组织因子途径抑制物2对卵巢癌细胞迁徙和浸润能力的影响(英文)

目的组织因子途径抑制物2(tissue factor pathway inhibitor-2,TFPI-2)是一种新近发现的丝氨酸蛋白酶抑制物,可抑制纤溶酶、胰蛋白酶、基质金属蛋白酶在内的多种蛋白酶。而对尿激酶、组织型纤溶酶原激活剂以及凝血酶没有抑制作用。研究发现在多种肿瘤发生、发展过程中,TFPI-2常表达减少。本研究旨在探讨 TFPI-2表达与卵巢癌细胞迁徙、浸润之间的关系。方法脂质体介导人类 TFPI-2真核表达载体 pBos-Cite-neo/TFPI-2转染卵巢癌细胞系 A_(2780),用 G418筛选阳性细胞,经逆转录聚合酶链反应,Western blot 技术检测转染前后卵巢癌细胞中 TFPI-2 mRNA 以及相应蛋白质表达水平;利用 Boyden 小室检测转染前后卵巢癌细胞穿膜的细胞数,此细胞数作为评价卵巢癌细胞迁徙、迁移浸润能力的指标。结果转染成功的卵巢癌细胞证实有 TFPI-2 mRNA 和相应蛋白质的表达;与未转染的细胞相比,转染 TFPI-2的细胞体外浸润能力显著下降(穿膜细胞数为59.3±6.5 vs 109.75.5,P<0.01);而迁徙能力无明显变化(穿膜细胞数为114.78.6 vs 127.3±7.1,P>0.05)。结论 TFPI-2表达可显著抑制卵巢癌细胞的浸润,为进一步开展肿瘤基因治疗提供实验依据。     

组织因子途径抑制物2对卵巢癌细胞迁徙和浸润能力的影响

目的组织因子途径抑制物2(tissuefactorpatlawayinhihitor-2，TFPI-2)是一种新近发现的丝氨酸蛋白酶抑制物，可抑制纤溶酶、胰蛋白酶、基质金属蛋白酶在内的多种蛋白酶。而对尿激酶、组织型纤溶酶原激活剂以及凝血酶没有抑制作用。研究发现在多种肿瘤发生、发展过程中，TFPI-2常表达减少。本研究旨在探讨TFPI-2表达与卵巢癌细胞迁徙、浸润之间的关系。方法脂质体介导人类TFPI-2真核表达载体pBos-cite-neo／TFPI-2转染卵巢癌细胞系A：，8。，用G418筛选阳性细胞，经逆转录聚合酶链反应，Westernblot技术检测转染前后卵巢癌细胞中TFPI-2mRNA以及相应蛋白质表达水平；利用Boyden小室检测转染前后卵巢癌细胞穿膜的细胞数，此细胞数作为评价卵巢癌细胞迁徙、迁移浸润能力的指标。结果转染成功的卵巢癌细胞证实有TFPI-2mRNA和相应蛋白质的表达；与未转染的细胞相比，转染TFPI-2的细胞体外浸润能力显著下降(穿膜细胞数为59．3±6．5vs109．75．5，P<0．01)；而迁徙能力无明显变化(穿膜细胞数为114．78．6vs127．3±7．1，P>0．05)。结论TFPI-2表达可显著抑制卵巢癌细胞的浸润，为进一步开展肿瘤基因治疗提供实验依据。     

组织因子途径抑制物-2表达与肝癌细胞体外侵袭能力的实验研究

目的:研究肝癌组织中组织因子途径抑制物-2(tissue factor pathway inhibitor-2 ,TFPI-2)基因的表达,同时探讨TFPI-2对肝癌细胞侵袭能力的影响.方法:应用原位杂交法和免疫组织化学法检测30例肝癌患者的癌组织和癌旁正常肝组织中TFPI-2基因和蛋白的表达;通过脂质体法将TFPI-2基因转染人HepG2细胞,RT-PCR检测转染前后TFPI-2 mRNA的表达;Transwell小室法测定TFPI-2基因转染前后肝癌细胞体外侵袭迁移能力的变化.结果: 肝癌组织中TFPI-2 mRNA与蛋白的表达水平明显低于癌旁正常肝组织(P < 0.05);成功转染TFPI-2基因的肝癌细胞HepG2中证实有TFPI-2 mRNA的表达;与未转染的细胞相比,转染TFPI-2的细胞体外侵袭能力明显下降,穿膜细胞数分别为45.2±5.6和 87.8±4.5 ,差异有统计学意义(P < 0.05);而迁移能力无明显变化,转染前后HepG2细胞的穿膜细胞数分别为140.4±7.4和152.8±9.6,差异无统计学意义( P > 0.05).结论:肝癌组织中TFPI-2表达明显降低,TFPI-2基因表达可明显抑制肝癌细胞的体外侵袭能力.     

