辽东楤木叶总皂苷抗肿瘤作用研究进展

对辽东楤木叶总皂苷抗肿瘤的作用的研究已取得一定的进展,主要涉及人肺腺癌、人乳腺癌、小鼠腹水瘤相关细胞的体外移植瘤模型研究及人肝癌、人结肠癌、人胃癌、人卵巢癌、人红白血病细胞水平的研究。为了进一步了解辽东楤木叶总皂苷在抗肿瘤方面的研究现状并了解其抗肿瘤作用的效果,通过对比前人及课题组在肿瘤体外移植瘤模型制备时细胞密度、辽东楤木叶总皂苷使用剂量、使用时间及在细胞水平中辽东楤木叶总皂苷剂量使用情况,最终发现,辽楤木叶总皂苷达50 mg·kg-1时,即达到一定肿瘤抑制率;100 mg·kg-1时,可以有效抑制肿瘤组织中相关蛋白的表达;并通过抑制肿瘤大小及影响其形态学变化而有效抑制肿瘤的生长。其给药间隔时间及持续时间不同,对不同类型肿瘤模型的作用也有一定的差别。细胞研究时发现,不同浓度对不同细胞的增殖、凋亡有一定的作用,并对其蛋白表达有一定的影响。这些都为辽东楤木叶总皂苷抗肿瘤的药理作用及临床应用提供更可靠的实验依据。     

辽东楤木叶总皂苷对人结肠癌HT-29细胞凋亡的影响

目的探讨辽东楤木叶总皂苷(ETS)诱导人结肠癌HT-29细胞凋亡及其对凋亡相关蛋白表达的影响。方法 MTT法检测不同浓度(6.25、12.5、25、50、100、200 mg/kg)ETS培养的结肠癌HT-29细胞增殖率,Hoechst33258染色和激光共聚焦成像检测细胞凋亡,并观察凋亡细胞的形态学改变,免疫组化检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax的表达。结果 ETS可诱导HT-29细胞发生凋亡,且凋亡作用在一定范围内呈剂量依赖性;ETS可使HT-29细胞Bcl-2表达降低、Bax表达升高(P0.05,P0.01),且呈明显的量效关系。结论 ETS可诱导HT-29细胞凋亡,其凋亡机制可能与降低Bcl-2、升高Bax的表达相关。     

辽东楤木叶总皂苷对荷瘤小鼠抑瘤作用的实验研究

目的:研究辽东楤木叶总皂苷对荷瘤小鼠抑瘤作用的效果,初步探讨其体内抑瘤作用机制。方法:采用小鼠H22肝癌细胞实体瘤模型进行体内抑瘤实验,测定肿瘤生长抑制率,利用光镜、电镜等方法进行形态学观察,是否产生凋亡小体。结果:辽东楤木叶总皂苷对小鼠的H22实体瘤生长具有明显的抑制作用,形态学观察显示,治疗组与对照组比较,肿瘤团块较小,异型性不明显,病理性核分裂和间质血管较少,淋巴细胞浸润明显。电镜下可见凋亡小体形成,其中以总皂苷组最明显。结论:辽东楤木叶总皂苷对荷瘤小鼠具有较强的体内抗肿瘤作用,作用机制可能与其能够抑制肿瘤细胞分裂、增殖及能够诱导肿瘤细胞凋亡有关。     

七叶皂苷钠抑制人白血病Jurkat细胞增殖的机制研究

目的研究七叶皂苷钠抑制人白血病Jurkat细胞增殖的作用及其机制。方法 MTT法分析七叶皂苷钠对Jurkat细胞增殖的抑制作用,Hoechst 33258染色、FITC-Annexin V/PI双染、DNA Ladder、流式细胞术检测细胞凋亡和细胞周期,Western blotting法分析凋亡相关蛋白变化。结果七叶皂苷钠呈质量浓度和时间相关方式抑制Jurkat细胞增殖;经七叶皂苷钠处理后的Jurkat细胞出现凋亡的形态学特征、DNA条带,Annexin V+/PI细胞(早期凋亡细胞)显著增加;七叶皂苷钠可活化Jurkat细胞中Caspase-8、Caspase-9、Caspase-3,引起PARP的切割,并减少Bcl-2蛋白的表达。结论七叶皂苷钠能有效地通过诱导细胞凋亡抑制Jurkat细胞增殖。     

