聚乙醇酸支架组织工程神经复合物修复大鼠脊髓损伤

目的 利用组织工程技术体外初步构建组织工程神经复合物，对成年大鼠损伤脊髓进行修复并观察其效果。方法 （1）分离培养大鼠神经干细胞（neural stem cells, NSCs），体外构建NSCs／聚乙醇酸（PGA）支架复合物，以胚胎脊髓提取液对NSCs进行诱导分化，通过组织化学检测和扫描电镜观察该复合物结构。（2）制作大鼠脊髓半横断损伤模型，植入组织工程神经复合物，术后6周通过功能学和组织学检查评估修复脊髓损伤的效果。结果 （1）体外构建的NSCs／PGA支架组织工程神经复合物含有神经元、少突胶质细胞和星形胶质细胞等成分，有独特的组织结构。（2）组织工程神经复合物移植后，其内的神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞可以存活并继续成熟，成年大鼠损伤脊髓平面以下运动功能获得了较明显的恢复。结论 体外构建的组织工程神经复合物对成年大鼠损伤脊髓的结构重建和功能恢复都有一定的作用。     

恒河猴骨髓基质细胞体外诱导分化成神经干细胞的实验研究

为研究恒河猴骨髓基质细胞（BMSC）体外培养及诱导分化为神经干细胞的可行性，分离恒河猴BMSC，在体外应用神经干细胞培养液和细胞因子进行诱导分化，利用免疫细胞化学方法进行鉴定。结果发现，恒河猴BMSC能在体外培养中增殖，分化和表达干细胞特异性抗原神经巢蛋白（Nestin)，并最终能分化为胶质细胞样细胞和神经元样细胞；免疫细胞化学检测可见有神经元特异性烯醇化酶（NSE）和胶质原性纤维酸性蛋白（GFAP）抗原表达；未发现维甲酸（RA），表皮生长因子（EGF）和碱性成纤维细胞生长因子（bFGF)对骨髓基质干细胞的诱导分化具有明显影响作用。提示恒河猴BMSC是具有较强的自我更新能力和多分化潜能的细胞，在一定条件下，可分化为表达神经系细胞（神经元和神经胶质细胞）抗原的细胞，可作为神经细胞的种子细胞。     

食蟹猴骨髓基质干细胞体外诱导分化的实验研究

为观察食蟹猴骨髓基质干细胞（BMSC）体外培养及诱导分化情况，分离食蟹猴的BMSC，以神经干细胞培养液和分化诱导因子进行体外培养和诱导分化。结果发现，分离得到的食蟹猴BMSC能在体外培养中增殖，分化，这些具有克隆能力的BMSC能表达神经干细胞特异性抗原Nestin，并能进一步诱导分化出胶质细胞样细胞和神经元样细胞，免疫细胞化学检测可见有GFAP和NSE抗原表达。提示灵长类BMSC是多分化潜能细胞，具有较强的自我更新和多分化能力，在适当的诱导分化条件下可形成具有神经系细胞（神经元和神经胶质细胞）特征的细胞；BMSC可作为神经干细胞的种子细胞。     

神经干细胞移植修复颅脑神经功能损害的研究现状及前景

神经干细胞作为具有自我增殖及分化为神经元，神经胶质细胞潜在能力的神经祖细胞，具有广阔的临床实用价值和应用前景。本文主要就神经干细胞的生物学特性，在神经发生过程中的分布，主要分化机制，分离培养及鉴定实验要点，以及神经干细胞移植修复脑神经功能损害的应用等进行论述。     

神经干细胞与临床应用

神经干细胞(neural stem cell NSC)具有自我更新和多分化潜能这两个基本属性,目前已成为神经组织移植治疗中枢神经疾病和神经损伤修复的研究焦点,大量的动物实验为神经干细胞移植提供了理论依据,全能的干细胞既可以在体外无限制的增值分裂,保持未分化状态,又可在一定条件下向神经细胞分化,为神经干细胞移植提供了物质条件。 1 神经干细胞的概念,来源与特性 1.1 对 NSC 的精确定义尚存在某些争论,自1992 年 Reynolds 等从胚胎鼠脑的纹状体区首次分离出能在体外持续增殖且具有向神经元及星形胶质细胞     

