荞麦花叶芦丁对乙醇所致小鼠肝细胞损伤的保护作用

目的探讨荞麦花叶芦丁（RBFL）对肝细胞损伤的保护作用,并探讨其可能机制。方法从荞麦花和叶中提取RBFL。采用胰蛋白酶消化、分离小鼠肝细胞行原代培养,乙醇体外诱导肝细胞损伤,以不同浓度的RBFL干预。检测损伤肝细胞培养上清液中天门冬氨酸氨基转换酶（AST）、丙氨酸氨基转移酶（ALT）、超氧化物歧化酶（SOD）活性和丙二醛（MDA）水平。结果与正常对照组比较,模型组AST、ALT、MDA明显升高,SOD活性明显降低（P均〈0.01）。与模型组比较,RBFL75～300 mg/L干预后AST、ALT、MDA水平明显降低,SOD活性明显提高,呈剂量依赖性,P〈0.05、〈0.01。结论 RBFL对乙醇所致的肝细胞损伤有明显保护作用;其机制可能与RBFL能清除自由基、防止脂质过氧化、改善脂质代谢有关。     

氧化应激在七氟醚保护大鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤中的作用

目的探讨七氟醚预处理对缺氧/复氧（H/R）引起的心肌细胞损伤的保护作用及氧化应激在其中的作用。方法将H9 c2细胞随机分为正常对照组（C组）、H/R组及七氟醚预处理组（S组）,缺氧2 h后复氧1 h,观察心肌细胞活力及细胞内活性氧,同时检测心肌细胞超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）活性和丙二醛（MDA）含量。结果与C组比较,H/R组细胞存活显著减少,细胞内活性氧增多,SOD及GSH-Px活性减弱,MDA含量增多（P均〈0.05）;与H/R组比较,S组细胞存活显著增多,细胞内活性氧减少,SOD及GSH-Px活性增强,MDA含量减少（P均〈0.05）。结论七氟醚可能通过抑制心肌细胞活性氧产生、增强抗氧化酶活性以减轻心肌细胞的H/R损伤。     

参附注射液对原代培养乳鼠心肌细胞缺氧一复氧损伤的影响

目的探讨参附注射液（SFI）对原代培养的乳鼠心肌细胞缺氧／复氧损伤的保护作用及其机制。方法建立大鼠心肌细胞原代培养缺氧／复氧损伤模型,将培养心肌细胞随机分为4组。正常对照组（C组）;缺氧／复氧组（H／R组）;低浓度SFI处理组（SFI-L组）：加入终浓度为50tlmol／mLSFI30min后再缺氧／复氧;D组：高浓度SFI处理组（SFI-H组）：加入终浓度为1（）（]umol／mI。参附注射液30rain后再缺氧／复氧。检测各组上清液中肌酸激酶同工酶（CK-MB）、心肌肌钙蛋白I（cTn-I）含量,心肌细胞内丙二醛（MDA）含量和超氧化物歧化酶（SOD）活性以及心肌细胞凋亡指数。结果与C组比较,H,0R组心肌细胞培养液cK-MB、cTn-I含量、心肌细胞内MDA含量以及凋亡指数显著上升,SOD活性显著下降,差异有统计学意义（P〈0．01）。与H／R组比较,SFI-L组、SFI-H组中除SOD活性显著上升外,上述其他指标均显著下降,差异有统计学意义（P〈0．01）。结论SFI对缺氧／复氧损伤心肌细胞具有保护作用,其具体机制可能是与通过抑制脂质过氧化程度,减少心肌细胞凋亡有关。     

氯离子通道阻滞剂对心肌低氧复氧损伤的影响

目的研究氯离子流在心肌缺氧、缺氧再灌注、缺氧预处理中的病理生理作用。方法利用培养的心肌细胞，制作低氧复氧、缺氧预处理和低渗预处理模型，并使用氯离子通道阻滞剂SITS和Tamoxifen进行干预，最后检测细胞存活率及培养细胞上清液中乳酸脱氢酶(LDH)、丙二醛(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)的活性变化。结果使用氯离子通道阻滞剂后的低氧复氧组，其细胞存活率及上清液中LDH、MDA及SOD活性与对照组相比无明显差异；加入氯离子通道阻滞剂后再进行缺氧预处理、低渗预处理的各组，细胞存活率及LDH、MDA和SOD的活性与单纯低氧复氧组相比无显著性差异。结论氯离子通道阻滞剂、缺氧预处理、低渗预处理对心肌缺氧损伤均具有保护作用，而缺氧预处理、低渗预处理的这一保护作用能被氯离子通道阻滞剂阻断。     

