系统性红斑狼疮患者外周血单一核细胞白介素6受体水平的研究

目的 探讨白介素6(IL-6)及其受体(IL-6R)在系统性红斑狼疮(SLE)发病中的作用。方法 应用逆转录酶-聚合酶链反应(RT-PCR)检测89例SLE患者和30例正常人外周血单一核细胞(PBMC)中IL-6RmRNA的表达水平,用ELISA法检测血清中IL-6水平。结果 ①活动期SLE患者和非活动期SLE患者及正常人IL-6R阳性表达率为100%。②PBMC中,IL-6RmRNA表达水平:活动期SLE患者为0.902±0.273,非活动期SLE患者为0.519±0.11,正常人为0.573±0.24。活动期组和非活动期组和对照组比较,差异均有统计学意义(P=0.00),非活动期组和对照组比较差异无统计学意义(P=0.289)。③血清中IL-6水平:活动期组为71.89±20.02pg/mL,非活动期组为17.96±6.93pg/mL,对照组为0.035±0.035pg/mL。活动组显著高于非活动组和对照组(P=0.00),非活动组显著高于对照组(P=0.00)。活动期SLE患者和非活动期SLE患者血清中的IL-6水平与PBMC上的IL-6R的表达水平呈正相关(r=0.887和r=0.615,P<0.05)。结论 IL-6及其受体的异常表达可能在SLE疾病活动和发展过程中起重要作用。检测SLE患者PBMC中IL-6受体的表达水平可作为评估疾病活动性的参考指标之一。     

系统性红斑狼疮患者外周血单个核细胞中γ干扰素mRNA的表达

目的 探讨系统性红斑狼疮（SLE）患中γ-干扰素（IFNγ）表达的自然情况。方法 用逆转录-多聚酶链反应（RT-PCR）法检测了15例SLE患和10例正常人外周血单个核细胞（PBMC）中IFNγmRNA表达的水平。结果 与正常人相比,活动期SLE患PBMC中IFNγmRNA表达水平降低（P<0.01)。结果 SLE患中IFNγ的表达下调。     

系统性红斑狼疮患者外周血单个核细胞中IL-6与TNF-α的表达

目的：探讨系统性红斑狼疮（ＳＬＥ）中某些具炎症介质作用细胞因子的自然表达。方法：用逆转录－多聚酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）法检测了１０例正常人和１５例活动期ＳＬＥ患者外周血单个核细胞（ＰＢＭＣ）中白介素６（ＩＬ－６）和肿瘤坏死因子α（ＴＮＦ－α）ｍＲＮＡ表达的水平。结果：与正常人相比,活动期ＳＬＥ患者ＰＢＭＣ中ＩＬ－６和ＴＮＦ－αｍＲＮＡ的表达水平均增高（均Ｐ〈０．０１）。结论：ＳＬＥ患者中ＩＬ－６与ＴＮＦ－α的表达上调,可能在发病机制中起一定作用。     

抗白介素6单抗诱导系统性红斑狼疮外周血T细胞凋亡的研究

近年来在细胞凋亡研究中观察到白介素2(IL-2)、IL-6等具有抑制淋巴细胞凋亡的作用。因此IL-2、IL-6分泌异常增高可能与SLE患者淋巴细胞凋亡缺陷有关。针对自身免疫性疾病中的这种细胞异常,人们发展了多种较特异性的疗法以期能保护和诱导淋巴细胞的正常凋亡作用[1]。但抗细胞因子抗体与淋巴细胞凋亡的关系深入研究不多。文献中有抗IL-2单抗诱导T细胞凋亡的作用[2],但抗IL-6单抗与T细胞凋亡的关系尚未见报道。我们研究了抗IL-6单抗(AH-65)与SLE患者外周血T细胞凋亡的关系,报道如下。一、材料和方法(一)SLE患者为我院附属第一、第…     

系统性红斑狼疮患者外周血单一核细胞中Th1型细胞因子的表达

目的 探讨系统性红斑狼疮（ＳＬＥ）患者中Ｔｈ１型细胞因子表达的情况。方法 用逆转录聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）法检测了ＳＬＥ患者外周血单一核细胞（ＰＢＭＣ）中白介素２（ＩＬ－２）ｍＲＮＡ表达（４１例）和γ干扰素（ＩＦＮ－γ）ｍＲＮＡ表达（３１例）的水平。结果 与正常人相比,活动期ＳＬＥ患者中ＩＬ－２表达水平降低者占７８．０％,ＩＦＮ－γ表达水平降低者占８３．９％。活动期ＳＬＥ组ＰＢＭＣ中ＩＬ－２和     

