重组人颗粒酶B对胃癌细胞增殖的影响

目的探讨重组人颗粒酶B(G rB)对人胃癌细胞株SGC-7901增殖活性的影响。方法重组表达质粒pCDNA 3.1-G rB经限制性内切酶N otⅠ与X baⅠ双酶切以及DNA测序鉴定无误后,转染处于对数生长期的SGC-7901细胞,同时设空白组、pCDNA 3.1转染组作对照。转染后48h,用RT-PCR法鉴定各组质粒的整合和G rB基因mRNA表达水平;同时采用软琼脂集落形成实验和M TT法检测胃癌细胞生长情况。结果与空白对照组(21.00±2.58)个和pCDNA 3.1转染组(18.50±2.64)个相比,pCDNA 3.1-G rB转染组(9.00±0.82)个的集落形成数目明显减少(P<0.05),细胞生长速度明显降低(P<0.05)。结论G rB对人胃癌细胞增殖有明显抑制作用。     

丝氨酸/苏氨酸激酶15基因的过表达与胃癌细胞增殖有关

目的探讨胃癌细胞及组织中丝氨酸／苏氨酸激酶15(STK15)mRNA和蛋白质表达与临床病理指标、胃癌细胞增殖的关系。方法采用实时定量PCR及Western blot分别检测正常胃黏膜上皮细胞株GES-1、胃癌细胞株SUN-16、KATOIII、MKN45、AGS、N87及60份新鲜切除的胃癌组织中 STK15基因mRNA及蛋白质表达。RNA干扰技术(RNAi)抑制MKN45、AGS、N87细胞株STK15表达,流式细胞仪检测细胞周期变化,MTT法检测细胞增殖速率变化,数据行秩和检验及t检验。结果 SUN-16、KATOⅢ、MKN45、AGS、N87中STK15基因mRNA及蛋白质表达均明显高于GES-1;60份胃癌组织中STK15 mRNA及蛋白质表达水平中位值分别为3．175×10-3与1．261,明显高于正常组织的0．532×10-3与0．224(P<0．05);胃癌组织中STK15 mRNA水平与胃癌分化及浸润深度有关(P< 0．05);而蛋白质表达水平与胃癌分化有关(P<0．05)。抑制STK15表达后,MKN45、AGS、N87细胞株 G2期DNA含量细胞分别为(26．1±6．1)％、(25．6±7．9)％及(20．6±6．1)％,明显高于对照组的(12．5 ±4．9)％、(10．9±4．4)％及(8．7±3．5)％(P<0．05);细胞增殖速率减慢(P<0．05)。结论 STK15 的过表达可能在胃癌发生发展中起促进作用,可作为胃癌某些生物学行为新的判定指标;STK15的过表达与胃癌细胞增殖有关。     

Bmi-1基因对胃癌细胞增殖的影响及机制

目的:探索干扰Bmi-1基因后对其可能的下游基因Akt/PKB活性和P16INK4a基因表达的影响及对肿瘤细胞增殖和细胞衰老的作用.方法:用s iRNA技术干扰Bmi-1表达后,运用Western blot检测Bmi-1蛋白及相关蛋白pAkt、Akt和P16INK4a的表达,同时进行SA-β-Gal染色检测细胞衰老,软琼脂克隆形成实验检测细胞的增殖能力.结果:转染Bmi-1 i质粒组平均细胞衰老率28%±3.5%,而对照Ctrl i组为16%±2.7%,有明显统计学差异( P<0.01).转染Bmi-1 i质粒组细胞平均克隆形成数为3.4±1.4个,而对照Ctrl i组为11±2.3个,两组比较有明显的统计学差异( P<0.01).Bmi-1 i 组较Ctrl i 组Bmi-1和pAkt蛋白表达明显下降,而P16INK4a蛋白表达升高.结论:干扰Bmi-1可以通过降低Akt/PKB活性和上调P16INK4a蛋白表达,促进肿瘤细胞衰老并减弱肿瘤细胞的增殖能力.     

