氧化应激对p53翻译后修饰影响的研究进展

蛋白质翻译后修饰是调控蛋白质功能及影响细胞行为的重要方式,而氧化应激直接影响蛋白质的翻译后修饰。p53的翻译后修饰极为丰富,在细胞应激条件下p53的多种翻译后修饰被快速调节,从而激活一系列下游靶基因,使p53 呈现功能的多样性。文章着重阐述氧化应激对p53磷酸化、泛素化、SUMO化、乙酰化和甲基化等不同翻译后修饰的影响。     

氧化应激对p53翻译后修饰影响的研究进展

蛋白质翻译后修饰是调控蛋白质功能及影响细胞行为的重要方式,而氧化应激直接影响蛋白质的翻译后修饰.p53的翻译后修饰极为丰富,在细胞应激条件下p53的多种翻译后修饰被快速调节,从而激活一系列下游靶基因,使p53 呈现功能的多样性.文章着重阐述氧化应激对p53磷酸化、泛素化、SUMO化、乙酰化和甲基化等不同翻译后修饰的影响.     

产生较少SMN蛋白的SMN基因型增加散发型ALS的易感性和严重程度

背景:一般认为,多种修饰基因影响肌萎缩性侧索硬化(ALS)的临床表现。儿童期发病的脊髓性肌肉萎缩症(SM A)是运动神经元的常染色体隐性遗传病,由存活运动神经元(SM N)基因突变所致。SM N基因有两种高度同源性变异体:SM N1是负责生成绝大多数功能性SM N蛋白的责任基因;SM N2负责生成较少的蛋白,但足够修饰SM A表型。目的:检测SM N基因型是否与散发型ALS的易感性和严重程度相关。方法:对242例临床确诊的ALS患者和175例对照者的SM N1和SM N2基因进行竞争性定量PCR分析。并结合SM N1和SM N2基因拷贝数来估计每例患者的SM N…     

小分子干扰RNA分子化学修饰研究进展

RNA干扰是指转录后的基因沉默现象,可使基因沉默的小分子干扰RNA（siRNA）为基因治疗提供了又一个选择。为了实现其基因治疗价值,根据siRNA的作用机制和反义核酸修饰所取得的经验,为优化其药学性质和有效转运,进行了各种改进。其中,载体修饰和化学方法修饰siRNA是优化其性质的重要方法,本文对两种方法进行了简要的综述。     

p16基因甲基化特异检测方法的建立及其初步应用

目的：建立p16基因中CpG岛的甲基化分析方法，即甲基化特异的PCR（methylation-specific polymerase chain reaction,MSP）方法及其初步应用。方法：用亚硫酸氢钠修饰变性后的被测DNA，随之进行甲基化，非甲基化特异的PCR扩增。应用MSP法分析白血病患者的白细胞p16基因5'CpG岛的甲基化变异情况。结果：用加热法变性DNA，亚硫酸氢盐修饰DNA,Wizard DNA纯化树脂除盐，纯化修饰后的DNA都获得了成功，并建立了MSP分析p16基因甲基化的方法。白血病患者的白细胞p16基因的5'CpG岛有一定比2例的甲基化变异。结论：MSP是一种较为简便，敏感，且具有高度特异性的检测任何基因的CpG区域甲基化位点的分析方法。     

壳聚糖修饰的纳米羟基磷灰石基因结合性研究

目的评估用壳聚糖修饰的纳米羟基磷灰石(HA)基因载体结合和保护DNA的性能。方法 HA纳米颗粒胶体液中加入壳聚糖弱酸溶液,以修饰HA纳米颗粒;透射电镜下观察壳聚糖修饰后HA纳米颗粒的形貌及粒径;在不同pH值环境下(5、6、7、8和9)测定修饰前后的HA纳米颗粒的Zeta电位;采用离心后测上清DNA浓度检测未修饰的HA纳米颗粒和经壳聚糖修饰后的HA纳米颗粒结合DNA的能力及壳聚糖-HA纳米颗粒与DNA解离的方式;应用DNA抗核酸酶保护实验测定修饰后的HA纳米颗粒保护DNA的能力。结果透射电镜观察经壳聚糖修饰的HA纳米颗粒周围有长梭状的壳聚糖颗粒包绕,粒径较均匀,约为50 nm,分散性较好;经过壳聚糖修饰的HA纳米颗粒较未修饰的HA纳米颗粒的Zeta电位显著升高(P<0.05)。血清、磷酸缓冲液(PBS)可以使结合到壳聚糖-HA纳米上的DNA解离。DNA结合及抗核酸酶保护实验显示,修饰后的HA纳米和DNA质量比达500∶1时,可更有效结合并保护DNA。结论经过壳聚糖修饰的HA基因载体分散性更好,Zeta电位显著提高,更有效地结合和保护DNA。     