龙葵碱调控还原型谷胱甘肽和活性氧氧化还原体系损伤线粒体超微结构诱导HepG2细胞凋亡

目的 探讨龙葵碱诱导HepG2细胞凋亡与线粒体损伤的关系.方法 倒置显微镜观察细胞形态,Annexin V/PI 双染激光共聚焦扫描显微术检测细胞凋亡,流式细胞仪检测细胞凋亡率.透射电镜观察细胞线粒体超微结构,CDFH-DA染色激光共聚焦扫描显微术检测活性氧(ROS)相对量,比色法检测还原型谷胱甘肽(GSH)量.结果 龙葵碱组HepG2细胞贴壁细胞数量减少,部分出现死亡.Annexin V/PI双染激光共聚焦扫描显微镜下观察发现龙葵碱组细胞Annexin V-FITC高染,细胞膜呈绿色荧光;PI低染,细胞核呈红色荧光,呈现明显的早期凋亡特征.流式细胞术分析0.4、2、10 μmol/L龙葵碱作用HepG2细胞24 h后,早期凋亡率分别为4.0%、8.5%、20.1%.透射电镜观察发现龙葵碱作用HepG2细胞24 h,细胞线粒体超微结构出现肿胀,嵴排列紊乱、嵴消失,重度空泡样变性等变化;细胞内ROS水平升高,GSH的水平降低.结论 龙葵碱通过降低HepG2细胞内GSH量,使ROS不能被及时清除而损伤线粒体结构,导致HepG2细胞凋亡.     

Annexin法在分析肺癌细胞凋亡中的应用

目的：探讨Annexin法在检测肺癌细胞凋亡中的应用．方法：AnnexinV／PI染色后，在激光共聚焦显微镜下观察含中药血清诱导人肺癌细胞凋亡的情况。结果：凋亡早期肺癌细胞呈AnnexinV^＋／PI^-，细胞膜呈绿色而细胞核不着色；凋亡中、晚期细胞则AnnexinV^＋／PI^-，细胞膜呈绿色而细胞，陔呈红色；部分细胞的核呈碎片状或梅花状，为典型的细胞凋亡形态．结论：Annexin法是目前观察凋亡的理想方法，特别适用于凋亡细胞的早期检测．     

太白楤木总皂苷诱导人白血病K562细胞凋亡的研究

目的 探讨太白楤木总皂苷对人白血病K562细胞增殖的抑制作用及其作用机制.方法 MTT法检测不同浓度的太白楤木总皂苷处理后K562细胞的增殖抑制率,倒置显微镜下观察细胞形态学变化,荧光显微镜下观察细胞核的变化,免疫组化法检测NF-κB、Casp3蛋白的表达.结果 太白楤木总皂苷对K562细胞的增殖有抑制作用,呈时间和剂量效应;倒置显微镜及荧光显微镜观察显示K562细胞随太白楤木总皂苷作用浓度增加发生形态学改变,出现凋亡小体;免疫组化法检测显示太白楤木总皂苷可以抑制NF-κB的表达,升高Caspase-3.结论 太白楤木总皂苷对K562细胞增殖有显著的抑制作用,并促进K562细胞凋亡,可能与下调NF-κB的表达和上调Caspase-3表达相关.     

基于谱-效关系的辽东楤木叶质量评价研究

目的 建立辽东楤木Aralia elata叶指纹图谱,并寻找能够反映辽东楤木叶抗肿瘤活性能力的质量评价方法。方法采用70%乙醇和水饱和的正丁醇提取各批次辽东楤木叶总皂苷,运用HPLC-ELSD测试分析皂苷并建立指纹图谱,MTT法测试楤木叶总皂苷和单体皂苷对人肺腺癌A549细胞、人肝癌SMMC-7221细胞、人结肠癌HT-29细胞的抑制作用,用灰色关联法分析指纹图谱峰与抗肿瘤作用之间的关系。结果 建立了含有28个共有峰的辽东楤木叶HPLC-ELSD指纹图谱,各批次图谱与共有模式图谱间相似度在0.850以上,指认并归属其中5个峰成分。各批次楤木叶总皂苷抗肿瘤作用的半数抑制浓度(half inhibitory concentration,IC₅₀)为7.39～79.13 mg/L,其中,黑龙江凤凰山7月的样品抗肿瘤效果最佳。谱-效相关性表明28个共有峰成分与抗肿瘤活性的关联度为0.469 2～0.810 3,其中10个成分与抗肿瘤活性间的关联度大于0.70,8个成分与抗肿瘤活性间的关联度小于0.60。图谱中有2个峰成分在各批次药材中含量都相当大,但谱-效关联度却很小。5...     

