虎杖苷对休克大鼠微血管平滑肌细胞内钙、pH和膜电位的影响

目的探讨虎杖苷（ＰＤ）改善休克动物微循环的作用机制。方法股动脉放血复制休克模型，取肠系膜微动脉用链霉蛋白酶Ｅ消化以分离单个血管平滑肌细胞（ＶＳＭＣ），再用不同荧光染料分别标记细胞，在激光共聚焦显微镜上测定细胞内钙（［Ｃａ２＋］ｉ）、ｐＨ和膜电位的变化。结果ＰＤ（０４ｍｍｏｌ·Ｌ－１）使休克大鼠ＶＳＭＣ［Ｃａ２＋］ｉ浓度在１０ｍｉｎ内显著下降至加药前的７８４％±５６％、ｐＨ下降至原来的７２８％±８２％；而正常对照组ＶＳＭＣ［Ｃａ２＋］ｉ升高１７５％±６３％、ｐＨ上升３４％±１０１％。当ＰＤ加入前１０ｍｉｎ用钙通道阻断剂维拉帕米（５０μｍｏｌ·Ｌ－１）预处理后，则动物不论休克与否，其［Ｃａ２＋］ｉ、ｐＨ都显著下降。另外ＰＤ使正常及休克大鼠ＶＳＭＣ膜电位负值下降，出现去极化反应。加入ＥＧＴＡ和维拉帕米预处理不能阻断ＰＤ作用，但加入钠通道阻断剂河豚毒素（１μｍｏｌ·Ｌ－１）则可完全阻断ＰＤ的去极化作用。结论ＰＤ对细胞内钙、ｐＨ有双向调节作用，正常情况下ＰＤ增加细胞内游离钙及升高ｐＨ以提高血管张力，休克时ＰＤ降低细胞内钙浓度及降低细胞内ｐＨ以降低血管张力，使血管扩张。此外ＰＤ还可能通过促进细胞外钠离子?     

血管平滑肌钙激活钾通道及其调节机制

在所有离子通道中，钾通道种类最多。就血管平滑肌细胞（ｖａｓｃｕｌａｒｓｍｏｏｔｈｍｕｓｃｌｅｃｅｌ，ＶＳＭＣ）而言，目前正式命名的就有４大类即电压依赖性钾通道（Ｋｖ）、钙激活的钾通道（ＫＣａ）、内向整流钾通道（ＫＩＲ）和ＡＴＰ敏感性钾通道（ＫＡＴＰ）...     

内皮细胞乙酰胆碱作用靶标对胞内钙信号的调节

目的研究激活血管内皮细胞乙酰胆碱作用靶标(ETA)对不同类型血管内皮细胞[Ca2+]i水平的影响;以[Ca2+]i水平作为鉴定ETA功能的指标之一,观察其在传代过程中的改变,为研究ETA的分子结构及其信号转导途径提供实验依据.方法采用激光共聚焦技术,以荧光指示剂Fluo-3为探针,观察乙酰胆碱(ACh)和氨甲酰胆碱(carbachol,Car)对内皮细胞[Ca2+]i水平的影响.结果ACh和Car在10-5～10-2 mol*L-1可使3～10代牛主动脉内皮细胞标本的[Ca2+]i水平显著升高,ACh在 10-8～10-2 mol*L-1可使8代人冠脉内皮细胞标本的[Ca2+]i水平显著升高.结论内皮细胞在10代培养过程中外源性激动剂ACh和Car均可诱导胞内[Ca2+]i水平升高,ETA的功能与[Ca2+]i水平升高有关.     

卡托普利和依那普利对血管平滑肌细胞内钙的影响

检测ＡＣＥ抑制剂对主动脉平滑肌细胞内Ｃａ＾２＋的影响。用荧光标计和图象处理技术。ＳＨＲ细胞内Ｃａ＾２＋以及ＫＣｌ，ＮＥ和Ａｎｇ在ＳＨＲ细胞引起的Ｃａ＾２＋增加多于ＷＫＹ细胞。Ｃａｐ和Ｅｎａ不影响ＫＣｌ     

