甲基强的松龙对大鼠急性脊髓损伤后Nogo-A表达的影响

目的：探讨大剂量甲基强的松龙（MP）对急性脊髓损伤（SCI）大鼠脊髓组织中Nogo-A蛋白表达的影响。方法：将56只成年SD大鼠分为正常对照组（A组,n=8）、急性脊髓损伤组（B组,n=24）和急性脊髓损伤后大剂量MP治疗组（C组,n=24）,C组在损伤后早期从尾静脉注射大剂量MP治疗。分别在术后3、7、14d对B、C组大鼠后肢运动功能行BBB评分,再在各时间点处死动物,取受损节段脊髓行HE染色及免疫组化染色观察形态学变化和Nogo-A在脊髓组织中的分布特点;同时应用Western-blot方法测定各组相应时间点Nogo-A表达量,并与A组比较。结果：B、C组大鼠在损伤后各个时间点后肢运动功能均有一定程度的恢复,Nogo-A蛋白在各组大鼠脊髓组织中均呈阳性表达,分布于神经细胞的细胞浆和脊髓神经纤维周围呈包裹神经纤维的状态。B、C组各个时间点Nogo-A表达均显著高于A组（P〈0.05）,7d时最高,14d时的表达量仍高于正常组;C组在各个时间点的表达量显著低于B组,差异有显著性（P〈0.05）。结论：大鼠急性脊髓损伤后Nogo-A显著升高,早期应用大剂量MP对Nogo-A的表达具有明显的抑制作用。     

硫氧还蛋白对大鼠急性脊髓损伤后Nogo-A表达的影响

目的 观察经硬膜外注入硫氧还蛋白(Trx)对大鼠急性脊髓损伤(ASCI)后脊髓组织中Nogo-A表达的影响,探讨其对脊髓损伤的保护作用.方法 成年Wister大鼠56只,分为假手术组(A组,n=8)、损伤对照组(B组,n=24)和Trx治疗组(C组,n=24).B、c组用改良Allen's法以30 g/cm致伤大鼠T8脊髓制作损伤模型,同时在蛛网膜下腔置管,C组术后即刻和随后每天1次按0.75mg/kg从硬膜下导管推入硫氧还蛋白,B组在相同时问点给予等量生理盐水;A组打开椎板后蛛网膜下腔置管,不损伤脊髓,不给药.在术后3、7、14 d分别对其进行后肢运动功能BBB评分(n=8),评分完毕即处死动物,取受损节段脊髓组织行免疫组织化学观察脊髓组织中Nogo-A阳性细胞的表达,同时计数阳性细胞.结果 各时间点B组大鼠BBB评分均显著低于A组(P<0.01),伤后7、14 d时C组评分显著高于B组(P<0.05或0.01).B组在术后7与14日Nogo-A表达均显著高于A组(P<0.01);C组在伤后7、14 d的表达量显著低于B组,差异有统计学意义(P<0.05).结论 大鼠急性脊髓损伤后Nogo-A显著升高,Trx能明显抑制Nogo-A的表达,可能促进轴突的再生.     

中药脊髓康对脊髓损伤大鼠Nogo-NgR基因表达的影响

目的 :观察中药脊髓康对急性大鼠脊髓损伤后Nogo-A,Ng R基因表达的影响,探讨其对急性脊髓损伤的治疗保护作用及机制。方法:180只雌性SD大鼠,随机分为假手术组、模型组、强的松组及脊髓康高、中、低剂量组,每组30只。假手术组:切除T10节段椎板,不损伤脊髓;其余组采用改良Allen法建立脊髓损伤模型。强的松组:术后至处死前每日灌胃强的松0.06 g/kg,首次在术后30 min给药。脊髓康高、中、低剂量组:在同一时间分别给予脊髓康,每日50、25、12.5 g/kg。术后3、7、14 d分批处死动物,取损伤节段脊髓9例,分别利用Western Blot及Real-time PCR检测脊髓组织中Nogo-A、Ng R蛋白及m RNA表达水平。结果:假手术组在各时间点Nogo-A及Ng R的表达维持在基础水平。与模型组比较,各时间点假手术组、强的松组及脊髓康中剂量组Nogo-A、Ng R蛋白表达差异均有统计学意义,脊髓康高、低剂量组差异无统计学意义。术后3 d,各治疗组Nogo-A、Ng R m RNA水平均低于模型组;术后7 d,模型组Nogo-A、Ng R m RNA水平升至最高,14 d时有所下降,但仍高于其他治疗组,其中强的松、脊髓康中剂量组效果最显著,两者之间差异无统计学意义。结论:在Allen急性大鼠脊髓损伤后,脊髓康能调节Nogo-A及Ng R基因表达,激活Nogo-Ng R信号通路,促进脊髓损伤后神经细胞再生。     