辽东楤木叶总皂苷体外抗肿瘤作用的研究

目的探讨辽东楤木叶总皂苷(ETS)的体外抗肿瘤作用,为进一步将其开发成新靶点的抗肿瘤药物提供可靠的科学依据,为研发具有自主知识产权的抗肿瘤新药奠定坚实的基础。方法利用磺酰罗丹明B(SRB)染色法,观察辽东楤木叶总皂苷不同浓度对A549、BGC、BEL-7402和HCT-8肿瘤细胞的抑制作用。结果 ETS浓度达到31.25μg.ml-1时即可对人肺腺癌A549细胞、人胃癌BGC细胞和人肝癌BEL-7402细胞有50%生长抑制作用,达到62.5μg.ml-1时即可对人结肠癌HCT-8细胞有50%生长抑制作用。其浓度达到125μg.ml-1时即可对人胃癌BGC细胞和人肝癌BEL-7402细胞有50%杀死的作用。浓度达到500μg.ml-1时即可对人结肠癌HCT-8细胞有50%杀死的作用,而对人肺腺癌A549细胞未测出其50%杀死作用。各组均未测出完全抑制细胞生长所需的ETS浓度。对于体外加药48 h后对A549、BGC、BEL和HCT-8细胞OD值的影响,ETS组500,250,125μg.ml-1均有极显著性统计学差异(P<0.01),62.5μg.ml-1对A549、BEL和HCT-8均有显著性意义;31.25μg.ml-1均无统计学意义。结论 ETS体外对人肺癌A549、人胃癌BGC、人肝癌BEL-2、人结肠癌HCT-8肿瘤细胞有一定的抑制作用。     

辽东楤木叶总皂苷对H_(22)荷瘤小鼠p53及PCNA蛋白表达的影响

目的:观察辽东楤木叶总皂苷对H22荷瘤小鼠p53及PCNA蛋白的影响,初步探讨其体内抑瘤作用机制。方法:采用免疫组化法对H22荷瘤小鼠p53及PCNA蛋白表达进行检测,运用真彩色病理图像分析系统进行分析。结果:辽东楤木叶总皂苷能有效降低H22荷瘤小鼠p53及PCNA蛋白的阳性表达。结论:辽东楤木叶总皂苷可能通过抑制突变型p53蛋白的表达,使PCNA蛋白表达下调,从而抑制肿瘤细胞增殖,以此作为其抗肿瘤的机制之一。     

表没食子儿茶素没食子酸酯测定及其对胃癌细胞增殖的抑制作用研究

目的 分析表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)在绿茶提取物中的含量,探讨EGCG对人胃癌细胞BGC823增殖和凋亡的影响,为阐明EGCG抗肿瘤作用机制提供实验基础.方法 反相高效液相色谱法(RP-HPLC)测定绿茶提取物中EGCG的含量.MTT法检测EGCG对体外培养的人胃癌细胞BGC823增殖的影响;DNA ladder法检测EGCG处理各组DNA梯度的变化.所有数据均采用SPSS12.0进行统计分析,均数比较采用t-test.结果 通过绘制标准曲线确定绿茶提取物中EGCG 的含量为9%.MTT法检测结果显示EGCG能够呈现剂量(5×10~(-3),1×10~(-2),2×10~(-2),4×10~(-2))g/L依赖性地抑制人胃癌细胞BGC823的增殖;DNA ladder法显示EGCG处理组细胞DNA呈现梯状条带,而对照组则没有这种带纹.结论 绿茶提取物中EGCG的含量为9%;EGCG能够通过诱导细胞凋亡而抑制人胃癌细胞BGC823的生长和增殖.     

甜橙黄酮对人胃癌AGS细胞增殖和凋亡的作用及其机制研究

目的:探讨甜橙黄酮对人胃癌AGS细胞增殖和凋亡的作用及其机制.方法:采用MTT法观察甜橙黄酮对AGS胃癌细胞生长的抑制作用;流式细胞仪检测甜橙黄酮对细胞周期的影响;Annexin V-FITC/PI标记定量检测细胞凋亡率,DNA片段化分析进一步验证甜橙黄酮对细胞凋亡的作用;Hoechst 33342染色后倒置荧光显微镜观察凋亡细胞形态;Westem blot检测对p21和p53蛋白表达的影响.结果:甜橙黄酮可明显抑制 AGS胃癌细胞的增殖,呈时间和剂量依赖性;甜橙黄酮可阻滞细胞于G2/M期和增加AGS胃癌细胞凋亡率,并随剂量增大作用增强;60 pmol·L-1甜橙黄酮作用48 h产生凋亡特有的梯形条带;Hoechst 33342染色观察到甜橙黄酮给药组出现细胞核浓缩、边缘化以及凋亡小体等细胞凋亡的形态特征;甜橙黄酮可呈剂量依赖地增强p21和p53蛋白表达.结论:甜橙黄酮可显著抑制人AGS胃癌细胞的增殖,使细胞阻滞于G2/M期,并可诱导细胞凋亡,其机制可能与上调p21和p53蛋白有关.     

