FAM20C在体外培养人牙髓细胞中的表达及成牙本质向分化诱导对其表达的影响

目的研究人牙髓细胞（hDPC）体外培养传代过程中FAM20C的表达模式,及对hDPC成牙本质向分化诱导后FAM20C的表达变化。 方法蛋白免疫印迹法（Western blot）检测第1代至第7代（P1 ~ P7）hDPC中FAM20C蛋白的表达量;结果采用独立样本t检验;对P3代hDPC进行成牙本质分化诱导7和14 d后,反转录聚合酶链反应与Western blot检测FAM20C的mRNA和蛋白水平变化。牙本质涎磷蛋白（DSPP）、牙本质基质蛋白1（DMP1）表达变化,FAM20C的mRNA以及蛋白表达变化采用单因素方差分析。免疫荧光法检测FAM20C在hDPC中的分布。 结果体外培养的hDPC中可检测到FAM20C表达,表达量随细胞传代先增加后减少（t_P2=-10.177,P_P2= 0.001;t_P3=-18.242,P_P3<0.001;t_P4=-19.143,P_P4<0.001;t_P5=-7.452,P_P5= 0.002;t_P6= 1.357,P_P6= 0.246;t_P7= 1.099,P_P7= 0.334）;成牙本质向分化诱导7和14 d后,FAM20C的mRNA和蛋白表达量高于未诱导组细胞（F_{FAM20C mRNA}=86.252,P_{FAM20C mRNA,7 d}<0.001,P_{FAM20C mRNA,14 d}<0.001;F_FAM20C蛋白= 85.569,P_{FAM20C蛋白,7 d}= 0.002,P_{FAM20C蛋白,14 d}<0.001）。免疫荧光结果显示,成牙本质诱导前FAM20C蛋白表达于细胞核,诱导后主要表达于细胞质,诱导14 d FAM20C在细胞质中表达量高于诱导7 d。 结论hDPC中表达FAM20C,成牙本质向分化诱导上调其表达水平,诱导后在细胞质中表达较高,提示FAM20C与hDPC的成牙本质分化相关。     

PI3K/AKT信号通路对体外人牙髓细胞增殖和成牙本质向分化能力的影响

目的 研究PI3K/AKT信号通路对人牙髓细胞（hDPC）体外增殖作用和成牙本质向分化能力的影响.方法 体外培养hDPC,采用PI3K通路抑制剂LY294002（LY）处理hDPC,CCK8法检测细胞增殖情况,Western blot蛋白印记检测PI3K/AKT通路下游蛋白AKT、磷酸化AKT（p-AKT）水平在6、12、24、48、72 h的改变,检测成牙本质向分化指标DSPP的蛋白水平变化;设立空白对照组、矿化诱导组、LY组、矿化诱导＋LY组共4组,成牙本质向矿化诱导14 d,茜素红染色检测矿化结节形成情况.结果 CCK8结果显示,LY294002在24、48和72 h可抑制hDPC的增殖（24 h：Z=-0.358,P＜ 0.05;48 h：t=11.674,P＜ 0.05;72 h：t=10.832,P＜ 0.05）;Western blot显示,LY294002抑制PI3K/AKT通路下游蛋白p-AKT活性,在24 h时作用最明显,成牙本质向分化指标DSPP蛋白水平降低;茜素红染色结果显示,矿化结节的数量B组最多、C组最少.结论 PI3K/AKT信号通路可促进hDPC的增殖和成牙本质向分化能力.     

