CXXC4调控胰腺癌PANC-1细胞迁移和侵袭的实验研究

目的 探究CXXC指蛋白4(CXXC4)对胰腺癌PANC-1细胞迁移、侵袭及上皮-间充质转化(EMT)进程的影响。方法 组织芯片免疫组织化学染色实验检测14份癌旁胰腺组织和87份胰腺癌组织中CXXC4表达情况。采用免疫荧光实验检测人正常胰腺导管上皮细胞HPNE及人胰腺癌细胞PANC-1、AsPC-1和BxPC-3中CXXC4蛋白的表达水平。采用Western blot实验检测CXXC4敲降和过表达的转染有效性,划痕和Transwell实验分析敲降或过表达CXXC4对PANC-1细胞迁移、侵袭的影响。采用Western blot和免疫荧光实验检测细胞EMT标志物E-cadherin、Vimentin和ZEB2的表达水平。通过STRING网站预测与CXCC4有相互作用的蛋白,筛选出的蛋白进行GO和KEGG富集分析。结果 免疫组化分析结果表明,CXXC4在胰腺癌组织中的表达水平低于癌旁胰腺组织(P<0.05)。免疫荧光实验结果显示,与HPNE细胞相比,CXXC4在PANC-1、AsPC-1和BxPC-3中的荧光强度均显著降低(均P<0.05)。划痕和Transwell实验结果显示...     

MiR-200c调控ZEB1抑制子宫内膜癌细胞增殖和侵袭

目的:探讨miR-200c调控子宫内膜癌(EC)细胞增殖和侵袭的机制。方法:蛋白印迹和RT-PCR法检测miR-200c、ZEB1和E-cadherin在EC细胞株中的表达。CCK-8检测细胞增殖,Transwell实验检测细胞侵袭力。结果:miR-200c在Ⅱ型EC细胞(HEC-1A和AN3CA)中显著低表达(2.63±0.41和2.83±0.47)。ZEB1在Ⅰ型EC细胞中不表达,而在Ⅱ型EC细胞中高度表达(0.52±0.34和0.81±0.45)。E-cadherin在Ⅰ型EC细胞中高度表达(1.58±0.44和1.01±0.36),而在Ⅱ型EC细胞中极低表达。转染pre-miR-200c后抑制Ⅱ型EC细胞增殖和侵袭能力,A450值分别为1.38±0.27和1.91±0.31,增加AN3CA细胞中E-cadherin的表达。结论:在Ⅱ型EC细胞中miR-200c表达与ZEB1表达呈显著负相关,与E-cadherin表达呈正相关。miR-200c过表达明显抑制Ⅱ型EC细胞增殖和侵袭,miR-200c负性调控ZEB1,参与E-cadherin介导的肿瘤上皮-间质转化。     

茯苓酸对人胰腺癌PANC-1细胞迁移、侵袭和上皮间质转化的抑制作用

目的：探讨茯苓酸（PA）通过上调活化转录因子3 (ATF3)和热休克蛋白家族A成员6(HSPA6)表达对胰腺癌PANC-1细胞迁移、侵袭和上皮间质转化（EMT）的作用,并阐明其可能的作用机制。方法：胰腺癌PANC-1细胞分为空白对照组和不同浓度（2、5、10、20、30、40和50μmol·L-1） PA处理组,采用CCK-8法检测各组PANC-1细胞的细胞活性。不同浓度（0、10、30和50μmol·L-1） PA作用于PANC-1细胞,采用Transwell小室实验检测PANC-1细胞迁移和侵袭能力,Western blotting法检测PANC-1细胞中EMT相关蛋白表达水平。将10只BALB/c nude裸鼠随机分为对照组和PA组,每组5只,裸鼠皮下注射PANC-1细胞,待肿瘤体积达到60 mm3时,PA组裸鼠腹腔注射25 mg·kg-1 PA,对照组裸鼠注射等量生理盐水,测量肿瘤体积和瘤质量,免疫组织化学法检测各组裸鼠移植瘤组织中Ki-67表达情况。通过GEO2R软件分析GSE64111数据集中PA处理及未处理胰腺癌细胞的差异表达基因。不同浓度（0和30μmol·L-1） P...     