长春新碱对人胃癌BGC细胞增殖与凋亡的影响及其机制

目的通过体内外水平研究长春新碱对人胃癌BGC细胞增殖与凋亡的影响及其机制。方法采用MTS法检测人胃癌BGC细胞的增殖情况;采用Hoechst荧光染色法、流式细胞技术检测细胞凋亡和细胞周期的情况;通过Western blotting法检测BGC细胞内增殖、周期和凋亡相关蛋白表达情况;荷瘤裸鼠实验检测长春新碱抑制胃癌生长情况。结果长春新碱明显抑制BGC细胞的生长,其抑制率与药物浓度呈剂量和时间相关性,将细胞周期阻滞于G1期,并促进其凋亡,下调了细胞增殖和周期相关蛋白p-FAK、FAK、E2F1、Cylin E2、Cyclin D2、CDK2、CDK6的表达,并激活了凋亡相关蛋白Caspase-3。荷瘤裸鼠实验显示长春新碱能明显抑制胃癌生长。结论长春新碱通过下调细胞增殖与周期相关蛋白的表达,使细胞周期在G1期阻滞,同时激活Caspase-3诱导细胞的凋亡。     

健脾化瘀方含药血清对人结肠癌细胞LoVo凋亡的影响

目的:探讨健脾化瘀方含药血清对人结肠癌细胞LoVo凋亡的影响。方法:①应用MTT法检测健脾化瘀方含药血清对人结肠癌细胞LoVo的增殖抑制作用;②运用TUNEL法和AnnexinV/PI法检测LoVo细胞的凋亡率。结果:①健脾化瘀方含药血清高浓度(20%)可抑制LoVo细胞的增殖(P<0.01);②健脾化瘀方含药血清作用细胞48h后可以诱导细胞凋亡。结论:健脾化瘀方含药血清能抑制结肠癌细胞LoVo的增殖能力,并诱导细胞凋亡。     

白藜芦醇诱导胃癌细胞脱落凋亡

目的 研究白藜芦醇诱导胃癌细胞脱落凋亡的作用。方法 采用细胞形态学观察、Annxin-V和PI细胞染色和流式细胞仪检测，观察白藜芦醇(0．1、0．2、0．5 mmol／L)对脱落培养胃癌细胞BGC823、SGC7901和HGC27的生长状态、细胞周期的影响及诱导脱落凋亡的作用。结果 倒置显微镜下发现脱落培养的胃癌细胞聚集成团生长，0．1mmol／L白藜芦醇作用细胞后可抑制抗脱落凋亡的胃癌细胞聚集成团；流式细胞仪检测和Annxin-V和PI细胞染色表明0．5mmol／L白藜芦醇可分别阻滞脱落培养的BGc823、sGc7901和HGc27细胞于G0／G1、S、G2／M期，并可诱导这3株胃癌细胞发生脱落凋亡，其中自藜芦醇诱导HGC27细胞脱落凋亡比例达19．3％，远高于其他两株胃癌细胞。结论自藜芦醇可诱导胃癌细胞发生脱落凋亡。     

蜂毒素对人胃癌细胞株BGC-823凋亡及其细胞周期的影响

目的：观察蜂毒素体外对人胃癌细胞株BGC-823增殖、凋亡及细胞周期的影响。方法：采用MTT法观察不同浓度的蜂毒素（32,16,8,4,2μg/mL）体外对人胃癌细胞株BGC-823增殖的影响,并用流式细胞仪检测其诱导的细胞凋亡和周期阻滞效应。结果：①与对照组比较,蜂毒素有抑制人胃癌细胞株BGC-823增殖的作用（P〈0.01）,随着药物浓度的增大,其对细胞的抑制率也明显增大,呈现剂量依赖性。②蜂毒素浓度从4μg/mL开始,即可诱导细胞产生凋亡,随着剂量的增加诱导凋亡的效果更加明显。③在细胞周期方面,与阴性对照比较,蜂毒素作用24小时后S期细胞比例上升,而G0/G1期比例明显下降,蜂毒素浓度达到16μg/mL时G0/G1期前出现明显的亚二倍体区。结论：蜂毒素对人胃癌细胞株BGC-823的增殖具有抑制作用,且能够引起该细胞的凋亡及改变其细胞周期。     