系统性红斑狼疮患者外周血单一核细胞中白介素18的表达

系统性红斑狼疮(SLE)是一种侵犯多系统的自身免疫性疾病。白介素(IL)18可诱导Th1反应,在各种过敏性疾病、肿瘤、自身免疫性疾病及感染性疾病中起免疫调节作用^[1]。为了探索IL－18在SLE中的变化及临床意义,我们以β肌动蛋白为内参照,用半定量逆转录聚合酶链反应(RT－PCR)法测定了SLE患者及正常人对照外周血单一核细胞(PBMC)中IL-18mRNA水平,观察IL－18与狼疮活动指数(SLEDAI)^[1]、血沉(ESR)的相关性。     

SLE患者外周血单个核细胞IL—13mRNA的表达

探讨IL-13在系统性红斑狼疮(SLE)发病机制中的作用及其意义,应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PGR)检测了34例活动期SLE患者和30名正常人外周血单个核细胞(PBMC)中IL-13mRNA的表达水平.结果表明,活动期SLE患者IL-13的阳性表达率与正常人对照组相比无明显差异(P＞0.05);活动期SLE患者PBMC中IL-13mRNA的平均表达水平(0.8983±0.1153)明显高于正常人对照组(0.6085±0.0903),差异非常显著(P＜0.001).提示高水平的IL-13表达可能与SLE患者外周血T细胞高度活化、功能异常有关,其通过刺激B细胞活化、分化与增殖或激活B细胞旁路,参与SLE的发病过程.     

系统性红斑狼疮患者外周血单一核细胞IL-4受体水平的研究

目的:探讨白介素(IL)-4受体在系统性红斑狼疮(SLE)发病中的作用及其临床意义。方法:应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测89例SLE患者和30名健康对照者外周血单一核细胞(PBMC)中IL-4受体mRNA的表达水平;用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清中IL-4水平。结果:①活动期SLE患者、非活动期SLE患者及健康对照者PBMCIL-4受体表达阳性率为100%。②活动期SLE患者、非活动期SLE患者及健康对照者PBMCIL-4受体mRNA表达水平分别为0.604±0.147、0.400±0.130、0.370±0.070。活动期SLE患者和非活动期SLE患者比较、活动期SLE患者和正常对照者比较差异均有显著性(P=0.000),非活动期SLE患者和正常对照者比较差异无显著性(P=0.351)。③血清中IL-4水平在活动期SLE患者显著高于非活动期SLE患者和正常对照组(P=0.000),非活动期SLE患者显著高于正常对照组(P=0.000),活动期和非活动期SLE患者血清中IL-4水平与PBMCIL-4受体表达水平呈正相关(r=0.622～0.859,P<0.05)。结论:IL-4及其受体的异常表达可能在SLE疾病活动和进展过程中起重要作用。检测SLE患者PBMCIL-4受体的表达水平可作为了解疾病活动性的指标之一。     

系统性红斑狼疮患者外周血单一核细胞CCR6、CCR8趋化因子受体mRNA的表达

目的:探讨趋化因子受体CCR6及CCR8在系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血单一核细胞(PBMC)中的表达及与疾病的相关性.方法:收集93例确诊的SLE患者和30例正常对照者的PBMC,提取RNA.应用RT-PCR方法检测研究对象CCR6、CCR8 mRNA表达水平.记录患者临床表现及实验室检查结果.结果:①CCR6 mRNA在PBMC中表达水平:活动期组(0.985±0.257)与对照组(0.229±0.041)相比,两者差异有统计学意义(t=2.910,P=0.006).活动期组与非活动期组(0.306±0.034)、非活动期组与对照组、患者组(0.641±0.179)与对照组,3组间差异均无统计学意义(P>0.05).CCR8 mRNA在PBMC中表达水平:活动期组(0.703±0.285)与非活动期组(0.219±0.031)及对照组(0.120±0.018)间比较,差异无统计学意义(P>0.05);非活动期组与对照组、患者组(0.549±0.663)与对照组,两组间差异无统计学意义(P>0.05).②患者组CCR6 mRNA水平与疾病活动度评分关系:SLE患者组PBMC中CCR6 mRNA表达水平与SLE疾病活动程度指数(SLEDAI)分别作直线相关性分析,CCR6 mRNA水平与SLEDAI(r=0.457,t=4.513,P<0.001)呈正相关.③患者分为两个亚组:具有某些临床表现的与不具临床表现的CCR6mRNA及CCR8 mRNA表达.差异无统计学意义.结论:CCR6 mRNA表达水平在活动期SLE患者比非活动期及对照组增高,与SLEDAI呈正相关.CCR8 mRNA表达水平在SLE患者组与正常对照组差异无统计学意义.CCR6可能参与SLE的发生.     