YY1通过下调长链非编码RNA SOX2OT抑制胰腺癌细胞的迁移和侵袭

目的:研究转录因子YY1对胰腺癌细胞迁移和侵袭的影响和分子机制.方法:使用定量RT-PCR和Western blot检测YY1和SOX2OT的表达.通过划痕实验和Transwell侵袭实验,研究YY1在胰腺癌细胞迁移和侵袭中的作用.在YY1过表达或YY1敲低的胰腺癌细胞中,通过SOX2OT过表达或RNA干扰进行功能回复...     

DDR1促进胰腺癌细胞AsPC-1的迁移及侵袭能力

目的 探讨盘状结构域受体1 (DDR1)对胰腺癌细胞迁移及侵袭能力的影响.方法 利用qRT-PCR检测DDR1在胰腺癌旁组织及癌组织中的表达水平.通过脂质体转染DDR1表达质粒至胰腺癌细胞AsPC-1中,应用Western blot验证其转染效果.通过划痕实验及Transwell法检测转染DDR1表达质粒后细胞迁移及侵袭能力的变化情况.Western blot检测转染后基质金属蛋白酶2 (MMP2)和基质金属蛋白酶9 (MMP9)的表达水平.结果 与癌旁组织比较,胰腺癌组织的DDR1 mRNA表达水平显著升高(P<0.05).转染质粒后,AsPC-1细胞DDR1蛋白表达量显著升高(P<0.05).应用划痕试验及Transwell试验结果显示,与对照组比较,AsPC-1/DDR1迁移力上调(51.11±11.51)%,侵袭力上调(77.25±10.64)%,差异均具有统计学意义(P<0.05).过表达DDR1后,AsPC-1细胞中MMP2和MMP9表达水平显著升高(P<0.05).结论 DDR1通过改变MMP2和MMP9的表达水平,促进胰腺癌细胞的迁移及侵袭,有望成为靶向治疗的新方向.     

ZEB1在卵巢子宫内膜异位症中的表达及功能研究

目的 研究E盒增强子结合蛋白1(ZEB1)在卵巢子宫内膜异位症(ovarian endometriosis, OEMs)中的表达情况,初步探索ZEB1在子宫内膜异位症发生、发展中的作用。方法 收集30例OEMs患者的卵巢囊壁组织及30例同期行手术治疗的其他妇科良性疾病患者的正常子宫内膜,分别采用实时定量PCR(qRT-PCR)及免疫组化检测ZEB1mRNA及蛋白表达水平;分别向正常子宫内膜间质细胞转染空白质粒pCI-neo(空白质粒组)及重组质粒pCI-neo-ZEB1(重组质粒组),通过CCK-8比色法测定内膜间质细胞体外增殖能力, Transwell实验检测间质细胞迁移、侵袭能力。结果 ZEB1在OEMs的异位内膜间质细胞及腺体胞核中的表达较正常子宫内膜明显升高,且分泌期的表达高于增生期,差异有统计学意义(P<0.05)。应用CCK-8法及Transwell分别检测细胞增殖及侵袭能力,发现转染ZEB1表达载体后,间质细胞的增殖、侵袭能力明显增强。结论 ZEB1表达上调促进异位内膜细胞的增殖能力,并增强了间质细胞的迁移、侵袭能力。     

巨噬细胞炎症蛋白-1γ 对胰腺癌BxP C-3细胞迁移和侵袭的影响

目的 研究巨噬细胞炎症蛋白-1γ(macrophage inflammatory protein-1γ,MIP-1γ)对胰腺癌BxPC-3细胞迁移和侵袭的影响.方法 采用Transwell小室细胞迁移和侵袭实验,研究MIP-1γ对胰腺癌BxPC-3细胞迁移和侵袭的影响.结果 MIP-1γ组BxPC-3细胞迁移和侵袭的数目明显比对照组多(P<0.01).结论 MIP-1γ能促进胰腺癌BxPC-3细胞的迁移和侵袭.     

