可溶性对大鼠海马脑片CA3区神经元延迟整流钾电流的影响

目的：观察可溶性β淀粉样蛋白（25-35（Aβ25-35）对大鼠海马脑片CA3区神经元延迟整流钾电流（Ik）的影响,探讨可溶性Aβ25-35的神经毒性作用机制。方法：采用膜片钳全细胞记录技术观察可溶性Aβ25-35对大鼠海马脑片CA3区神经元Ix的影响。结果：可溶性Aβ25-35对大鼠海马脑片CA3区神经元IK有明显抑制作用,且呈时间和电压依赖性。可溶性Aβ25-35使Ik激活曲线左移,加入可溶性Aβ25-35前后IK半数激活电压分别为（5．88±0．67）mV和（-2．8±0．76）mV（P〈O．05）,但其斜率因子无显著改变。结论：可溶性Aβ25-35对大鼠海马脑片CA3区神经元Ik的抑制作用可能是其产生神经毒性作用的机制之一。     

褪黑激素对新生大鼠海马神经元延迟整流钾电流的影响

目的 用膜片钳技术观察褪黑激素对电压门控性延迟整流钾电流(Ik)的影响,探讨褪黑激素在中枢神经系统的作用机制及其生物学意义.方法 选择7～12 d原代培养的新生Wistar大鼠海马锥体神经元,用膜片钳电压钳全细胞记录模式观察Ik的基本电生理特点,并观察不同浓度褪黑激素,包括1、10、100 nmol/L、1、10、100 μmol/L和1 mmol/L对Ik的幅度及动力学特性的影响.结果 利用海马锥体神经元的钾电流对4-AP、TEA的敏感性及电生理特性的不同可分离出激活、失活缓慢,具有强烈外向整流特性的延迟整流钾电流.褪黑激素对海马锥体神经元Ik的影响是快速、可逆、呈电压依赖性的,但对其激活曲线没有影响.褪黑激素对Ik的作用具有浓度依赖性.1～100nmoI/L的褪黑激素可逐渐递增地增加Ik幅度;1～100 μmol/L褪黑激素对Ik的增加程度随浓度增加而增大,而1 mmol/L褪黑激素的增加程度却减小.结论 褪黑激素可逆地增强体外培养新生大鼠海马神经元的Ik电流,这或许参与了神经元损伤和记忆损害的某些环节.     

非凝聚态淀粉样蛋白对大鼠海马神经元瞬时外向钾电流的影响

目的 探讨凝聚前的β淀粉样蛋白(Aβ25-35)对新生大鼠海马CA3区锥体神经元瞬时外向钾电流(IA)的影响.方法 采用伞细胞膜片钳技术记录非凝聚态Aβ25-35作用前后IA峰值和动力学变化.结果 非凝聚态Aβ25-35对新生大鼠海马CA3区神经元IA有明显抑制作用,其效应具有时间依赖性,浓度依赖性和电压依赖性,同时使IA的激活动力学曲线和失活动力学曲线均明显左移.结论 β淀粉样蛋白在凝聚成老年斑之前就对大鼠海马CA3区神经元的瞬时外向钾电流有抑制作用,町能是其产生神经毒性作用的机制之一.     

大鼠海马锥体神经元延迟整流钾电流的发育变化

目的 研究大鼠海马锥体细胞延迟整流钾电流(Ik)在出生后不同发育阶段的变化.方法 采用膜片钳全细胞记录模式比较3个不同年龄组,即出生后7～10天(P7-10组)、25～30天(P25-30组)和56～60天(P56-60组)Wistar大鼠急性分离的海马锥体神经元Ik的变化及通道动力学和药理学特征.结果 随着动物的发育,Ik的电流密度上调,由p-10的(32±13)pA/pF逐渐增加到P25-30的(54±20)pA/pF和P56-60的(70±18)pA/pF.随年龄增大,Ik的激活曲线左移,其半数最大激活电位(V1/2)由-12.2mV逐渐增加到-17.8 mv,而斜率因子无明显变化.四乙铵(TEA)可剂量依赖性地抑制Ik,其中P7-10组的Ik对低浓度的TEA(2和5mmol/L)较P25-30及P56-60组更敏感.结论 在大鼠海马锥体神经元的发育过程中Ik逐渐增加,并伴有通道激活动力学和药理学特性的改变.上述变化可能与海马锥体神经元的成熟以及认知功能的日益完善有关.     