重组腺病毒RNA同时干扰3个基因对胃癌细胞增殖的实验研究

目的应用能同时表达3种不同基因（血管内皮生长因子VEGF、人端粒酶逆转录酶hTERT、抗凋亡基因bcl-x1）的短发夹RNA（short hairpin RNA,shRNA）的重组腺病毒对胃癌细胞系（BGC-823）进行RNA干扰,观察重组腺病毒对胃癌细胞增殖活性及细胞周期的影响。方法构建能同时表达3种不同的的重组腺病毒Ad—shVEGF—shTERT—sh bcl—x1,同时构建单独表达上述3个基因的重组腺病毒,将上述4种重组腺病毒同时感染BGC-823,MTF法检测BGC-823细胞增殖活性,流式细胞仪检测细胞凋亡情况,蛋白印迹检测目的蛋白的表达。结果重组腺病毒感染胃癌细胞后,3个目的基因的蛋白表达显著下调,细胞增殖明显受抑制,大量细胞凋亡。表达3个基因的重组腺病毒生长增殖抑制作用强于表达单个基因的重组腺病毒。结论相对于单独沉默1个基因,同时沉默3种不同基因,对胃癌细胞的生长抑制作用更强。同时沉默多个基因的表达是胃癌基因治疗研究的一个新的有效途径。     

AKT靶向miRNA表达载体的构建及其对胃癌细胞增殖侵袭的影响

目的构建靶向AKT基因的miRNA真核表达载体,观察其转染胃癌BGC-823细胞后对胃癌细胞增殖及侵袭的影响。方法设计并合成两条针对AKT基因的特异性miRNA干扰序列,与载体pcDNATM6．2-GW／EmGFP—miR连接,转化大肠杆菌,纯化并鉴定后转染BGC-823细胞,实时定量PCR及Westernblot技术鉴定重组体对AKT基因表达的干扰效果。使用M1Tr法检测细胞增殖能力,Transwell法检测细胞的侵袭能力。结果针对AKT基因的miRNA干扰质粒构建成功,BGC-825细胞转染该质粒后AKTmRNA及AKT蛋白表达明显受抑制,细胞增殖和侵袭能力均显著下降（P均〈0．05）。结论AKT靶向miRNA真核表达载体构建成功;其可有效抑制胃癌细胞的增殖和侵袭能力。     

上调Periostin基因表达对人胃癌细胞增殖的影响

背景：有文献报道,在内源性periostin低表达的人肿瘤细胞株中,过表达periostin基因可抑制细胞的非贴壁依赖性生长,提示该基因具有肿瘤抑制功能。但亦有较多研究发现periostin在一些肿瘤细胞中呈高表达,并可促进其生长、侵袭和转移。目的：探讨上调periostin基因表达对人胃癌细胞增殖的影响。方法：构建、鉴定pcDNA3.1-periostin重组质粒并稳定转染人胃癌细胞株SGC7901和MGC-803,同时设置空载体稳定转染组和不予转染的对照组。蛋白质印迹法检测各组细胞periostin蛋白表达,MTT实验检测细胞活力。结果：pcDNA3.1-periostin重组质粒构建成功。periostin稳定转染组SGC7901和MGC-803细胞periostin蛋白相对表达量明显增高,分别约为相应空载体稳定转染组的2.5倍和4倍（P〈0.05）;MTT实验显示两组细胞在5 d培养过程中的细胞活力均与相应对照组相似,两组间差异亦无统计学意义。结论：稳定转染pcDNA3.1-periostin重组质粒能使人胃癌细胞过表达periostin基因,但periostin基因过表达对人胃癌细胞,至少是本研究检测的两株胃癌细胞的增殖能力无明显影响。     