甲基化调控microRNA表达影响胰腺癌细胞增殖、迁移、侵袭的研究

目的 研究基因启动子区甲基化对胰腺癌相关microRNA（miR34a、miR34b、miR148a、miR203a）表达水平的调控,及其对胰腺癌细胞增殖、迁移、侵袭能力的影响。方法 通过5-氮杂-2′-脱氧胞苷（5-Aza-CdR)去甲基化处理胰腺癌细胞MIAPaca-2,使用甲基化特异性PCR (methylation-specific PCR,MSP)法检测60 μmol/L 5-Aza-CdR处理组及0 μmol/L对照组 MIAPaca-2细胞目标microRNA启动子甲基化水平的变化;用荧光实时定量PCR检测处理组及对照组目标microRNA表达水平的改变;CCK-8法、划痕实验以及Transwell法检测胰腺癌细胞去甲基化处理后处理组和对照组增殖、迁移、侵袭能力的变化。结果 MSP法结果显示处理组较未处理组目标microRNA甲基化M条带灰度值减弱,非甲基化U条带灰度值增强,处理组目标microRNA启动子甲基化程度较对照组减弱。荧光实时定量PCR结果显示处理组较未处理组目标microRNA相对表达量升高（ P<0.05）,处理组microRNA的表达水平随去甲基化处理而升高。CCK-8法显示随着药物处理浓度的增加,处理组细胞抑制率增高,去甲基化处理抑制了胰腺癌细胞的增殖能力。划痕实验结果显示处理组较未处理组细胞伤口愈合率降低（ P<0.01）,去甲基化处理降低了胰腺癌细胞的迁移能力。Transwell法结果显示处理组较未处理组穿膜细胞数减少（ P<0.01）, 去甲基化处理降低了胰腺癌细胞的侵袭能力。结论 肿瘤细胞去甲基化处理,导致4种目标microRNA高表达,抑制了胰腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力。     

靶向干扰CDK2AP1对乳腺癌MCF-7细胞体外迁移和侵袭的影响

目的：探讨靶向干扰细胞周期调节蛋白依赖性激酶2-关联蛋白-1（CDK2AP1）对乳腺癌MCF-7细胞体外迁移和侵袭的影响。方法构建重组慢病毒 pGCLV- CDK2AP1- shRNA及重组空病毒pGCLV- GFP,分别稳定转染乳腺癌细胞系MCF-7,获得乳腺癌细胞株 MCF-7/RNAi- NC 和 MCF-7/RNAi- CDK2AP1。采用定量 PCR 法检测两组 MCF-7细胞株的CDK2AP1mRNA表达,xCELLigence/RT- CIM实时细胞电子分析系统检测细胞迁移能力,Transwel 实验检测细胞的侵袭能力。结果成功构建乳腺癌细胞株MCF-7/RNAi- NC和MCF-7/RNAi- CDK2AP1,相比MCF-7/RNAi- NC细胞组,MCF-7/RNAi- CDK2AP1细胞组的CDK2AP1mRNA表达受到明显抑制,其细胞迁移和侵袭能力均显著下降（P＜0.05）。结论乳腺癌细胞MCF-7中CDK2AP1低表达能有效抑制细胞的体外迁移和侵袭能力。     

蛹虫草菌丝体与冬虫夏草抑制人胰腺癌PANC-1

目的 比较人工培养的蛹虫草菌丝体与天然冬虫夏草抑制人胰腺癌PANC-1细胞株增殖的活性,并探讨其作用机制. 方法 MTT法分析蛹虫草菌丝体和天然冬虫夏草对PANC-1细胞的增殖抑制作用,Hoechst33258染色检测细胞凋亡,Western blot分析细胞凋亡和自噬相关蛋白变化. 结果 蛹虫草菌丝体和天然冬虫夏草都能通过诱导细胞自噬而非凋亡途径,呈浓度依赖地降低胰腺癌PANC-1细胞的存活率.癌基因STAT3的总蛋白和磷酸化水平均明显降低.蛹虫草菌丝体处理后PANC-1细胞促存活蛋白Mcl-1和Survivin的表达水平明显降低,而冬虫夏草并无此作用. 结论 人工培养的蛹虫草菌丝体与天然冬虫夏草相比,具有相似或更强的体外抗胰腺癌细胞增殖活性.     