镧对大鼠海马神经元瞬时外向和延迟整流钾通道的调控作用(英文)

目的研究细胞内外La3+对急性分离大鼠海马神经元IA、IK电流的影响。方法运用全细胞膜片钳技术记录细胞内外施加La3+后IA、IK的变化。结果细胞外100μmol/L La3+使IA稳态激活曲线和稳态失活曲线半数电压向去极化方向移动,IA失活恢复时间延长,IA激活动力学抑制。细胞内100μmol/L La3+使IK稳态激活曲线左移,并减弱了细胞外La3+引起的IA稳态失活曲线右移程度。结论细胞内外La3+可能与IA、IK通道蛋白某些位点结合而发挥对通道蛋白的调控作用,细胞外La3+对IA通道蛋白的多个状态都有影响,并且细胞外La3+对IA稳态失活的部分作用可能通过第二信使实现。     

β—淀粉样肽对海马CA1区神经元的短暂性外向K^＋电流的影响

目的：为了在离子通道水平探讨β淀粉样肽（β－ＡＰ）在Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ病中的作用。方法：用７－２１ｄ大鼠，以链蛋白酶酶解加吸管吹打法制备海马ＣＡ１区神经元；利用全细胞膜片钳技术，观察了βＡＰ梗对急性分离海马ＣＡ１区锥体细胞的短暂性Ｋ＋电流的影响。结果：β－ＡＰ２５－３５对短暂性Ｋ＋电流有明显抑制作用，且呈明显浓度领事性、时间依赖性和部分电压领事性。结论：β－ＡＰ对Ｋ＿通道的影响在Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ     

淀粉样β-蛋白31-35片段对急性分离的海马神经元延时整流钾通道的影响(英文)

β 淀粉样蛋白 (amyloidβ protein ,AβP)的神经毒性作用已被广泛报道 ,其毒性作用机制可能与改变细胞膜上原有离子通道尤其是钾通道的活动有关。目前 ,AβP对K 通道的作用报道不一 ;在单通道水平上AβP对K 通道产生的早期效应尚不清楚。本研究采用单通道膜片钳技术 ,观察了AβP的 31 35片段 (AβP31 35 )对急性分离的海马神经细胞内面向外式 (inside out)膜片的延迟整流钾电流 (IK)单通道活动的影响 ,旨在从通道水平揭示AβP的神经毒性机制。结果发现 :①IK 通道的电导较低 ,分布在 9～ 38pS范围之内 ,平均电导只有 (2 4.4± 7.9) pS (n =2 9) ;通道电流的翻转电位 (- 6 5mV)接近K 的平衡电位 ;140mmol/LCsCl取代溶液中KCl后 ,通道电流能立即消失 ,但含有EGTA的无Ca2 浴液对通道活动没有影响。②经灌流系统给予膜片内侧 5 μmol/L的AβP31 35后 ,IK 通道平均开放频率和开放概率 (PO)分别下降了 (70 .45± 35 .75 ) % (P <0 .0 1)和 (86 .91± 1.13) % (P <0 .0 1) ,有些膜片甚至显示出通道活动的完全丧失 (PO=0 )。③给予 5 μmol/L的AβP31 35后 ,IK通道的平均开放时间减少了 (4 7.0 7± 38.8) % (P <0 .0 5 ) ;平均电流幅度虽有 (16 .6± 12 .6 ) %的增加 ,却无统计学意义 (P >0 .0 5 )。以上表明     

铝对海马神经元电压依赖性钙电流的作用及其机制

目的探讨金属铝对急性分离的大鼠海马锥体神经元的作用及其机制。方法利用全细胞膜片钳技术研究大鼠海马CA1 区锥体神经元,观察其高电压激活钙通道电流 (IHVA)的变化。结果铝在低浓度范围 ( <0.2mM)内对IHVA的幅度具有抑制作用。8 Br cAMP并不能抵消铝在低浓度范围内对IHVA的抑制作用。结论铝对钙通道具有抑制作用可能是其导致神经毒性作用的原因之一;铝对IHVA幅度的抑制可能不是通过影响钙通道的磷酸化过程而起作用的。     

