兔骨膜成骨细胞体外培养体系的建立

本文用兔骨膜成骨细胞分离培养建立了成骨细胞生物学模型。本法有骨膜取材方便、骨膜生发层所含的成骨细胞量多而集聚的优点,分离培养技术也简单易行,为研究成骨细胞的代谢及成骨潜能提供了有用的工具。     

大鼠长骨成骨细胞体外培养形态观察

目的 建立生长期大鼠长骨成骨细胞体外培养实验模型并观察其生长及骨化过程。方法 以10周龄Wistar大鼠股骨，胫骨为材料，采用酶分次消化法分离成骨细胞，经DME：F－12加10％胎牛血清的培养基原代和传统培养或含50μg/ml L-抗坏血酸和10mmol/L β－甘油磷酸钠的培养基连续培养，追踪观察成骨细胞在体外培养中的增殖及形态变化，并通过Giremsa,ALPey Kossa染色技术，观察细胞体外基质分泌和骨化过程。结果 （1）大鼠工骨成骨细胞具有体内成骨细胞的形态特征，增殖代谢旺盛，其群体倍增时间为78h。（2）成骨细胞分泌形成球形和无定形基质。（3）当给予钙化条件培养时，细胞形成钙化骨基质。（4）大多数细胞ALP染色呈阳性并与基质的钙化密切相关。结论 培养的生长期大鼠长骨成骨细胞具有成骨细胞的某些生物学行为，为儿童骨生长及调控的研究提供了一种实验模型。     

骨巨细胞瘤体外培养观察

对３例骨巨细胞瘤采用组织块培养法和单层培养法进行体外培养，３例原代培养全部成活，生存日数２６－６６日，例１共传５代，例２共传３代，例３传１代。单核间质细胞可见有丝分裂，并敏殖传代，而多核巨细胞不能繁殖传代，培养结果说明单核间质细胞是骨巨细胞瘤的实质性细胞。     

体外培养大鼠颌骨成骨细胞成骨及成血管相关因子表达检测

目的 探讨体外培养的大鼠颌骨成骨细胞成骨及成血管相关因子的表达情况。 方法 体外分离培养大鼠颌骨成骨细胞,采用碱性磷酸酶染色(ALP)与矿化结节茜素红染色对细胞进行鉴定。应用实时荧光定量聚合酶链反应及酶联免疫吸附法检测细胞成骨与成血管相关细胞因子的表达情况。 结果 体外培养的大鼠颌骨成骨细胞ALP及矿化结节茜素红染色均为阳性。颌骨成骨细胞在高表达成骨相关基因、Runt相关转录因子2、Ⅰ型胶原和骨钙素的同时,在蛋白及基因水平均高表达成血管相关细胞因子血管内皮生长因子、血管生成素1和成纤维生长因子2。 结论 颌骨成骨细胞在成骨分化的同时可通过分泌成血管相关细胞因子参与血管化调控。     

成骨细胞的体外培养及其生物学特性

目的 :建立体外分离、培养兔和人成骨细胞的生物学模型 ,并对其生物学特性进行观察。方法 :抽取新西兰兔骨髓 ,采用全骨髓法培养 ;人髂骨松质骨经胰酶消化获得成骨细胞 ,以 1× 10 6 / ml的细胞浓度进行培养 ,约10 d左右得到贴壁生长的单层细胞。随后传代培养 ,对所获得的细胞进行生物学特性观察。 结果 :获得的细胞呈多种形态 ,有长短不一、粗细不均、互相连接的胞浆突起 ,细胞可相互重叠呈复层生长 ,并形成钙结节。经连续传代 ,细胞形态与功能不变 ,具有典型成骨细胞的生物学特性。结论:无论采用兔骨髓基质细胞全骨髓法 ,还是人松质骨经胰酶消化法均能在体外培养出大量高纯度成骨细胞 ,方法简便、易行 ,为成骨细胞复合生物降解材料移植修复骨缺损奠定了基础 ,而且培养的成骨细胞可作为生物学模型 ,供干预研究使用。     

破骨细胞体外培养方法的建立与形态观察

1　材料和方法1 1　骨磨片制备　新鲜牛股骨皮质锯成 6ｍｍ× 6ｍｍ×2 0 0 μｍ的小块 ,再磨成 10 μｍ厚。1 2　破骨细胞分离培养　拉颈处死出生 2 4ｈ内的新生Ｗｉｓｔａｒ大鼠 ,75 %乙醇浸泡 5ｍｉｎ。无菌条件下分离股骨、肱骨、胫骨 ,清除骨表面的软组织和骨骺 ,放入培养液 (含ＤＭＥＭ ,2 5ｍｍｏｌ/ＬＨＥＰＥＳ ,15 %胎牛血清 ,青霉素 10 0Ｕ/ｍｌ,链霉素 10 0ｍｇ/Ｌ ,ｐＨ 7 0 )。骨干纵行剖开 ,吸管反复冲洗骨髓腔 ,静止 1ｍｉｎ。取 2 4孔培养板 ,每孔加 1ｍｌ培养液和一个骨磨片或盖玻片 ,37℃、5 %ＣＯ2 孵育箱 1ｈ。吸出培…     