苯那普利对缺氧复氧心肌心胞内钙离子的影响及机制研究

目的研究苯那普利对乳鼠缺氧复氧心肌细胞内钙离子浓度的影响及作用机制。方法采用纯化培养的乳鼠心肌细胞复制缺血再灌注模型。实验分为4组,每组8例：空白对照组、单纯缺氧复氧组（H／R）、缺氧复氧＋苯那普利（1×10^6mol／L）组、缺氧复氧＋苯那普利（1×10^6mol／L）＋缓激肽B2受体拮抗剂（HOE140）（1×10^6mol／L）组。细胞缺氧1h,复氧2h后取细胞培养液测定乳酸脱氢酶（LDH）,取细胞测定超氧化物歧化酶（SOD）的活性和丙二醛（MDA）含量,测定细胞内钙浓度。结果单纯缺氧复氧组与对照组比较,LDH、MDA、[Ca^2＋]i含量升高,SOD活性下降（P〈0．01）;苯那普利组与缺氧复氧组比较,LDH、MDA、[Ca^2＋]i含量降低,SOD活性升高（P〈0．01）;苯那普利＋HOE140组与苯那普利组比较,LDH、MDA、[Ca^2＋]i含量升高,SOD活性下降（P〈0．01）。结论苯那普利能降低细胞内钙离子浓度,有明显保护心肌的作用。其作用可能与激活激肽-缓激肽释放系统、抑制缓激肽的降解有关。     

Effects of Wy14643 on hepatic ischemia reperfusion injury in rats

AIM： To investigate the effects and possible mechanisms of Wy14643 on hepatic ischemiareperfusion （I/R） injury in rats. METHODS： Thirty male Sprague-Dawley rats weighing 220-280 g were randomly divided into five experimental groups： sham group （G1, n = 6）： a sham operation was performed （except for liver I/R）, I/R-untreated group （G2, n = 6）： rats underwent liver ischemia for 90 min followed by reperfusion for 4h; and I/R ＋ Wy14643 groups （G3, G4, G5; n = 6）： after the same surgical procedure as in group 2, animals were pretreated with Wy14643 at the dose of 1, 5 and 10 mg/kg 1 h before ischemia, respectively. Hepatic ischemia-reperfusion （I/R） was induced by clamping blood supply to the left lateral and median lobes of the liver for 90 min, and atraumatic clamp was removed for 4 h reperfusion. Blood samples and liver tissues were obtained at the end of reperfusion to assess serum and hepatic tissue homogenate aminotransferase （ALT）, aspartate aminotransferase （AST）, myeloperoxidase （MPO）, serum interleukin- 1β（IL-1β） and tumor necrosis factor alpha （TNF-α）, as well as activity of superoxide dismutase （SOD） and content of malondialdehyde （MDA） in the hepatic tissue homogenate. RESULTS： Hepatic I/R induced a significant increase in the serum levels of ALT, AST, TNF-α, IL-1β and MPO, as well as the levels of ALT, AST and MDA in the liver tissue homogenate, which were reduced by pretreatment with Wy14643 at the dose of 1, 5 and 10 mg/kg, respectively. The activity of SOD in the liver tissue homogenate was decreased after hepatic I/R, which was enhanced by Wy14643 pretreatment. In addition, serum and liver tissue homogenate ALT and AST in the Wy14643 10 mg/kg group were lower than in the Wy14643 1 mg/kg and 5 mg/kg groups, respectively. CONCLUSION： Wy14643 pretreatment exerts significant protection against hepatic I/R injury in rats. The protective effects are possibly associated with enhancement of anti-oxidant and inhibition inflammation res     

