凋亡相关因子Caspase-3、Survivin在急性胰腺炎患者中的表达及意义

目的探讨急性胰腺炎患者凋亡相关因子Caspase-3和Survivin的表达及其临床意义。方法选取82例急性胰腺炎患者,其中轻症38例,重症44例。所有患者均术中留取胰腺组织标本进行免疫组化。观察轻症与重症患者的HE染色与免疫组化表现,比较HE病理评分、Caspase-3、Survivin平均光密度及Caspase-3、Survivin阳性率。结果轻症患者的HE染色表现为胰岛组织出血,胰腺腺泡、小叶、细胞等间隙发生明显增宽;重症患者为正常结构消失、组织坏死、中性粒细胞浸润。轻症患者的Caspase-3免疫组化表现为胰腺腺泡组织胞浆深染,重症患者为淡染;轻症与重症患者Survivin免疫组化均表现为胰腺组织胞浆黄染,但重症患者颜色更深。轻症患者的HE病理评分、Survivin平均光密度低于重症患者(P0.05),Caspase-3平均光密度高于重症患者(P0.05)。轻症患者Caspase-3阳性率55.26%,高于重症患者31.82%(P0.05)。轻症患者Survivin阳性率26.32%,低于重症患者52.27%(P0.05)。结论急性胰腺炎患者早期已出现凋亡系统紊乱,表现为轻症患者的Caspase-3高表达与Survivin低表达。随着病情进展,Caspase-3表达减弱、Survivin表达加强,二者有负反馈调节作用。     

联用谷氨酰胺和吲哚美辛对重症急性胰腺炎大鼠胰腺细胞凋亡的影响

目的：研究联用谷氨酰胺和吲哚美辛对重症急性胰腺炎（severe acute pancreatitis，SAP）大鼠胰腺细胞凋亡的影响，并探讨其作用机制。方法：将大鼠随机分成5组：谷氨酰胺治疗组；吲哚美辛治疗纽；联合治疗组；重症急性胰腺炎组和正常对照组。术后12、24和36h处死大鼠。取大鼠胰腺病理标本，采用TUNEL法检大鼠测胰腺腺泡细胞凋亡指数。结果：正常对照大鼠胰腺腺泡细胞凋亡指数2．97％。另4组大鼠胰腺腺泡细胞凋亡指数均明显高于对照组，3个治疗组均明显高于SAP组，其中联合治疗组大鼠胰腺腺泡细胞凋亡指数最高。结论：谷氨酰胺和吲哚美辛能促使SAP大鼠胰腺细胞凋亡增加，两药联用有协同作用。     

视黄酸通过RARα对缺氧缺血性脑损伤后神经元凋亡的影响

目的 探讨视黄酸通过视黄酸核受体α（RARα）对缺氧缺血性脑损伤（HIBD）后神经元凋亡的影响。 方法 采用维生素A缺乏饲料和维生素A正常的普通饲料分别构建视黄酸缺乏（RAD）和视黄酸正常(RAN)新生SD模型大鼠,随机选取24只RAD新生模型鼠作为RAD组,选取48只RAN新生模型鼠随机分为RAN组和假手术组,每组24只。RAN组和RAD组采用经典Rice法进行分离结扎左侧颈总动脉建立HIBD模型,假手术组只做颈部皮肤切开缝合。分别于术后第3天和第7天,采用TUNEL法检测脑皮质神经元凋亡情况,于术后第7、14、21和28天进行神经功能缺损评估。体外分离培养原代神经元,建立缺氧缺糖损伤(OGD)模型,将原代神经元细胞分为对照组、OGD组、视黄酸OGD组,采用实时荧光定量聚合酶链反应（Real-time PCR）和Western blot法检测各组RARα、胶质细胞源性神经营养因子（GDNF）及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-8（Caspase-8）的mRNA及蛋白表达水平。采用RARα基因小干扰RNA重组腺病毒（Ad-si RARα）感染原代神经元,将原代神经元分为沉默组和阴性对照组,检测RARα、GDNF、Caspase-8的mRNA和蛋白表达水平。 结果 ①RAD组和RAN组大鼠在缺氧缺血后第3天到第7天,皮质凋亡神经元数量逐渐增加,且RAD组神经元凋亡数量明显多于RAN组;RAD组大鼠各时间点的神经功能损伤评分均高于RAN组(P<0.05)。②视黄酸OGD组神经元的RARα、GDNF mRNA表达水平［(1.49±0.05)、(0.61±0.02)］均高于OGD组［（0.51±0.04）、（0.21±0.02）］,Caspase-8的mRNA表达水平显著低于OGD组［(1.13±0.09) vs （1.79±0.11）］,且组间差异均有统计学意义（P<0.01）;各组神经元的蛋白表达水平与mRNA表达水平基本一致。③沉默组神经元的RARα、GDNF mRNA表达水平均低于阴性对照组［RARα(1.07±0.12) vs （2.33±0.08）,P<0.01］;GDNF［(0.11±0.01) vs （0.13±0.01）,P<0.05］,沉默组神经元的Caspase-8 mRNA表达水平较阴性对照组高［(2.92±0.20) vs （2.40±0.18）,P<0.01］;各组蛋白表达水平与mRNA表达水平基本一致。 结论 视黄酸可通过RARα上调GDNF表达,下调Caspase-8的表达,进而抑制HIBD后神经元的凋亡。     