siRNA对人结肠癌细胞黏附力和侵袭性的抑制作用

目的: 探讨VEGFR3对人结肠癌细胞黏附力和侵袭性的影响。方法:构建携靶向 VEGFR3基因siRNA(small interfering RNA)表达载体，转染人结肠癌LoVo细胞， 半定量RTPCR和Western blotting检测转染前后LoVo细胞VEGFR3mRNA和蛋白表达的变化，基质黏附实验检测细胞转染后的黏附能力，细胞侵袭实验检测转染后肿瘤细胞侵袭性的改变。结果:携靶向 VEGFR3 基因siRNA的表达载体成功构建，RTPCR检测转染siRNA后LoVo细胞 VEGFR3mRNA表达水平降低；Western blotting检测转染siRNA后72 h LoVo细胞VEGFR3蛋白表达下降，其表达相对值由(1.26±0.19)降至(0.39±012)(P<0.05)。转染siRNA 72 h后LoVo细胞的黏附能力显著下降\[（0.626±0.047）vs (0.407±0.029), P＜0.05\]；LoVo细胞穿膜细胞数(6.38±3.25)明显低于空白对照组(24.82±3.44)、非特异性对照组(23.58±3.73) (P＜0.05)。结论:siRNA能够在LoVo细胞中引发RNA干扰效应，下调VEGFR3基因的表达，进而抑制LoVo细胞的黏附能力和侵袭性。     

组织因子途径抑制物-2基因与非小细胞肺癌关系的研究进展

组织因子途径抑制物-2（TFPI-2）是一种广谱的丝氨酸蛋白酶抑制物,可抑制包括纤溶酶、胰蛋白酶、基质金属蛋白酶在内的多种蛋白酶.TFPI-2可通过维持细胞外基质的完整、调节肿瘤血管生成、调控肿瘤细胞凋亡等机制调节非小细胞肺癌的侵袭转移,并成为肿瘤基因治疗的新靶点.     

人胃癌组织中基质金属蛋白酶7的基因表达及意义

目的 :研究基质金属蛋白酶 7基因 (MMP 7)在胃癌组织及不同分化程度的胃癌细胞中的表达情况 ,探讨其临床意义。方法 :用RT PCR及凝胶成像仪检测MMP 7mRNA表达 ,用改良的BoydenChamber检测肿瘤细胞的侵袭能力。结果 :①MMP 7mRNA在胃癌组织中表达的阳性率为 60 % ,正常组织中表达的阳性率为 1 1 % ,肿瘤组织MMP 7mRNA表达量 (MMP 7/ β actin光密度平均比值为 0 .62 7± 0 .2 76)显著地高于正常组织 (为 0 2 37±0 1 2 ) (P <0 .0 5) ,同时有淋巴结转移的癌组织表达增高更为显著 ;②分化程度低的MGC 80 2、KATOⅢ、SGC 790 1细胞株MMP 7mRNA表达强阳性 ,而分化程度高的MKN2 8细胞株表达弱阳性 ;③转染了MMP7 asODN的KATOⅢ穿过膜的细胞数 (1 5 .6± 1 .2 1 )明显低于对照组、PS sODN组及PS mODN组 (分别为 75 .4± 6 .1 6、53 .8± 7.32、58.4± 5 .87) (P <0 .0 5)。结论 :MMP 7基因在胃癌组织中表达明显升高 ;分化低的细胞表达强阳性 ,而分化高的细胞表达弱阳性 ;MMP7反义寡核苷酸可明显降低肿瘤细胞的侵袭能力。MMP7在肿瘤浸润与转移中起作用。     

胃癌细胞基质金属蛋白酶-2、9的表达及对细胞迁移的影响

 目的 研究基质金属蛋白酶 2、9(matrix metalloproteinase 2、9, MMP-2、9)在胃癌细胞株HGC-27和SGC-7901的表达及对细胞迁 徙转移的影响。 方法 采用Real time PCR检测MMP-2、9 mRNA的含量;以ELISA检测培养上清液中 MMP-2、9的相对浓度;通过明胶酶谱法测定培养上清液中的MMP-2、9比活。用Transwell小室迁徙实验、同质黏附和异质黏附实验比较两株细胞体外迁徙黏附能力。 结果 HGC-27中 MMP-2 和MMP-9 mRNA含量高于SGC-7901。HGC-27上清液 MMP-2、9相对浓度均高于SGC-7901,且MMP-2比活高于SGC-7901,两株细胞MMP-9比活相近。HGC-27穿膜细胞数和异质黏附细胞数高于SGC-7901,同质黏附细胞数低于SGC-7901,差异均有统计学意义（P<0.05）。 结论 迁徙和异质黏附能力较强、同质黏附能力较弱的胃癌细胞HGC-27的MMP-2、9表达较强,提示MMP-2、9高表达可能促进胃癌细胞迁徙转移。     

磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3基因对肝癌细胞SK-Hep-1黏附和侵袭的影响

摘 要 目的: 肝细胞癌中高表达磷脂酰肌醇蛋白聚糖3基因(glypican3,GPC3)，而在非肿瘤肝组织、肝细胞腺瘤、胆管癌、肝内胆管细胞癌、胆囊癌等细胞中低表达甚至不表达；本研究利用携带GPC3重组真核表达载体，探讨GPC3基因对SKHep1肝癌细胞增殖、黏附和侵袭能力的影响。方法：将pEGFP-N2-GPC3通过脂质体方法转染人肝癌细胞SKHep1。RT-PCR检测GPC3SKHep1细胞中GPC3 mRNA的表达；MTT法检测SK-Hep-1细胞的增殖并计算黏附率；Transwell小室实验检测SK-Hep-1肝癌细胞的迁移能力和侵袭能力。结果：pEGFPN2GPC3成功转染SKHep1细胞，转染后GPC3-Hep-1细胞明显表达GPC3mRNA。GPC3转染能显著抑制肝癌细胞SK-Hep-1的增殖（P<0.01）；GPC3转染细胞的黏附能力较对照细胞显著下降[（10.21±0.62）% vs (15.51±095)%,P<0.01];GPC3转染细胞的迁徙和侵袭能力较对照细胞明显增强[（131.7±7.44）vs（69.6±5.25），P<0.01;(220±12.8) vs （130±8.2），P< 0.01]。结论：GPC3基因显著抑制肝癌细胞的增殖和黏附能力，但显著增强后者的迁移和侵袭能力。     

TFPI-2基因与消化道肿瘤关系的研究进展

组织因子途径抑制物2（tissue factor pathway inhibitor2,TFPI-2）是一种广谱的丝氨酸蛋白酶抑制物,可抑制包括纤溶酶、胰蛋白酶、基质金属蛋白酶（matrix metalloproteinases,MMPs）在内的多种蛋白酶,而MMPs参与了细胞外基质的重塑,在肿瘤细胞的浸润和转移、伤口愈合、血管新生、纤维蛋白溶解及动脉粥样硬化等生理和病理过程中发挥重要作用。TFPI-2可通过维持细胞外基质的完整、调节肿瘤血管生成、调控肿瘤细胞细胞凋亡及血液凝固等机制调节胰腺癌、食管癌及胃癌等消化道肿瘤细胞的侵袭转移。越来越多的研究表明,TFPI-2能明显抑制肿瘤中MMPs的活性与功能等从而抑制肿瘤的侵袭与转移,并成为肿瘤基因治疗的新靶点。     

Overexpression of tissue factor pathway inhibitor-2 (TFPI-2), decreases the invasiveness of prostate cancer cells in vitro

Human tissue factor pathway inhibitor-2 (TFPI-2) is a 32-kDa serine protease inhibitor that inhibits plasmin, trypsin, chymotrypsin, cathepsin G, and plasma kallikrein but not urokinase and tissue-type plasminogen activators or thrombin. After discovering that TFPI-2 expression is down-regulated or lost during tumor progression, we investigated the role of TFPI-2 in the invasiveness of the prostate cancer cell line (LNCaP). We stably transfected LNCaP cells with a 0.7-kb vector expressing TFPI-2 in the sense orientation and measured the expression of TFPI-2 protein and mRNA by these cells by western and northern blotting. Neither TFPI-2 protein nor mRNA was expressed by parental LNCaP cells or vector-transfected controls, but levels of both protein and mRNA were significantly increased in the sense-TFPI-2 clones. The sense clones were less invasive than the control cells in Matrigel invasion and spheroid migration assays. This is the first demonstration that upregulation of TFPI-2 plays a significant role in the invasive behavior of human prostate cancer cells.     