PTEN对缺氧复氧肝细胞HL7702氧化损伤的影响研究

目的研究第10号染色体同源缺失性磷酸酶—张力蛋白(PTEN)对缺氧复氧肝细胞HL7702氧化损伤的影响。方法取肝细胞HL7702,进行缺氧复氧处理,用qRT-PCR和Western blotting法检测细胞中PTEN表达水平。在HL7702细胞中转染PTEN siRNA,缺氧复氧处理后,Western blotting检测细胞中PTEN的表达水平,丙酮酸氧化酶法检测培养液上清中丙氨酸氨基转移酶(ALT)水平,紫外-苹果酸脱氢酶法检测培养液上清中谷草转氨酶(AST)水平,硫代巴比妥酸法检测细胞中丙二醛(MDA)水平,黄嘌呤氧化法检测细胞中超氧化物歧化酶(SOD)水平,流式细胞术测定细胞凋亡情况,Western blotting检测细胞中剪切的Caspase-3(Cleaved Caspase-3)蛋白水平。结果缺氧复氧处理后的HL7702细胞中PTEN mRNA和蛋白水平均高于未经处理的细胞(P0.05)。细胞中转染PTEN siRNA后可以下调缺氧复氧处理的HL7702细胞中PTEN的表达水平。缺氧复氧诱导HL7702细胞中MDA含量升高,降低细胞中SOD活性,提高培养液上清中ALT和AST水平,促进细胞凋亡和细胞中Caspase-3的活化,与未经处理的细胞比较,差异有统计学意义(P0.05)。转染PTEN siRNA后的HL7702细胞经缺氧复氧处理以后,细胞中MDA含量降低,SOD含量升高,培养液上清中ALT、AST水平降低,细胞凋亡减少,细胞中Caspase-3活化水平降低,与未经转染的HL7702细胞比较,差异有统计学意义(P0.05)。结论缺氧复氧诱导肝细胞中PTEN表达上调,敲低其表达后可以减轻缺氧复氧氧化损伤,减少细胞凋亡。     

苦杏仁苷对二甲基亚硝胺诱导的大鼠肝纤维化的防治作用

目的：探讨苦杏仁苷对二甲基亚硝胺（DMN）诱导的大鼠肝纤维化的防治作用。方法：采用Wistar雄性大鼠,以腹腔注射DMN诱导大鼠肝纤维化模型。在造模4周后,将造模大鼠按体重分层随机分为模型组、苦杏仁苷组及对照药秋水仙碱组,每组10只,灌胃用药两周后取材。观察检测以下指标：①末次体重、肝脾比值;②肝组织羟脯氨酸含量;③肝功能指标：血清丙氨酸氨基转移酶（ALT）、门冬氨酸氨基转移酶（AST）、谷胺酰转肽酶（GGT）活性;白蛋白（Alb）、总胆红素（TBil）含量;④肝组织天狼星红染色及HE染色;⑤肝组织脂质过氧化指标：超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）、还原型谷胱甘肽（GSH）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）。结果：①模型组大鼠肝组织羟脯氨酸含量与正常组相比显著升高（P〈0.01）;与模型组相比,苦杏仁苷及秋水仙碱治疗组大鼠肝组织羟脯氨酸含量显著降低（P〈0.01）;②天狼星红染色显示模型组大鼠窦周胶原沉积明显,肝小叶间形成较厚汇管区和中央静脉间的纤维间隔,可见较多完整的假小叶,HE染色结果显示模型组大鼠肝细胞水肿明显,汇管区结缔组织有不同程度增生,肝组织中有炎性细胞浸润,窦壁细胞增生明显;苦杏仁苷治疗组和秋水仙碱对照组与模型组相比炎症缓解、胶原纤维增生程度分期显著降低（P〈0.05）;③模型组大鼠血清ALT、AST、GGT活性及TBil含量显著升高,Alb含量显著降低（P〈0.01）;苦杏仁苷组与秋水仙碱组大鼠血清ALT、AST活性显著降低（P〈0.01或P〈0.05）;④与正常组比较,模型组大鼠肝组织SOD活性、GSH含量及GSH-Px活性显著降低,MDA含量显著升高（P〈0.05）;苦杏仁苷能显著升高模型大鼠肝组织GSH活性（P〈0.05）,秋水仙碱则能显著升高GSH、GSH-Px活性。结论：苦杏仁苷对DMN诱导的大鼠肝纤维化有显著改善作用。     