Survivin蛋白在大鼠急性出血坏死性胰腺炎中的表达及作用

目的研究凋亡抑制蛋白Survivin的表达在大鼠急性出血坏死性胰腺炎(ANP)发病机制中的作用。方法 40只SD大鼠随机分为假手术组、造模后6h、12h、24h组,每组10只。实验组采用胰胆管逆行穿刺注射4.5%牛磺胆酸钠建立不同炎症程度的ANP模型,比较假手术组与各实验组胰腺组织病理学变化,检测各组血清淀粉酶(AMY)、血清脂肪酶(LPL)含量,应用免疫组化及RT-PCR方法检测Survivin蛋白在胰腺组织中的表达,TUNEL法检测凋亡的胰腺组织细胞。结果各实验组AMY明显高于假手术组,其中ANP12h组AMY为(6987±261)U/L,与假手术组差异有统计学意义(P<0.05);ANP各组LPL活性较假手术组明显下降,差别有显著统计学意义(P<0.01),建立模型后随时间延长,胰腺组织病理损害呈进行性发展,胰腺组织出血、坏死。通过免疫组化检测假手术组胰腺组织无Survivin蛋白的表达;大鼠ANP模型建立后,随时间进展,胰腺Survivin蛋白及其mRNA的表达水平呈逐渐增强;胰腺导管细胞凋亡水平逐渐升高,而胰腺腺泡细胞凋亡水平则逐渐下降。结论凋亡抑制蛋白Survivin的表达在ANP发病机制中起着重要作用,其水平的高低可用来预测和评估ANP严重程度的作用。     

二氮嗪对大鼠心肌缺血-再灌流损伤细胞凋亡的影响

目的观察二氮嗪对缺血-再灌流心肌细胞凋亡,以及对Bax、Bcl-2和Caspase-3表达的影响。方法21只SD大鼠随机分为假手术组(sham operation,SO),缺血-再灌流组(ischemia/reperfusion,IR)和二氮嗪处理组(Diazoxide,DI)。SO组和IR组静脉注射相应量溶媒,DI组12.5 mg/kg剂量静脉注射二氮嗪。10min后SO组不结扎前降支,4 h后取心脏,而IR组和DI组结扎前降支2 h,再灌流2 h。采用TUNEL法和免疫组化法检测缺血心肌细胞凋亡和Bax、Bcl-2、Caspase-3表达,及心肌梗死范围。结果与SO组相比,IR和DI组心肌细胞凋亡率显著增加(P<0.05),Bax、Bcl-2和Caspase-3蛋白阳性细胞指数明显升高(P<0.05);与IR组相比,DI组明显降低心肌细胞凋亡率(P<0.05)和Bax,Caspase-3蛋白阳性细胞指数(P<0.05),增加Bcl-2蛋白阳性细胞指数(P<0.05)。IR组心肌梗死范围为(36.9±2.3)%,DI组为(20.0±8)%,两组差异有显著性(P<0.05)。结论二氮嗪通过上调Bcl-2表达,下调Bax及Caspase-3表达而减少在体大鼠缺血-再灌流损伤心肌细胞凋亡。     