超氧阴离子对兔肺动脉平滑肌细胞内钙的影响

AIM: To study the effect of superoxide anion on the Ca2+ homeostasis in smooth muscle cells isolated from the rabbit pulmonary artery. METHODS: Intracellular Ca2+ concentration ([Ca2+]i) was investigated using cell suspension of freshly isolated smooth muscle cells from rabbit pulmonary artery (PASMC). Fura-2 fluorescent ratio obtained at 340 nm and 380 nm wave lengths was measured as an indicator of [Ca2+]i. RESULTS: ATP 30 mumol.L-1 induced a transient increase in the ratio (Ca2+ transient). Thapsigargin, an inhibitor of sarcoplasmic Ca2+ ATPase, induced a phasic increase in the ratio due to Ca2+ leak from intracellular store sites, but not the sustained increase, thereby suggesting the absence of Ca2+ release-activated Ca2+ entry (CRAC) mechanism in PASMC. When PASMC were exposed to superoxide anion by the pretreatment with xanthine and xanthine oxidase (X/XO) for 30 min, sustained component of ATP-induced Ca2+ transient was elevated. The ratios at 5 and 10 min after ATP application (delta ratio5 min and delta ratio10 min) were increased from 0.091 +/- 0.022 to 0.149 +/- 0.048 (P < 0.05) and from 0.021 +/- 0.020 to 0.117 +/- 0.047 (P < 0.01), respectively. But, thapsigargin-induced [Ca2+]i transient was not affected by X/XO. CONCLUSION: Superoxide anion makes ATP-induced Ca2+ transient sluggish, and does not affect Ca2+ leak pathway in PASMC.     

L-甲状腺素对血管变态反应性收缩的影响及胞内钙调节机制

目的:考察正常豚鼠血管变态反应在L-甲状腺素给药后的病理模型中的改变。方法:制作L-甲状腺素致豚鼠血管损伤病理模型,作为甲亢组。以卵白蛋白作为抗原,诱发豚鼠离体血管变态反应。观察在有钙和无钙介质中及药物干预下,正常组和甲亢组血管变态反应性收缩的变化及对胞外和胞内钙的依赖性。结果:两组血管变态反应主要依赖于胞内钙,胞外钙的影响次之。胞内钙的作用主要涉及咖啡因敏感型钙池,去氧肾上腺素敏感型钙池的影响次之。结论:甲亢组发生血管变态反应时,胞内钙释放增加比正常组更明显,主要加强了胞内咖啡因敏感型钙池的钙释放。     

大电导钙激活钾通道在平滑肌细胞中的调节机制

大电导钙激活钾通道由形成孔道的α亚基及具有调节作用的β亚基组成,因其电导大,对调节平滑肌细胞功能起重要作用,从而成为近年来研究的热点。大电导钙激活钾通道的调节机制多种多样,现对其近年来调节机制的研究进展作一综述。     

细胞内游离钙在辛伐他汀诱导大鼠血管平滑肌细胞凋亡中的作用

目的　研究 3 羟 3 甲戊二酰辅酶A (HMG CoA)还原酶抑制剂辛伐他汀诱导血管平滑肌细胞(VSMC)凋亡的机制。方法　以荧光染料Fura 2 /AM负载后荧光分光光度计法检测细胞内游离钙浓度 ,以DNA琼脂糖凝胶电泳、流式细胞仪PI/膜联蛋白 (an nexin)V染色及半胱天冬酶 3激活来检测细胞凋亡。结果　辛伐他汀 30 μmol·L- 1孵育VSMC后 ,细胞内游离钙浓度显著升高 ,6h时达对照的 3倍以上 (P <0 .0 1) ,维拉帕米 80 μmol·L- 1与辛伐他汀 30 μmol·L- 1共同孵育VSMC 6h后细胞内游离钙浓度为 (14 4± 34)nmol·L- 1(P <0 .0 1)。辛伐他汀可诱导细胞凋亡率增高、“DNA梯状”样改变及半胱天冬酶 3的激活 ,这些变化均可被维拉帕米所逆转。结论辛伐他汀通过使细胞外钙大量内流而诱导VSMC凋亡。     