表皮细胞体外培养过程中生物学特性改变的观察

目的 通过观察表皮细胞体外增殖与老化规律，为选择合适的纽织工程化皮肤种子细胞提供依据。方法 取正常年轻人表皮细胞进行传代培养，以不同代龄细胞为实验对象，采用形态学观察、群体倍增时间(PDT)、免疫细胞化学及β-半乳糖苷酶染色等一系列方法，检测表皮细胞老化规律。结果 体外单层培养9代，P2的PDT最短，前5代增殖能力较强，P5以后PDT明显延长，P8细胞不再增殖；随着细胞的连续传代培养，SA-β-Gal表达呈现从弱(在年轻细胞中占9％)到强(在老化细胞中占65％)的趋势。结论 建立了体外培养正常人表皮细臆的衰老模型，第1-5代表皮细胞(拱者年龄16～18岁)可作为构建组织工程化皮肤的种子细胞。     

成釉细胞株ALC体外培养观察

目的:探索成釉细胞株ALC的体外培养方法,了解ALC细胞的形态特征和生长特点。方法:对成釉细胞株ALC进行复苏、培养,运用免疫细胞化学SABC法检测角蛋白14和釉原蛋白的表达。结果:ALC细胞呈现特征性的"铺路石"样生长,多边形,细胞间连接紧密,细胞核明显,有短的细胞突起,符合上皮样细胞生长特点。免疫细胞化学染色结果显示角蛋白14和釉原蛋白染色阳性。结论:ALC细胞生长良好,并具有成釉细胞特点,是一种适合作为实验研究对象的成釉细胞株。     

成骨细胞样细胞体外培养的实验研究

阐明不同组织来源的成骨细胞样细胞，在各个发育阶段中的形态与功能以及它与骨形成之间的关系。方法从大鼠及鸡胚胎颅盖骨分离出３种形态的成骨细胞样细胞，即长梭形细胞、圆球形细胞、鳞片形细胞，进行体外培养。结果长梭形细胞、圆球形细胞均可向鳞片形细胞方向发展，它们有着一致的演变趋势与结果。同时处于不同发育阶段的３种形态细胞分别表现出所处阶段的功能状态，分泌酸性粘多糖、胶原、钙盐、碱性磷酸酶等物质，分泌物堆积即形成新生骨组织。同时在成骨区附近还呈现酸性磷酸酶阳性反应细胞。结论说明颅盖骨分离细胞含有两种不同来源的骨系细胞，在形成新骨的同时还进行着骨吸收的过程。     

人骨膜源性成骨细胞的体外培养

目的：探索成骨细胞的体外培养方法，建立人骨膜源性成骨细胞体外实验模型。方法；以人骼骨骨膜为材料，通过植块培养法进行细胞培养，通过形态学观察；细胞的碱性磷酸酶（ＡＬＰ）染色；培养液中骨钙放免分析等进行细胞学鉴定。结果：成骨细胞为成纤维细胞型，，贴壁生长，形态多样化，ＨＥ染色细胞轮廓清晰，核内可见２～３个核仁；细胞的ＡＬＰ染色淡了性；培养液中检测出较高浓度的ＢＧＰ。结论：可以利用人骨膜灯民骨细胞的体外     

甘油三酯对体外培养大鼠胰岛细胞功能的影响

OBJECTIVE: To study the effect of triglycerides (TGs) on the function of in vitro cultured rat islet cells. METHODS: SD rat islet cells were isolated for monolayer cell culture and treated with TGs at different concentrations (0, 0.5, 2.5, 5.0, 10.0 mmol/L) for 72 h. Insulin level in the cell culture media was measured after glucose loading test, and the deposition of fat droplets in the islet cells observed by oil red O-staining. RESULTS: No obvious effect was observed after a 72-h incubation of the islet cells with TGs at low glucose level (2.8 mmol/L), while with the stimulation of high-level glucose (27.8 mmol/L), the insulin secretion was significantly inhibited by TGs of higher concentrations (5.0, 10.0 mmol/L). The deposition of fat droplets was found in the islet cells after incubation with TGs, with TGs of higher concentrations. CONCLUSION: TGs induces deposition of fat droplets in islet cells in vitro, and may inhibit the insulin-secreting function of the cells.     