小鼠不同细胞间组蛋白修饰变化对MafA基因转录表达的影响

目的通过比较不同细胞类型之间MafA基因转录起始区的组蛋白修饰差异,探讨组蛋白修饰对MafA基因转录表达的作用。方法采用染色质免疫共沉淀-实时定量PCR法检测小鼠胰岛素瘤β细胞(NIT-1)、NIH小鼠成纤维细胞(NIH3T3)及小鼠胚胎干细胞(mES)三者中的MafA和MLH1基因转录起始区组蛋白修饰(H3K4m3、H3K9m3和H3乙酰化)的状况。同时采用实时定量RT-PCR检测上述三种细胞各基因mRNA表达水平。分析基因的H3K4m3、H3K9m3和H3乙酰化修饰与基因表达之间的相互关系。结果 (1)以mES细胞为参照,NIT-1细胞MafA基因的转录起始区的H3K4m3修饰水平明显增高(P<0.05),H3K9m3修饰水平明显降低(P<0.05);NIH 3T3细胞MafA基因的转录起始区的H3K9m3修饰水平明显增高(P<0.05),H3K4m3修饰水平明显降低(P<0.05);(2)MafA基因的仅在NIT-1细胞表达,其表达与H3K4m3修饰存在直线相关(相关系数0.995);与H3K9m3修饰存在直线负相关(相关系数-0.751);(3)管家基因MLH1的表达与所检测组蛋白修饰无相关性。结论 H3K9m3与H3K4m3修饰能相互协调,共同调控MafA基因的表达,对胚胎干细胞向β细胞分化具有重要的意义。     

亚胺培南耐药铜绿假单胞菌氨基糖苷类修饰酶基因型研究

目的了解中国5个地区亚胺培南耐药的铜绿假单胞菌部分氨基糖苷类修饰酶分布情况。方法从成都、杭州、北京、上海和广州收集对亚胺培南耐药的铜绿假单胞菌,使用PCR法扩增16种氨基糖苷类修饰酶基因。结果共收集了146株亚胺培南耐药的铜绿假单胞菌。16种氨基糖苷类修饰酶基因中有6种基因型获得阳性的PCR结果,氨基糖苷类修饰酶基因总检出率为65.06%,各种氨基糖苷类修饰酶基因检出率分别为aac（3）-Ⅱ33.6%、aac（6＇）-Ⅰ15.8%、aac（6＇）-Ⅱ19.9%、ant（2″）-Ⅰ28.8%、ant（3″）-Ⅰ14.4%和aph（3＇）-Ⅵ4.8%。氨基糖苷类修饰酶基因的分布存在地区差异,其中杭州和上海6种AMEs基因均被检测出,成都和北京检测出4种AMEs基因,广州的IRPA中仅检测出3种AMEs基因。结论亚胺培南耐药的铜绿假单胞菌氨基糖苷类修饰酶基因携带率高;氨基糖苷类修饰酶基因型在中国5个地区间分布存在差异。     

急性ST段抬高心肌梗死患者LDLR基因启动子区的甲基化修饰

目的分析急性ST段抬高心肌梗死(STEMI)患者低密度脂蛋白受体(LDLR)基因启动子区CpG岛甲基化修饰程度。方法选择经急诊确诊的STEMI患者48例(STEMI组),立即抽取静脉血查血脂和保存用于DNA提取;以健康人群36例为对照组,亚硫酸氢盐修饰后测序检测其LDLR基因启动子区甲基化程度。结果STEMI组患者血清低密度脂蛋白(LDL)水平较对照组升高,在LDLR基因启动子区CpG岛(-383,-140)片段中所包含的7个CG位点均无发生甲基化。结论 STEMI患者血清LDL水平改变与LDLR基因启动子区CpG岛(-383,-140)的甲基化修饰无关。     

EcoRI限制及修饰酶基因的克隆和高效表达研究(简报)

限制性内切酶是进行基因分析和DNA重组不可少的工具。EcoRI是其中最常用的酶之一.本文简述了利用重组DNA技术克隆EcoRI的限制和修饰酶基因及其高效表达的研究结果. 据文献报导,EcoRI的限制和修饰酶基因定位于质粒DNA上.我们从酶的生产菌株E.coli~5RY13中纯化了一种分子量约为9kb(千硷基对)的质粒DNA,并藉PvuⅡ和BstNI联合酶解,分得一含限制和修饰酶基因的片段(～2.2kb)。片段用Klenow酶补齐末端后,经平端连接插入pBR32     