PKC抑制剂chereythrine对大鼠皮层神经元延迟整流钾电流的抑制作用

目的 观察蛋白激酶C (PKC)抑制剂chereythrine对大鼠皮层神经元延迟整流钾电流(IK)的影响.方法 采用全细胞式膜片钳技术,检测了chereythrine对大鼠皮层神经元IK的影响.结果 ①chereythrine(20μmol/L)对大鼠皮层神经元IK有抑制作用,抑制率为(41.2±9.62)%(P<0.01);②chereythrine(20μmol/L)可使大鼠皮层神经元IK的电流-电压曲线下移,并呈现一定的电压依赖性.结论 PKC抑制剂chereythrine对大鼠皮层神经元IK具有抑制作用.     

乳酸司帕沙星对豚鼠心室肌细胞延迟整流钾电流的影响

目的:观察乳酸司帕沙星(SPX)对豚鼠心室肌细胞延迟整流钾电流(IK)的影响.方法:采用酶消化方法分离单个豚鼠心室肌细胞,利用全细胞膜片钳技术记录心室肌细胞IK,观察不同浓度SPX(0.1 μmol/L、1 μmol/L、10 μmol/L、100 μmol/L和1 000 μmol/L)对IK的影响.结果:除0.1 μmol/L外,SPX浓度分别为1 μmol/L、10 μmol/L、100 μmol/L、1 000 μmol/L时IK的脉冲电流和尾电流较正常心室肌细胞脉冲电流和尾电流均减少(P＜0.05或0.01).SPX明显抑制了IK的脉冲电流和尾电流(P＜0.05),SPX的量效关系曲线显示SPX的IC50为14.89 μmol/L. 结论:SPX能浓度依赖性抑制豚鼠心室肌细胞IK,提示高浓度SPX有引发心律失常的潜在不良反应.     

海马区注射Aβ1～42对不同年龄大鼠记忆能力和脑内Aβ1～42沉积的影响

目的:探讨不同年龄大鼠海马区注射同等量β-amylod protein 1～42(Aβ1～42)后记忆能力和Aβ1～42沉积情况的变化.方法:SD雄性幼年鼠(月龄1个月)、成年鼠(月龄3个月)、老年鼠(月龄12个月以上)各21只,每个年龄段大鼠分别随机平均分入正常对照组、假手术组和模型组3个组.模型组选择双侧海马区注射Aβ1～42,制备AD模型.假手术组操作同模型组,但注入等体积生理盐水.正常对照组不做任何处理.采用Y型电迷宫和改进的甲醇刚果红染色分别观察大鼠的记忆能力和海马区Aβ1～42沉积情况.结果:与正常对照组比较,模型组成年和老年鼠记忆能力减退,海马部位出现大量的Aβ1～42沉积,并伴有神经元的皱缩或丢失以及胶质细胞的浸润.而幼年鼠未出现记忆障碍,Aβ1～42沉积程度较轻,神经元的形态数目基本正常.结论:不同年龄的大鼠对Aβ1～42的代谢能力不同,这可能与AD发病有关.     

β-淀粉样肽对海马CA1区神经元的短暂性外向K~ 电流的影响

目的：为了在离子通道水平探讨β淀粉样肽（βＡＰ）在Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ病中的作用。方法：用７～２１ｄ大鼠，以链霉蛋白酶Ｅ酶解加吸管吹打法制备海马ＣＡ１区神经元；利用全细胞膜片钳技术，观察了βＡＰ２５～３５对急性分离海马ＣＡ１区锥体细胞的短暂性Ｋ＋电流的影响。结果：βＡＰ２５～３５对短暂性Ｋ＋电流有明显抑制作用，且呈明显浓度依赖性、时间依赖性和部分电压依赖性。结论：βＡＰ对Ｋ＋通道的影响在Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ病的发生机制中具有重要作用。     

