重组质粒pcDNA3.1IL-2/Fc对HBV preS2S DNA疫苗免疫作用的影响

目的 探讨IL-2/Fc融合表达后对HBVpreS2S基因疫苗诱导免疫反应的佐剂效应.方法 采用HBV preS2S DNA疫苗作为基础免疫,重组质粒pcDNA3.1IL-2/Fc作为佐剂加强免疫BALB/c小鼠,采用0、2、4周的方案接种,检测各次接种后抗体水平.初次免疫后7周,测定免疫脾细胞的杀伤活性、增殖活性和细胞因子的分泌水平.结果 pcDNA3.1IL-2/Fc作为佐剂在HBV preS2S注射3 d后免疫组小鼠抗体滴度、免疫脾细胞的杀伤活性和增殖活性、TH1型细胞因子的分泌水平,均比各对照组明显增强.结论 IL-2/Fc是有效的HBV preS2S DNA疫苗佐剂之一.     

基因佐剂在DNA疫苗中的应用

基因佐剂可将编码某些具有佐剂作用成分的基因与DNA疫苗共免疫，在体内表达相应的蛋白，增强T、B细胞对疫苗成份的体液及细胞免疫应答。目前研究较多的基因佐剂有：细胞因子基因佐剂如IL-12、IL-2、IFN—γ、GM-CSF等；共刺激分子基因佐剂如B7—2、CD40L等；免疫刺激DNA序列基因佐剂如CpG、ODN等。基因佐剂在体内与疫苗基因共表达，改善抗原的周边微环境，提高疫苗的免疫效果。因此，基因佐剂是目前DNA疫苗研究中的热点问题之一。     

基因佐剂在DNA 疫苗中的应用

基因佐剂可将编码某些具有佐剂作用成分的基因与DNA疫苗共免疫,在体内表达相应的蛋白,增强T、B细胞对疫苗成份的体液及细胞免疫应答.目前研究较多的基因佐剂有细胞因子基因佐剂如IL-12、IL-2、IFN-γ、GM-CSF等;共刺激分子基因佐剂如 B7-2、CD40L 等;免疫刺激DNA序列基因佐剂如CpG、ODN 等.基因佐剂在体内与疫苗基因共表达,改善抗原的周边微环境,提高疫苗的免疫效果.因此,基因佐剂是目前DNA疫苗研究中的热点问题之一.     

细胞因子佐剂对HIV DNA疫苗免疫效果的影响

根据联合国艾滋病规划署(UNAIDS)资料，在艾滋病流行的20年里，全世界已有6000万人感染了人类获得性免疫缺陷病毒(HIV)，其中1／3已因艾滋病或HIV感染相关疾病而死亡。尽管目前公认疗效较好的高效抗逆转录病毒治疗(HAART)在抗HIV感染中取得一定效果，但由于药物昂贵和HIV耐药株的产生影响了艾滋病治疗，限制了其在发展中国家使用。因此，最终将需要一种有效的疫苗来控制HIV感染的流行及传播。近年来，不少学者研究了多种类型的HIV疫苗，其中最引人关注的是HIV—1 DNA疫苗(核酸疫苗)。     

DNA疫苗的分子佐剂研究进展

DNA疫苗是一种能诱生机体产生高水平免疫应答的新型疫苗 ,近年来有关它的研究不断扩展和深入。由于它受到DNA疫苗以表达抗原蛋白的重组质粒DNA为免疫原的启发 ,为进一步优化DNA疫苗 ,人们开始研究一类新型的DNA疫苗分子佐剂 ,即可在体内表达各种免疫相关分子的重组质粒DNA和具免疫刺激效应的细菌源性CpGDNA。本文介绍了各种分子佐剂对DNA疫苗的调制效应及其在疫苗优化、免疫治疗和DNA疫苗作用机制探索中的意义 ,就影响分子佐剂对DNA疫苗调制的因素问题作了一些讨论。     

白细胞介素2作为乙型肝炎病毒基因疫苗佐剂的效应

近年来，随着细胞因子研究的进展，发现许多细胞因子具有明显的免疫佐剂效应（sdjuvanticity），其中thZ可能是最有效的一种。有实验证明，给小鼠注射灭活狂犬病毒疫苗后，若再连续注射数天IL－2，发现小鼠对狂犬病毒的防御作用明显增强‘’‘；若注射疟疾子抱子多肽疫苗和IL－2的油乳剂，能完全克服小鼠MHC相关联的遗传无应答性“’。新兴的基因疫苗，由于诱导的免疫应答全面，且具有易于制备、贮存等优点，现已应用于传染病、恶性肿瘤、变态反应及自身免疫病等的防治。本文以构建的编码HBVS蛋白的重组真核表达质粒pCR3．l－S作为基…     