急性胆源性胰腺炎LTB4、TRPV1及CGRP表达的意义

目的:通过检测白三烯B4(leukotriene B4,LTB4)、瞬时电位香草酸亚型受体1(Transient receptor potential vanilloid channel-1,TRPV1)及降钙素基因相关肽(Calcitonin gene related peptide,CGRP)等指标变化,分析LTB4-TRPV1信号活化在急性胆源性胰腺炎中的作用。方法:清洁级SD大鼠60只,按体重随机分为3组,正常组、模型组、TRPV1拮抗剂组。采用胆胰管开口十二指肠结扎法制备重症胰腺炎模型,术后3h开始分组给药,术后12h处死全部大鼠,腹主动脉取血并收集胰腺组织备测。应用光镜检测胰腺组织超微结构变化,应用ELISA技术检测LTB4变化,应用Real-time PCR技术检测TRPV1、CGRP变化。结果: 正常组胰腺肉眼见胰腺呈浅粉红色;模型组大鼠肉眼见胰腺坏死、出血,部分可见腹水,腹水含血,光镜下见胰腺腺体结构紊乱,小叶间隔明显增大,腺体实质内可见大片凝固性坏死并伴有出血,坏死灶及周围有大量炎细胞浸润;TRPV1拮抗剂组大鼠胰腺组织充血水肿较模型组减轻,未见腹水,光镜下胰腺实质可见少许坏死、出血及少量炎性细胞浸润,其组织病理学评分较模型组下降,有统计学意义(P＜0.05)。模型组见血淀粉酶、LTB4表达明显上升,分别为5672.65±189.54、489.32±22.76;TRPV1拮抗剂组血淀粉酶、LTB4表达下降,分别为2134.54±121.69、231.25±16.78,较模型组有统计学意义(P＜0.05)。模型组胰腺组织TRPV1、CGRP mRNA表达上升,分别为2.78±0.41、2.17±0.33;TRPV1拮抗剂组TRPV1、CGRP mRNA表达下降,分别为1.24±0.21、1.19±0.11;与模型组比较有统计学意义(P＜0.05)。结论: 内源性LTB4活化TRPV1信号在胆道梗阻性胰腺炎可能发挥至关重要的作用,阻断TRPV1信号转导将为急性胰腺炎的治疗提供新的思路。     

前列腺素E1预先给药对出血性休克复苏后大鼠肾组织Caspase-3表达的影响

目的 探讨PGE1预先给药对急性出血性休克复苏后大鼠肾组织活化Caspase-3以及TNF-α mRNA,iNOS mRNA表达的影响.方法 32只雄性SD健康大鼠随机分成4组(n=8),A:正常对照组,不进行任何处理;B:手术对照组,0.5 mL生理盐水尾静脉注射,1 h后切开左侧腹股沟皮肤暴露股动静脉;C:出血性休克复苏组,大鼠硫喷妥纳麻醉后,经股静脉穿刺置管放血,平均动脉血压降至25～35 mmHg,维持1 h,自体温血复苏30 min,维持平均动脉血压80～100 mmHg,制作失血性休克复苏模型;D:出血性休克复苏+lipo-PGEl预先给药组,lipo-PGEl按10 μg/kg溶于0.5 mL生理盐水尾静脉汴射,1 h后制作出血性休克复苏模型.各组分别于复苏后6 h时间点用Northern blotting法检测肾组织TNF-α mRNA和iNOS mRNA的表达;免疫组化检测肾脏组织活化Caspase-3的表达.数据采用单因数方差分析(SNK-q检验),以P<0.05为差异具有统计学意义.结果 出血性休克复苏模型组肾组织出现Caspase-3阳性表达细胞;TNF-α mRNA和iNOS mRNA的表达也明显高于正常对照组[(0.651±0.028)vs.(0.030±0.003),(0.524±0.022)vs.(0.026±0.003),P<0.05]和手术对照组[(0.651±0.028)vs.(0.029±0.002),(0.524±0.022)vs.(0.025±0.003),P<0.05];预先给药组肾组织Caspase-3阳性细胞数量显著减少;TNF-αmRNA和iNOS mRNA的表达明显低于模型组[(0.250±0.019)vs.(0.651±0.028),(0.203±0.020)vs.(0.524±0.022),P<0.05],正常对照组和手术对照组间肾组织Caspase-3的表达以及TNF-α mRNA和iNOS mRNA的表达尢显著差异[(0.029±0.002)vs.(0.030±0.003),(0.029±0.002)vs.(0.030±0.003),P>0.05].结论 lipo-PGEl预先给药可以下调出血性休克复苏后大鼠肾组织Caspase-3的表达水平,其机制可能与在基因转录水平抑制TNF-α和I-NOS的表达有关.     