异丙酚对大鼠海马CA1区锥体神经元GABSAA受体的作用

目的：研究异丙酚对大鼠海马CA1区锥体神经元γ－氨基丁酸A型（GABAA）受体的作用。方法：采用膜片钳全细胞记录技术。结果：临床血药浓度异丙娄（3－12μg/ml）对海马脑片CA1区锥体神经元电压门控性钠、钾、钙离子通道的开放、失活、最大电流幅值没有影响。海马脑片CA1区锥体神经元自发抑制性突触后电位（sIPSC）可被GABAA受体特异性阻断剂荷包牡丹碱（Bic）所阻断。异丙酚对海马脑片CA1区锥体神经元sIPSC濉有增频作用，但对其幅度没有影响，且其增频作用可被Bic阻断。结论：临床浓度的异丙酚对海马脑片CA1区锥体神经元的sIPSC具有增频作用，说明海马可能是异丙酚作用的靶器官。     

人体海马CA3区锥体神经元发育的研究

目的 探究人体海马CA3区神经元锥体细胞发育的过程.方法 取26周、35周、38周引产胎儿和8岁死亡儿童各1例,采用Golgi染色及微镜技术,进行神经元锥体细胞胞体形态学观察,并计算胞体的长度和面积.结果 26周、35周、38周、8岁海马CA3区神经元锥体细胞胞体长度分别为（76.4±3.1）μm、（90.9±13.8）μm、（96.0±16.9）μm、（107.0±9.9）μm;胞体面积分别为（363.8±15.8）μm2、（474.3±115.5）μm2、（449.5±116.8）μm2、（656.8±125.7）μm2.26周胞体长度和面积与35周、38周、8岁相比差异明显（P〈0.05）;35周胞体长度和面积与38周相比差异不明显（P〉0.05）,与8岁相比差异明显（P〈0.05）;38周胞体长度和面积与8岁相比差异明显（P〈0.05）.26W、35W、38W锥体细胞呈锥体形,细胞长度逐渐增长,面积逐渐增大,顶树突从无到有,基树突逐渐增粗增长,树突分支表面的小棘从无到有;8Y锥体细胞呈锥体形,细胞长度趋于稳定,面积稍微增大,顶树突增长增粗,基树突增粗增长,小棘增多.结论 人体在发育过程中,锥体细胞长度呈逐渐增长趋势,增长逐渐变慢并趋于稳定,面积呈逐渐增大趋势,增大逐渐变慢并趋于稳定,锥体细胞形态学上呈生长性改变.     

NGF对Aβ1-40舶诱导海马神经元周期素A、B1异常表达的影响

目的研究NGF对Aβ1-40诱导海马神经元周期素（Cyclin）A、B1异常表达的影响。方法原代培养新生大鼠海马神经元7d后，分别在Aβ1-40作用前后加入神经生长因子（NGF），采用免疫组化法、免疫荧光法检测胆碱乙酰化转移酶（ChAT）活性和周期蛋白表达变化。结果①Cyclin A、B1免疫荧光检测：Aβ1-40组、NGF1组、NGF2组海马神经元内均出现蓝色颗粒（Cyclin A）和红色颗粒（Cyclin B1），但Aβ1-40组最多，NGF2组较NGF1组明显；对照组未出现上述颗粒。Cyclin A、B1免疫荧光阳性信号IA值：Aβ1-40组较对照组显著增高（P〈0．01），NGF1组较Aβ1-40组明显降低（P〈0．05），NGF2组与Aβ1-40组比较无明显降低。②ChAT免疫组化染色：Aβ1-40组仅见少量海马神经元内有棕褐色颗粒，而NGF1组、NGF2组及对照组可见较多含棕褐色颗粒的ChAT免疫阳性细胞，但对照组较NGF1组明显，NGF1组较NGF2组明显。ChAT免疫阳性信号IA值：Aβ1-40组较对照组显著降低（P〈0．01），NGF1组较Aβ1-40组明显增高（P〈0．05）；NGF2组与Aβ1-40组比较无明显增高。结论NGF能有效阻止Aβ1-40诱导海马神经元损伤，对Aβ引起大鼠海马神经元内异常表达细胞周期蛋白有一定的逆转作用，为阿尔茨海默病（AD）的防治提供了一定的实验依据。     