IL-18基因佐剂协同HSV-1 gB DNA疫苗免疫诱导的特异性免疫应答

目的研究IL-18 cDNA协同单纯疱疹病毒Ⅰ型（HSV-1）糖蛋白B（gB）核酸疫苗免疫对机体体液免疫和细胞免疫应答的影响。方法利用pcDNA3载体分别构建HSV-1gB和IL-18的真核表达质粒pgB和pIL-18,分pcDNA3、pgB和pgB＋pIL-18三组,肌肉注射免疫接种BALB/c小鼠3次,每次间隔2周,每次接种质粒100μg,第3次免疫后2周,用ELISA检测特异性抗体滴度;利用^3H-TdR掺入法进行T细胞特异性抗原刺激实验;耳廓肿胀实验检测迟发型超敏（DTH）反应。结果与pgB单独免疫组相比,pIL-18的协同免疫可以显著增强ELISA特异性抗体滴度、T细胞增殖反应和DTH反应。结论IL-18cD-NA的协同免疫可以显著提高pgBDNA疫苗诱导的体液免疫和细胞免疫水平,增强核酸疫苗对机体的免疫保护作用。     

081 DNA疫苗的分子佐剂研究进展

ＤＮＡ疫苗是一种能诱生机体产生高水平免疫应答的新型疫苗是一种能诱生机体产生高,近年来有关综拓展断扩展和深入。。由于它受ＤＮＡ疫苗以表达抗原蛋白重组质粒ＤＮＡ为免疫原的启发,为进一步优化ＤＮＡ疫苗,人们开始研究一类新型的ＤＮＡ疫苗分子佐剂,即可在体内表达各种免疫相关分子的重组质粒ＤＮＡ和具有免疫刺激效应的细菌源笥ＣｐＧＤＮＡ。本文介绍了种分子佐剂对ＤＮＡ疫苗的调制效应及其在疫苗优化,免疫治疗和ＤＮＡ     

细胞因子佐剂对核酸疫苗免疫效果的影响及作用机制

细胞因子佐剂包括白细胞介素、干扰素、粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子、趋化因子等,其作为佐剂可显著增强抗原的免疫原性,调节机体的体液免疫和细胞免疫应答水平.在核酸疫苗的研究中,细胞因子佐剂已被证实具有重要的调节作用.现就细胞因子佐剂对核酸疫苗免疫效果的影响及作用机制进行综述.     

增强防龋DNA疫苗黏膜免疫的递送系统和佐剂

DNA疫苗作为一种新的理论和技术,因其与传统疫苗比较具有诸多优点而为通过免疫接种更有效地防治疾病带来了新的希望。通过黏膜途径作免疫接种具有经济、简便的特点,可刺激产生黏膜免疫系统的效应部位能分泌保护性抗体sIgA,是通过免疫接种防治龋病及其他感染性口腔疾病的物质基础,通过黏膜免疫途径接种防龋疫苗将有望成为免疫防龋的主要方式。为了增加防龋DNA疫苗的抗原性,诱导唾液特异slgA产生,对如何提高防龋DNA的黏膜免疫反应做了大量的研究工作,本文就此作一简要综述。     

IL-2 preS DNA疫苗免疫正常小鼠和HBV转基因鼠的免疫应答研究

目的 探讨IL—2 preS DNA疫苗作为预防和治疗性疫苗的可行性及作用机理。方法 应用基因重组技术，构建人白细胞介素2(hIL-2)和前表面抗原(preS)的真核表达载体，将此重组载体用基因枪分别注射正常的BALB／c小鼠和HBV转基因小鼠，通过ELISA方法检测BALB／c小鼠和HBV转基因鼠的抗-preS2、HBsAg及抗-HBs抗体水平；荧光定量PCR方法检测HBV转基因鼠血清中HBV DNA拷贝数，并用免疫病理HE染色观察小鼠肝组织炎症活动度，同时检测肝功能指标。结果 ①基因枪注射真核表达质粒免疫正常小鼠后，100％小鼠能在第4、6周检测到抗preS1抗体，持续时间长达10周。②用IL-2 preS真核表达质粒基因枪肌肉注射方式优于正常肌肉注射和皮下注射的方式，且所需质粒量(10μg／只)仅为后者(100μg／只)的1／10。③在第4周高峰期检测IgG亚类，是诱导以TH1(IgG2a)细胞免疫为主的反应。④基因枪注射真核表达质粒(1μg／只)免疫转基因小鼠后，80％的小鼠产生了抗体，HBV DNA量下降，其中20％的小鼠HBsAg转阴。⑤HE肝组织染色显示：肝组织有明显的炎细胞浸润、肝细胞肿大、颗粒样变性、转氨酶升高。结论 IL-2 preS DNA疫苗能刺激小鼠机体产生体液和细胞免疫，可部分打破小鼠机体的免疫耐受，为新型乙肝疫苗和抗HBV持续性感染的特异性免疫治疗剂的设计和构建提供理论与实践依据。     