基质金属蛋白酶-9与脊髓损伤后脊髓水肿的关系

目的：探讨基质金属蛋白酶-9与急性脊髓损伤后脊髓水肿的关系。方法：健康雄性SD大鼠70只，随机分为对照组和损伤组。对照组大鼠10只，仅做椎板切除术，术后6h取材；损伤组采用改良Allen法制作T8～T9节段脊髓损伤模型，分别于伤后6h、12h、1d、3d、5d、7d（每时间点10只）处死取材。采用干湿重法测定脊髓含水量，免疫组化检测基质金属蛋白酶-9的表达。结果：急性脊髓损伤后6h，损伤组脊髓含水量较对照组增多，3～5d时达到高峰。基质金属蛋白酶-9在对照组未见表达，而损伤组在损伤后6h表达增加，并在1～3d达到高峰，损伤后7d仍有表达。相关性分析显示基质金属蛋白酶-9的表达与脊髓含水量呈正相关。结论：急性脊髓损伤后，基质金属蛋白酶-9的表达与脊髓水肿的形成有关，但两者达到高峰的时间不完全一致。     

大剂量甲基强地松龙对大鼠脊髓损伤后iNOS表达及细胞凋亡的影响

目的：探讨大鼠脊髓损伤后应用大剂量甲基强地松龙(MP)对诱导型一氧化氮合酶(iNOS)表达及细胞凋亡的影响。方法：成年大鼠随机分为脊髓损伤后应用大剂量甲基强的松龙治疗组(A组)和应用生理盐水对照组(B组)，损伤后不同时间点(4h、8h、1d、3d、7d、14d、21d)按Tarlov标准评价大鼠双后肢神经功能恢复情况，然后处死。用HE染色观察损伤脊髓组织病理变化，用免疫组化染色检测iNOS阳性细胞，原位末端标记法(TUNEL法)标记凋亡细胞。结果：HE染色镜检发现脊髓组织病理学改变A组明显轻于B组。A、B两组均发现凋亡细胞及iNOS表达，神经细胞凋亡指数及iNOS表达均为B组＞A组(P＜0．01)。结论：大剂量甲基强的松龙能抑制大鼠脊髓损伤后iNOS表达及细胞凋亡。     

脊髓损伤后血管内皮生长因子的表达及细胞凋亡

目的 观察大鼠急性脊髓损伤后不同时间点血管内皮生长因子(VEGF)的表达及局部脊髓组织细胞凋亡的情况,进一步了解脊髓损伤后的病理变化情况.方法 雌性SD大鼠,随机分为对照组(A组)、脊髓损伤组(B组),每组各30只.所有大鼠行T12节段椎板切除开窗,暴露脊髓.A组只打开椎板,不打击脊髓.B组按改良Allen法(以10 g×6 cm力撞击脊髓)制作大鼠急性脊髓损伤模型.各组分别于伤后1、3、5、7、14、28 d随机处死5只,损伤部位取材,VEGF、细胞凋亡免疫组化染色及在光镜下观察,计算VEGF阳性细胞数及凋亡细胞数.结果 A组脊髓中央管周围和脊髓软脊膜见少量VEGF表达,其它部位未见表达;B组脊髓损伤后VEGF在脊髓损伤及损伤周边区高表达,5 d达高峰,7 d和14 d表达仍较明显,28 d见少量表达;B组各时间点VEGF表达和A组相比差异均有统计学意义(P<0.05).A组各时间点凋亡细胞少见,B组则较明显,凋亡细胞在脊髓损伤后逐渐增多,1 d达高峰,3 d和5 d仍较多,7、14、28 d仍有表达;B组各时间点细胞凋亡和A组相比差异均有统计学意义(P<0.05).结论 VEGF参与急性脊髓损伤后系列病理改变,且持续时间较长.急性脊髓损伤后较长时间内存在着继发性细胞凋亡现象.     

