家蝇幼虫抗茵肽粗提物对人肝癌HepG2细胞凋亡、钙离子浓度及线粒体膜电位变化的影响

本文从肿瘤细胞凋亡及作用机制的角度出发初步探讨了家蝇幼虫抗菌肽粗提物对人肝癌HepG2细胞的影响.采用Hoechst 33258荧光染色法在荧光显微镜下观察家蝇抗菌肽对HepG2细胞形态学的影响.并通过流式细胞术分别观察家蝇抗菌肽粗提物对HepG2细胞凋亡、钙离子浓度及线粒体膜电位变化的影响.Hoechst 33258荧光染色法结果显示家蝇抗菌肽粗提物作用于HepG2细胞48h后能够引起细胞核发生核凝聚、染色质趋边化、核碎裂等凋亡形态学的改变;流式细胞仪检测结果显示家蝇抗菌肽粗提物能够诱导HepG2细胞发生凋亡、线粒体膜电位下降、细胞内钙离子浓度增加的现象.因此,我们推测家蝇抗菌肽可能通过增加HepG2细胞内钙离子,降低线粒体膜电位,进而诱导细胞凋亡的发生.     

家蝇幼虫抗菌肽粗提物对人肝癌HepG2细胞凋亡、钙离子浓度及线粒体膜电位变化的影响

本文从肿瘤细胞凋亡及作用机制的角度出发初步探讨了家蝇幼虫抗菌肽粗提物对人肝癌HepG2细胞的影响。采用Hoechst 33258荧光染色法在荧光显微镜下观察家蝇抗菌肽对HepG2细胞形态学的影响。并通过流式细胞术分别观察家蝇抗菌肽粗提物对HepG2细胞凋亡、钙离子浓度及线粒体膜电位变化的影响。Hoechst 33258荧光染色法结果显示家蝇抗菌肽粗提物作用于HepG2细胞48h后能够引起细胞核发生核凝聚、染色质趋边化、核碎裂等凋亡形态学的改变;流式细胞仪检测结果显示家蝇抗菌肽粗提物能够诱导HepG2细胞发生凋亡、线粒体膜电位下降、细胞内钙离子浓度增加的现象。因此,我们推测家蝇抗菌肽可能通过增加HepG2细胞内钙离子,降低线粒体膜电位,进而诱导细胞凋亡的发生。     

家蝇抗菌肽defensin对人肝癌细胞HepG2的增殖、凋亡和周期的影响

采用四甲基偶氮噻唑蓝（MTT）比色法,分析家蝇抗菌肽defensin对人肝癌细胞HepG2体外生长增殖与凋亡的影响,用倒置光学显微镜检测defensin对人肝癌细胞HepG2和人正常心肌细胞H9C2生长增殖情况的影响,并采用流式细胞术检测defensin对人肝癌细胞HepG2细胞凋亡及细胞周期的影响。结果显示,家蝇抗菌肽defensin对人肝癌细胞HepG2的生长有抑制作用,对人正常心肌细胞H9C2无抑制作用。通过显微镜观察HepG2细胞凋亡的形态变化,MTT检测发现defensin对肿瘤细胞的增殖抑制率呈剂量反应关系和时间反应关系。defensin能诱导人肝癌细胞HepG2发生凋亡,并且影响人肝癌细胞HepG2的细胞周期。家蝇抗菌肽defensin对人肝癌细胞HepG2具有增殖抑制作用及凋亡作用,对正常人心肌细胞H9C2基本无抑制作用。     

