RT-PCR法检测肝癌患者周围和肝静脉血AFP mRNA及其临床意义

目的：通过对外周静脉因和肝静脉血AFPmRNA表达检测的比较，旨在寻找一种比较好的监测肝癌细胞转移的方法，并了解肝癌细胞在体内的转移机制。方法：抽取肝癌患者外周及肝静脉血，采用RT－PCR方法检测AFPmRNA，比较二者的阳性率。结果：在肿瘤直径＞5cm的肝癌患者，其外周血，肝静脉血AFPmRNA表达差异无显著性（P＝0．618），而在直径＜5cm的肝癌患者，其二处血AFPmRNA表达差异有显著性（P＝0．028）。结论：肝癌直径＜5cm的患者，直接检测肝静脉血能更准确地反映肝癌细胞肝内播散的情况。肝癌直径＞5cm的患者中，外周血，肝静脉血AFPmRNA表达差异无显著性，这部分患者的外周血AFPmRNA可代表其肝静脉血中AFPmRNA的状况。     

用nested RT—PCR法检测肝癌患者外周血癌细胞

寻求一种高灵敏的检测肝癌患者外周血中部细胞的方法。方法：采用ｎｅｓｔｅｄ ＲＴ－ＰＣＲ法检测外周血中的肝癌细胞。能从２ｍｌ人外周静脉血中检测到１０个左右肝癌细胞表达的人甲胎蛋白ｍＲＮＡ。。此方法特异性强，灵敏高，可作为一种理想的临床检测手段。     

原发性肝癌患者外周血中肝细胞特异性AFP mRNA检测及意义

【目的】寻找一种敏感的方法以检测原发性肝癌患者外周血中肝细胞特异性AFPmRNA。【方法】巢式RT PCR检测外周血有核细胞成分中AFPmRNA。【结果】 49例肝癌中 17例检出AFPmRNA ,阳性率 35 % ,其中 9例证实有转移的 6例阳性 (6 7% )。 19例肝硬化、6例急性肝炎、8例慢性肝炎、5例肝良性肿瘤、6例肝内胆管癌、11例肝转移癌、13例健康对照组均为阴性。外周血细胞AFPmRNA的存在与肝内肿癌灶的数目、是否有门静脉癌栓形成、远处器官转移与肿瘤的TMN分期密切相关 ,与血清AFP浓度无关。【结论】检测肝癌患者外周血AFPmRNA ,可帮助早期发现肝癌细胞的血行播散。     

原发性肝癌患者外周血中肝细胞特异性AFP mRNA检测及意义

目的 寻找一种敏感的方法以检测原发性肝癌患者外周血中肝细胞特异性ＡＦＰ ｍ ＲＮＡ。方法 巢式ＲＴ－Ｐ;ＣＲ检测外周血有核细胞成分中ＡＦＰ ｍＲＮＡ。结果 ４９例肝癌中１７例检出ＡＦＰｍＲＮＡ,阳性率３５％,其中９例证实有转移的６例阳性。１９例肝硬化,６例急性肝炎,８例慢性肝炎,５例肝良性肿瘤,６例肝内胆管癌,１１例肝转移癌,１３例健康对照组均为阴性。     

应用PCR检测原发性肝癌患者外周血中CD44v mRNA的临床意义

我们通过合理的PCR引物设计，采用套式PCR方法检测了15例原发性肝癌患者术晨外周静脉血液中游离肿瘤细胞CD44vmRNA表达情况（此15例患者的新鲜肝癌切除标本CD44vmRNA表达均为阳性），并检查了与侵袭转移相关的病理指标（肿瘤包膜穿破、缺乏；门静脉癌栓；瘤周卫星灶），同时结合近2年（20～22个月）随访的13例病例情况，研究了检测外周血CD44vmRNA表达的临床意义。结果发现13例随访回报的病例中阳性表达9例，阴性表达4例，前者侵袭转移病理指标重于后者；复发率前者（100％）高于后者（25％，P＜0．005）；生存率前者（11．11叭）…     