SLE患者外周血单个核细胞中Aiolos mRNA的表达

目的观察系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE)患者外周血单个核细胞(PBMCs)中转录因子Aiolo smRNA的表达情况。方法采用SYBR Green实时定量PCR法检测20例SLE患者PBMCs中Aiolos mRNA的表达情况,并与20例正常人作比较。结果 SLE患者的PBMCs中Aiolos mRNA的表达明显低于正常对照组;SLE活动期组和稳定期组也均低于正常对照组;而且活动期组低于稳定期组;以上差异均有统计学意义(P均<0.01)。另外,SLE患者PBMCs中Aiolos mRNA的表达与SLEDAI评分呈负相关(P<0.01)。结论 SLE患者Aiolos基因表达降低,且与SLE活动指数呈一定相关性。     

女性狼疮肾炎患者外周血单个核细胞瘦素受体mRNA的表达及其与细胞因子的关系

目的:检测女性狼疮肾炎患者外周血单个核细胞(PBMCs)表面两种瘦素受体(ob-R)mRNA及血清中瘦素和细胞因子(IL-6和TNF-α)的表达水平.方法:采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测了28例女性狼疮肾炎患者和20例正常对照者的外周血单个核细胞表面长型受体(ob-Rb)和短型受体(ob-Ra)mRNA的表达.血清瘦素、IL-6和TNF-α水平的检测采用放射免疫分析法.结果:与正常对照组相比,女性狼疮肾炎患者单个核细胞mRNA(包括长型受体和短型受体)和血清瘦素、IL-6和TNF-α水平明显增高(P<0.01).结论:女性狼疮肾炎患者体内瘦素长型受体(ob-Rb)和短型受体(ob-Ra)mRNA与IL-6和TNF-α水平的增高可能与狼疮肾炎的发生和发展有关.     

SLE患者外周血白细胞B7-H1分子的表达

目的 探讨B7-H1分子在系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血白细胞的表达.方法 心用荧光抗体染色技术,经流式细胞仪检测30例SLE患者和20例正常人对照者外周血白细胞表面B7-H1的自然表达水平,同时收集SLE患者的实验室检查指标,并用SLE疾病活动指数(SLEDAI)来判定患者疾病活动程度.结果 活动期SLE组单核细胞、淋巴细胞和粒细胞上B7-H1表达水平均明显高于正常人对照组(P<0.01);SLE患者单核细胞和淋巴细胞B7-H1表达水平与SLEDAI呈正相关(r₁=0.42,P₁<0.05;r₂=0.52,P₂<0.05);抗dsDNA抗体阳性患者组淋巴细胞表面B7-H1分子数较抗dsDNA抗体阴性组明显增高(t=3.20,P<0.01).治疗后SLE患者外周血单核细胞、淋巴细胞和粒细胞B7-H1表达均明显下降,t值分别为10.00、6.75和4.33,P<0.01.结论 活动期SLE患者外周血白细胞B7-H1表达增加,且与SLEDAI成正相关,B7-H1可能与SLE的发病机制有关.     