银杏内酯对拟AD模型大鼠海马CA1区Aβ1-40表达的影响

目的：研究银杏内酯对拟阿尔茨海默病（AD）模型大鼠海马CA1区Aβ1-40表达的影响。方法：采用冈田酸（OA）海马CA1区微量注射建立拟AD大鼠模型，3周后银杏内酯腹腔注射，水迷宫行为学试验检测学习记忆能力，免疫组织化学方法观察海马CA1区Aβ1-40的表达。结果：与拟AD模型组比较，银杏内酯组平均逃避潜伏期明显缩短（P〈0．01），银杏内酯组海马CA1区Aβ1-40表达明显减少或消失（P〈0．01）。结论：银杏内酯显著改善拟AD模型大鼠学习记忆能力，其机理可能是抑制海马Aβ1-40的表达及tau蛋白磷酸化，减轻OA对大鼠海马神经元的病理损害。     

大鼠海马CA3区神经元突触的老龄性改变

目的:观察老龄大鼠海马CA3区神经元突触超微结构的改变,探讨老龄动物海马学习记忆功能减退的形态学基础.方法:应用透射电镜技术,观察青年组(3～5月龄)和老龄组(24～26月龄)Wistar大鼠海马神经元的超微结构.结果:老龄组海马CA3区神经元的主要变化:突触连接缩短或间断、突触前后膜融合;突触小胞大量集聚、小胞大小不等;树突棘内棘器远离突触后膜,其扁平小囊增多并扩张.结论:老龄大鼠海马CA3区神经元突触发生了明显的变性改变,这可能是导致学习记忆障碍的形态学基础.     

重组人BDNF对Aβ25-35致原代培养海马神经元损伤的保护作用

目的 观察人脑源性神经营养因子(BDNF)对Aβ 25-35致原代培养海马神经元损伤的保护作用.方法 取新生wistar大鼠海马细胞进行体外培养.分别加入不同浓度的BDNF及聚集态A β 25-35作用于培养的海马神经元,采用MTT法观察BDNF对A β 25-35致海马神经元存活率影响及Hoechst 33342染色观察BDNF对A β 25-35致海马细胞凋亡的影响.结果 显微镜下观察BDNF处理组比A β 25-35模型组细胞损伤小,细胞生长良好.MTT结果显示随着BDNF浓度增高,细胞存活率逐渐增高,在0.6nmol/L时最明显,与A β 25-35模型组比较,细胞存活率显著增高(P＜0.01).Hoechst 33342染色显示随着BDNF浓度增大凋亡率减少,与A β 25-35组比较凋亡率均显著减少(P＜0.01).结论 BDNF对培养海马神经元有神经营养活性,对Aβ致培养海马神经元的损伤有保护作用.     

大鼠海马神经元大电导钙激活钾通道的全细胞电流记录

目的 探讨记录全细胞的大电导钙激活钾通道的技术方法。方法 首先酶解急性分离大鼠海马神经元；利用全细胞膜片钳技术记录大电导钙激活钾电流。结果 可记录到一系列快速的外向钾离子电流。结论 所记录到的外向钾离子电流中，快速出现并很快减小的呈尖峰样的瞬变外向电流主要由大电导的钙激活钾电流组成。     

Aβ25-35对海马和隔区胆碱能神经元毒性的比较

目的 探讨Aβ25-35对原代培养的海马神经元和隔区神经元毒性作用。方法 采用体外原代培养,用Aβ25-35诱导大鼠海马和隔区神经元损伤,MTT法比较两种神经元的存活率,电镜下的形态学变化、并测定SOD活性的改变。结果 Aβ25-35可使海马和隔区神经元的存活率下降,发生凋亡的形态学改变,对两种神经元的Mn-SOD的活性无明显影响,但可使海马神经元CuZn-SOD活性明显下降。结论 Aβ25-35具有神经毒性,它对两种神经元的损伤程度相似,无细胞差异性,但其毒性损伤作用可能不同。