Store-operated calcium entry in vascular smooth muscle

In non-excitable cells, activation of G-protein-coupled phospholipase C (PLC)-linked receptors causes the release of Ca(2+) from intracellular stores, which is followed by transmembrane Ca(2+) entry. This Ca(2+) entry underlies a small and sustained phase of the cellular [Ca(2+)](i) increases and is important for several cellular functions including gene expression, secretion and cell proliferation. This form of transmembrane Ca(2+) entry is supported by agonist-activated Ca(2+)-permeable ion channels that are activated by store depletion and is referred to as store-operated Ca(2+) entry (SOCE) and represents a major pathway for agonist-induced Ca(2+) entry. In excitable cells such as smooth muscle cells, Ca(2+) entry mechanisms responsible for sustained cellular activation are normally considered to be mediated via either voltage-operated or receptor-operated Ca(2+) channels. Although SOCE occurs following agonist activation of smooth muscle, this was thought to be more important in replenishing Ca(2+) stores rather than acting as a source of activator Ca(2+) for the contractile process. This review summarizes our current knowledge of SOCE as a regulator of vascular smooth muscle tone and discusses its possible role in the cardiovascular function and disease. We propose a possible hypothesis for its activation and suggest that SOCE may represent a novel target for pharmacological therapeutic intervention.     

钙诱导的钙释放引起一株血管平滑肌细胞株凋亡

目的：对钙诱导的钙释放引起血管平滑肌细胞株A10凋亡的可行性及其钙调节机制进行初步研究.方法：以钾离子孵育并以多种工具药进行干预,观测对A10细胞细胞核形态学,DNA琼脂糖凝胶电泳,细胞凋亡率,细胞线粒体膜电位的影响.结果：钾离子孵育能浓度相关性地促进A10细胞凋亡;硝本地平、ryanodine、BAPTA/AM、环胞素对中浓度钾离子孵育所致A10细胞凋亡有抑制作用;Zn^2＋、肝素对钾离子所致A10凋亡无抑制作用.结论：钾离子孵育将导致外钙经电压依赖性钙通道内流,通过升高胞浆内钙离子浓度激活ryanodine受体而不是IP3受体释放内钙,促进线粒体大量摄取而致A10细胞凋亡,该过程可能需要内钙持续释放但与容量依赖性外钙内流无关.     

缬沙坦对球囊损伤后血管平滑肌细胞增生的影响

目的 探讨缬沙坦因子防治人类血管成形术后再狭窄的可行性方法观察新的非肽类血管紧张素Ⅱ的Ⅰ型(AT_1)受体拮抗剂,缬沙坦(Valsartan),对血管平滑肌细胞(VSMC)增生的影响。对大鼠髂动脉球囊内皮剥脱术后过度增生模型采用~3H-TdR和~3H-Leu掺入,免疫组化染色检测VSMC中增殖细胞核抗原(PCNA)的表达及图象分析血管壁形态学变化。结果 缬沙坦显著减少~3H-TdR和~3H-Leu的掺入量,减少新生内膜面积和PCNA阳性细胞数。结论 缬沙坦能抑制大鼠动脉的球褒内皮损伤后的VSMC增生,可能它是防治血管成形术再狭窄的有效药物。     

小白菊内酯抑制胎牛血清诱导的大鼠血管平滑肌细胞增殖及信号转导机理

目的　探讨小白菊内酯的抗动脉粥样硬化机理与IκBα ,环氧合酶 2 (COX 2 ) ,p2 1,p2 7蛋白表达的关系。方法　培养大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞(VSMC) ,Western印迹杂交法检测IκBα ,COX 2 ,p2 1,p2 7蛋白表达 ,流式细胞仪检测VSMC周期情况 ,[3H ]TdR参入测定VSMC的DNA合成。结果小白菊内酯 (30 μmol·L- 1)以时间依赖关系上调IκBα ,p2 1,p2 7蛋白表达和以时间依赖关系抑制COX 2蛋白表达 ,10～ 30 μmol·L- 1以剂量依赖关系使VSMC周期中的G0 /G1期细胞比例明显增多 ,S期细胞比例显著减少 ,同时抑制VSMC的 [3H]TdR参入。结论　①小白菊内酯可能通过上调IκBα蛋白表达抑制核因子 κB活性 ,从而抑制COX 2蛋白表达 ,通过抑制COX 2蛋白表达来抑制VSMC增殖 ;②小白菊内酯可能通过上调调控G1 S周期转换的p2 1,p2 7蛋白来抑制VSMC增殖。     