脑缺血预处理后Caspase-8蛋白的表达与神经元的保护作用

目的探讨脑缺血预处理后凋亡相关基因 Caspase- 8蛋白表达与神经元保护作用的关系. 方法雄性 Wistar大鼠 70只,随机分为对照组( 10只)、预处理组( 10只)、缺血预处理组( 25只)和缺血组( 25只).四血管阻断法复制全脑缺血模型,尼氏和 TUNEL染色法观察脑皮质及海马 CA1区神经元数和凋亡细胞数,免疫组化方法检测 Caspase- 8蛋白在缺血预处理后表达变化情况. 结果①缺血 7 d时,缺血预处理组皮质及海马 CA1区神经元数无显著变化 [( 268± 8.5)个 /视野 ],缺血组神经元数则显著减少 [(135.0± 5.6)个 /视野 ].②缺血预处理组 Caspase- 8蛋白缺血 12 h表达升高 [( 125.6± 9.0)个 /视野 ], 24 h达高峰 [( 167.0± 8.1)个 /视野 ]; 缺血组 caspase- 8蛋白缺血 6 h表达升高 [( 154.2± 18.4)个 /视野 ], 12 h达高峰 [( 222.8± 17.1)个 /视野 ];各对应时点缺血组 Caspase- 8蛋白阳性表达细胞较缺血预处理组明显增多.③缺血预处理组和缺血组均在缺血 12 h皮质及海马 CA1区凋亡细胞数开始增多 [( 15.5± 2.1), (39.8± 3.9)个 /视野 ],缺血 48 h凋亡细胞数达高峰 [( 68.3± 13.6), (328.4± 24.0)个 /视野 ],但缺血组凋亡细胞数较缺血预处理组显著增多. 结论全脑缺血可能通过诱导 Caspase- 8蛋白的表达增多,启动细胞凋亡,导致缺血后神经元凋亡的发生.缺血预处理延缓并降低缺血后 Caspase- 8蛋白表达并减少细胞凋亡的发生可能是其神经元保护作用机制之一.     

生长抑素区域动脉灌注对SAP鼠胰腺腺泡细胞凋亡的影响

[目的]探讨生长抑素区域动脉灌注对重症急性胰腺炎(SAP)大鼠胰腺腺泡细胞凋亡的影响.[方法]SD大鼠64只,随机分为假手术组(A组),SAP组(B组),生长抑素外周静脉注射组(C组),生长抑素区域动脉灌注组(D组).测定各组大鼠的血清淀粉酶(Amy),观察胰腺病理变化,并检测胰腺腺泡细胞的凋亡率.[结果]①制成SAP模型后,各组Amy水平显著上升,而C组和D组可使Amy下降,以D组下降更为明显.②C组和D组生长可使胰腺腺泡细胞凋亡率明显上升,胰腺病理损害程度减轻,以D组作用更强.[结论]①生长押素可诱导SAP大鼠胰腺细胞凋亡,减轻胰腺病理损害,是治疗SAP的有效方法.②生长抑素区域动脉灌注是治疗SAP的增效途径.     

LINC01224靶向miR-125b对口腔鳞癌细胞增殖及凋亡的影响

摘要：目的?探讨长链非编码RNA(LncRNA)LINC01224是否通过调控微小RNA-125b(miR-125b)的表达，从而影响口腔鳞癌(OSCC)细胞增殖及凋亡。方法?采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测OSCC患者癌组织及癌旁组织中LINC01224的表达水平；体外培养OSCC细胞系CAL-27，将si-NC、si-LINC01224、si-LINC01224与anti-miR-NC、si-LINC01224与anti-miR-125b转染至CAL-27细胞；甲基噻唑基四唑(MTT)试验检测细胞增殖能力；流式细胞术检测细胞周期与细胞凋亡率；双荧光素酶报告试验验证LINC01224与miR-125b的靶向结合关系；western blot检测半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶3前体蛋白(pro-caspase-3)、增殖标记蛋白细胞增殖核抗原67(Ki67)、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(clv-caspase-3)、P21蛋白的表达水平。结果?与癌旁组织相比，OSCC患者癌组织中LINC01224的表达水平(1.00±0.05 vs 2.43±0.17)显著升高(t=94.345，P<0.05)，miR-125b的表达水平(0.98±0.06 vs 0.22±0.02)显著降低(t=14.838，P<0.05)；与si-NC组比较，si-LINC01224组细胞存活率[(100.02±6.73)% vs (47.94±4.69)%]显著降低(t=19.047，P<0.05)，G1期细胞比例[(31.03±3.01)% vs (42.29±4.12)%]显著增加(t=6.615，P<0.05)，S期细胞比例[(34.18±3.38)% vs (23.49±2.57)%]显著减少(t=7.553，P<0.05)，细胞凋亡率[(8.10±0.92)% vs (24.17±1.74)%]显著升高(t=24.494，P<0.05)，Ki67、pro-caspase-3蛋白水平显著降低(P<0.05)，P21、clv-caspase-3蛋白水平显著升高(P<0.05)；双荧光素酶报告试验证实LINC01224与miR-125b靶向结合；与si-LINC01224+anti-miR-NC组比较，si-LINC01224+anti-miR-125b组细胞存活率[(48.03±4.57)% vs (90.01±5.59)%]显著升高(t=17.442，P<0.05)，细胞凋亡率[(24.11±1.58)% vs (12.81±1.12)%]显著降低(t=17.504，P<0.05)，G1期细胞比例[(42.27±4.10)% vs (35.09±3.18)%]显著减少(t=4.151，P<0.05)，S期细胞比例[(23.53±2.54)% vs (30.03±2.96)%]显著增加(t=4.999，P<0.05)，pro-caspase-3、Ki67蛋白水平显著升高(P<0.05)，clv-caspase-3、P21蛋白水平显著降低(P<0.05)。结论?LINC01224能够靶向调控miR-125b的表达，从而促进OSCC细胞增殖及抑制细胞凋亡。     