性激素对SLE患者外周血单一核细胞凋亡的影响及其意义

研究脱氢表雄酮(DHEA)和(或)雌二醇(E2)对系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血单一核细胞(PBMC)凋亡的影响。应用吖啶橙(AO)染色法检测SLE患者、健康献血员PBMC与生理、病理浓度的DHEA和(或)E2培养48h的凋亡百分率。SLE患者PBMC凋亡率高于健康献血员(P<0.01)。不论生理或者病理浓度的E2对SLE患者、健康献血员PBMC凋亡无影响(P>0.05)。生理浓度的DHEA及DHEA+E2对健康献血员PBMC凋亡无影响(P>0.05),但可显著抑制SLE患者PBMC凋亡(P<0.05);病理浓度的DHEA及DHEA+E2可显著促进SLE患者、健康献血员PBMC凋亡(P<0.05)。DHEA及DHEA+E2对PBMC凋亡的影响,两者间无显著差异(P>0.05)。结果提示,DHEA对SLE患者PBMC凋亡起重要作用;DHEA浓度降低可能导致凋亡加快。     

SLE患者外周血单一核细胞淋巴细胞功能相关抗原1表达的检测

目的 研究SLE患者外周血单一核细胞（PBMC）淋巴细胞功能相关抗原1（LFA-1）的表达,探讨LFA-1与SLE的发病及病情变化的关系及其临床意义。方法 提取30例SLE患者（SLE组）和24例正常人（对照组）的PBMC,用抗人CD3-FITC和抗人CD11a-PE对其进行标记后,采用流式细胞术检测其CD11a的表达率。结果 PBMC CD11a的表达率对照组为68.21% ± 4.58%,SLE组为73.74% ± 7.89%,活动期组为77.11% ± 7.46%,稳定期组为69.33% ± 6.27%,SLE组PBMC CD11a的表达率显著高于对照组（P ＜ 0.05）,且活动期组亦显著高于对照组（P ＜ 0.05）,而稳定期组与对照组比较,差异无统计学意义（P > 0.05）。活动期组与稳定期组比较,差异有统计学意义（P ＜ 0.05）。相关性分析显示,SLE患者CD11a的表达率与其采血时的SLEDAI呈正相关（r = 0.64,P ＜ 0.01）。结论 LFA-1的过表达参与SLE的发病,并与疾病活动相关。     

SLE患者HSP90基因表达及其与IL-6相关性的研究

目的:通过检测系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血中热休克蛋白90(HSP90)基因mRNA及IL-6的水平,探讨SLE患者HSP90基因的表达及其与IL-6间存在的相关性。方法:分别使用原位杂交法、双抗体夹心ELISA法检测45例SLE患者外周血中HSP90mRNA和IL-6的表达,并进行直线相关性分析。取15份健康人血样进行正常对照。结果:SLE活动期、非活动期PBMC中HSP90mRNA表达的平均光度值分别为0.350±0.225,0.221±0.040,均显著高于正常对照组0.114±0.009(P<0.01,P<0.05)。SLE活动期HSP90mRNA表达显著高于SLE非活动期(P<0.05)。SLE活动期、非活动期血清IL-6水平分别为(16.82±1.79)pg/mL,(12.58±1.12)pg/mL,均显著高于正常对照组(10.13±2.95)pg/mL(P<0.01,P<0.05)。SLE活动期IL-6水平显著高于SLE非活动期(P<0.01)。IL-6的表达与HSP90mRNA的含量之间呈直线正相关关系(r=0.413,P<0.01)。结论:SLE患者体内存在IL-6的过度表达,可导致HSP90mRNA表达的增多,进而导致HSP90蛋白增高,高表达的HSP90可参与SLE的自身免疫反应,这可能在SLE的发病机制中起着一定的作用。     

SLE患者外周血单个核细胞一氧化氮合酶mRNA的表达

探讨原生型一氧化氮合酶(cNOS)和诱生型一氧化氮合酶(iNOS)在系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血单个核细胞(PBMC)中的表达水平及其意义,应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测了34例活动期SLE患者和30名正常人PBMC中cNOS和iNOSmRNA的表达水平。结果表明,活动期SLE患者iNOS和cNOS的阳性表达率与正常人对照组相比均无明显差异(P>0.05);活动期SLE患者PBMC中iNOSmRNA的平均表达水平(0.7710±0.1050)明显高于正常人对照组(0.5249±0.0770),差异非常显著(P<0.01);活动期SLE组cNOS的平均表达水平与正常人对照组处于同一表达水平,差异无统计学意义(P>0.05)。提示活动期SLE患者外周血单个核细胞中iNOSmRNA的表达增加,可能通过诱导一氧化氮(NO)及其代谢产物的产生参与SLE的发病过程。特异性iNOS抑制剂的开发与研制可能是治疗SLE新药发展的一个方向。     