磷脂酰肌醇3-激酶信号通路在姜黄素诱导肝细胞转录因子Nrf2核转位中的作用

目的研究磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）信号通路在姜黄素诱导人肝细胞Nrf2核转位中的作用。方法用30μmol/L姜黄素和Wortmannin（PI3K抑制剂）干预L02肝细胞12 h,Western blot观察Nrf2核转位水平;将L02肝细胞分为对照组、模型组、干预组和抑制剂组,对照组用RPMI1640正常培养,模型组用100 U/L葡萄糖氧化酶（GO）干预2 h,干预组用30μmol/L姜黄素干预12 h后给予100 U/L GO干预2 h,抑制剂组先用0.1μmol/L Wortmannin预处理1h,余处理同干预组。流式细胞术检测细胞内活性氧簇（ROS）。分光光度法检测细胞MDA、GSH及培养液LDH水平,速率法检测细胞培养液AST的水平。结果姜黄素明显诱导Nrf2核转位,其诱导作用可被Wortmannin部分阻断。模型组ROS、MDA、AST、LDH水平较对照组显著升高（P〈0.01）,干预组ROS、MDA、AST、LDH水平较模型组显著降低（P〈0.01）,抑制剂组ROS、MDA、AST、LDH水平显著高于干预组,低于模型组（P〈0.01）。模型组GSH水平较对照组显著降低（P〈0.01）,干预组GSH水平较模型组显著升高（P〈0.01）,抑制剂组GSH水平显著低于干预组（P〈0.01）,高于模型组（P〈0.01）。结论 PI3K信号通路是姜黄素诱导Nrf2核转位的重要信号通路,通过抑制该通路可减弱姜黄素对肝细胞氧化应激损伤的保护作用。     

脑神康胶囊对培养大鼠海马神经元缺氧复氧损伤的保护作用

目的 观察益气补肾中药脑神康胶囊对体外培养大鼠海马神经元缺氧复氧损伤的保护作用.方法 原代培养大鼠海马神经元,随机分为对照组,损伤组,脑神康胶囊高、中、低浓度组.对照组正常培养,损伤组及脑神康胶囊各浓度组建立缺氧复氧损伤模型,其中脑神康胶囊各浓度组于复氧时换以不同浓度(5%、10%、20%)含药血清的培养液,检测各组细胞超氧化物歧化酶(SOD)、乳酸脱氢酶(LDH)活力及丙二醛(MDA)含量,测定细胞存活率及凋亡率,RT-PCR法检测bcl-2 mRNA和bax mRNA的表达及两者比值.结果 与对照组比较,损伤组SOD活性及细胞存活率均明显下降(P＜0.01),MDA含量、LDH活力及细胞凋亡率均显著升高(P＜0.01),bcl-2 mRNA表达下降,bax mRNA表达升高,bcl-2/bax降低(均P＜0.01);脑神康胶囊各浓度组均较损伤组SOD活性及细胞存活率均升高(P＜0.01),MDA含量及细胞凋亡率均降低(P＜0.01),LDH活力及bax mRNA表达降低(P＜0.01,P＜0.05),bcl-2 mRNA表达升高,bcl-2/bax增加(均P＜0.01),且呈明显的剂量依赖性.结论 脑神康胶囊对海马神经元缺氧复氧损伤有明显的保护作用,其作用机制可能与其提高神经元抗氧化能力、调节凋亡相关蛋白、减少凋亡密切相关.     