葛根素对心肌缺血再灌注大鼠心肌组织Bcl-2、Bax和Caspase-3表达水平的影响

目的探讨葛根素对心肌缺血再灌注大鼠心肌组织细胞凋亡的影响。方法以雄性Wistar大鼠为研究对象,将实验动物分为5组：即假手术组、心肌缺血再灌注模型组（I/P）、葛根素2mg/Kg给药组（A组）、葛根素5mg/Kg给药组（B组）和葛根素10mg/Kg给药组（C组）。采用结扎大鼠冠状动脉左前降支（LAD）的方法,建立大鼠心肌缺血再灌注损伤模型;采用免疫组织化学方法检测,大鼠心肌组织中Bcl-2、Bax和Caspase-3的蛋白含量采用RT-PCR法,检测大鼠心肌组织中Bcl-2、Bax和Caspase-3mRNA的表达水平。结果与假手术组相比较,心肌缺血再灌注模型组Bcl-2、Caspase-3的蛋白含量和Bcl-2、Caspase-3mRNA的表达水平均显著降低（P〈0.01）,而Bax的蛋白含量和BaxmRNA的表达水平均显著升高（P〈0.01）;B、C组Bcl-2、Bax、Caspase-3的蛋白含量和Bcl-2、Bax、Caspase-3mRNA的表达水平均未见显著差异（P〉0.01）;A组Bcl-2、Caspase-3的蛋白含量和Bcl-2、Caspase-3mRNA的表达水平均显著降低（P〈0.01）,而Bax的蛋白含量和Bax mRNA的表达水平均显著升高（P〈0.01）。结论葛根素能够通过提高Bcl-2、Caspase-3的表达及降低Bax的表达调控心肌组织细胞的凋亡,从而起到保护心肌组织的功能。     

NG-硝基-L-精氨酸对脂多糖诱导大鼠肺损伤时肺表面活性物质和细胞凋亡的影响

目的 探讨NG-硝基-L-精氨酸(L-NA)对内毒素性肺损伤大鼠肺表面活性物质(PS)和细胞凋亡的影响.方法 雄性SD大鼠24只,按随机数字表法均分为对照组、模型组、L-NA治疗组.模型组、L-NA治疗组舌下静脉注射脂多糖(LPS)复制内毒素性肺损伤模型;对照组给予等量生理盐水.L-NA治疗组于注射LPS 3 h后给予L-NA 20 mg/kg;对照组和模型组给予等量生理盐水.6 h后处死动物,取肺组织,用原位杂交法测定肺组织表面活性物质相关蛋白A(SP-A)mRNA表达;用流式细胞术检测肺组织细胞凋亡率;用蛋白质免疫印迹法(Western blotting)检测天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3(caspase-3)蛋白表达;用免疫组化法测定Bcl-2和Bax蛋白表达.结果 与对照组比较,模型组SP-A mRNA表达[吸光度(A)值]明显下降(0.071±0.017比0.113±0.021),细胞凋亡率[(25.04±4.57)%比(11.37±3.08)%]、caspase-3蛋白表达(A值:298.64±37.11比110.24±14.35)、Bax蛋白表达(A值:0.145±0.011比0.076±0.010)明显升高,Bcl-2蛋白表达(A值:0.064±0.011比0.073±0.009)和Bcl-2/Bax比值(0.447±0.086比0.976±0.157)明显下降(均P<0.01).与模型组比较,L-NA治疗组SP-A mRNA表达(A值:0.085±0.015)和Bcl-2蛋白表达(A值:0.070±0.087)明显增强(P<0.01和P<0.05),但细胞凋亡率[(20.67±1.35)%]、caspase-3蛋白表达(A值:268.75±42.56)、Bax蛋白表达(A值:0.142±0.012)和Bcl-2/Bax比值(0.498±0.069)均无明显变化(均P>0.05).结论 L-NA不通过抑制肺细胞凋亡来减轻内毒素性肺损伤的程度,对调节凋亡相关基因caspase-3和Bax也无明显影响;而是可通过增强PS表达减轻内毒素性肺损伤.     