坎地沙坦,PD123319及金雀异黄素对大鼠血管平滑肌细胞迁移影响

目的:探讨血管紧张肽Ⅱ(AngⅡ)不同受体亚型(AT1,AT2)在血管平滑肌细胞(VSMC)迁移中的作用。方法:以体外培养VSMC为基础,采用改良Boyden小室,对不同浓度AT1拮抗剂坎地沙坦(CV)、AT2拮抗剂PD123319(PD)和酪氨酸激酶(PTKs)抑制剂金雀异黄素作用下AngII诱导产生的VSMC跨膜迁移细胞数进行评价。分对照组、AngII组、AngII+10-10～10-5mol·L-1CV组、AngⅡ+10-9～10-6mol·L-1PD组、AngⅡ+CV+PD组、AngⅡ+金雀异黄素组。结果:与对照组相比,AngⅡ组跨膜迁移细胞数明显增加,P<0.01。坎地沙坦在10-10～10-5mol·L-1的浓度范围内,呈剂量依赖性抑制由AngⅡ介导的VSMC迁移(r=0.95,P<0.05)。PD123319对此无明显的增强或抑制作用。金雀异黄素组VSMC跨膜迁移细胞数低于AngⅡ组,高于对照组。结论:AngⅡ影响VSMC迁移能力的生物学效应由AT1介导;AT2在VSMC迁移过程中不起作用或者不起主要作用。酪氨酸激酶的激活也参与了AngⅡ诱导的VSMC迁移的信号转导过程。     

糖尿病大鼠冠状动脉平滑肌细胞体外培养方法的探讨

目的探讨糖尿病大鼠冠状动脉平滑肌细胞体外培养方法,建立糖尿病大鼠冠状动脉平滑肌细胞模型,为糖尿病性冠心病的研究奠定基础。方法建立糖尿病大鼠模型,用酶消化法体外培养冠状动脉血管平滑肌细胞。结果糖尿病大鼠造模成功后分离冠状动脉,用酶消化法培养糖尿病大鼠血管平滑肌细胞,24h更换培养液液,培养7~10d细胞重叠生长达多层,高低起伏呈“峰—谷”状。细胞α-actin免疫组织化学染色鉴定为平滑肌细胞。结论糖尿病大鼠血管平滑肌细胞增殖速度快,培养条件要求严格,在形态学上与正常大鼠平滑肌细胞相同。     

葛根素对血管平滑肌细胞增殖及对c-fos蛋白和凝血酶受体mRNA表达的影响

目的:通过建立凝血酶(T)诱导的血管平滑肌细胞(VSMC)增殖模型,观察葛根素对T诱导的VSMC增殖的影响,并进一步观察其对c- fos蛋白以及凝血酶受体(TR)mRNA表达的作用,旨在认识葛根素作用的分子机制。方法:以细胞计数法和流式细胞仪测定DNA含量,细胞周期分析观察T及葛根素对VSMC增殖和DNA合成的影响。T及葛根素等各处理因素作用2 4h后,免疫印迹法(Westernblot)检测c -fos蛋白表达,半定量逆转录聚合酶链式反应(RT- PCR)检测TRmRNA的表达。结果:T对VSMC有明显促增殖作用,促增殖效应在2 4h末达到峰值,且T浓度在0 .1～1.0U·L- 1有剂量依赖关系;葛根素呈剂量依赖性地抑制T诱导的细胞增殖、DNA合成以及VSMCc fos蛋白的表达;高浓度(1.5×10 - 3mol·L- 1)的葛根素可显著抑制T诱导的TRmRNA上调。结论:葛根素能抑制T诱导的VSMC增殖,这可能与其抑制c- fos蛋白有关,并部分与其抑制TRmRNA表达有关。     

家兔动脉血管平滑肌细胞培养方法的改进

目的提高家兔血管平滑肌细胞(vascular smooth mus-cle cell,VSMC)体外培养的成功率。方法以传统的主动脉平滑肌细胞培养方法中的组织块贴壁法为基础,从动物选择、培养基配制、血管取材、组织块的大小和接种间距、培养液的量及换液量、细胞传代的时机等多个重要环节进行改进;用倒置显微镜、电镜对培养细胞进行形态学观察,并用平滑肌细胞特异性α-肌动蛋白(α-actin)单克隆抗体免疫组织化学方法进行鉴定。结果台盼蓝检查传代细胞的存活率大于97%;光镜下见培养细胞平行排列呈长梭形及"峰、谷"样结构特征;免疫组织化学染色鉴定培养细胞中VSMC的纯度为97%;电镜技术观察到VSMC完整的超微结构。结论此培养方法能提高动脉平滑肌细胞原代培养的成功率,传代后血管平滑肌细胞生物学特征的稳定性好,可作为研究血管平滑肌细胞生物学行为的有效模型。