大鼠脊髓损伤后室管膜细胞增殖迁移及可塑性研究

[目的]研究大鼠脊髓损伤后室管膜细胞的原位增殖、迁移及其可塑性。[方法]Wistar大鼠60只，制作大鼠脊髓全横断损伤模型，根据伤后不同时间点分组，应用免疫组织化学方法动态检测脊髓内5-溴脱氧尿嘧啶（Brdu）、多唾液酸神经细胞黏附分子（PSA—NCAM）的表达。[结果]与对照组相比，Brdu阳性细胞在脊髓损伤后1d开始增加（P〈0．05），7d达到高峰，14d后开始下降，但仍高于对照组（P〈0．05）；PSA—NCAM阳性细胞在脊髓损伤后3d开始增加（P〈0．05），7d达到高峰，14d后开始下降，但仍高于对照组（P〈0．05）；两者在时间上均呈一过性增高表达，空间上自中心向周围迁移。[结论]脊髓损伤可激活自体室管膜细胞的原位增殖及迁移．后者具有一定的可甥性．参与伤后脊髓的结构修复。     

甲强龙对大鼠急性脊髓损伤后OMgp表达的影响

目的探讨甲强龙对急性脊髓损伤(SCI)大鼠脊髓组织中少突胶质细胞髓鞘糖蛋白(OMgp)表达的影响。方法将80只SD大鼠分为A组(单纯椎板切除对照组)、B组(急性脊髓损伤组)和C组(急性脊髓损伤后甲强龙治疗组),C组在损伤后早期从尾静脉注射甲强龙治疗。对各组大鼠后肢运动功能行BBB评分评价神经功能状况;分别在术后1、3、7、14 d处死各组大鼠,分别取受损节段脊髓行免疫组化染色;应用实时荧光定量PCR技术(RealTime-PCR)方法观察OMgp mRNA的表达。结果 B、C组大鼠在损伤后各个时间点后肢运动功能均有一定程度的恢复;B、C组各个时间点OMgp mRNA表达均显著高于A组(P<0.05),7 d时最高;C组在各个时间点的表达量显著低于B组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论大鼠急性脊髓损伤后OMgp显著升高,早期应甲强龙对OMgp的表达具有明显的抑制作用。     

人羊膜间充质干细胞移植对大鼠脊髓损伤后NGF、BDNF和Nogo-A mRNA表达的影响

目的:观察人羊膜间充质干细胞(hAMSCs)移植对大鼠脊髓损伤后神经生长因子(NGF)、脑源性神经营养因子(BDNF)及轴突生长抑制因子(Nogo-A)mRNA表达的影响.方法:成年雌性SD大鼠24只,随机分成hAMSCs移植组(12只)、磷酸盐缓冲液(PBS)对照组(12只).体外分离培养、鉴定hAMSCs,并以终浓度为10μg/ml 4,6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)荧光染料标记hAMSCs.在建立大鼠T1 1脊髓全横断损伤模型后,立即以微量注射器吸取约3×106个hAMSCs悬液于横断损伤处头尾两端原位移植,对照组注射相同体积的PBS液.分别于术后3d、7d利用荧光显微镜观察hAMSCs存活情况,并采用RT-PCR分析损伤脊髓段NGF mRNA、BDNF mRNA及Nogo-A mRNA的表达.结果:术后3d和7d hAMSCs移植组均可观察到植入的hAMSCs在宿主脊髓组织内存活.术后3d、7d,hAMSCs移植组NGF mRNA的表达均高于对照组(P＜0.05,P＜0.01),Nogo-A mRNA的表达均低于对照组(P＜0.05);术后3d时hAMSCs移植组BDNF mRNA的表达与对照组比较无显著性差异(P＞0.05),但术后7d其表达高于对照组(P＜0.05).结论:hAMSCs移植可上调大鼠受损脊髓组织内NGF mRNA和BDNF mRNA的表达、下调Nogo-A mRNA的表达,有利于促进脊髓损伤后的功能修复.     