miR-494负调控ROCK1、PTEN抑制急性胰腺炎细胞凋亡的机制研究

目的:探讨miR-494负调控ROCK1、PTEN进而抑制胰腺细胞凋亡并参与急性胰腺炎发生发展的机制研究。方法:雨蛙素处理大鼠胰腺腺泡AR42J细胞,ELISA法检测细胞培养上清液中淀粉酶、TNF-α、IL-1、IL-6水平以验证急性胰腺炎细胞模型。RT-PCR检测正常AR42J细胞（对照组）、急性胰腺炎细胞模型（模型组）中的miR-494表达水平。流式细胞法检测对照组、转染阴性对照miRNA的急性胰腺炎细胞模型（阴性对照组）以及转染miR-494的急性胰腺炎细胞模型（miR-494转染组）的细胞凋亡情况。Western Blot检测对照组、阴性对照组以及miR-494转染组中促凋亡蛋白ROCK1、PTEN的表达情况。结果:雨蛙素处理AR42J细胞8 h、12 h时的细胞培养上清液中的淀粉酶、TNF-α、IL-1、IL-6水平均显著高于0 h及对照组,差异均有统计学意义（ P<0.05）,提示模型构建成功。急性胰腺炎细胞模型构建后8 h、12 h、24 h的miR-494表达水平均显著高于4 h时及对照组,差异均有统计学意义（ P<0.05）。模型组的细胞凋亡比例显著高于对照组,miR-494转染组的细胞凋亡比例显著低于模型组,差异均有统计学意义（ P<0.05）。miR-494转染组ROCK1、PTEN蛋白的表达水平均显著低于模型组和阴性对照组,差异均有统计学意义（ P<0.05）。 结论:急性胰腺炎发生时过表达的miR-494能够抑制促凋亡蛋白表达,从而抑制胰腺腺泡细胞凋亡并促进急性胰腺炎发生发展。     

间充质干细胞条件培养基对HPV18型阳性人子宫颈癌HeLa细胞凋亡的影响

目的 观察人脐带间充质干细胞条件培养基(MSC-CM)对HPV18型阳性人子宫颈癌HeLa细胞(HPV18 HeLa细胞)凋亡相关基因的调控作用,以及对HPV18 HeLa细胞凋亡的影响。方法 制备MSC-CM,设置空白组、低剂量组和高剂量组,配制相应浓度分别为0%、20%和60%的MSC-CM处理HPV18 HeLa细胞,使用CCK-8法、克隆形成实验检测细胞活力和克隆形成能力;磷脂结合蛋白Ⅴ-异硫氰酸荧光素/碘化丙啶双染法凋亡染色和流式细胞术检测细胞凋亡的变化;实时荧光定量PCR检测凋亡相关基因mRNA表达量。结果 与空白组相比,在低剂量组或高剂量组的MSC-CM作用下,HPV18 HeLa细胞的生长活性和克隆形成能力均降低,细胞凋亡率升高(P均< 0.05),且高剂量组作用效果均比低剂量组明显(P均< 0.05)。与空白组相比,HPV18 HeLa细胞在低剂量或高剂量组MSC-CM的作用下,HPV18 HeLa细胞中p53、胱天蛋白酶-3(Caspase-3)、Caspase-9、Bax的mRNA表达量升高,而B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)的mRNA表达量降低(P均< 0.05),高剂量组比低剂量组的作用效果更明显(P < 0.05)。结论 MSC-CM能诱发HPV18 HeLa细胞凋亡,可能与p53、Caspase-3、Caspase-9、Bax以及Bcl-2等基因表达差异相关。     

中药筋脉通对高糖培养海马神经元细胞Bax、Bcl-2和Caspase-3蛋白表达的影响

目的探讨中药筋脉通含药血清对高糖培养海马神经元细胞的保护作用。方法采用血清药理学方法制备筋脉通含药血清(JMT),原代培养新生鼠海马神经元细胞分别接种于不同条件的培养基中,分为正常对照组、高糖组、阳性对照组以及JMT大、中、小剂量组。不同培养基中培养72 h后使用Western blotting检测其Bax、Bcl-2和Caspase-3蛋白的表达。结果与正常对照组相比,高糖组Caspase-3、Bax表达明显增加(P<0.01),Bcl-2的表达下降(P<0.05);与高糖组相比,阳性对照组和JMT各剂量组的Caspase-3、Bax表达明显下降(P<0.01),Bcl-2的表达升高(P<0.05);与阳性对照组相比,JMT各剂量组的Caspase-3、Bax表达下降(P<0.05),筋脉通大、中剂量组Bcl-2的表达增加(P<0.05)。结论筋脉通含药血清可能通过提高Bcl-2蛋白的表达,减少Bax、Caspase-3的表达,上调Bcl-2/Bax的比值,从而减少海马神经元细胞的凋亡。     