脊髓损伤新型神经细胞支架材料研究进展

脊髓损伤（spinal cord injury，SCI）是临床上有严重危害的急性病损。目前脊髓损伤修复研究的主要方向是利用组织工程和神经干细胞修复损伤脊髓。方法是将一定量的细胞种植到具有一定结构的三维支架上，然后将此细胞-支架复合物植入体内或体外继续培养，通过细胞间的相互粘附，增殖和分化，分泌细胞外基质，从而形成具有一定结构和功能的组织或器官，达到修复损伤脊髓的目的。     

不同损伤时期人脑挫裂伤对神经干细胞分化影响的体外研究

目的：将人神经干细胞与不同损伤时期人挫裂伤脑组织（3 d、2月、6月）匀浆上清液体外培养,研究不同时期挫裂伤脑组织对神经干细胞分化的影响,探讨神经干细胞移植的最佳时机。方法：从12周流产胎儿脑组织提取神经干细胞,传代培养。加入不同时期脑挫伤组织匀浆上清液共培养,观察神经干细胞分化情况。结果：胎儿脑组织提取的神经干细胞具有分化增殖能力,与挫伤脑组织共培养后可分化成神经元和神经胶质细胞,越早期的挫伤脑组织诱导神经干细胞分化成神经元细胞的比例越高。结论：脑挫裂伤后早期组织可以诱导神经干细胞分化成更多的神经元,脑挫裂伤后早期行神经干细胞移植可能有助于提高疗效。     

胚胎干细胞在脊髓损伤中的应用

神经干细胞具有自我增殖、分化、迁移及建立突触联系的特征,并可促进损伤神经组织的修复与再生。最近发现,经胚胎干细胞诱导的神经前体细胞植入受损伤的脊髓中,可分化为神经元和神经胶质细胞,并能促进脊髓功能的恢复,提示胚胎干细胞在中枢神经系统的治疗中具有广阔的应用前景。     

神经干细胞分化调节因子的研究进展

近年来随着干细胞研究的发展,神经干细胞的发现为干细胞治疗神经系统疾病提供了前提条件。在脑损伤后中枢神经系统的神经干细胞可分化成为神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞,神经干细胞周围微环境会影响神经干细胞的增殖、存活、迁移和分化。本文综述了肾上腺髓质激素、生长因子和低氧诱导因子等细胞因子对神经干细胞的增殖分化的影响,分析了这一领域目前存在的问题,并就今后的发展进行了积极的思考。     

嗅鞘细胞在神经系统损伤修复中的作用

嗅鞘细胞是一种特殊的神经胶质细胞,也是目前唯一应用到临床治疗脊髓损伤的细胞。在神经系统损伤修复中,嗅鞘细胞具有改善损伤微环境、促进轴突再生、穿越胶质瘢痕、亲和神经元和导向神经再生方面的作用,为神经系统损伤修复及病变治疗提供了广阔的临床应用前景。     

经骨髓间充质干细胞诱导分化的神经样细胞对大鼠脊髓损伤的修复作用

 目的 探讨经骨髓间充质干细胞诱导分化的神经样细胞对大鼠脊髓损伤的修复作用。方法 提取、培养和扩增骨髓间充质干细胞后,在体外诱导分化为神经样细胞。大鼠脊髓损伤造模后,分别进行神经样细胞、骨髓间充质干细胞及无细胞悬液移植,每组18只。术后采用BBB评分及斜板实验观察3组大鼠的运动功能恢复情况。结果 体外诱导骨髓间充质干细胞后,经免疫组化染色发现具备神经细胞特征。术后6周,BBB评分方面,实验组(16.56±2.42)优于阳性对照组(13.70±2.66),后者又优于阴性对照组(8.37±2.35)。Rivlin斜板实验评分方面,实验组术后2、4、6周,均优于阳性对照组,后者又均优于阴性对照组。实验组术后可见较多的神经纤维,结构完整,优于阳性对照组及阴性对照组。结论 体外诱导骨髓间充质干细胞向神经样细胞分化后,移植治疗大鼠脊髓损伤具有良好效果。
     