肝癌患者外周血中白蛋白mRNA检测的意义

目的:探讨肝癌患者外周血中白蛋白mRNA在血行播散中的意义。方法:抽取30例肝癌患者外周静脉血5ml,应用RT-PCR技术对血中白蛋白mRNA进行扩增检测。结果:敏感性实验中,健康人血中存在102以上个肝癌细胞时可测出。30例HCC患者中,白蛋白mRNA的阳性率为60%(18/30);白蛋白mRNA的检出率与肝癌的TNM分期、肿瘤大小、有无门脉癌栓及有无肝外转移有显著的相关性(P<0.05),而与血清AFP值无关(P>0.75)。结论:白蛋白mRNA是反映原发性肝癌患者血中是否存在肝癌细胞的灵敏指标。     

应用PCR检测原发性肝癌患者外周血中CD44v mRNA的临床意义

我们通过合理的PCR引物设计，采用套式PCR方法检测了15例原发性肝癌患者术晨外周静脉血液中游离肿瘤细胞CD44vmRNA表达情况（此15例患者的新鲜肝癌切除标本CD44vmRNA表达均为阳性），并检查了与侵袭转移相关的病理指标（肿瘤包膜穿破、缺乏；门静脉癌栓；瘤周卫星灶），同时结合近2年（20～22个月）随访的13例病例情况，研究了检测外周血CD44vmRNA表达的临床意义。结果发现13例随访回报的病例中阳性表达9例，阴性表达4例，前者侵袭转移病理指标重于后者；复发率前者（100％）高于后者（25％，P＜0．005）；生存率前者（11．11叭）…     

定量PCR分析HBsAg阳性肝癌患者手术前后血清HBVDNA变化

目的：明确外科手术对ＨＢｓＡｇ阳性肝癌患者乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）复制的影响。方法：以常规聚合酶链反应（ＰＣＲ）方法检测了２０例ＨＢＶ血清学标志阳性肝癌患者血清中的ＨＢＶＤＮＡ；应用荧光能量转移定量聚合酶链反应（ＱＰＣＲ）测定肝癌手术切除前后病人血清中ＨＢＶＤＮＡ量的变化情况。结果：在部分肝癌病人（４０％）血清中可以检测到ＨＢＶＤＮＡ；外科手术后较手术前病人血清ＨＢＶＤＮＡ拷贝数增高（Ｐ＜０．０１）。结论：乙型肝炎病毒仍然在大部分肝癌病人体内进行着活跃的复制；外科干预在部分病人中引起病毒复制增加。     

肝癌患者外周血自然杀伤细胞的活性

目的探讨肝细胞性肝癌患者外周血自然杀伤细胞（ＮＫ）活性与乙型肝炎表面抗原（ＨＢｓＡｇ）、甲胎蛋白（ＡＦＰ）、肿瘤大小、转移及黄疸的关系。方法应用５－１２５Ｉ－２′－脱氧尿嘧啶核苷（１２５Ｉ－ＵｄＲ）释放法分别对５１例肝癌患者和４８例正常人进行ＮＫ活性测定。结果肝癌患者外周血ＮＫ活性明显低下（３８．３０％±１７．０３％，Ｐ＜０．００１），与血清中ＨＢｓＡｇ无关，而与血清中ＡＦＰ呈负相关关系（ｒ＝－０．４５６，Ｐ＜０．０１），且随着患者肿瘤的增大和转移及出现黄疸ＮＫ活性进一步下降。结论ＮＫ活性可作为一种免疫监视指标，对判断肝癌的疗效和预后有一定的临床指导意义     

免疫磁珠分选和RT-PCR法检测胃癌患者外周血微转移

目的分别建立免疫磁珠分离和RT—PcR技术检测胃癌患者外周血中微转移的情况,讨论两种检测方法的意义和差别以及微转移与临床病理的相关性。方法首先采用密度梯度离心的方法分离出胃癌和慢性胃炎患者外周血中的单个核细胞,再分别采用RT—PCR和免疫磁珠技术检测其中的癌细胞。并行HE染色、免疫细胞化学和免疫荧光化学的方法对于获得的细胞进行检测分析。结果60例胃癌患者有24例采用免疫磁珠分选技术分离到微转移的癌细胞,而RT—PCR法阳性者为32例。慢性胃炎患者的检测结果均为阴性。微转移的检出与胃癌组织的分化程度呈正相关。结论胃癌患者的外周血中存在着微转移的癌细胞,采用免疫磁珠分离技术和RT—PCR的方法均可检测到微转移的癌细胞。RT—PCR法的敏感性高于免疫磁珠分离技术,更适合于临床应用。高分化的胃癌更易发生血行转移。     