松萝烟酰胺对胃癌SGC-7901细胞增殖、凋亡、细胞周期及迁移的影响

目的探讨松萝烟酰胺对胃癌SGC-7901细胞的增殖抑制作用及机制。方法体外培养SGC-7901细胞,分为对照组和不同浓度的松萝烟酰胺实验组,显微镜观察各组细胞形态;MTT法测定SGC-7901细胞增殖;AnnexinV/PI双染和DAPI荧光染色检测细胞凋亡;流式细胞术检测细胞周期;细胞划痕实验检测细胞的迁移。结果松萝烟酰胺处理SGC-7901细胞后,细胞发生皱缩、变形,贴壁细胞脱落;MTT结果显示,松萝烟酰胺对SGC-7901增殖抑制作用呈明显的浓度依赖性和时间依赖性;AnnexinV/PI双染结果显示,松萝烟酰胺使SGC-7901细胞的晚期凋亡率增加,且DAPI染色可观察到明显的细胞凋亡的核浓缩、核碎裂;流式结果显示,松萝烟酰胺使SGC-7901细胞周期停滞在S期;划痕实验显示,随着时间的延长、浓度的增加,松萝烟酰胺使SGC-7901细胞迁移率下降越明显。结论松萝烟酰胺对SGC-7901细胞具有增殖抑制作用,其作用机制可能是通过诱导细胞凋亡、阻滞细胞于S期,从而抑制细胞的迁移。     

木犀草素抑制人胃癌BGC-823细胞增殖作用的研究

目的研究木犀草素（Luteolin,Lu）对人胃癌BGC-823细胞增殖的体外抑制作用及其机制。方法 DPPH法测定Lu抗氧化活性;MTT法测定Lu对BGC-823细胞增殖的影响;流式细胞术检测细胞周期分布影响及诱导凋亡的作用;倒置显微镜下观察细胞形态学变化。结果 Lu清除自由基的能力与其浓度呈正相关（r2=0.979）;5,10,20,40μmol/L的Lu作用48 h后对BGC-823细胞增殖抑制率分别为5.08%,7.09%,25.27%和53.77%,半数抑制浓度（IC50）为（37.88±5.81）μmol/L;Lu以浓度依赖性阻滞细胞周期在G2/M期,且S期细胞比例呈下降趋势。40μmol/L的Lu作用72 h后,BGC-823细胞凋亡率显著增高（P〈0.01）;镜下观察发现经Lu处理后细胞固缩并伴随细胞膜破裂的现象。结论 Lu在体外对人胃癌BGC-823细胞增殖有明显的抑制作用,且呈剂量依赖性;抗氧化、改变细胞周期及诱导细胞凋亡是其抗肿瘤作用的机制。     

双氢青蒿素抑制人胰腺癌细胞SW-1990的实验研究

目的:研究双氢青蒿素对人胰腺癌细胞株SW-1990增殖及凋亡的影响,并探讨其作用机制。方法:采用细胞增殖/毒性检测试剂盒(Cell Counting Kit-8,CCK-8)检测不同浓度双氢青蒿素(dihydroartemisinin,DHA)对人胰腺癌细胞株SW-1990增殖的影响;流式细胞术Annexin V-FITC和PI双标染色法检测不同浓度DHA对其凋亡的影响;并且用激光共聚焦显微镜观察在Hoechst 33342/PI荧光双染色下胰腺癌细胞SW-1990形态学变化;RT-PCR检测DHA对胰腺癌细胞SW-1990中端粒酶催化亚单位hTERT mRNA表达的影响。结果:DHA在体外可以明显的抑制SW-1990的增殖,并且具有浓度-时间依赖性;DHA在体外能明显诱导SW-1990细胞的凋亡;DHA可以抑制胰腺癌细胞SW-1990中hTERT mRNA的表达,并且与浓度呈正相关。结论:DHA在体外抑制胰人腺癌细胞SW-1990的增殖、诱导其凋亡,其作用机制可能是抑制了肿瘤细胞中端粒酶催化亚单位hTERT mRNA的表达。