真核化的原核表达系统增强HBV preS2/S基因免疫的效果

目的：研究真核化的原核表达系统——pCMV-T7poL／pT7IRES-HBs双质粒共表达体系与常规真核表达质粒相比在真核细胞中的表达差异；基因免疫小鼠诱生特异性体液免疫应答的能力及二者所诱生的抗体亚型的差异。方法：运用分子生物学方法构建真核化的原核表达系统，将构建的质粒进行基因免疫，应用DOT-EIA和ELISA等检测其所产生的抗体水平。结果：①真核化的原核表达系统在真核细胞中的表达能力明显强于常规真核表达质粒。②真核化的原核表达系统基因免疫小鼠不仅可诱生特异性体液免疫应答，且具有明显增强效应（P〈0．05）。③真核化的原核表达系统与常规真核表达质粒相比不仅可诱生同等程度的Th1型免疫应答，而且能够诱生更强的Th2型免疫应答（P〈0．01）。结论：真核化的原核表达系统——pCMV-T7pol／pT7IRES-HBs双质粒能诱导较强的体液免疫应答。     

IL—2／HBV PreS融合基因的克隆及序列测定

目的：获得ＩＬ－２／ＨＢＶｐｒｅＳ融合基因克隆，为表达ＩＬ－２／ＨＢＶｐｒｅＳ融合蛋白奠定基础，方法：用ＰＣＲ方法从乙肝全序列中扩增ＨＢＶｐｒｅＳ基因片段，并克隆入带ＩＬ－２基因的ｐｌｙ５质粒中，挑出的阳性克隆再亚克隆到ｐＵＣ１８中进行序列测定。结果：基因全长９３０ｂｐ，编码３１０个氨基酸，序列内有起始码和终止码。结论：所克隆的基因为ＩＬ－２与ＨＢＶｐｒｅＳ的融合基因。     

HBV preS2S-rhGM-CSF融合基因表达质粒的构建和表达

目的：研究GM-CSF和preS2对乙肝DNA疫苗的免疫增强作用。方法：采用PCR方法，扩增HBV preS2 S基因约846 bp的片段和rhGM-CSF(包括甘氨酸接头)基因450bp的片段。通过T-A克隆技术和基因定向克隆，构建融合基因的真核表达质粒pcDNA3．1-S2S-rhGM-CSF，并在HepG2细胞中表达。结果：经酶切、PCR及DNA测序鉴定，融合基因表达质粒HBV preS2S-rhGM-CSF成功地构建。将其转染HepG2细胞后，目的基因的转录通过RT-PCR得到证实，而且表达的融合蛋白能与抗-HBs、抗-preS2和抗-GM-CSF单克隆抗体(mAb)均产生特异性反应。结论：融合基因表达载体pcDNA3．1-S2S-rhGM-CSF的成功构建并表达，为进一步研究乙肝DNA疫苗奠定了实验基础。     

HIV-2 DNA疫苗免疫小鼠的免疫反应观察

目的：用构建的HIV－2外膜蛋白gp105和核心蛋白gag基因的DNA疫苗免疫小鼠，评价其免疫效果。方法：将HIV－2型gp 105和gag基因克隆到表达载体pIRES1neo中，构建重组DNA疫苗质粒。间接免疫荧光试验证明，构建的DNA疫苗在真核细胞中表达了gp105或／和gag.构建的疫苗免疫小鼠后，用流式细胞仪测定CD4^ 、CD8^ T淋巴细胞亚类数，并用HIV－2抗体ELISA检测试剂盒检测免疫鼠血清中抗HIV－2抗体水平。结果：构建了3种HIV－2 DNA疫苗pIRES1gag、pIRSE1gp105和pIRES1gag-gp105，转染BHK细胞后均能表达抗原蛋白，免疫小鼠后可有效地刺激淋巴细胞增殖并诱导产生抗HIV－2特异性抗体，其中pIRES1gag-gp105免疫鼠中，淋巴细胞增殖最显著，而pIRES1gp105免疫鼠中HIV－2特异性抗体水平最高。结论：构建的DNA疫苗均能诱导机体产生免疫反应，其中pIRES1gp105诱导的体液免疫应答最显著，而pIRES1gag-gp105 诱导的细胞免疫响应最显著。     