Ephrin-B1在大鼠脊髓损伤的表达

[目的]探讨红细胞生成素诱导肝癌细胞株配体-B1 (Ephrin-B1)在大鼠脊髓损伤的表达变化.[方法]将60只成年Wistar大鼠分正常组、假手术组、伤后3、7、14 d及28 d组.假手术组大鼠不损伤脊髓,损伤组大鼠采用Allen's氏打击法损伤T10脊髓.分别在各个时间点取材,免疫荧光和Western Blot检测Ephrin-B1蛋白表达情况.[结果]免疫荧光结果显示Ephrin-B1在正常、假手术和损伤脊髓的灰质和白质中均有表达,但在损伤脊髓组织中表达较高,脊髓组织中的星形胶质细胞表达Ephrin-B1.Western Blot显示损伤组比对照组Ephrin-B1蛋白含量显著增加(P＜0.01),从伤后3d开始持续到伤后28 d;伤后14 d蛋白含量达到高峰,明显高于对照组及伤后其他组(P＜0.01);伤后28 d蛋白含量较14 d减少(P＜0.01),与伤后7d相比无显著性差异(P＞0.05).[结论]Ephrin-B1在大鼠脊髓损伤后表达升高,伤后14d表达升高显著,表达于脊髓的星形胶质细胞.     

静脉移植骨髓间充质干细胞促进脊髓损伤后GDNF基因的表达

[目的]探讨经静脉移植骨髓间充质干细胞(MSCs)对大鼠脊髓损伤(SCI)后胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)表达的影响。[方法]MSCs提取自成年Wistar大鼠的股骨干骨髓,经原代培养、鉴定及5-溴脱氧尿嘧啶核苷(Brdu)核标记。以改良Allen′s打击装置制作大鼠T10节段脊髓损伤(SCl)模型,于伤后立即缝合切口并经尾静脉注射移植MSCs。实验共分为3组MSCs尾静脉移植组(A组)、生理盐水注射组(B组)、正常对照组(C组)。术后不同时间点应用免疫组化法和逆转录聚合酶链反应法(RT-PCR)观察MSCs移植后的存活状态以及不同时间点GDNF基因的表达变化。[结果]免疫组化结果MSCs经尾静脉移植后在损伤脊髓平面可以检测到迁移及存活,标记细胞呈棕黄色的核标记,以损伤区域为多并向周围迁移,移植术后第14d,A组Brdu阳性细胞较多,最远于距离损伤区2.5cm处可检测到。B及C组则均未检测到阳性细胞。RT-PCR结果移植术后第1、3、5d,A组表达量呈逐渐升高趋势,B组呈一过性表达升高,C组无变化。各时间点A组GDNFmRNA的表达量明显高于B组,P<0.05。免疫组化结果移植术后第7、14、28dGDNF的表达量明显高于B组,P<0.05。[结论]骨髓间充质干细胞经尾静脉移植后可迁移至脊髓损伤区域,并上调胶质细胞源性神经营养因子基因的表达,是该移植方式修复大鼠脊髓损伤的机制之一。     

髓鞘相关蛋白抗体对大鼠脊髓损伤早期bcl-2与bax表达的影响

目的 探讨髓鞘相关蛋白(Nogo-A)抗体应用于脊髓损伤动物模型中对bcl-2与bax表达的影响.方法 建立大鼠急性脊髓损伤实验动物模型.180只大鼠随机分成对照组、损伤组和损伤后Nogo-A抗体治疗组,每组各60只.不同时间点损伤节段脊髓取材,分别行苏木素-伊红(HE)染色、免疫组织化学法检测bcl-2、bax表达并进行定量分析.结果 HE染色后光镜下观察:损伤后治疗组出血、小胶质细胞增生和炎细胞浸润均较损伤组轻.bcl-2、bax在损伤组和治疗组表达呈现动态变化,损伤后24 h bcl-2表达达高峰(3组分别为0.1004±0.0091、0.1890±0.0100、0.2456±0.0179,F=197.541,P＜0.01);损伤后8 h bax表达达高峰(3组分别为0.1084±0.0041、0.3440±0.0070、0.2472±0.0071,F=1856.199,P＜0.01);3组各时间点的图像分析结果 经单因素方差分析,差异有统计学意义(P＜0.05),治疗组和损伤组比较,bcl-2表达增强而bax表达减弱.结论 Nogo-A抗体治疗脊髓损伤能抑制bax表达,促进bcl-2表达,减轻脊髓继发性损伤.     