siRNA干扰galectin-3表达对人胃癌细胞株SGC-7901增殖、凋亡和化疗敏感性的影响

Galectin-3属于半乳凝素家族成员,参与细胞生长和凋亡、细胞黏附、新生血管形成、肿瘤浸润和转移等多种生理和病理过程,在多种恶性肿瘤细胞中呈高表达。目的:研究siRNA干扰galectin-3表达对人胃癌细胞株SGC-7901增殖、凋亡和化疗敏感性的影响。方法:合成靶向galectin-3的siRNA并转染SGC-7901细胞,以real time PCR和蛋白质印迹法检测干扰效果。CCK-8实验检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡。结果:Galectin-3siRNA转染24 h后转染效率为83.8%,转染后SGC-7901细胞的galectin-3表达显著受抑,mRNA和蛋白表达量分别较空白对照组降低87.8%和90.4%(P0.01)。转染后24 h、48 h和72 h,galectin-3 siRNA组SGC-7901细胞增殖抑制率分别为15.57%±1.45%、32.90%±0.76%和57.35%±1.05%,转染后72 h该组细胞凋亡率为46.17%±2.39%,均显著高于同时间点空白对照组、空脂质体组和阴性对照siRNA组(P0.01)。Galectin-3 siRNA组SGC-7901细胞由化疗药物奥沙利铂诱导的增殖抑制亦较其余三组显著增加(P0.01)。结论:以siRNA干扰galectin-3表达后,SGC-7901细胞增殖减少、凋亡增加,对化疗药物的敏感性增强,表明galectin-3有望成为胃癌基因治疗的有效靶点。     

RNA干扰沉默Twist基因对人膀胱癌T24细胞增殖的影响

目的 研究RNA干扰沉默Twist基因对人膀胱癌T24细胞周期和增殖的影响.方法 体外构建Twist基因的shBNA表达载体,Li-pefectamin 2000介导转染膀胱癌T24细胞,采用RT-PCR和Western印迹方法检测特异性shRNA对Twist基因沉默效果,转染后采用MTT法检测shR-NA对细胞增殖的作用;应用PI单染流式细胞术分析细胞周期的改变.结果 Twist基因的shRNA表达载体有效下调Twist基因表达(P<0.05).与对照组比较,细胞增殖明显抑制(P<0.05);同时引起细胞G1期阻滞,RNA干扰后,G1期细胞从(48.17±1.62)%增加到(74.34±3.24)%(P<0.05),s期细胞从(33.71±3.54)%减少到(11.58±1.02)%(P<0.05).结论 Twist-shRNA表达载体可以特异高效地抑制膀胱癌T24细胞Twist基因的表达,从而调控肿瘤细胞周期,抑制肿瘤细胞增殖.     

RNAi技术沉默Bcl-xL基因表达对食管癌细胞增殖和侵袭的影响

目的探讨RNA干扰（RNAi）技术沉默Bcl-xL基因表达对食管癌细胞增殖和侵袭能力的影响。方法将Bcl-xL小干扰RNA（siRNA）转染食管癌EC109细胞,分别采用荧光实时定量RT-PCR和Western blot方法检测食管癌细胞Bcl-xL mRNA和蛋白,采用软琼脂集落培养试验和Boyden小室模型检测癌细胞增殖和侵袭力。结果与对照组相比,siRNA转染组细胞Bcl-xL mRNA和蛋白水平明显下调（P均〈0.05）,所形成的软琼脂集落数和穿膜细胞数明显减少（P均〈0.05）,并均呈浓度依赖性。结论采用RNAi技术沉默Bcl-xL基因表达,可抑制食管癌细胞的增殖和侵袭能力。     

shRNA沉默干扰HMGA2基因对胃癌细胞株MKN-45的增殖与凋亡的影响

目的:观察小分子RNA(shRNA)沉默后HMG-A2基因在胃癌细胞株MKN-45的表达,并探讨HMGA2基因对胃癌细胞的增殖与凋亡的影响.方法:构建针对人HMGA2基因的shRNA真核表达载体,瞬时转染人胃癌细胞株MKN-45.用细胞免疫组化的方法观察转染72h后HMGA2的蛋白表达水平,以MTT比色法、流式细胞术检测转染后MKN-45细胞的生长增殖、凋亡的情况.结果:转染HMGA2-shRNA组的蛋白表达强度(171.34±19.61)明显弱于scrambled组(143.48±19.04)和空白对照组(141.79±18.09,P<0.05),较之scrambled组(5.66%±0.63%)和空白对照组,HMGA2-shRNA组(39.32%±2.37%)能明显抑制细胞的增殖(P<0.05),HMGA2-shRNA组的凋亡率(39.67%±2.35%)与scrambled组(4.29%±1.33%)和空白对照组(5.05%±1.84%)相比明显增加(P<0.05).结论:靶向HMGA2基因的shRNA可以有效抑制人胃癌MKN-45细胞的生长,并促进细胞的凋亡,HMGA2可能是胃癌治疗的一个潜在靶点.     