吡咯烷二硫氨基甲酸脂对缺氧再给氧冠状动脉内皮细胞凋亡的影响

目的:探讨缺氧再给氧(H/R)时冠状动脉内皮细胞(CAEC)氧自由基清除功能和细胞凋亡率的变化及抗氧化剂吡咯烷二硫氨基甲酸脂(PDTC)对它的影响。方法:将体外培养的猪CAEC分为3组。对照组:未经处理;H/R组:作H/R处理;PDTC组:在H/R前于培养液中加入PDTC。分别检测各组细胞谷胱甘肽(GSH)、丙二醛(MDA)含量、核转录因子(NF-κB)表达及细胞凋亡率。结果:实验期对照组GSH、MDA含量、NF-κB的表达及细胞凋亡率无明显改变;H/R及PDTC组GSH含量明显低于对照组同期,而MDA含量、NF-κB表达及细胞凋亡率明显高于对照组同期;但PDTC组GSH含量明显高于H/R组同期,MDA含量、NF-κB的表达及细胞凋亡率明显低于H/R组同期。结论:H/R使细胞GSH含量明显减少,MDA含量、NF-κB的表达及细胞凋亡率明显增加;PDTC能有效降低NF-κB的表达,改善细胞氧自由基清除功能,降低细胞凋亡率,减轻H/R损伤。     

乌司他丁对羊多脏器功能障碍综合征的防护作用

目的探讨乌司他丁（UTI）对多脏器功能障碍综合征（MODS）的防治作用。方法 21只杜泊绵羊随机分为对照组、模型组、UTI治疗Ⅰ组和治疗Ⅱ组。模型组、治疗Ⅰ组和Ⅱ组静脉注射内毒素（6μg/kg）,治疗Ⅰ组静脉注射UTI（30000U/kg）,1次/d,连续3d,治疗Ⅱ组静脉注射UTI（30 000U/kg）,2次/d,连续3d。各组分别于0,1,2,3,6和12h时间点测定动脉氧分压;于0,3,6,12,24,48和72h测定脏器生化指标天门冬氨酸转氨酶（AST）、丙氨酸氨基转移酶（ALT）、总胆红素（TBIL）、肌酐（Cr）和血常规指标。结果与模型组比较,UTI治疗组的氧分压下降幅度小;治疗组AST,ALT,TBIL和Cr的升高明显低于模型组（P〈0.05）,治疗Ⅰ组和Ⅱ组之间各项指标改善无统计学差异;模型组、治疗Ⅰ组和Ⅱ组绵羊的死亡率分别为66.6%、50.0%和33.3%。结论预防性应用UTI能降低内毒素诱导的MODS模型绵羊的死亡率,提高动脉氧分压,减轻内毒素所致的肺、肝和肾等脏器的损伤,具有保护作用。     

胡黄连苦苷Ⅱ抗大鼠肝纤维化的作用研究

背景：胡黄连苦苷Ⅱ可治疗急性肝损伤,但对肝纤维化的作用尚不明。目的：探讨胡黄连苦苷Ⅱ对CCl4致大鼠肝纤维化的治疗作用及其机制。方法：采用CCl4腹腔注射诱导大鼠肝纤维化模型,56只大鼠分为正常对照组、模型组、胡黄连苦苷Ⅱ治疗组和胡黄连苦苷Ⅱ对照组。造模第8周,处死大鼠：以HE染色和Masson染色观察肝组织改变和肝纤维化程度,以电子显微镜观察超微结构变化,检测血清丙氨酸氨基转移酶（ALT）、天冬氨酸氨基转移酶（AST）、白蛋白（ALB）以及组织丙二醛（MDA）水平,以逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）和免疫组化法分别检测肝组织转化生长因子（TGF）-β1、Ⅰ型胶原mRNA和蛋白表达。结果：与正常对照组相比,模型组肝组织炎症和纤维化程度、血清ALT、AST以及肝组织MDA水平、TGF—β1和Ⅰ型胶原mRNA和蛋白表达显著增高,血清ALB水平显著降低,超微结构发生显著改变。经胡黄连苦苷Ⅱ治疗后,上述指标均显著改善,但与正常对照组相比差异仍有统计学意义。胡黄连苦苷Ⅱ对照组上述各项指标与正常对照组无明显差异：结论：胡黄连苦苷Ⅱ可通过改善肝功能、抑制脂质过氧化反应、下调TGF-β1和Ⅰ型胶原mRNA和蛋白表达而抑制肝纤维化的形成。     