大鼠胚胎脊髓移植对损伤脊髓GAP-43 mRNA表达的影响

目的观察大鼠胚胎脊髓移植对损伤脊髓 GAP－ 43 mRNA表达和大鼠后肢功能恢复的影响。方法成年 Wistar大鼠 66只,随机被分为脊髓半切洞损伤应用胚胎脊髓移植组 (脊髓移植组, 30只 )、单纯脊髓半切洞损伤明胶海绵填充组 (单纯损伤组, 30只 )、正常对照组 (6只 )。术后第 1、 3、 7、 14、 28 d,对大鼠进行 Tarlov评分和斜板试验检查后肢功能。应用原位杂交的方法观察 GAP－ 43 mRNA的表达,记录阳性细胞数,采用计算机图像分析技术,进行定量分析。结果脊髓损伤后第 1 d,在脊髓移植组和单纯损伤组的损伤脊髓灰质中都可见到 GAP－ 43 mRNA的表达。于损伤后迅速增加,第 7 d时达到高峰。脊髓移植组 GAP－ 43 mRNA蛋白表达为 39.24± 6.83,约是单纯损伤组 (21.48± 7.83)的 2倍 (P< 0.05)。胚胎脊髓移植后可使损伤的脊髓中 GAP－ 43 mRNA持续高表达至术后第 28 d,而单纯损伤组仅持续到术后第 14 d。增加的 GAP－ 43 mRNA阳性细胞数与神经功能的改善平行。结论胚胎脊髓移植后可使损伤大鼠脊髓高表达 GAP－ 43 mRNA,并促进大鼠功能的恢复。     

中药髓复康对恒河猴急性脊髓损伤后脊髓组织勿动蛋白-A表达的影响

目的:观察急性脊髓损伤后中药髓复康干预对脊髓组织勿动蛋白-A表达的影响。方法:成年雄性恒河猴14只,其中10只用于制备T12胸髓左侧半横断损伤模型,并将其随机分为髓复康组和模型组,另外4只设为正常对照组。观察评估恒河猴脊髓神经功能恢复情况,采用原位杂交法及免疫组化法检测各组Nogo-A的表达量。结果:给药30d后,髓复康组患肢神经功能恢复优于模型组;脊髓损伤后Nogo-AmRNA及其蛋白的阳性细胞数及其阳性产物的OD值均明显升高,与正常组比较差异显著(P0.05);其中髓复康组Nogo-AmRNA及其蛋白的阳性细胞数和其阳性产物的OD值都明显低于模型组。结论:中药髓复康对脊髓损伤后恒河猴脊髓中Nogo-A的表达有一定的抑制作用,为神经的修复和再生提供有利的微环境,促进了脊髓损伤后恒河猴运动神经功能的恢复。     

Antibodies neutralizing Nogo-A increase pan-cadherin expression and motor recovery following spinal cord injury in rats