辛伐他汀对老年COPD大鼠肺泡上皮细胞凋亡的干预作用

目的：探讨辛伐他汀对老年COPD大鼠肺泡上皮细胞凋亡干预作用。方法39只老年Wistar大鼠随机分为正常组（A组）、COPD模型组（B组）及辛伐他汀干预组（C组）,每组各13只。B、C组采用熏香烟联合气道内滴入脂多糖法建立大鼠COPD模型,在造模2周后C组给予辛伐他汀（2.5 mg/kg）灌胃6周,A、B组给予同等量生理盐水灌胃。8周后处死大鼠,并观察大鼠肺组织病理变化,检测肺泡上皮细胞凋亡及凋亡相关因子半胱氨酸蛋白酶-3（Caspase-3）、诱导型一氧化氮合酶（iNOS）、内皮型一氧化氮合酶（eNOS） mRNA表达,并计算凋亡指数。结果与A组相比, B组和C组凋亡指数、Caspase-3及iNOS mRNA表达增加（P均＜0.01）,eNOS mRNA表达降低（P＜0.01）;与B组相比,C组凋亡指数、Caspase-3及iNOS mRNA表达降低（P均＜0.01）,eNOS mRNA表达增加（P＜0.01）。各组间肺泡上皮细胞凋亡指数与Caspase-3及iNOS mRNA表达呈正相关（P＜0.05）,与eNOS mRNA表达呈负相关（P＜0.05）。各组间Caspase-3 mRNA与iNOS mRNA表达呈正相关（P＜0.05）,与eNOS mRNA表达呈负相关（P＜0.01）。结论辛伐他汀通过增加肺组织eNOS基因表达,抑制iNOS及Caspase-3基因表达,抑制了老年COPD大鼠肺泡上皮细胞凋亡。     

人参皂甙Rg3对糖尿病肾病大鼠肾组织Bax和B淋巴细胞瘤-2蛋白表达及肾细胞凋亡的影响

目的探讨糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)大鼠应用人参皂甙Rg3处理后肾组织Bax、B淋巴细胞瘤-2(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)蛋白表达变化及肾细胞凋亡情况。方法120只雄性SD大鼠,随机分为模型组、治疗组和对照组各40只。模型组、治疗组腹腔注射质量分数2%链尿佐菌素溶液制备DN模型,对照组腹腔注射等量生理盐水。造模成功后,治疗组将0.5 mg/kg人参皂甙Rg3与生理盐水混合溶液灌胃,模型组、对照组大鼠给予等量生理盐水灌胃,均1次/d,连续28 d。疗程结束后大鼠麻醉处死,取肾组织行病理检查,采用TUNEL法检测肾组织细胞凋亡,Western blot法检测肾组织Bax、Bcl-2蛋白相对表达量,实时荧光定量PCR法检测肾组织Bax mRNA、Bcl-2 mRNA相对表达量。结果对照组大鼠肾组织系膜结构、肾小管均正常,小管膜完整光滑,间质未增生;模型组大鼠肾组织系膜结构异常,间质严重增生,肾小管萎缩严重,小管膜粗糙;与模型组比较,治疗组大鼠肾组织系膜细胞增生减轻,肾小管萎缩减少,纤维组织减少;模型组、治疗组、对照组大鼠肾细胞凋亡率[(0.91±0.23)%、(0.56±0.14)%、(0.21±0.03)%]依次降低(P<0.05);模型组、治疗组、对照组肾组织Bax蛋白相对表达量(1.79±0.31、2.73±0.24、3.26±0.12)、Bcl-2蛋白相对表达量(1.42±0.12、2.59±0.25、4.40±0.31)、Bax mRNA相对表达量(0.35±0.02、1.45±0.91、3.12±1.17)、Bcl-2 mRNA相对表达量(1.34±0.87、1.73±0.67、3.91±0.75)依次增高(P<0.05)。结论人参皂甙Rg3对DN大鼠有显著治疗作用,可明显改善大鼠肾组织形态,降低肾细胞凋亡率,上调Bax、Bcl-2表达。     

The effect of Ulinastatin on myocardial cell apoptosis and Caspase-3 channel北大核心CSCD