骨康对体外培养人成骨细胞OPG及RANKL基因表达的影响

【目的】观察中药骨康含药血清对肾阳虚型骨质疏松症患者成骨细胞细胞因子骨保护素(OPG)、核因子-κB受体活化因子配体(RANKL)mRNA表达的影响。【方法】取6月龄体质量2.5～3.0 kg的新西兰大耳白兔4只,雌雄各半,随机分为2组(中药骨康组、空白对照组),每组2只;分别灌服骨康煎剂4.2 g.kg-1.d-1,以及等容积生理盐水,连续灌胃共7 d,最后1次灌胃2 h后所有动物进行心脏采血,收集血清备用。分离并传代培养肾阳虚骨质疏松症患者成骨细胞,取第2代,制成2×105/mL的细胞悬液。实验组分别加入低、中、高不同浓度(体积分数5%、10%、20%)的骨康含药血清进行干预,空白对照组仅加培养液,继续培养。48 h后采用Trizol一步法提取总RNA,然后采用逆转录—聚合酶链反应(RT-PCR)法检测OPG、RANKL mRNA的表达。【结果】骨康低、中、高浓度组OPG mRNA表达量显著上升,与空白对照组比较差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01);骨康中浓度组与骨康低浓度组、骨康高浓度组与骨康中浓度组组间分别比较差异均有统计学意义(P<0.05);骨康含药血清以体积分数5%、10%、20%浓度递增时,RANKL mRNA的表达量显著下降,与空白对照组比较差异均有统计学意义(P<0.05),骨康中浓度组与骨康低浓度组、骨康高浓度组与骨康低浓度组组间RANKL mRNA表达量比较差异均无统计学意义(P>0.05)。【结论】骨康可以上调肾阳虚骨质疏松症患者体外培养成骨细胞OPG mRNA的表达,下调RANKL mRNA的表达。     

成人破骨细胞的体外培养

目的 建立成人破骨细胞体外培养的方法，观察成骨细胞对破骨细胞分化、增殖和功能的影响，为进一步研究补肾中药防治骨溶解和骨质疏松症提供基础。材料和方法 从成人骨髓中提取单核细胞，以1，25—(OH)2D3作为刺激因子，分3组培养：单核细胞与成骨细胞共同培养，单核细胞单独培养，单核细胞与成骨细胞条件培养液培养。生物显微镜下观察细胞的分化过程，HE染色和抗酒石酸酸性磷酸酶(Trap)染色方法作组织化学观察，扫描电镜(SEM)观察骨吸收功能。结果 在单核细胞与成骨细胞共同培养组，可见单核细胞逐步融合成多核细胞；HE染色和Trap染色可见阳性多核细胞；扫描电镜观察可见骨片上有骨吸收陷窝形成。其他两组则未得到上述结果。结论 成人骨髓单核细胞在一定培养条件下能分化成熟为具有典型的破骨细胞表型的多核细胞：Trap染色阳性，具有骨吸收功能。与成骨细胞的直接接触是破骨细胞分化、增殖和发挥功能的必不可少的条件。     

乳鼠成骨细胞体外培养及其生物学特性的研究

目的 探讨建立乳鼠成骨细胞体外培养方法 的可行性及成骨细胞的生物学特性.方法 取出生后24h内乳鼠颅盖骨,采用多次复合胶原酶消化法进行消化及体外培养,通过倒置相差显微镜观察细胞形态,进行成骨细胞HE染色,碱性磷酸酶染色,基质钙结节染色及Ⅰ型胶原蛋白免疫组织化学染色,对大鼠成骨细胞进行鉴定.结果 所培养细胞为成骨细胞,并生长良好,HE、碱性磷酸酶染色,钙结节染色及Ⅰ型胶原蛋白染色均阳性.结论 采用复合胶原酶消化法分离培养的成骨细胞具有典型成骨细胞生物学特性,且成分较单一.     

乳鼠肝细胞的体外培养及组织化学观察

本文用等量混合低浓度胶原酶、胰蛋白酶,直接消化乳鼠肝组织小块的方法,获得了存活率较高的大量肝细胞。培养的乳鼠肝细胞呈上皮状,形态多样,可分为大形细胞和小形细胞,胞质内充满颗粒。在培养的肝细胞内糖原丰富,琥珀酸脱氢酶活性强,乳酸脱氢酶活性阳性。培养的乳鼠肝细胞具有整体肝中细胞的特殊功能,可做为研究肝细胞的实验模型。     