PARP-1抑制剂对人肝癌细胞HepG2增殖和迁移的抑制作用

目的 研究证实聚腺苷二磷酸核糖聚合酶-1(poly ADP ribose polymerase,PARP-1)抑制剂对肿瘤细胞的增殖、凋亡和侵袭有影响,但对肝癌细胞生物学特性的影响尚不清楚,此研究的目的是观察3种不同的PARP-1抑制剂对人肝癌细胞株HepG2增殖、凋亡及迁移的影响及可能机制.方法 MTT检测体外不同浓度的PARP-1抑制剂AG014699,BSI-201,AZD-2281处理后HepG2细胞的增殖;随后选择抑制效果明显的抑制剂AG014699和BSI-201处理HepG2;Western印迹法检测HepG2细胞Casepase3、Casepase8、Bax、Bcl-2、PTEN、Timp3、MMP3蛋白的表达水平.Transwell实验检测AG014699和BSI-201对HepG2细胞迁移的影响.结果 AG014699,BSI-201,AZD-2281均具有抑制HepG2细胞增殖的作用,具有时间和浓度依赖性,作用HepG2细胞48 h后的Caspase3、Caspase8、Bax、PTEN、Timp3蛋白的表达水平随药物浓度的增加而增高,而Bcl-2和MMP3蛋白水平随药物浓度的增加而降低且与对照组相比有显著性差异(P<0.01).结论 在体外PARP-1抑制剂AG014699、BSI-201、AZD-2281明显抑制HepG2细胞的增殖,但AG014699和BSI-201展示较好的敏感性,同时二者诱导肝癌细胞凋亡和抑制肝癌细胞的迁移,这其中的机制可能与影响凋亡信号的通路以及迁移相关蛋白的表达有关.     

辛伐他汀对肝癌细胞生物学特性与脂质代谢的影响

目的 探讨辛伐他汀对肝癌细胞系HepG2细胞生物学特性与脂质代谢的影响.方法 体外培养肝癌细胞系HepG2,分别给予不同浓度辛伐他汀(0、5、10、20及40μM),CCK-8方法检测各组肝癌细胞系HepG2细胞活力;细胞克隆实验观察各组细胞群落形成情况;流式细胞仪检测细胞凋亡率;细胞划痕与Transwell实验观察细胞侵袭与迁移能力;Real-time PCR检测脂质代谢相关基因SREBP1、SREBP2、FASN、SQLE、HMGCS1 及HMGCR表达;Western blot检测SREBP1、SREBP2、FASN、SQLE、HMGCS1 及HMGCR蛋白表达.结果 不同浓度辛伐他汀均抑制了HepG2细胞活力;抑制了HepG2细胞群落形成,促进细胞凋亡,抑制细胞侵袭与迁移;辛伐他汀还下调SREBP1、SREBP2、FASN、SQLE、HMGCS1及HMGCR基因与蛋白表达(P＜0.05).结论 辛伐他汀能够抑制肝癌细胞系HepG2增殖,促进凋亡,并抑制细胞迁移与侵袭,其作用机制可能与抑制脂质代谢相关基因与蛋白表达有关.     

miR-212-5p在肝癌组织中的表达及对HepG2细胞增殖、侵袭及迁移的影响

目的 探讨miR-212-5p在肝癌组织中的表达及对HepG2细胞增殖、侵袭及迁移的影响。方法应用qRT-PCR法检测96例肝癌组织及癌旁组织中miR-212-5p表达水平,同时设HepG2细胞组、miR-212-5pmimics组与miR-212-5pinhibitor组。培养72h后,采用MTT法检测细胞活力;流式细胞仪检测细胞凋亡水平;Transwell实验和划痕实验检测细胞侵袭与迁移水平;qRT-PCR法检测细胞miR-212-5p表达水平。结果 肝癌组织中miR-212-5p表达水平升高,肿瘤最大径≥2cm、TNM分期越高、浸润深度越深、病理级别越低、有淋巴结转移、有复发的肝癌患者miR-212-5p高表达率更高（P<0.05）。miR-212-5p模拟物能增强HepG2细胞增殖、侵袭及迁移能力,抑制HepG2细胞凋亡（P<0.05）;miR-212-5p抑制剂能抑制HepG2细胞活力、增殖、侵袭及迁移能力,促进HepG2细胞凋亡（P<0.05）。结论 miR-212-5p在肝癌组织中高表达,miR-212-5p可促进HepG2细胞增殖、侵袭及迁移能力,抑制...     