Objective To investigate the effect of ulinastatin on myocardial injury in rats with sepsis. Methods Thirty male SD rats were randomly (random number) divided into 3 groups: sham operation group (Sham group, n=\0), sepsis group (sepsis group, n=10) and ulinastatin group (UTI group, n=10). The sepsis model of the rats was subjected to cecal ligation and puncture (CLP). Rats of UTI group were given 200 000 U/kg ulinastatin at 6 hour after modeling, and dosing was repeated every 12 h. Blood samples were collected from inferior vena cava at 6, 12, 24, 36 h after modeling for determination of cardiac troponin-I (cTnl) and the inflammatory factor by ELISA, then the rats were sacrificed and hearts were removed for myocardial tissue stained with hematoxylin eosin (HE) staining, the expression of Bax/Bcl-2 protein level and myocardial cell apoptosis were detected by TUNEL. The level of caspase-3 protein in myocardial tissue was detected by Western-blot. Results The level of cTnl (ng/mL ) in serum in UTI group at 6, 12, 24 and 36 h after modeling were significantly lower compared with sepsis group(P<0.05). The protein expression levels of TNF-a and IL-6 (ng/mL) in group UTI were higher than those in Sham group, but was significantly lower than those in Sepsis group (PO.05). HE staining showed that inflammatory cell infiltration present in myocardial cells, edema and vacuole formation were observed in sepsis group, while those were significantly attenuated in UTI group compared with sepsis group. UTI increased the level of myocardial Bcl-2 protein in the rats (P<0.05), and reduced the level of myocardial Bax protein (P<0.05). TUNEL and HE staining showed apoptosis cells in UTI group was significantly reduced compared with sepsis group [(32.24.8)% vs. (58.45.6)%, P<0.05]; Western-blot method showed the level of Caspase-3 protein in UTI group was higher than that in group sham (0.320.048) vs. (0.12.03), P<0.05], but significantly lower than that of Sepsis group [(0.320.048) vs. (0.550.052), PO.05]. Conclusions Ulinastatin can reduce proinflammatory mediators release in the blood of sepsis rats, and inhibit the apoptosis of myocardial cells protecting myocardial cells through the regulation of the Caspase-3 pathway during sepsis. © 2018 Chinese Medical Association. All Rights Reserved.     

高频振荡通气联合肺表面活性物质对吸入性损伤肺组织天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3和p73的影响

目的 探讨高频振荡通气(HFOV)联合肺表面活性物质(PS)对吸人性损伤兔肺组织细胞凋亡的影响.方法 采用兔蒸汽吸人性损伤模型,将32只兔按不同通气治疗方式分为常规控制机械通气(CMV)组、HFOV组、CMV+PS组及HFOV+PS组4组,每组8只.治疗4 h后处死动物,取右肺中叶组织,分别检测天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3(caspase-3)、p73的含量及其mRNA表达水平.结果 ①HFOV组和HFOV+PS组肺组织caspase-3和p73的含量分别较CMV组和CMV+PS组明显减少,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01);加入外源性PS后,CMV+PS组和HFOV+PS组的caspase-3和p73含量也较相应未加入组明显减少,差异也有统计学意义(P均<0.05).②HFOV组和HFOV+PS组caspase-3 mRNA和p73 mRNA表达分别较CMV组和CMV+PS组明显减少,差异有统计学意义(P均<0.01);加入外源性PS后,CMV+PS组和HFOV+PS组肺组织caspase-3 mRNA和p73 mRNA的表达也明显低于相应未加入组,差异也有统计学意义(P均<0.05).结论 与CMV或CMV+PS比较,HFOV或HFOV+PS能减少吸入性损伤肺组织细胞中caspase-3、p73的含量及其mRNA表达,从而可能减少通气肺的肺细胞凋亡.     

头针对急性脑缺血再灌注大鼠的保护作用

目的:探讨头针对急性脑缺血损伤的保护作用及机制。方法:将90只健康SD雌性大鼠随机分为假手术组10只、模型组40只、头针组40只,采用线栓法制备大脑中动脉阻塞(MCAO)再灌注模型,假手术组不造成缺血状态,头针组行头针治疗,于再灌注6、24、487、2 h时采用神经功能缺损量表(NSS)评定各组大鼠神经功能、TUNEL法检测各组神经细胞凋亡率,Western blot和RT-PCR检测脑组织Caspase-3、Bcl-2、Bax的表达。结果:头针组再灌注72 h NSS评分显著低于模型组(P<0.01);模型组缺血侧神经细胞凋亡率随再灌注时间延长而增加,24 h达高峰;头针组神经细胞凋亡率明显低于模型组,以244、8 h尤为显著。再灌注6 h后Bcl-2、Bax蛋白在缺血侧脑组织中均有表达,24 h达高峰,但随着时间推移,头针组Bcl-2/Bax比值减少较模型组慢;头针组的Bcl-2、Caspase-3 mRNA的表达较模型组比较均有统计学差异(P<0.05)。结论:脑缺血可诱导Bcl-2、Bax、Caspase-3基因表达增强;头针对缺血脑组织具有保护作用,可能通过抑制细胞凋亡、减轻脑缺血再灌注损伤来实现。