Annexin A1调控胰腺癌细胞迁移

目的:鉴定Annexin A1胰腺癌细胞迁移中的作用.方法:构建Annexin A1的干扰质粒,筛选低转移细胞的干扰稳定细胞系.利用划痕实验及Transwell鉴定迁移能力.结果:Annexin A1表达的下调能促进低转移细胞的迁移能力.结论:Annexin A1抑制低转移胰腺癌细胞迁移能力.     

JWA调控能量代谢重编程抑制胰腺癌细胞迁移

目的：探讨JWA通过调节细胞能量代谢,抑制胰腺癌细胞迁移的作用及其分子机制。方法：通过基因转染和JWA小分子激动剂JAC4处理人胰腺癌细胞Panc1和Bxpc3,采用划痕实验、穿孔实验、Seahorse XF能量代谢分析仪分别检测细胞迁移能力以及能量代谢水平的改变。用小鼠被动转移模型检测JAC4抑制胰腺癌转移的作用。蛋白免疫印迹法检测相关分子蛋白质表达水平。结果：JWA基因在胰腺癌肿瘤组织与胰腺癌细胞中表达水平显著低于正常;JAC4处理可显著增加JWA表达并抑制胰腺癌细胞迁移,并且抑制小鼠胰腺癌转移并降低血清中乳酸脱氢酶（LDH）水平;JAC4增强肿瘤细胞线粒体有氧呼吸,同时抑制糖酵解;JAC4通过AMPK信号通路正调控FOXO3a,激活线粒体复合物Ⅲ（UQCRC2）的表达,同时下调FAK。结论：JWA通过AMPK/FOXO3a/UQCRC2/FAK信号通路调节细胞能量重编程,进而抑制胰腺癌细胞的迁移。     

TNF-α诱导的circMAN1A2促进宫颈癌细胞的迁移、侵袭和增殖

目的:探讨肿瘤坏死因子（TNF）-α诱导的circMAN1A2对宫颈癌细胞恶性行为的影响。方法:RNA高通量测序检测TNF-α处理后人宫颈癌HeLa细胞中circRNA的表达差异性。RT-qPCR方法验证TNF-α对circMAN1A2的影响。RNase R耐受性实验验证circMAN1A2是否耐受RNase R消化。核质RNA分离实验研究circMAN1A2在HeLa细胞的定位;Transwell迁移侵袭实验、MTT实验、集落形成实验研究circMAN1A2对宫颈癌细胞恶性行为的影响。结果:RNA高通量测序检测到98种表达上调和63种表达下调的circRNA。TNF-α处理后circMAN1A2表达上调,其能够耐受RNase R消化,主要定位于HeLa细胞胞核中。细胞功能实验表明circMAN1A2能够促进宫颈癌细胞的迁移、侵袭和增殖。结论:TNF-α诱导的circMAN1A2促进宫颈癌细胞的迁移、侵袭和增殖。     