超顺磁性氧化铁粒子标记神经干细胞与磁共振示踪成像研究进展

目前，对脑脊髓疾病和损伤的治疗目的多为缓解症状和控制疾病的发展。然而，近年来研究发现，在成年哺乳动物脑组织中存在神经干细胞，这些神经干细胞可以分化成神经组织，表明中枢神经系统也存在再生修复能力，这为研究中枢神经系统损伤的修复提出了希望。人们曾设想通过注入生长因子诱导细胞增殖而使内源性细胞激活和修复，然而，大多数影响细胞增殖的生长因子尚不十分清楚，而且这种方法不适用于遗传性疾病的治疗，因为这些疾病的内源性细胞的基因存在缺陷。基于以上2点原因，     

成人骨髓源性神经干细胞诱导分化实验研究

为探讨成人骨髓分离培养神经干细胞的可行性和有效性 ,无菌条件下行骨穿 ,梯度密度离心分离获取成人骨髓源细胞 ,以“CYTOKINE·神经干细胞培养液”培养 ,确定神经干细胞的最佳体外生存环境。以细胞克隆方法判断神经干细胞增殖情况 ;以NESTIN、NSE及GFAP免疫细胞化学方法分别鉴定神经干细胞、神经元和神经胶质细胞。细胞培养所涉及的细胞因子主要有GDNF(2 0ng/ml)、LIF(10ng/ml)和RA(0 5 μg/ml)等。结果发现 ,成人骨髓源细胞在相应培养条件下快速分裂增殖为大而圆并含粗大胞质颗粒的神经干细胞 ,后者形成细胞球 (或称“神经球”) ,该细胞球表达特殊的神经干细胞NESTIN抗原 ;若进一步将这些细胞球分离成单细胞并重新以克隆密度培养 ,单个的细胞又很快形成新的神经球。神经干细胞球进一步分化 ,可见到有的细胞胞体增大并出芽 ,逐渐发育成为较成熟的长突起细胞 ,长突起相互连接、交织成网并建立有神经纤维样联系 ,表达NSE或GFAP抗原。说明成年人骨髓在一定条件诱导下可以生成神经干细胞 ;用人骨髓组织诱导神经干细胞作为种子细胞具有可行性和有效性     

神经干细胞移植促进大鼠损伤脊髓的修复

笔者建立神经千细胞体外培养体系，经BrdU标记后植入大鼠纽约大学(NYL)脊髓损伤模型，通过BBB运动功能评分法：评价人鼠的运动功能恢复情况，并进行免疫组化鉴定，光学显做镜观察移植神经干细胞的存活、迂移及损伤部位脊髓的修复情况，探讨神经干细胞移植治疗脊髓损伤的可行性     

人神经干细胞移植对脊髓损伤大鼠后肢运动功能恢复的影响

目的:探讨人神经干细胞(hNSCs)移植对脊髓损伤大鼠后肢运动功能恢复的影响及可能机制。方法:取2～3个月流产胎儿海马区组织,体外培养神经干细胞;采用通用型脊髓打击器将24只成年SD大鼠制成脊髓损伤模型,伤后第8天随机分为移植组和对照组,于损伤中心分别注入CM-DiI标记的hNSCs悬液和DMEM/F12培养液。分别于hNSCs移植后当天及1、2、3、4、6、8周采用Basso,Beattie,Bresnahan(BBB)行为功能评定量表评估大鼠后肢运动功能恢复情况。移植后第4、8周取损伤部位脊髓,行病理切片,免疫组化方法观察移植细胞的存活和迁移,并检测损伤脊髓处胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、神经元核心抗原(NeuN)、2,3-环核苷酸磷酸二酯酶(CNPase)、神经巢蛋白(Nestin)等抗原的表达。结果:移植组后肢运动功能评分随时间延长而逐渐升高,移植1周时后肢运动功能有所改善,与对照组无明显差异(6.4±0.99 vs 6.0±0.93,P>0.05);移植4周时后肢运动功能比1周时有明显恢复,BBB评分明显高于对照组(9.7±1.04 vs 7.4±0.95,P<0.05);移植的hNSCs可在损伤脊髓处长时间存活(至少8周),并分化为神经元、少突胶质细胞和星形胶质细胞。结论:人神经干细胞可在损伤脊髓处向神经元和神经胶质细胞分化,并能促进脊髓损伤大鼠后肢运动功能的部分恢复。     