甲基化特异性熔点曲线分析检测FMR1基因CpG岛甲基化状态方法的建立

目的建立一种可靠的检测脆性X智力障碍1基因(FMR1)CpG岛甲基化状态的方法。方法用亚硫酸氢钠对基因组DNA进行脱氨基修饰,以修饰后的DNA为模板,利用荧光定量PCR仪扩增FMR1基因CpG岛序列并进行熔点曲线分析,并对PCR产物进行克隆测序,验证其甲基化状态。结果分析包含10个CpG位点FMR1基因CpG岛105bp片段显示,非甲基化与甲基化引物扩增产物之间熔点温度相差2.5℃;克隆测序显示两者之间未被修饰的胞嘧啶相差7个。结论所建立甲基化特异性熔点曲线分析方法可以有效地检测FMR1基因CpG岛甲基化状态,为临床诊断脆性X综合征提供依据。     

一种改良的亚硫酸氢盐修饰微量DNA的甲基化分析方法

目的 建立一种改良的亚硫酸氢盐修饰微量DNA的甲基化分析方法.方法 应用低熔点琼脂糖包埋不同含量的DNA进行亚硫酸氢盐修饰.通过MGMT基因甲基化与非甲基化特异PCR的扩增,与传统的亚硫酸氢盐修饰法进行分析比较.结果 改良法对于低至15.625ng的DNA修饰均可获得MGMT基因甲基化扩增产物,而传统法对于62.5ng及其以下的DNA修饰难以获得MGMT基因甲基化扩增产物.结论 改良的亚硫酸氢盐修饰方法可有效提高甲基化特异PCR的灵敏度,该方法为微量DNA的甲基化分析提供了一种较理想的研究手段.     

Analysis of methylation statue of low density lipoprotein receptor gene promoter in patients with acute ST segment elevated myocardial infarction.

目的 分析急性ST段抬高心肌梗死(STEMI)患者低密度脂蛋白受体(LDLR)基因启动子区CpG岛甲基化修饰程度.方法 选择经急诊确诊的STEMI患者48例(STEMI组),立即抽取静脉血查血脂和保存用于DNA提取;以健康人群36例为对照组,亚硫酸氢盐修饰后测序检测其LDLR基因启动子区甲基化程度.结果 STEMI组患者血清低密度脂蛋白(LDL)水平较对照组升高,在LDLR基因启动子区CpG岛(-383,-140)片段中所包含的7个CG位点均无发生甲基化.结论 STEMI患者血清LDL水平改变与LDLR基因启动子区CpG岛(-383,-140)的甲基化修饰无关.     

牙髓细胞成牙本质向分化过程中DSPP基因的表观遗传学修饰

目的:通过检测牙髓细胞(DPC)体外成牙本质向分化过程中牙本质涎磷蛋白(DSPP)基因的表观遗传学修饰模式的变化。探讨表观遗传学机制在DPC成牙本质向分化中的作用。方法:在体外诱导DPC成牙本质向分化,采用Real-time PCR检测DSPP基因表达的改变,采用重亚硫酸盐测序法检测DSPP基因的甲基化水平改变,染色质免疫共沉淀检测DSPP启动子区组蛋白修饰(H3K27me3和H3K4me3)修饰的变化。结果:在DPC诱导分化后,DSPP的表达逐渐增高,伴随着基因启动区甲基化水平的降低,同时与转录激活相关的组蛋白修饰H3K4me3升高,而与转录抑制相关的组蛋白修饰H3K27me3降低。结论:DPC在成牙本质分化过程中DSPP表达的上调与DSPP启动子区域出现开放基因表达的表观遗传学修饰模式有关。这提示,表观遗传学调控参与到DPC成牙本质向分化的过程。     

《现代实用医学》第16卷（2004年）论文分类索引

(按中图分类号顺序排列 )C92 1　人口统计学1992～ 2 0 0 3年宁海县新生儿死亡原因分析应素花 ( 7) :415Q78　基因工程Q786　基因的表达氨基糖苷类修饰酶及其基因检测糜祖煌等 ( 1) :13鲍曼不动杆菌氨基糖苷类药物修饰酶基因类　型的研究史伟峰等 ( 1) :17葡萄球菌耐药基因检测糜祖煌等 ( 2 ) :67多重耐药铜绿假单胞菌aac( 6’) Ⅱ型氨基糖　苷类修饰酶基因研究陶玉坚等 ( 3 ) :12 9肠球菌产 β内酰胺酶、氨基糖苷类修饰酶基　因检测时庭文等 ( 4 ) :193鲍曼不动杆菌耐药基因及其检测糜祖煌 ( 6) :3 2 4革兰阴性杆菌 9种氨基糖苷类修饰酶…     