木犀草素对人肝癌HepG2细胞株侵袭、迁移和黏附能力的影响

目的:探讨木犀草素对人肝癌HepG2细胞株侵袭、迁移和黏附能力的影响及其作用机制。方法:采用不同浓度木犀草素处理体外培养的人肝癌HepG2细胞株,Transwell实验检测细胞的侵袭能力,划痕实验检测细胞的迁移能力,黏附实验评价细胞的黏附能力,Western blot检测E-钙黏蛋白(E-cadherin)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(vimentin)和Snai1蛋白的表达。结果:木犀草素可明显降低肝癌HepG2细胞的体外侵袭、迁移及黏附能力(P0.01),且在一定浓度范围内呈明显量效关系。木犀草素处理肝癌细胞后,上皮细胞标志蛋白E-cadherin表达明显上调,间质细胞标志蛋白N-cadherin和vimentin以及转录因子Snai1表达均明显下调,木犀草素对以上蛋白的调节呈明显浓度依赖性。结论:木犀草素体外具有抑制肝癌HepG2细胞株侵袭、迁移和黏附的作用,其作用机制可能与调控上皮-间质转化有关。     

三氧化二砷对肝癌细胞HepG2迁移、侵袭和凋亡的影响

本文旨在探究三氧化二砷(As2O3)对肝癌细胞HepG2作用的最佳浓度,以及此浓度As2O3对HepG2细胞迁移、侵袭和凋亡的影响。本研究采用CCK-8法检验0、1、2、4、8、16、32μmol/L As2O3处理后HepG2细胞活力,计算半抑制浓度(IC50),并且观察IC50浓度As2O3作用12、24、48 h后HepG2细胞形态变化。通过伤口愈合实验和Transwell侵袭实验验证As2O3对细胞迁移侵袭能力的影响。Western blot和qRT-PCR实验检测As2O3对细胞迁移、侵袭及凋亡相关蛋白和基因表达水平的影响。结果显示,与对照组相比,HepG2细胞活力随As2O3处理浓度的升高而降低,呈现剂量依懒性,其IC50为7.3μmol/L;8μmol/L As2O3处理24 h后,HepG2细胞发生明显凋亡,且其迁移和侵袭能力显著降低;此外,细胞中RhoA、Cdc42、Rac1、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)蛋白表达水平下调,抑凋亡基因Bcl-2的蛋白和mRNA表达水平显著下调,而促凋亡基因Bax、Caspase-3的蛋白和mRNA表达水平显著上调。以上结果说明一定浓度的As2O3能够抑制肝癌细胞迁移和侵袭,促进肝癌细胞凋亡。     

姜黄素对肝癌HepG2细胞增殖和侵袭转移的影响及相关机制

目的探讨姜黄素对人肝癌HepG2细胞增殖和侵袭转移的影响及其相关机制。方法应用10、20、40、60μmol/L姜黄素处理肝癌细胞株HepG2;采用MTT检测不同浓度的姜黄素对HepG2细胞增殖的影响;运用Transwell侵袭转移实验测定不同浓度的姜黄素对HepG2细胞体外侵袭能力的影响。采用Western blot方法检测经不同浓度姜黄素处理后,HepG2细胞内细胞周期素D1(CyclinD1)、基质金属蛋白酶2(matrix metalloproteinase2, MMP-2)和E-钙黏素(E-cadherin)蛋白表达。结果姜黄素能明显抑制肝癌HepG2细胞的增殖和体外侵袭能力,且具有显著剂量依赖性。肝癌HepG2细胞中CyclinD1、MMP-2蛋白表达随着姜黄素的浓度的增多而明显的降低,而E-cadherin蛋白表达则随着姜黄素剂量的增多而显著升高。结论姜黄素明显抑制肝癌HepG2细胞的增殖和侵袭转移能力,与下调CyclinD1、MMP-2和上调E-cadherin的蛋白表达相关。     

土槿皮乙酸阻滞HepG2肝癌细胞于G2/M期并抑制其侵袭和迁移

目的研究土槿乙酸(PAB)阻滞HepG2肝癌细胞周期并抑制其侵袭转移的机制。方法采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法观察PAB对人肝癌HepG2细胞增殖的影响;流式细胞术检测其对HepG2肝癌细胞周期的影响;免疫荧光细胞化学染色法检测PAB对HepG2肝癌细胞内α微管蛋白(α-tubulin)聚合形态及表达的影响;TranswellTM小室侵袭实验和划痕愈合实验检测PAB对肝癌HepG2细胞侵袭和迁移能力的影响;Western blot法检测细胞内α-tubulin、上皮钙黏蛋白(E-cadherin)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)的蛋白水平。结果 PAB可剂量依赖性地抑制HepG2细胞增殖并将细胞阻滞于G2/M期;PAB可显著改变微管蛋白聚合态使其表达明显减弱,PAB处理的HepG2细胞侵袭和迁移能力明显降低;细胞内α-tubulin、MMP-9蛋白水平降低,E-cadherin蛋白水平增加。结论 PAB可以通过下调α-tubulin水平影响其聚合,将HepG2细胞周期阻滞于G2/M期,抑制HepG2肝癌细胞增殖,通过下调细胞骨架α-tubulin、MMP-9,上调E-cadherin,抑制HepG2肝癌细胞的侵袭和迁移。     