神经干细胞缺氧预处理后的内源性保护作用和促红细胞生成素的表达

神经干细胞（neural stem cells，NSCs）是具有自我更新能力和多种分化潜能的细胞。体外培养的NSCs移植治疗中枢神经系统包括脊髓损伤成为近年来研究的热点之一。但细胞受绝对数量和移植后局部微环境所限，使其存活率不高，限制了其修复作用，影响了移植效果。笔者通过体外实验，对大鼠NSCs进行缺氧预处理，观察处理后细胞对伤害性刺激的内源性保护作用，并对其机制进行初步的探讨，为进一步提高NSCs移植治疗效果提供理论依据和指导。     

热休克蛋白70封闭后对星形胶质细胞反应性增生的影响

目的 探讨用抗体封闭热休克蛋白70(heat shock protein 70,HSP70)后对星形胶质细胞反应性增生的影响. 方法 原代培养并纯化星形胶质细胞,采用划痕损伤法构建细胞损伤模型,通过培养液内加入HSP70抗体来进行干预.在不同时间点对损伤对照组和损伤干预组进行胶质纤维酸性蛋白(GFAP)免疫细胞化学染色,观察细胞增生情况及形态学变化,并用RT-PCR检测GFAP mRNA的表达. 结果 与对照组相比,干预组细胞面积、突起数目及突起长度均减小(P<0.05或0.01),GFAP mRNA的表达也明显降低(P<0.05). 结论 星形胶质细胞损伤后,HSP70有促进星形胶质细胞反应性增生的作用.用抗体封闭HSP70后,能够一定程度上抑制星形胶质细胞的反应性增生.     

人脑少突胶质细胞的培养与鉴定

少突胶质细胞是中枢神经的成髓鞘神经胶质细胞，它包绕神经纤维的轴突形成髓鞘，对轴突正常的电传导功能有重要作用。将少突胶质细胞移植人髓鞘形成障碍或脱髓鞘的中枢神经系统内，可揭示髓鞘形成和再生机制。由于体外培养的少突胶质细胞与其在体内的特性相关,因此通过体外培养研究可了解少突胶质细胞的存活、增殖、分化和发育过程中的细胞生物学变化。然而中枢神经系统具有细胞多样性，它包括神经元、星形胶质细胞、少突胶质细胞和小胶质细胞，所以必须对少突胶质细胞进行体外纯化。     

嗅鞘细胞对脊髓源性神经干细胞分化的影响

目的 探讨嗅鞘细胞对脊髓源性神经干细胞分化的作用。方法 应用Millicell插入式细胞培养皿，大鼠脊髓源性神经干细胞与嗅鞘细胞在无血清培养液中共培养，通过免疫化学染色方法，检测脊髓源性神经干细胞分化为神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞的比例。结果 共培养7d后，脊髓源性神经干细胞分化为神经元的比例高达43．5％，明显高于对照组的21．4％。结论 嗅鞘细胞提供的微环境可促进脊髓源性神经干细胞分化为神经元。     

脑神经干细胞移植的磁共振活体成像研究进展

随着对干细胞的深入研究,已有明确的证据表明神经干细胞能促进神经元和胶质细胞的再生及脑组织的修复.MRI在无创性、活体研究移植神经干细胞在宿主体内的分布、存活、分化、移行等功能状态以及评价治疗效果等方面具有独特的价值.就MRI在脑神经干细胞移植的示踪研究中的进展作一综述.