血浆及其外周血单个核细胞中丙型肝炎病毒检测比较

目的：了解慢性丙型肝炎患者的血浆及其外周血单个核细胞（ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌｂｌｏｏｄｍｏｎｏｎｕｃｌｅａｒｃｅｌｓ，ＰＢＭＣ）中丙型肝炎病毒（ｈｅｐａｔｉｔｉｓＣｖｉｒｕｓ，ＨＣＶ）的存在及存在形式。方法：反转录多聚酶链反应（ｒｅｖｅｒｓｅｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｐｏｌｙｍｅｒａｓｅｃｈａｉｎｒｅａｃｔｉｏｎ，ＲＴＰＣＲ）技术检测１２４例慢性丙型肝炎患者的血浆及ＰＢＭＣ中的ＨＣＶ。结果：在７０例抗ＨＣＶ及血浆ＨＣＶＲＮＡ阳性的患者中有２１例（３０％）的患者其ＰＢＭＣ内存在ＨＣＶＲＮＡ正链，仅１例存在ＨＣＶＲＮＡ负链。在５４例抗ＨＣＶ阳性、血浆ＨＣＶＲＮＡ阴性的患者中，仅有２例（３．７％）检出ＨＣＶＲＮＡ正链，未检出ＨＣＶＲＮＡ负链，这２例患者均为干扰素治疗３～６个月的病人。结论：ＰＢＭＣ可作为肝外病毒复制场所。对慢性ＨＣＶ感染者来说，３～６个月的干扰素治疗时间可能是不够的，ＨＣＶ在ＰＢＭＣ内的存在可能是干扰素治疗后复发的原因之一。     

慢性乙型肝炎病人外周血单个核细胞HBV DNA的PCR检测

①目的 探讨慢性乙型肝炎病人外周血单个核细胞（ＰＢＭＣ）乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）ＤＮＡ和血清ＨＢＶＤＮＡ的感染情况及其临床意义。②方法 采用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术对１２８例慢性乙型肝炎病人和２０例健康人进行了ＰＢＭＣ及血清中ＨＢＶＤＮＡ检测。③结果 慢性乙型肝炎病人ＰＢＭＣ中ＨＢＶ ＤＮＡ的感染率为６４．２％,和血清ＨＢＶＤＮＡ的感染率具有一致性倾向（Ｘ＾２－０．６３,Ｐ〉０．０５）,慢性肝病病     

IL－2和IL－6基因在急性移植物抗宿主病患者外周血单个核细胞中的表达

目的：研究ＩＬ－２及ＩＬ－６在急性ＧＶＨＤ中的表达状态。方法：采用细胞原位杂交方法，对骨髓移植后发生急性ＧＶＨＤ患者的外周血单个核细胞检测其ＩＬ－２和ＩＬ－６的表达水平，测定积分光密度值。结果：ＩＬ－２表达在急性期与缓解后比较，ｔ＝５．９９，Ｐ＜０．００１，差异非常显著；ＩＬ－６表达在急性期与缓解后比较，ｔ＝３．５９，Ｐ＜０．０１，差异显著。结论：ＩＬ－２和ＩＬ－６在急性ＧＶＨＤ时表达升高，在缓解后降低，其表达状态有助于探讨ＧＶＨＤ的免疫病理损害机理。     

多聚酶链反应检测乙型肝炎患者外周血单个核细胞中的HBVDNA

本文应用多聚酶链反应（ＰＣＲ）技术检测了６９例乙型肝炎患者（其中慢性迁延性肝炎１７例，慢性活动性肝炎２３例，肝炎后肝硬化１２例，重症乙肝１７例）外周血单个核细胞（ＰＢＭＣ）中的ＨＢＶＤＮＡ存在状态。结果显示，ＰＢＭＣ中ＨＢＶ－ＤＮＡ总阳性率为４６％，而各型乙肝间ＰＢＭＣ中ＨＢＶＤＮＡ阳性率差异无显著性（Ｐ＞０．０５），提示ＨＢＶ对ＰＢＭＣ的感染，似与乙型肝炎的临床类型无明显的相关性。     