二甲双胍抑制人胰腺癌细胞株Patu8988的增殖

二甲双胍孵育胰腺癌细胞株Patu8988 72 h后应用CCK-8(Cell counting Kit-8)检测细胞增殖,流式细胞仪分析细胞周期,RT-PCR检测相关基因表达.干预后细胞增殖呈浓度依赖性抑制(r=0.994.,P＜0.05),细胞周期G0/G1期所占比例显著增加,G2/M期显著减少(均P＜0.05),相关基因MMP-3、CyclinD1、p53表达下调,Bax表达上调.结果表明二甲双胍抑制Patu8988细胞增殖,主要机制可能与阻滞细胞周期、影响相关基因表达有关.     

RNA干扰DNMT1基因对胰腺癌细胞BxPC-3增殖的影响及相关机制

目的:探讨RNA干扰DNMT1基因对胰腺癌细胞BxPC-3增殖的影响及相关机制.方法:利用Lipofectamine TM2000转染DNMT1-siRNA至胰腺癌细胞BxPC-3.实验共分为3组:实验组(转染DNMT1-siRNA)、阴性对照组(转染negative-siRNA)和空白对照组(转染脂质体).转染48h后,应用荧光定量PCR法和Western blot法分别检测细胞中DNMT1 mRNA和蛋白的表达水平;MTT法检测细胞体外增殖活力;FCM法检测细胞凋亡;甲基化特异性PCR法(MSP)检测抑癌基因p16、RASSF1A和ppENK的启动子甲基化状态.结果:与空白对照组和阴性对照组相比,实验组的DNMT1 mRNA及蛋白表达量均显著降低(P<0.01);实验组细胞增殖明显受到抑制(P<0.05),细胞凋亡率明显增加(44.46%±5.98%vs3.74%±1.02%vs5.07%±1.16%,P<0.01).空白对照组与阴性对照组的p16、RASSF1A和ppENK基因甲基化阳性,而实验组的p16和ppENK基因甲基化阴性,RASSF1A基因部分甲基化.结论:DNMT1基因表达下调后,能抑制胰腺...     

siRNA沉默USP22基因对胃癌细胞增殖的抑制作用

目的:探讨小干扰RNA(siRNA)沉默泛素特异性肽酶22(ubiquitin specific peptidase22,USP22)对胃癌细胞增殖的影响.方法:针对USP22基因设计3条siRNA及阴性siRNA,用脂质体Lipofectamine 2000转染胃癌AGS细胞,通过实时定量PCR和Western blot检测转染后AGS细胞USP22基因中mRNA和蛋白表达水平的变化情况,流式细胞术检测细胞周期分布变化情况,CCK8法检测细胞增殖率及抑制率.结果:转染48h后,3条siRNA均能显著抑制USP22 mRNA和蛋白的表达.其中,以转染USP22 siRNA3后效果最明显,mRNA和蛋白表达分别下降80.47%±2.99%和79.40%±3.58%.细胞增殖明显受到抑制,USP22 siR-NA3组细胞增殖抑制率为27.33%±3.49%.细胞周期中G0/G1期细胞增多,S期细胞减少.结论:采用RNA干扰技术能够有效地沉默USP22基因的表达,并显著抑制胃癌细胞的增殖.     

