膜病变的发病机理，从而为防治糖尿病视网膜病变提供一种新的思路。     

糖基化终产物对纯化培养大鼠视网膜神经节细胞凋亡的影响

糖尿病性视网膜病变是糖尿病患者严重的眼部并发症，其病因和发病机制尚未阐明。近年来人们认为慢性高血糖引起体内糖基化蛋白的过量沉积，形成糖基化终产物，从而导致各系统的慢性疾病和功能丧失。传统上人们多认为糖尿病性视网膜病变主要是微血管病变，包括：内皮细胞增殖、基底膜增厚、周细胞丧失等。但目前许多临床研究表明：在糖尿病性视网膜病变微血管病变发生以前，糖尿病患者已有视功能改变。动物实验发现在糖尿病早期，     

体外孵育的非酶糖基化终产物诱导正常大鼠类糖尿病性视网膜血管病变研究

目的　探讨外源性非酶糖基化终产物 (advancednon enzymaticglycationendproducts ,AGE)在血管壁的沉积与糖尿病性视网膜血管病变之间的关系。方法　将 16只健康两月龄SD大鼠 ,随机分为 4组 ,每组 4只鼠。正常对照组不做任何处理 ;糖尿病对照组应用AGE制作糖尿病模型 ;血清白蛋白 (ratserumalbumin ,RSA)组每日自鼠尾静脉注射RSA(4 0mg kg体重 ) ,连续注射 2周 ;AGE RSA组注射AGE RSA ,注射方法、剂量与RSA组相同。 2周后观察各组鼠视网膜毛细血管周细胞密度变化。结果　注射RSA组鼠视网膜毛细血管周细胞数平均为 (5 80± 0 4 8)个 每油镜视野 ,注射AGE组为(4 31± 0 34)个 每油镜视野 ,显示实验组毛细血管周细胞密度低于对照组 ,差异有显著意义 (F =7 16 4 ,P <0 0 1)。结论　外源性AGE注入正常大鼠会引起类糖尿病性视网膜血管病变 ,AGE可能是糖尿病性视网膜血管病变的独立致病因素之一。     

高级糖基化终末产物与糖尿病视网膜病变的关系

高级糖基化终末产物(advanced glycation end products,AGE)的堆积是糖尿病视网膜病变(diabetic retinopathy,DR)主要的致病因素,其可促进视网膜色素上皮(retinal pigment epithelium,RPE)细胞AGE受体(receptor of AGE,RAGE)的表达、血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)的分泌及细胞凋亡损伤.RPE细胞参与构成视网膜的外屏障,具有屏障、滤过、吞噬和分泌等作用,在维持视网膜正常生理功能方面具有重要作用,RPE细胞的功能损害会导致多种视网膜疾病.通过研究AGE对RPE细胞的损伤,探讨AGE在DR发生发展中的作用,有利于寻找有效防治DR的新途径.     

糖基化终末产物与糖尿病瞳孔功能异常的关系

目的探讨虹膜中糖基化终末产物（AGEs）的表达及血浆AGEs质量浓度与糖尿病患者瞳孔功能障碍的关系,并探讨其发病机制。方法对糖尿病并发白内障患者的瞳孔散大难易度与单纯白内障患者进行对照研究。依据白内障手术前瞳孔散大是否能够达到6mm,将2型糖尿病并发白内障患者分为瞳孔功能异常组24例和瞳孔功能正常组21例,单纯白内障组患者21例作为对照。采用竞争性酶联免疫吸附分析法测定各组患者血浆AGEs的吸光度（A）值;采用免疫组织化学法分别检测上述各组患者虹膜组织中AGEs的表达强度。结果 3组在性别、年龄、眼压和糖尿病病程方面差异均无统计学意义（P〉0.05）。瞳孔功能异常组、瞳孔功能正常组和单纯白内障组血浆AGEs质量浓度分别为7.625±1.69、5.904±1.27和3.726±1.35,组间差异均有统计学意义（F=312.431,P〈0.05）;瞳孔功能正常组和单纯白内障组的血浆AGEs质量浓度明显低于瞳孔功能异常组,差异均有统计学意义（t1=2.017,P〈0.05;t2=2.018,P〈0.05）。瞳孔功能异常组、瞳孔功能正常组和单纯白内障组AGEs在虹膜组织中的表达强度值分别为109.13±19.47、79.71±13.06和40.92±11.91,差异有统计学意义（F=188.32,P〈0.05）,瞳孔功能正常组和单纯白内障组的AGEs表达值明显低于瞳孔功能异常组,差异均有统计学意义（t1=2.017,P〈0.05;t2=2.023,P〈0.05）。结论 AGEs在糖尿病瞳孔功能异常患者虹膜组织中呈高表达,其血浆AGEs质量浓度亦明显升高,提示AGEs在虹膜组织中的积聚与糖尿病患者瞳孔功能异常有关,可能是其发病机制之一。     