PRMT5与JAKs/STATs通路的相互作用及其机制的研究进展

蛋白精氨酸甲基转移酶5(PRMT5)属于Ⅱ型甲基转移酶,主要催化组蛋白和非组蛋白物质的精氨酸残基的对称二甲基化修饰。PRMT5通过表观遗传学调控靶基因的表达或信号分子的翻译后修饰,从而参与多种细胞进程。PRMT5可能是一种癌基因,并且通过多种肿瘤抑制基因或者信号分子的修饰导致肿瘤的发生。骨髓增殖性肿瘤(MPN)中普遍存在JAK2基因的突变并且导致Janus激酶(JAKs)/信号转导和转录激活因子(STATs)信号通路的激活,JAKs/STATs在MPN的发病机制中起着重要的作用,而且有证据表明PRMT5在MPN发展中有重要作用。     

一种改良的亚硫酸氢盐修饰微量DNA的甲基化分析方法

目的 建立一种改良的亚硫酸氢盐修饰微量DNA的甲基化分析方法。方法 应用低熔点琼脂糖包埋不同含量的DNA，进行亚硫酸氢盐修饰，通过MGMT基因甲基化与非甲基化特异PCR的扩增，与传统的亚硫酸氢盐修饰法进行分析比较。结果 改良法对于低至15、625ng的DNA修饰均可获得MGMT基因甲基化扩增产物，而传统法对于62．5ng及其以下的DNA修饰难以获得MGMT基因甲基化扩增产物。结论 改良的亚硫酸氢盐修饰方法可有效提高甲基化特异PCR的灵敏度，该方法为微量DNA的甲基化分析提供了一种较理想的研究手段。     

胶质瘤中GDNF基因启动子Ⅱ区甲基化修饰发生变化

目的 检测胶质瘤组织中神经胶质细胞源性的神经营养因子(GDNF)基因启动子Ⅱ区甲基化修饰水平,以期探讨其与目的基因在胶质瘤组织中高转录的关系.方法 基因测序技术检测胶质瘤组织中GDNF基因启动子Ⅱ区碱基序列是否发生突变;采用BSP检测GDNF基因启动子Ⅱ区的甲基化修饰水平;通过qPCR检测胶质瘤组织中GDNF基因mRNA的表达水平.结果 胶质瘤组织中GDNF基因启动子Ⅱ区没有发生有意义的突变位点;启动子Ⅱ区总甲基化修饰率在正常组、低级别、高级别胶质瘤中分别为:25.57％,15.42％,42.19％,各组间比较均有明显差异(P＜0.05);在低级别组中增强子的甲基化水平最低,而高级别组中沉默子甲基化水平最高;qPCR结果显示胶质瘤组织中GDNF mRNA水平较正常脑组织显著升高.结论 在胶质瘤组织中,GDNF基因启动子Ⅱ区甲基化修饰水平发生显著变化,此甲基化修饰形式的变化可能参与目的基因在胶质瘤组织中的高表达机制.     

神经元细胞甲基化与阿尔茨海默病

0 引言 染色体结构的松开和凝聚可调控启动子结合目的基因,而表遗传学修饰通过影响染色体结构的稳定性可对基因表达进行调控. 组蛋白修饰和DNA甲基化修饰均可引起染色体结构改变,因此在基因沉默中的作用很重要. 神经元细胞的基因表达和功能均受甲基化的调节.     

PPARγ磷酸化与非磷酸化的研究进展

过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)是一种配体依赖性核转录因子,具有调控细胞分化、脂肪代谢、糖代谢及炎症等多种生物学功能。已知PPARγ有多种转录后修饰,磷酸化修饰是PPARγ第一个被鉴定的翻译后修饰方式,目前研究较多的是Ser112位点的丝裂原激活的蛋白激酶途径及Ser273位点的细胞周期素依赖的蛋白激酶5途径。PPARγ的异源二聚体结合到靶基因启动子区的特异反应元件过氧化物酶体增殖反应元件上调控靶基因的转录,PPARγ还参与炎性反应应答。PPARγ与糖尿病、肿瘤等疾病也有密切的联系。