核糖核酸干扰沉默生长抑制因子1基因表达对胃腺癌AGS细胞凋亡的影响

目的 探讨RNA干扰沉默生长抑制因子1(ING1)基因表达对胃腺癌AGS细胞凋亡的影响。方法人胃腺癌细胞株AGS经常规培养后分为空白对照组、阴性对照组[转染阴性对照小干扰RNA(siRNA)序列]、siRNA组（转染特异性ING1 siRNA序列）。应用免疫荧光、定量PCR和免疫印迹方法检测转染后不同时间的ING1基因表达沉默效果。应用流式细胞技术检测ING1基因表达沉默对AGS细胞凋亡的影响。结果ING1主要在AGS细胞胞质中表达。在荧光定量PCR技术检测中将空白对照组的ING1基因表达量设为1,则转染后24和40 h阴性对照组的ING1基因相对表达量分别为0.88±0.16和0.92±0.13,siRNA组ING1基因相对表达量分别为0.38±0.09和0.17±0.06。空白对照组和阴性对照组比较,P值分别=0.78和0.82。空白对照组和siRNA组比较,P值均=0.01。阴性对照组和siRNA组比较,P值分别=0.02和0.01。免疫印迹技术检测结果显示,转染后40 h AGS细胞中ING1蛋白表达水平明显下调。空白对照组AGS细胞凋亡率为11.06％±0.97％,阴性对照组、siRNA组转染40 h后AGS细胞凋亡率为11.82％±0.69％和 6.70％±0.41％。空白对照组与siRNA组比较P=0.024。空白对照组与阴性对照组比较P=0.76。阴性对照组与siRNA组比较P=0.019。结论ING1在人胃癌细胞凋亡过程中发挥重要作用,可能成为胃癌基因治疗的新靶点。     

联合转染Survivin shRNA和CD44v3shRNA对结直肠癌SW480细胞增殖和侵袭能力的影响

目的:探讨联合转染Survivin短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)和CD44v3 shRNA对结直肠癌SW480细胞增殖和侵袭能力的影响.为结直肠癌的基因治疗提供实验依据.方法:设计并构建能够稳定转录shRNA并干扰Survivin和CD44v3分子表达的质粒,将其单独及联合转染结直肠癌S...     

西咪替丁对胃癌细胞SGC-7901增殖及凋亡的影响

目的:观察西咪替丁对人胃癌SGC-7901细胞增殖、细胞周期分布及凋亡的影响,并初步探讨其作用机制.方法:培养人胃癌SGC-7901细胞,以不同浓度的西咪替丁处理后用MTT法检测SGC-7901细胞的增殖情况;流式细胞术检测癌细胞周期和凋亡;Hoechst33258染色后荧光显微镜观察药物作用后癌细胞的形态变化;透射电镜观察用药后细胞超微结构的改变;Western印记法检测Bcl-2和Bax蛋白表达.结果:以不同浓度的西咪替丁分别处理人胃癌SGC-7901细胞24h和48 h,结果发现,在0.5,1,2.5,5,10 mmol/L时对SGC-7901细胞的增殖具有显著的抑制作用,与对照组相比差异显著(24 h:0.705±0.018,0.560±0.038,0.408±0.029,0.276±0.042,0.205±0.031 vs 0.803±0.012,P<0.05;48 h:0.902±0.024,0.671±0.015,0.420±0.030,0.180±0.037,0.0117±0.021 vs 1.079±0.040,P<0.05),并呈时间和剂量依懒性,而在0.25 mmol/L以下浓度对SGC-7901细胞未见明显细胞毒作用;0.5-10 mmol/L西咪替丁作用后,可观察到典型的细胞凋亡形态学改变;流式细胞仪检测可见凋亡峰,G0/G1期细胞明显增多(60.83±2.27,67.21±1.18,75.15±4.01,81.88±3.10,86.99±1.43 vs 50.28±1.97,P<0.05);西咪替丁还可下调SGC-7901细胞中的Bcl-2蛋白表达,上调Bax蛋白表达.结论:西咪替丁可改变细胞周期分布,并能通过下调Bcl-2、上调Bax蛋白表达,诱导SGC-7901细胞凋亡,从而抑制细胞增殖.