IL-12和IL-18基因免疫对HBcAg核酸疫苗诱导小鼠(H-2d)特异性免疫应答的影响

目的：观察IL-12和IL-18基因免疫对HBcAg核酸疫苗诱导小鼠（H-2d）特异性体液免疫和细胞免疫应答的影响.方法：用肌肉注射法将HBV核心区DNA疫苗、IL-12质粒和IL-18 质粒接种BALB/c小鼠;ELISA法检测小鼠血清抗-HBc（IgG）及IgG亚类（IgG1、IgG2a）;LDH释放法检测小鼠脾细胞HBcAg特异性CTL活性.结果：免疫6周后,HBcAg DNA疫苗联合IL-12质粒、IL-18质粒和IL-12＋IL-18质粒组小鼠的血清抗HBc终点滴度均明显高于单纯注射HBcAg DNA疫苗组小鼠（P＜0.05）,抗HBc IgG亚类以IgG2a占优.DNA疫苗免疫的各组小鼠,HBcAg特异性细胞毒性T淋巴细胞杀伤率均高于对照组（P组）,其中C＋IL-18组和C＋IL-12＋IL-18组中CTL值明显高于C组,尤以C＋IL-12＋IL-18组中的CTL杀伤率最高.结论：IL-12和IL-18基因与HBcAg DNA疫苗联合免疫,不仅能增强HBcAg特异性体液免疫应答,而且能增强HBcAg特异性CTL的杀伤活性.     

IL-2-preS融合蛋白表达质粒的基因枪DNA免疫研究

目的 观察基因枪肌肉人注射ＩＬ－２－ｐｅｒＳ融合蛋白表达质粒（ｐＣＷＩＩＰ）的基因免疫效率,为乙型肝炎基因免疫研究提供基础。方法 设基因枪肌内注射组和正常肌肉注射组,分别用ｐＣＷＩＩＰ质粒及对照质粒ｐＣＩＩＰ－２和ｐＣＩ免疫Ｂａｌｂ／ｃ小鼠,免疫后第４天,取肌肉组织通过免疫组化观察ＩＬ－２－ｐｒｅＳ在肌肉中的表达;另设基因枪、正常肌肉、皮下注射组分别免疫ｐＣＷＩＩＰ及对照质粒在２、４、６、８Ｗ眼后     

The Experimental Study on Treating Transgenic HBV Mice with Recombined IL-2-PreS DNA Vaccine

There are estimated 350 million chronic HBV carriersworldwide, third in China [1]. Unfortunately, there is nogood curative therapy approach for these patients. The pro tein vaccine contains surface protein of HBV (encoded Sgene), which (produced in…     

IL-17作为分子佐剂增强HIV DNA疫苗细胞免疫应答的研究

目的 为了进一步增强HIV DNA疫苗的免疫反应,本研究将IL-17作为HIV DNA疫苗的分子佐剂免疫小鼠,旨在探讨IL-17对HIVDNA疫苗诱导体液和细胞免疫应答的影响.方法 将小鼠IL-17构建到真核表达载体,与HW-1膜蛋白DNA疫苗pGX-Env联合免疫BALB/c小鼠;分别在第0、2周进行免疫,在第4周检测T淋巴细胞增殖指数、抗-Env IgG、细胞因子表达水平和体内细胞毒性T淋巴细胞杀伤作用(CTL)等免疫学指标.结果 IL-17能够增强HIV DNA疫苗的特定免疫反应.与单注射疫苗组相比,IL-17作为佐剂组的T细胞增殖、抗体水平和CD4~+T细胞分泌IFN-γ、IL-4和IL-17的表达均无明显增强,但对CD8~+T细胞分泌IFN-γ的表达和体内CTL的效果影响明显(P<0.05).结论 IL-17作为分子佐剂不足以影响Th细胞分化,然而却能够增强特异性CD8~+T细胞中IFN-γ的表达,尤其是增强体内CTL反应.此结果为增强艾滋病DNA疫苗CD8~+T细胞活性和用于艾滋病的治疗提供了一个新的思路.