寡核苷酸阻断ROCK-1蛋白对人卵巢癌细胞恶性行为的影响

目的通过反义寡核苷酸(ASODN)对ROCK-1的特异性阻断,探讨ROCK-1蛋白在卵巢癌转移中的作用。方法将ROCK-1反义寡核苷酸(ASODN)以脂质体介导,转染人卵巢癌细胞系SW626和Caov-3细胞,采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)与Western blot印迹法,检测转染前后ROCK-1蛋白的表达,Boyden小室观察ROCK-1 ASODN对SW626和Caov-3细胞侵袭及迁移能力的影响,采用二苯基溴化四氮唑蓝(MTT)比色法,测定转染前后细胞增殖及黏附能力的变化。结果转染ROCK-1 ASODN后,2株细胞内ROCK-1蛋白的表达明显减少,最大抑制率可达49.0%;细胞的侵袭能力受到明显抑制,10μmol/L组和20μmol/L组SW626细胞的侵袭能力分别为对照组的75.6%±3.8%和54.7%±2.9%,Caov-3细胞为68.8%±4.7%和50.0%±4.5%;转染2种浓度ASODN的SW626和Caov-3细胞的随机运动能力分别为对照组的80.0%±1.3%、63.7%±1.9%、72.0%±1.3%和55.9%±2.5%;定向运动能力分别为对照组的83.9%±1.4%、64.1%±1.3%、72.5%±3.4%和54.5%±1.9%。转染后2株细胞的体外黏附能力和增殖能力,均未显示出明显的变化。结论ROCK-1蛋白的表达与人卵巢癌细胞的体外侵袭和迁移密切相关,阻断ROCK-1的表达,可有效地抑制卵巢癌肿瘤细胞的转移。     

趋化因子受体及配体在卵巢癌细胞迁移中的作用

背景与目的:研究表明许多肿瘤细胞表达趋化因子受体,与肿瘤细胞的迁移与转移有密切关系。本研究拟探讨趋化因子受体CXCR4[chemokine(C.X.C)receptor4]及配体CXCL12[chemokine(C.X.Cmotif)ligand12]在上皮性卵巢癌细胞中的表达及在肿瘤细胞迁移中的作用。方法:采用RT鄄PCR和Westernblot检测15例上皮性卵巢癌组织、卵巢癌细胞株CAOV3、血管内皮细胞株HUVEC和10例正常卵巢组织中CXCR4的表达以及卵巢癌患者腹膜后淋巴结组织和输卵管平滑肌组织中CXCL12的表达。ELISA检测15例上皮性卵巢癌患者腹水中趋化因子CXCL12的含量。以Boyden小室检测重组人CXCL12、上皮性卵巢癌癌性腹水对CAOV3和HUVEC细胞的趋化活性的影响。结果:(1)在上皮性卵巢癌组织、CAOV3及HUVEC细胞中,CXCR4在mRNA及蛋白水平的相对表达量分别为2.30±1.12、1.89±1.20、1.68±1.11及1.35±0.14、1.86±0.34、1.96±0.23,正常卵巢组织在mRNA及蛋白水平均未检测到CXCR4表达;(2)卵巢癌癌性腹水定量检查结果显示,CXCL12含量为632～9326pg/ml(中位数为6237pg/ml)。卵巢癌患者腹膜后淋巴结组织中,CXCL12mRNA表达量的平均值为1.14±0.87,卵巢癌患者输卵管平滑肌组织未检测出CXCL12表达;(3)重组人CXCL12可诱导CAOV3及HUVEC细胞的迁移,其趋化指数分别为3.     

卵巢癌细胞体外侵袭与血管内皮生长因子和明胶酶-A表达的关系

背景与目的:血管内皮生长因子(vascularendothelialgrowthfactor,VEGF)和明胶酶-A(matrixmetalloproteinase-2,MMP-2)均为介导肿瘤转移的重要因子,但两者在卵巢癌转移中的相关性尚未见相关报道。本研究通过比较卵巢癌细胞的体外侵袭力及VEGF和MMP-2的表达水平,探讨VEGF、MMP-2分别与卵巢癌转移的相关性及VEGF与MMP-2的关系。方法:用Boyden小室体外侵袭实验比较两株卵巢癌细胞CaOV-3、COC1的体外侵袭力强弱;采用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和Western免疫印迹检测CaOV-3、COC1细胞VEGF与MMP-2的mRNA及蛋白表达情况;用明胶酶谱法比较分析两株癌细胞MMP-2酶活性。结果:Boyden小室体外侵袭实验表明卵巢癌细胞系CaOV-3体外侵袭力较强,其穿膜细胞相对百分率为(21.9±1.5)%,而COC1细胞体外侵袭力相对较弱,其穿膜细胞相对百分率为(8.8±0.9)%,两者差异具有显著性意义(P<0.05);RT-PCR、Westernblot提示CaOV-3细胞VEGF、MMP-2mRNA及蛋白表达水平均较COC1细胞高(P<0.05);明胶酶谱法结果表明CaOV-3细胞MMP-2酶活性约为COC1细胞的2倍。结论:卵巢癌细胞体外侵袭力与VEGF、MMP-2表达正相关,在卵巢癌侵袭转移中,VEGF与MMP-2可能具有某种内在联系。     