甘油三酯测定中不同色原物质的性能评价

目的 评价不同色原对Trinder's方法测定甘油三酯的呈色效果及抗干扰性能.方法 配制不同浓度的H2O2溶液分别与色原物质反应,进行吸收峰扫描;将色原物质应用于甘油三酯检测试剂中,评价其抗干扰效果.结果 TBHB的呈色稳定性及灵敏度在11个受试色原中最好;含不同色原的甘油三酯试剂抗血红蛋白的干扰能力均较差,各组试剂干扰样本测定值与对照样本差异均有统计学意义(P＜0.05).对于结合胆红素干扰样本,以DHBS及TBHB为色原的试剂其测定值与对照样本差异有统计学意义(P＜0.05);对于游离胆红素干扰样本,以DHBS为色原的试剂其测定值与对照样本差异有统计学意义(P＜0.05).结论 在建立应用Trinder's反应原理的检测方法时需根据反应特点选择适宜的色原物质.     

中药黄芪对成骨细胞体外成骨能力的观察

目的 :观察黄芪水提液对新生大鼠颅骨成骨细胞体系增殖、分化及成骨能力的影响。方法 :取 2 4 h新生大鼠颅骨成骨细胞按细胞密度 1× 1 0 5个 / ml接种 96孔培养板 ,然后将生理盐水 (NS)、黄芪低剂量 (0 .5 g/ ml)、黄芪高剂量 (5 g/ml) ,终稀释成 1∶ 2 0 ,1∶ 4 0 ,1∶ 80分别加入新生大鼠颅骨成骨细胞体系 ,进行细胞增殖 (MTT法 )、AL P活性测定以及矿化结节计数。结果 :黄芪低剂量 (0 .5 g/ ml)在 1∶ 80稀释比 ,MTT法所测吸光度 A值及 AL P活性显著高于 NS对照组 (P<0 .0 1 ) ;黄芪高剂量 (5 g/ ml)在 1∶ 2 0稀释比 ,MTT法所测吸光度 A值及 AL P活性亦显著高于 NS对照组(P<0 .0 1 ) ;矿化结节计数两组均显著高于 NS对照组 (P<0 .0 1 )。结论 :黄芪在体外对成骨细胞的增殖与分化具有一定的双向调节作用     

早期培养人胎胸腺基质细胞的组织化学和免疫组织化学观察

３例胸腺组织取向３．５至４个月新鲜死亡人胎，剪碎后种在培养瓶内。所用培养液为ＤＭＥ，另加５％胎牛血清、１０％新生牛血清及Ｄ－缬氨酸６５０ｍｇ／Ｌ。早期培养中出现两类不同形态的细胞。上皮样细胞的ＮＥ、ＡｃＰ活性及ＰＡＳ反应较弱，ＡＴＰ酶和５＇－ＮＴ活性较强，角蛋白呈阳性。成纤维样细胞显示较强的ＮＥ、ＡｃＰ活性及ＰＡＳ反应，Ｖｉｍｅｎｔｉｎ呈阳性。３例培养中均含两类细胞，表明培养细胞仍为胸腺基质细胞的     

人骨髓成骨细胞培养法的改良及其体外成骨能力

目的：探讨简便、易行的人达成骨细胞体外培养方法,研究骨髓基质在体外培养条件下的成骨能力。方法：抽取人骨髓组织,梯度离心后置于含１００ｍＬ／Ｌ小牛血清的ＤＭＥＭ培养液中,培养２４小时换液,稳定伟代后改用含地塞米松和β－甘油磷酸钠的条件增大２液,用倒置显微镜观察、组织化学染色、四环素荧光标记等方法进行观察。结果：传代细胞４天～５天即可传代,在条件培养液中２ＷＫ形成多层结构,并聚集成黑色结节。培养细胞Ａ     

甘油三酯对体外培养大鼠胰岛细胞功能的影响

目的研究甘油三酯对胰岛细胞分泌功能的影响。方法体外分离SD大鼠胰岛细胞并进行单层细胞培养,以不同浓度(0、0.5、2.5、5.0 10.0 mmol/L)甘油三酯与胰岛细胞共同孵育72 h后,进行葡萄糖负荷试验,放射免疫法检测培养液中胰岛素水平,以评价胰岛细胞功能变化;同时采用油红染色方法,光镜下观察细胞内脂肪堆积情况。结果低糖(2.8 mmol/L)刺激下,甘油三酯对胰岛细胞的胰岛素分泌无明显影响,高糖(27.8 mmol/L)负荷下,高浓度甘油三酯(5.0、10.0 mmol/L)可抑制胰岛细胞的胰岛素分泌(P<0.05);油红染色见甘油三酯处理组胰岛细胞内均有脂肪堆积,尤以高浓度组明显。结论甘油三酯可导致体外培养胰岛细胞内脂肪堆积,抑制细胞的分泌功能。