HAX-1在SLE患者外周血单一核细胞中的表达及其亚细胞定位

目的 检测活动期SLE患者PBMC中抗凋亡基因HAX-1的表达水平，并进行亚细胞定位分析。方法 分别采用半定量PCR以及Western印迹试验从mRNA和蛋白水平上检测活动期SLE患者及正常人对照组PBMC中HAX-1的表达，并通过激光共聚焦显微镜观察HAX-1在SLE患者PBMC中的亚细胞定位。结果 活动期SLE患者PBMC中HAX-1在mRNA水平以及蛋白水平的表达均明显高于健康正常人（P值分别 = 0.000、0.007），且其相对表达水平与SLEDAI之间呈线性正相关；HAX-1在SLE患者PBMC中主要分布于线粒体内及内质网。结论 HAX-1可能通过抗凋亡机制抑制SLE患者体内淋巴细胞凋亡而导致其过度活化，从而参与SLE疾病发生发展过程。     

circ-PTPN22在系统性红斑狼疮患者外周血单个核细胞中的翻译及意义

【摘要】 目的 探讨circ-PTPN22的翻译能力及其与系统性红斑狼疮（SLE）的关系。方法 2019年5月10日至2019年9月30日分别于西南医院中西医结合风湿免疫科和体检中心收集6例SLE女性患者和9例健康女性对照全血样本,分离外周血单个核细胞（PBMC）,其中3例SLE和3例健康对照PBMC采用磁珠分选为T、B、NK细胞。通过circRNADb网站预测出circ-PTPN22内部核糖体进入位点（IRES）序列及蛋白序列,制备针对circ-PTPN22剪接位点处特异氨基酸序列的兔抗circ-PTPN22pro多克隆抗体,Western印迹法检测健康对照和SLE患者PBMC以及T、B、NK细胞亚群中circ-PTPN22pro的表达。将circ-PTPN22-FLAG、circ-PTPN22-NC-FLAG、circ-PTPN22-shRNA-FLAG、circ-PTPN22-shRNA-NC-FLAG重组慢病毒分别转染培养的Jurkat细胞,以正常培养的细胞作为细胞对照组,Western印迹法检测Jurkat细胞中circ-PTPN22pro蛋白表达,流式细胞仪检测circ-PTPN22对细胞活化和凋亡的影响。采用两因素重复测量方差分析和两独立样本t检验进行统计分析。结果 circRNAD数据库预测显示,circ-PTPN22具有翻译能力,且Western印迹显示circ-PTPN22pro蛋白相对分子质量为20 000。转染48 h后,circ-PTPN22-FLAG组circ-PTPN22pro表达明显高于circ-PTPN22-NC-FLAG组和细胞对照组。转染24、48、72 h,circ-PTPN22组白细胞介素2（IL-2）表达（22.20% ± 8.92%、31.10% ± 5.88%、53.20% ± 10.25%）均低于circ-PTPN22-NC组（30.90% ± 11.00%、51.23% ± 10.70%、69.67% ± 9.00%;F = 284.881,P = 0.003）;circ-PTPN22-shRNA组IL-2表达（35.57% ± 8.79%、78.10% ± 10.08%、88.63% ± 3.89%）均高于circ-PTPN22-shRNA-NC组（26.73% ± 4.92%、41.03% ± 10.45%、41.33% ± 4.96%;F = 293.818,P = 0.003）。转染48、72、96 h后,circ-PTPN22组、circ-PTPN22-shRNA组细胞凋亡率均分别高于circ-PTPN22-NC组（F = 81.287,P = 0.012）、circ-PTPN22-shRNA-NC组（F = 111.813,P = 0.009）。SLE组PBMC中circ-PTPN22pro表达低于健康对照组,几乎不表达。SLE组T、B细胞中circ-PTPN22pro表达均显著低于健康对照组（t =3.047、4.806,P < 0.05）,两组NK细胞中circ-PTPN22pro表达差异无统计学意义（t = 0.582,P > 0.05）。结论 circ-PTPN22可翻译circ-PTPN22pro蛋白,具有抑制Jurkat细胞活化功能,SLE患者PBMC中circ-PTPN22pro表达低于健康对照,提示其与SLE发生发展可能存在一定关系。