微囊化肝细胞移植治疗暴发性肝衰竭大鼠的疗效观察

目的观察微囊化肝细胞腹腔移植对暴发性肝衰竭大鼠的疗效。方法气流法制备含肝细胞的微囊。D-氨基半乳糖诱导大鼠急性肝功能衰竭模型,设模型组、裸肝细胞腹腔移植组、微囊化肝细胞移植组,每组8只测定ALT、AST、TBil水平。样本比较采用重复测量的多元方差分析或单因素方差分析,组间比较采用t检验。结果肝衰竭模型建立后ALT、AST、TBil迅速升高（P〈0．05）,并于24h～72h达高峰。同一时间点两两比较发现,Ⅱ、Ⅲ组在48h、72h、120h均明显低于Ⅰ组（P〈0．05）,Ⅲ组在48h、72h均低于Ⅱ组（P〈0．05）。Ⅲ组峰值较Ⅰ组前移。模型组、裸肝组和微囊组大鼠生存率分别是26．7％（4／15）、40．0％（6／15）、73．3％（11／15）,微囊组较模型组、裸肝组大鼠生存率有显著性提高（P〈0．05）。结论HCT能降低FHF大鼠ALT、AST和TBil水平,减轻肝损伤程度,可能改善FHF预后。     

Susceptibility of murine periportal hepatocytes to hypoxia-reoxygenation: role for NO and Kupffer cell-derived oxidants

Ischemia/reperfusion (I/R) is an important problem in liver resection and transplantation that is associated with hepatocellular dysfunction and injury. This study was designed to investigate whether a difference in hepatocyte susceptibility occurs in the periportal (PP) and/or perivenous (PV) zones in response to hypoxia/reoxygenation (H/R), and to delineate the mechanisms underlying this susceptibility. H/R was induced in an in situ perfused mouse liver model with deoxygenated Krebs-Henseleit buffer followed by oxygenated buffer. Selective destruction of PP or PV sites was achieved by digitonin perfusion into the portal or inferior vena cava, and was confirmed by histological evaluations and zone-specific enzymes. Hepatocellular injury was assessed by alanine aminotransferase (ALT) release. In whole liver, H/R significantly increased perfusate ALT. H/R of PP-enriched zones caused ALT release that was similar to that of whole liver (80 + 10 vs. 70 + 12 U/mg protein), consistent with significant PP hepatocyte injury. Minimal ALT release occurred in PV zones (10 + 5 U/mg protein). Administration of N-acetyl L-cysteine or a chimeric superoxide dismutase (SOD)-SOD2/3, a genetically engineered SOD-abrogated ALT release in H/R-perfused PP zones, implicating a role for superoxide (O(2) (-)). This elevated ALT release was attenuated by gadolinium chloride pretreatment, indicating that Kupffer cells are the O(2) (-) source. Enzymatic inhibition of cellular nitric oxide synthase (NOS) or genetic depletion of endothelial nitric oxide synthase (eNOS) aggravated hypoxia injury while exogenous NO and inducible nitric oxide synthase (iNOS) deficiency abolished reoxygenation injury. In conclusion, PP hepatocytes are more vulnerable to H/R; this injury is mediated directly or indirectly by Kupffer cell derived O(2) (-) and is limited by eNOS-derived NO.     

Sevoflurane pretreatment inhibits the myocardial apoptosis caused by hypoxia reoxygenation through AMPK pathway:An experimental study

Objective:To study whether sevoflurane pretreatment inhibits the myocardial apoptosis caused by hypoxia reoxygenation through AMPK pathway.Methods:H9c2 myocardial cell lines were cultured and divided into control group(C group),hypoxia reoxygenation group(H/R group),sevoflurane pretreatment+hypoxia reoxygenation group(SP group) and sevoflurane combined with Compound C pretreatment+hypoxia reoxygenation group(ComC group),and the cell proliferation activity and apoptosis rate,myocardial enzyme levels in culture medium as well as the expression of apoptosis genes and p-AMPK in cells were determined.Results:p-AMPK expression in cells of H/R group was significantly lower than that of C group,SP group was significantly higher than that of H/R group;cell proliferation activity value and Bcl-2 expression in cells of H/R group were significantly lower than those of C group,SP group were significantly higher than those of H/R group,Com C group were significantly lower than those of SP group;apoptosis rate,LDH,CK and AST levels as well as the Bax and Caspase-3 expression in cells of H/R group were significantly higher than those of C group,SP group were significantly lower than those of H/R group,ComC group were significantly higher than those of SP group.Conclusions:Sevoflurane pretreatment can activate AMPK signaling pathway to inhibit the myocardial apoptosis caused by hypoxia reoxygenation.     