Silencing of IQGAP1 by shRNA inhibits the invasion of ovarian carcinoma HO-8910PM cells in vitro

Background

IQGAP1 is a scaffolding protein and overexpressed in many human tumors, including ovarian cancer. However, the contribution of IQGAP1 to invasive properties of ovarian cancer cells remains unknown. Here, we investigated the effect of IQGAP1-specific short hairpin RNA (shRNA) expressing plasmids on metastatic potential of ovarian cancer HO-8910PM cells.

Methods

We used RT-PCR and Western blot analysis to characterize expression of IQGAP1 in three human ovarian cancer-derived cell lines SK-OV-3, HO-8910 and HO-8910PM. We then determined whether expression of endogenous IQGAP1 correlated with invasive and migratory ability by using an in vitro Matrigel assay and cell migration assay. We further knocked down IQGAP1 using shRNA expressing plasmids controlled by U1 promoter in HO-8910PM cells and examined the proliferation activity, invasive and migration potential of IQGAP1 shRNA transfectants using MTT assay, in vitro Matrigel-coated invasion assay and migration assay.

Results

IQGAP1 expression level seemed to be closely associated with the enhanced invasion and migration in ovarian cancer cell lines. Levels of both IQGAP1 mRNA and protein were significantly reduced in HO-8910PM cells transfected with plasmid-based IQGAP1-specific shRNAs. RNAi-mediated knockdown of IQGAP1 expression in HO-8910PM cells resulted in a significant decrease in cell invasion and migration.

Conclusion

Our findings support the hypothesis that IQGAP1 promotes tumor progression and identify IQGAP1 as a potential therapeutic strategy for ovarian cancer and some other tumors with over-expression of the IQGAP1 gene.     

miR-26a对肝癌细胞侵袭迁移能力的影响及初步机制的研究

目的:探讨miR-26a对人肝癌细胞株HepG2侵袭迁移能力的影响及可能机制。方法:将miR-26a表达质粒及对照质粒分别转染HepG2细胞,qRT-PCR检测转染后miR-26a的表达,细胞划痕实验和Transwell侵袭实验检测HepG2细胞迁移和侵袭能力的改变,qRT-PCR和Western blot检测转染后AEG-1 mRNA和蛋白的表达。结果:转染miR-26a表达质粒后,HepG2细胞miR-26a表达明显增高(P＜0．01),迁移和侵袭能力显著降低(P＜0.05),AEG-1 mRNA及蛋白表达水平明显下调(P＜0.05)。结论:过表达miR-26a,可抑制HepG2细胞迁移和侵袭,其机制可能与抑制AEG-1表达相关。     

TFPI-2基因克隆及其在胰腺癌细胞中的表达

目的克隆人TFPI-2基因全长cDNA,构建其真核表达载体,并将其转染到人胰腺癌细胞Panc-1中,检测其表达。方法用RT-PCR法从人胎盘组织中扩增人TFPI-2基因,并将其与真核表达载体pEGFP-C1连接,构建真核表达载体pEGFP-C1-TFPI-2。将构建的重组载体转染到人胰腺癌细胞系Panc-1细胞,Westernblot检测TFPI-2在Pane-1细胞中的表达。结果RT-PCR成功的扩增出一条约708bp的片断,扩增片断与载体连接后,经限制性内切酶酶切电泳分析和DNA序列测定证实该基因已经成功构建到载体上,转染Panc-1细胞后,荧光显微镜观察到稳定转染细胞发出较强绿色荧光,Westernblot技术证明TFPI-2基因能在Panc-1细胞中稳定表达。结论成功构建了人TFPI-2基因的真核表达载体pEGFP-C1-TFPI-2,获得了稳定表达TFPI-2的Panc-1细胞,证实TFPI-2基因能够在人胰腺癌细胞系Panc-1中高效、稳定的表达,为进一步研究其胰腺癌迁移、浸润及转移中的作用打下基础。