STUDY DESIGN: A rat model of spinal cord injury was used to test the hypothesis that Nogo-A monoclonal antibody (NEP1-40) promotes morphologic and functional recoveries of injured spinal cord. OBJECTIVE: Nogo-A is a myelin-associated neurite outgrowth inhibitory protein, which blocks elongation nerve fibers and limits neuronal regeneration after central nervous system injury. METHODS: Forty-four rats were utilized and allocated into control (vehicle) and NEP1-40-treated groups. In all animals, the spinal cord was hemi-transected at Th-10 and phosphate-buffered saline solution was immediately applied on the injured area in the control group. NEP1-40 solution was immediately applied on the hemi-transected area in the treatment group. Each group was subdivided into three subgroups according to the postsurgical day of killing (3, 8 and 21 days). The spinal cords were removed for analysis. RESULTS: Motor scores in the NEP1-40-treated groups were significantly higher than those in the vehicle groups both at 8 and 21 days post injury. Immunohistochemical staining for pan-cadherin, a marker of neuronal cell adhesion and axonal sprouting, revealed a significant increase in staining in the NEP1-40 treatment group at 8 and 21 days post injury. Transmission electron microscopical evaluation revealed degeneration of the myelin and loss of cytoarchitectural organization in the axons of controls. Better preservation and normal histologic features were observed in the NEP1-40-treated groups. CONCLUSION: We have demonstrated improved preservation of injured axons and significant pan-cadherin expression after NEP1-40 treatment after the spinal cord injury. Inhibition of Nogo-A may improve the capacity for neuronal regeneration after spinal cord injury.     

Effect of VEGF and CX43 on the promotion of neurological recovery by hyperbaric oxygen treatment in spinal cord–injured rats

Background contextSpinal cord injury (SCI) is a serious health issue that may result in high health care costs, with additional social and psychological burdens. Hyperbaric oxygen (HBO) treatment has been found to be beneficial for neurological recovery; however, the underlying mechanisms are yet to be characterized.PurposeThe aim of this study was to investigate the mechanisms of HBO treatment in SCI by measuring the expression levels of vascular endothelial growth factor (VEGF) and Connexin43 (CX43) in the injured spinal cord tissue.Study design/settingAn experiment animal study of rats undergoing SCI and HBO treatment.MethodsThe spinal cord injury model was established in rats, which were randomly divided into the following four groups: (1) the sham-operated group (SH), (2) the sham-operated and hyperbaric oxygen treatment group (SH+HBO), (3) the spinal cord injury group (SCI), and (4) the spinal cord injury and hyperbaric oxygen treatment group (SCI+HBO). For groups of SH+HBO and SCI+HBO, the animals received 1 hour of HBO at 2.0 ATA in 100% O2 twice per day for 3 days and then daily for the following days consecutively after surgery. After operation, neurological assessments were performed, the spinal cord tissue samples were harvested for histopathological evaluation, Western blot and real-time polymerase chain reaction analysis.ResultsThe Basso-Bettie-Bresnahan scores were significantly improved in the SCI+HBO group compared with the SCI group on the postoperative 7th and 14th days. The histology scores were significantly decreased by HBO treatment compared with that in the SCI group on the postoperative 3rd, 7th, and 14th days. Western blot analysis and real-time polymerase chain reaction revealed that the expression level of vascular endothelial growth factor (VEGF) in the SCI+HBO group was significantly increased compared with the SCI group. The protein expression level of CX43 and its mRNA level in the SCI+HBO group were significantly decreased on the postoperative 3rd and 7th days, whereas its expression was significantly increased by HBO treatment on the postoperative 14th day compared with the SCI group.ConclusionsHBO treatment improved neurological recovery when applied after SCI. The expression level changes of VEGF and CX43 may contribute to the further understanding on the molecular mechanisms of HBO treatment on SCI.     

bcl-xL基因转染对脊髓损伤半胱氨酸蛋白酶-3表达的影响

目的 探讨bcl—xL基因转染对大鼠脊髓损伤Caspase-3表达的影响和对神经细胞的保护作用。方法 制备大鼠胸段脊髓T8,9压迫损伤模型，随机分为2组：对照组．bcl—xL组，将阳离子脂质体质粒混合后直接注入大鼠损伤脊髓，伤后1、3和7d利用半定量逆转录-聚合酶链式反应（RT—PCR）和免疫组织化学检测bcl—xL和Caspase-3表达情况；TUNEL法检测细胞凋亡，观察对神经细胞的保护作用。结果 与对照组相比，bcl—xL组各时间段Caspase-3表达明显降低（P〈0．05），TUNEL阳性凋亡的神经细胞明显减少（P〈0．05）。结论 外源性bcl—xL基因体内转染在损伤脊髓的过度表达可减少脊髓不完全性损伤后凋亡，可能与其下调Caspase-3的有关。