四氯化碳诱导小鼠急性肝损伤模型的建立和优化

目的通过单次腹腔注射不同剂量的四氯化碳(CCl4)致小鼠急性肝损伤,检测小鼠血浆转氨酶水平的变化,建立适合本研究的小鼠模型。方法采用6~8周龄雄性C57BL/6小鼠单次腹腔注射CCl4诱导急性肝损伤。比较不同剂量的CCl4诱导急性肝损伤小鼠的血浆转氨酶水平。将182只小鼠随机分出32只。32只小鼠随机分为3组CCl4实验组(每组8只)和正常对照组(8只),分别腹腔注射0.1%、0.2%、0.3%的CCl4橄榄油溶液(10 ml/kg)或等体积橄榄油。注射12小时后取血,检测血浆丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)的水平。比较0.1%和0.2%剂量组小鼠不同时间点血浆转氨酶水平的变化。将剩余150只小鼠随机分为正常对照组(10只)、实验Ⅰ组(0.1%剂量,70只)、实验Ⅱ组(0.2%剂量,70只),实验组小鼠在造模6、12、16、20、24、48、72小时后取血,检测血浆ALT、AST的水平。结果与正常对照组相比,分别用0.1%、0.2%、0.3%CCl4处理后12小时小鼠血浆ALT、AST均明显升高(P0.05),并呈剂量依赖性。与正常对照组相比,0.1%和0.2%剂量组小鼠血浆ALT、AST的水平在早期均呈上升趋势,并分别在16小时和20小时达到高峰,随后逐渐下降,在72小时接近至正常水平。结论单次腹腔注射CCl4诱导小鼠急性肝损伤呈剂量依赖性。0.1%剂量的CCl4以及该剂量处理后16小时是建立C57BL/6小鼠急性轻度肝损伤的合适剂量与检测转氨酶水平的合适时间点。     

下调NAD（P）H氧化酶4加重缺氧复氧心肌细胞损伤：线粒体SIRT3信号的关键作用

目的明确内源性NAD（P）H氧化酶4（Nox4）在心肌细胞缺氧／复氧（H／R）损伤中的作用并探讨其可能的机制。方法：以H,C2心肌细胞系为研究对象,建立H／R模型,将细胞分为对照组、NC-siRNA组、Nox4-siRNA组、H／R组、H／R＋NC-siRNA组和H／R＋Nox4-siRNA组。采用RNAi方法下调Nox4的表达,MTT比色法测定相对存活率、荧光素酶化学发光法测量ATP水平,MitoSOX荧光探针检测线粒体ROS,比色法测定NAD＋／NADH的比值,Western blot法测定Nox4和SIRT3表达水平。结果：与对照组相比,H／R组H。c,心肌细胞中Nox4蛋白的水平明显增加（P〈0．05）,相对存活率、ATP的水平明显降低（P〈0．05,P〈0．01）,而线粒体ROS生成明显增加（P〈0．01）,同时NAD＋／NADH的比值明显增加、SIRT3表达量明显降低（P〈0．05,P〈0．01）。与H／R组相比,H／R＋Nox4-siRNA组Nox4蛋白水平显著降低（P〈0．05）,相对存活率、ATP的水平进一步降低、线粒体ROS生成进一步增加（P〈0．05）,同时,NAD＋／NADH的比值明显降低（P〈0．01）、SIRT3蛋白水平进一步降低（P〈0．05）。结论：下调Nox4可加重H／R诱导的心肌细胞损伤和氧化应激,抑制线粒体能量生成,其心肌细胞保护机制可能是通过上调NAD＋／NADH的比值,增加SIRT3的表达而发挥作用。