基于质粒的蛋白激酶B1特异性小干扰RNA和P53共表达协同抑制肝细胞癌细胞的增殖、迁移和侵袭

目的 探讨蛋白激酶B1(Akt1)特异性小干扰RNA(siRNA)和p53共表达质粒对肝细胞癌(HCC)细胞增殖、迁移、侵袭、凋亡的影响.方法 构建了一种共表达蛋白激酶B1(Akt1)特异性siRNA和野生型p53基因的双表达质粒(pSi-Akt1-P53).将pSi-Akt1-P53共表达质粒转染至肝癌HepG2细胞...     

下调HIF-2α基因对低氧诱导的肝癌细胞体外生物学行为的影响

目的:探讨下调缺氧诱导因子2α(Hypoxia-inducible factor 2α,HIF-2α)基因对人肝癌细胞株HepG2 低氧状态下增殖、凋亡、细胞周期分布和迁移侵袭力的影响。方法:选取氯化钴(CoCl2 )诱导的人肝癌细胞株HepG2 作为研究对象,构建HIF-2αsiRNA 特异性载体,转染低氧环境下的HepG2 细胞,Real-time PCR 和Western blot 方法分别检测转染前后细胞中HIF-2αmRNA 和蛋白表达,MTT 方法检测转染前后HepG2 细胞增殖,流式细胞术检测转染前后HepG2 细胞凋亡和细胞周期分布,Transwell 试验检测转染前后HepG2 细胞侵袭迁移能力。结果:低氧诱导下,肝癌HepG2 细胞HIF-2α表达显著增多;特异性转染HIF-2αsiRNA 于低氧环境下的HepG2 细胞后,HIF-2αmRNA 和蛋白表达水平均受到明显抑制、细胞增殖能力降低,凋亡率升高,分布于G0/ G1 期细胞比率升高,合成期(S)及合成后期(G2/ M)细胞比率降低,细胞体外侵袭迁移能力受到明显抑制(P<0.05)。结论:低氧环境下肝癌HepG2 细胞表达HIF-2α增多,特异性siRNA 可通过下调低氧环境下HepG2 细胞中HIF-2α基因表达,抑制HepG2 细胞增殖、侵袭迁移,改变细胞周期分布并诱导其凋亡。     

黄芪甲苷通过调节细胞自噬增强贝伐单抗在肺癌细胞系A549中抗肿瘤作用机制的研究

目的：验证黄芪甲苷可以通过调节细胞自噬增强贝伐单抗对肺癌细胞系A549细胞增殖能力的影响,讨论黄芪甲苷在A549中的抗肿瘤作用机制。方法：MTT方法检测黄芪甲苷单药以及与贝伐单抗联合应用对A549细胞增殖能力的影响。Western blot方法分别检测黄芪甲苷以及贝伐单抗处理A549后自噬相关蛋白P62和LC3的表达水平。RT-PCR方法检测黄芪甲苷处理后A549细胞内侵袭相关基因MMP-2和MMP-9的表达情况。ECIS方法检测黄芪甲苷处理后A549细胞黏附与迁移能力的变化。结果：MTT检测结果显示,100 mg/L的黄芪甲苷与750 mg/L的贝伐单抗联合应用对A549细胞的活力有显著的抑制作用,两药联合应用组与对照组相比差异有统计学意义,P值为0.0009。Western blot检测结果显示,黄芪甲苷能够通过影响自噬通路P62和LC3的表达从而抑制自噬的发生。RT-PCR方法显示黄芪甲苷能显著抑制侵袭相关基因MMP-2和MMP-9的表达,黄芪甲苷组与对照组相比差异有统计学意义,P值分别为0.0001和0.001。ECIS结果显示黄芪甲苷能够增强A549细胞的黏附能力并抑制其转移。结论：体外研究结果显示黄芪甲苷能够增强A549细胞的黏附能力并抑制其转移和侵袭,这一过程是通过抑制细胞自噬的发生,而贝伐单抗有较弱的促进自噬发生的作用,当两者联合时较单用贝伐单抗更强的抗肿瘤细胞增殖的作用。     