糖基化终末产物对牛视网膜微血管内皮细胞和周细胞存活和形态的影响

目的 观察体外孵育的牛血清白蛋白(BSA)非酶促糖基化终末产物（AGEs）对牛视网膜微血管内皮细胞（BREC）和周细胞（BRP）存活和形态的影响。 方法 取终浓度为50mg/ml的牛血清白蛋白（BSA）、500 mmol/L D-葡萄糖，于37℃孵箱内避光孵育12周，制备外源性AGEs-BSA，经Sephacryl S-300层析纯化，十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS PAGE）蛋白电泳鉴定AGEs-BSA和coomassie 蛋白质定量法测定蛋白浓度。分设不同浓度梯度的AGEs-BSA实验组和BSA对照组，以及空白对照组，分别观察体外孵育的AGEs-BSA对体外培养的BREC和BRP的毒性作用。相差倒置显微镜观察500μg/ml AGEs-BSA和BSA作用48 h对BREC和BRP形态的影响。 结果 随着AGEs-BSA剂量的增加，细胞被抑制呈上升趋势。500μg/ml AGEs-BSA抑制BREC为空白对照组的（72.8±15.9）%，抑制周细胞为空白对照组的（64.8±9.0）%。低浓度AGEs-BSA对BREC有一定促增生作用，但与空白对照组比较无统计学意义（P=0.231）。相差倒置显微镜观察结果显示AGEs-BSA处理组细胞增殖受抑制，失去正常细胞形态，而BSA对照组细胞同空白对照组，细胞形态正常。 结论 AGEs-BSA在高浓度时，无论是对BREC还是BRP，都产生生长抑制作用，从而导致BRP的丢失，损伤血管功能。进一步证实了非酶糖化是糖尿病微血管并发症的一个重要原因。 (中华眼底病杂志, 2006, 22: 11-15)     

糖基化产物对牛视网膜微血管周细胞增生和胞浆[Ca~(2 )]i水平的影响

目的　探讨糖基化产物对牛视网膜周细胞 (pericyte ,PC)增生和胞浆 [Ca2 ]i水平的影响。　方法　采用细胞计数结合噻唑蓝比色测定 ,氚标胸腺嘧啶核苷 (3H thymidine ,3H TdR)掺入和钙荧光探剂 (Fu ra 2Acetoxymethylester,Fura 2AM) ,研究PC在牛血清白蛋白早期糖基化产物 (earlyglycationpro ductsofbovineserumalbumin ,EG BSA)和牛血清白蛋白糖基化终产物 (advancedglycationendproductsofbovineserumalbumin ,AGE BSA)培养下 ,PC增生数、DNA合成量及胞浆 [Ca2 ]i水平的改变。　结果　培养 4d后 ,细胞计数法 :EG BSA和AGE BSA组PC数分别为 17.87± 2 .36 ,14 .77± 3 .72 ,较其对照组 (2 0 .5 4± 0 .82 ,2 0 .31± 0 .93)减少13 .0 0 %和 2 7.0 0 % (P <0 .0 1) ;MTT法 :EG BSA和AGE BSA组分别为 0 .46 19± 0 .0 946 ,0 .3884± 0 .10 13 ,较其对照组 (0 .5 2 36± 0 .0 5 39,0 .5 2 2 7± 0 .0 5 19)减少 12 .0 0 %和 2 5 .70 % (P <0 .0 1) ;3H TdR掺入量 :EG BSA和AGE BSA组分别为 3945 0 .16± 8870 .6 8,336 6 7.85± 10 5 81.70 ,较其对照组 (5 6 373 .6 3± 2 317.97,5 6 5 42 .0 4±196 1 2 3)减少 30 .0 0 %和 40 46 % (P <0 0 1) ;胞浆 [Ca2 ]i水平 :EG BSA和AGE BSA组分别为 (12 9.     

糖基化终末产物在青光眼中的研究进展

糖基化终末产物(AGEs)体内多种组织中累积,通过调节相关因子表达及激活信号通路等诱发一系列生物学反应,引起年龄相关性疾病及神经退行性病变,如阿尔茨海默病、帕金森病、动脉粥样硬化。青光眼是一种视神经退行性病变,最终导致不可逆的视野缺失,是全球仅次于白内障导致视力丧失的主要原因。青光眼患者视网膜等眼组织中过多AGEs累积,通过激活信号通路、引发生物反应,对组织、细胞的结构及功能造成损伤,参与青光眼发生发展的病理过程。本文主要阐述AGEs在青光眼发病机制、治疗、筛查等相关研究中的最新进展,为青光眼的防治提供新的思路和研究方法。     

Elevated advanced glycation end products are associated with subfoveal ellipsoid zone disruption in diabetic macular edema

Purpose:Advanced glycation end products (AGEs), due to increased production and a slow turnover rate, serve as mediators of “metabolic memory” even after the resolution of hyperglycemia. A prospective study was undertaken to evaluate the association of AGEs with subfoveal ellipsoid zone (EZ) disruption in diabetic macular edema (DME).Methods:A tertiary-care-center-based cross-sectional study included 40 consecutive cases with DME and 20 healthy controls in the age group of 40–65 years. All the study subjects underwent spectral-domain optical coherence tomography (SD-OCT) for cross-sectional imaging of the retina. The EZ was defined as a hyperreflective band below the external limiting membrane. The disruption of EZ was graded as intact EZ and disrupted EZ. Serum AGEs were assessed by assay of N^ε-carboxymethyl-lysine (N^ε-CML) using the standard protocol. Data were analyzed statistically.Results:Subfoveal EZ disruption was noted in 80% (32/40) of the cases of DME. In the cases without EZ disruption, visual acuity (LogMAR VA) was 0.60 ± 0.52, whereas in cases with EZ disruption, LogMAR VA was 0.96 ± 0.56 (P < 0.001). In the cases without EZ disruption, N^ε-CML was 94.31 ± 57 ng/mL, whereas in cases with EZ disruption N^ε-CML was 120.64 ± 71.98 ng/mL (P < 0.001).Conclusion:In DME, increased levels of AGEs are significantly associated with EZ disruption on SD-OCT.