HSP90抑制剂17-DMAG调控胰腺癌细胞PANC-1增殖及凋亡的初步研究

目的探讨热休克蛋白90(HSP90)功能特异性抑制剂17-DMAG对胰腺癌细胞PANC-1增殖与凋亡的影响。方法体外培养腺癌细胞PANC-1,17-DMAG处理PANC-1细胞后,CCK8法测定细胞生长曲线,观察细胞增殖的抑制情况,流式细胞仪测定细胞凋亡率的变化,Jc-l染色检测线粒体膜电位变化,RT-PCR法测定17-DMAG处理PANC-1细胞前后Bcl-2、Bax表达变化。结果 17-DMAG处理组24 h时D(490)值较对照组差异无统计学意义(P>0.05),48、72 h后较对照组D(490)值分别减少(18.3±2.4)%、(21.5±3.2)%,差异有统计学意义(P<0.05)。17-DMAG处理组48 h时较对照组能显著地抑制PANC-1细胞增殖(P<0.05),细胞凋亡率[(22.4±2.4)%]较对照组[(4.2±1.7)%]显著增加(P<0.05);线粒体电位显著降低(P<0.05)。RT-PCR结果显示,17-DMAG处理组抑制Bcl-2的表达,促进Bax的表达。结论 17-DMAG可抑制胰腺癌细胞PANC-1增殖并诱导其凋亡,该效应可能是通过调控凋亡相关蛋白Bcl-2家族成员的表达实现。     

EZH2对人喉鳞状细胞癌HEP-2增殖、迁移和侵袭的影响

目的：探讨Zeste基因增强子同源物2(EZH2)在人喉鳞状细胞癌组织和HEP-2、SCC10A细胞中的表达及其对人喉鳞状细胞癌细胞HEP-2增殖、迁移和侵袭的影响。方法：收集宣城中心医院30例喉鳞状细胞癌和10例癌旁正常喉黏膜组织标本,qRT-PCR检测喉鳞状细胞癌组织和癌旁组织以及喉鳞状细胞癌细胞HEP-2、SCC10A中EZH2的表达。采用Lipofectamine2000将EZH2 shRNA质粒转染至HEP-2细胞中,通过qRT-PCR和Western blot检测EZH2 shRNA的转染效率,并通过Western blot检测EZH2下游相关信号分子的表达水平。CCK8实验检测HEP-2细胞的增殖,划痕实验和 Transwell侵袭实验检测细胞的迁移、侵袭能力。运用裸鼠体内成瘤实验检测EZH2对HEP-2细胞体内成瘤能力的影响。结果：EZH2在喉鳞状细胞癌组织及细胞中显著高表达(P＜0.01)。EZH2 shRNA质粒转染后可抑制细胞的增殖能力,细胞的迁移和侵袭也均受到明显抑制。裸鼠体内成瘤实验结果显示,EZH2 shRNA组的HEP-2细胞肿瘤形成能力明显减弱。结论：EZH2在喉鳞状细胞癌组织和细胞中高表达;EZH2 shRNA能够在体外抑制喉鳞状细胞癌细胞HEP-2的增殖、迁移和侵袭,并抑制RAF1-ERK信号通路的活化;EZH2能够在体内抑制喉鳞状细胞癌细胞HEP-2的成瘤能力。     

HP1α（CBX5）对前列腺癌细胞迁移、侵袭和增殖影响的研究

目的:探讨HP1α在前列腺癌细胞LNCaP和PC3中的表达情况,并研究HP1α的表达对LNCaP和PC3的影响。方法:采用qPCR及Western 印迹检测HP1α的表达情况,通过Transwell检测细胞的迁移和 侵袭能力,CCK-8和集落形成检测细胞的增殖能力。结果:HP1α在前列腺癌细胞C4-2和LNCaP中表达水平最高,PC3和DU145次之,良性前列腺增生的最低（P <0.05）;Transwell显示,与si-NC组相比, si-HP1α组前列腺癌细胞LNCaP和PC3的迁移和侵袭能力均降低（P <0.05）;CCK-8和集落形成实验显示敲低HP1α后,前列腺癌细胞LNCaP和PC3的增殖能力下降（P <0.05）;Western 印迹发现EMT分子标 志物E-cadherin的表达增加,而N-cadherin、Vimentin等的表达均降低（均P <0.05）。结论:HP1α在前列腺癌细胞LNCaP、C4-2、PC3和DU145中高表达,而降低其表达可以抑制前列腺癌细胞LNCaP和PC3 的迁移、侵袭、增殖以及上皮-间充质转化（EMT）能力。