A novel melanoma-targeting peptide screened by phage display exhibits antitumor activity

Peptide display on the phage surface has been widely used to identify specific peptides targeting several in vivo and in vitro tumor cells and the tumor vasculature, playing a role in the discovery of bioactive antitumor agents. Bioactive peptides have been selected to target important tumor receptors or apoptosis-associated molecules such as p53. Presently, we attempted to identify potentially antitumor bioactive molecules using the whole cell surface as the recognizable static matrix. Such methodology could be advantageous in cancer therapy because it does not require previous characterization of target molecules. Using a C7C phage display library, we screened for peptides binding to the B16F10-Nex2 melanoma cell surface after pre-absorption on melan-A lineage. After a few rounds of enrichment, 50 phages were randomly selected, amplified, and tested for inhibition of tumor cell proliferation. Seven were active, and the corresponding peptide of each phage was chemically synthesized in the cyclic form and tested in vitro. Three peptides were able to preferentially inhibit the melanoma lineage. A unique peptide, [-CSSRTMHHC-], exhibited in vivo antitumor inhibitory activity against a subcutaneous melanoma challenge, rendering 60% of mice without tumor growth. Further, this peptide also markedly inhibited in vitro and in vivo the tumor cell invasion and cell-to-cell adhesiveness in vitro. This is the first report on a bioactive peptide derived from a C7C library active against whole melanoma cells in vitro and in vivo.     

ITIH4基因沉默对人肝癌细胞HepG2增殖、迁移及侵袭的影响

目的:探讨沉默间-α-胰蛋白酶抑制剂重链H4(inter-alpha-trypsin inhibitor heavy chain H4,ITIH4)基因对人肝癌细胞系HepG2增殖、迁移及侵袭的影响.方法:将4个ITIH4基因沉默载体分别转染HepG2细胞,用2 mg/L嘌呤霉素筛选获得稳定表达细胞株.Western印迹评价沉默效率,并选择效率最高的细胞株(si-ITIH4)用于后续实验.转染无意义序列的细胞株(si-Control)作为对照组.分别用细胞计数及CCK-8细胞计数试剂盒评价两组细胞增殖.用Transwell小室评价两组细胞的迁移及侵袭.结果:成功获得ITIH4基因沉默的HepG2细胞株si-ITIH4,与si-Control组相比,si-ITIH4组沉默效率达到86%.与si-Control组相比,si-ITIH4组细胞增殖显著降低、细胞迁移及侵袭均显著减少,差异有统计学意义(P<0.05).结论:ITIH4基因沉默可显著抑制HepG2的增殖、迁移及侵袭,提示其可能是参与肝细胞癌发生发展的重要基因之一.     

胰岛素对人肝癌HepG2细胞体外诱导人脐静脉内皮细胞血管形成能力的影响

目的:探讨胰岛素对人肝癌细胞系HepG2体外诱导人脐静脉内皮细胞(HUVECs)血管形成能力的影响及其可能机制。方法:用含不同浓度胰岛素的完全培养基预培养肝癌细胞系HepG2制备条件培养基;应用预铺Matrigel基质胶的Transwell小室检测不同组条件培养基对HUVECs迁移能力的影响;运用CCK-8方法及EdU细胞增殖实验检测不同组条件培养基对HUVECs增殖能力的影响;运用内皮细胞成管实验检测不同组条件培养基对HUVECs成血管能力的影响;同时应用RT-PCR检测不同胰岛素浓度培养的HepG2细胞中血管内皮生长因子(VEGF)121、VEGF165、环氧化酶2(COX-2)的转录水平。结果:在一定浓度范围内,HepG2细胞对HUVECs的侵袭迁移能力、增殖能力的影响,对HUVECs的成血管能力的影响,对HepG2细胞VEGF121、VEGF165、COX-2转录水平的影响,均分别与胰岛素浓度呈正相关。结论:在一定浓度范围内,胰岛素可能通过上调HepG2细胞中VEGF121、VEGF165、COX-2的表达水平促进HepG2细胞诱导HUVECs血管形成能力。