流感患者外周血自然杀伤细胞数量的观察

目的：探讨受流感病毒感染患者的机体免疫状态。方法：采用Ｍａｙ－Ｇｒüｎｗａｌｄ－Ｇｉｅｍｓａ染色法对４０例临床诊断为流感患者的外周血大颗粒淋巴细胞（ＬＧＬ）数量变化进行观察。结果：流感患者外周血ＬＧＬ百分率较对照组有显著升高（Ｐ＜００１）。结论：受流感病毒感染患者外周血ＬＧＬ数目增高，有助于病毒感染的控制。     

PCR检测肺结核病人外周血中结核分枝杆菌

为了解ＰＣＲ检测外周血中结核分枝杆菌ＤＮＡ对肺结核诊断的价值，采用ＰＣＲ检测了１９０例可疑肺结核病人外周血中结核分枝杆菌ＤＮＡ，并用涂片镜检和培养法检测了这些病人痰中结核分枝杆菌。结果肺结核病人外周血ＰＣＲ阳性率（４４％）明显低于培养法（８０．０％），与涂片法相当（４６．８％）；非肺结核病人外周血ＰＣＲ阳性率为１６．２％（５／３）。ＰＣＲ检测外周血结核分枝杆菌ＤＮＡ诊断肺结核的应用价值有限，对急性     

痰简易处理法结合巢式PCR在检测结核杆菌中的应用

作者对106例结核性痰标本采用简易处理法（TET煮沸法）后，再用聚合酶链反应（PCR）检测，阳性率（44．3％）与酚／氯仿抽提法（46．2％）相近（X2＝0．076，P＞0．05），巢式PCR（nested－PCR）阳性率（72．6％）则显著高于PCR（X2＝17．485，P＜0．01），这种差异在涂片和培养均阴性的标本中尤为明显。巢式PCR扩增人结核菌DNA，其敏感性（50fg）为PCR的100倍，但不影响其特异性。21例非结核性痰标本经PCR和巢式PCR检测均为阴性。因而我们认为，TET煮沸法作为痰PCR前处理简易有效，对含菌量较小的标本有必要结合巢式PCR，以提高结核杆菌阳性诊断率。     

MF/SS受累淋巴结病变的基因诊断

目的：探讨基因诊断在确定MF／SS受累淋巴结病变性质中的价值。方法：采用PCR-PAGE技术，研究了20例MF／SS受累淋巴结病变和10例良性皮病性淋巴结病变T淋巴细胞受体基因重排的特点。结果：检测出有TCR-β和／或TCR－γ基因克隆重排的：11／12例（91．7％）典型MF／SS淋巴结病变，5／8例（62．5％）临床病理可疑MF／SS或反应性淋巴结病变。10例良性皮病性淋巴结病变未检测出有TCR个或TCR－γ基因克隆重排，在8例临床病理可疑MF／SS或反应性淋巴结病变病人中，有TCR基因克隆重排的比没有重排的有明显短的生存期。结论：PCR－PAGE检测MF／SS受累淋巴结病变中T淋巴细胞受体基因重排，在其早期诊断及精确分期方面是相当有用的。     

聚合酶链反应检测临床标本中的肺炎支原体

作者应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）检测３～１３岁肺炎患儿１５０例咽拭标本中的肺炎支原体（ＭＰ），以分离培养及间接血凝试验（ＩＨＡ）为对照。ＰＣＲ检出率显著高于培养，若以ＩＨＡ为标准，ＰＣＲ阴性一致率为９６％、阳性一致率为７３％。不同病程ＭＰ－ＤＮＡ检出率无显著差异，提示即使病程较长仍可应用ＰＣＲ作出诊断。鉴于ＰＣＲ检测简便快速，可作呼吸道ＭＰ感染的常规诊断应用。但ＭＰ感染经敏感药物治疗可使ＰＣＲ结果阴性，因此，血清学检测尚不宜放弃。     

PCR-RFLP分析人结直肠癌DCC基因杂合性缺失

目的：探讨DCC基因在结直肠癌中杂合性缺失情况及其意义。方法：应用PCR技术检测了25例中国人散发型结直肠癌病人正常粘膜及癌组织和3个直肠癌细胞系DCC基因M2位点限制性片断长度多态性。结果：16例（64％）病人具有杂合性，其中4例（25％）癌组织表现出等位基因杂合性缺失。此4例均有淋巴结或肝转移。细胞系HCT，HR8348表现杂合性，HT29表现纯合性。结论：DCC基因是一个在结直肠肿瘤发生发展中起重要作用的抑癌基因，该基因的异常与结直肠癌发生发展有关。