p38β在矿化诱导液诱导的人牙髓细胞成牙本质向分化中的作用

目的研究p38β丝裂原激活的蛋白激酶(MAPK)对矿化诱导液诱导的人牙髓细胞(h DPC)成牙本质向分化的影响。方法体外培养hDPC,Western blot检测hDPC矿化诱导0、3、7、14 d后p38β蛋白表达情况;构建3条慢病毒载体p38β鄄shRNA并分别转染hDPC,Western blot及实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测p38β蛋白及基因表达;设立空白对照组、矿化诱导(OM)组、OM+空载体(NC)组、OM+sh鄄p38β组共4组。成牙本质向矿化诱导1、7、14 d,实时荧光定量PCR检测成牙本质向分化指标牙本质涎磷蛋白(DSPP)、碱性磷酸酶(ALP)的基因表达;Western blot检测成牙本质向分化指标DSPP蛋白的表达;成牙本质向矿化诱导14 d,茜素红染色检测矿化结节的形成情况。结果 Western blot结果表明正常牙髓组织中存在p38β蛋白;成功构建p38β稳定低表达的hDPCs(实时荧光定量PCR显示三条序列干扰效率分别为55.4%、68.3%、54.2%);实时荧光定量PCR显示沉默p38β的hDPCs经矿化诱导后,成牙本质向分化指标DSPP、ALP基因表达水平显著降低,Western blot结果显示成牙本质向分化指标DSPP蛋白表达水平显著降低;茜素红染色结果显示,矿化诱导+sh鄄p38β组与空白对照组较另外两组的矿化结节数量明显减少。结论 p38β在OM诱导的h DPC成牙本质向分化中发挥作用。     

细胞骨架及相关蛋白在人牙周韧带细胞成骨分化过程中的表达模式

目的探讨人牙周韧带细胞（PDLCs）成骨分化过程中细胞骨架及相关蛋白的表达模式及其可能的功能作用。方法酶消化法培养PDLCs．免疫细胞化学染色检测vimentin的表达：取诱导前（对照组）及矿化诱导7、14和21d的PDLCs。实时荧光定量RT—PCR检测vimentin、actin、caldeSIllon（CaD）、tropomyosin（Tm）和annexin A4 mRNA的表达变化并进行统计分析，Western blot检测蛋白表达。结果PDLCs表达丰富的vimentin：Vimentin、actin、CaD和Tm mRNA的表达在诱导7d组下调．诱导14d组和21d组逐渐上调：Annexin A4 mRNA的表达在诱导7d组表现为上调，诱导14d组和21d组逐渐下调：Vimentin的mRNA表达在各组间差异均有统计学意义（P〈0．05）：CaD和Tm在诱导7d组与14d组之间的mRNA表达差异无统计学意义（P〉0．05），其余各组间差异均有统计学意义（P〈0．05）：Actin和annexin A4在对照组与诱导21d组之间的mRNA表达差异无统计学意义（P〉0．05）．其余各组间差异均有统计学意义（P〈0．05）；Western blot检测蛋白表达显示类似的表达趋势。结论在PDLCs成骨分化过程中．一组细胞骨架及细胞骨架蛋白相关蛋白呈现相似的表达变化．提示其参与调节PDLCs成骨分化。     

细胞外基质磷酸化糖蛋白在人牙髓细胞成牙本质分化中的表达

义(P<0.05).蛋白质印迹法检测显示各矿化标记的蛋白表达均较对照组上调.结论 在hDPC诱导成牙本质分化的过程中,MEPE与DSPP、DSP、BSP、Ⅰ型胶原呈现相似的表达变化趋势,提示MEPE与hDPC的成牙本质分化有关,可作为hDPC向成牙本质样细胞分化的标志.     

低浓度氟化钠对人牙髓细胞的成骨/成牙本质分化的影响

目的 探讨低浓度氟化钠对人牙髓细胞（human dental pulp cells,hDPCs）成骨/成牙本质分化的影响。方法 本研究已通过单位伦理委员会审查批准。原代培养hDPCs，采用MTT法检测不同浓度氟化钠对hDPCs增殖的影响；选取合适浓度的氟化钠加入成骨/成牙本质分化诱导培养液中，对hDPCs进行体外诱导，通过茜素红染色检测hDPCs成骨/成牙本质分化能力的变化，RT-qPCR检测分化相关基因的mRNA表达；同时通过RT-qPCR和Western blot检测h DPCs成骨/成牙本质分化过程中内质网应激相关基因的表达。结果 低浓度氟化钠（0.1 mmol/L）在体外可刺激h DPCs增殖，高浓度氟化钠（5～10 mmol/L）可抑制hDPCs增殖（P<0.05）。选取0.1 mmol/L氟化钠体外混合成骨/成牙本质分化诱导培养后hDPCs的茜素红染色增加，成骨/成牙本质分化相关基因牙本质涎磷蛋白（dentin sialophosphoprotein,DSPP）、骨涎蛋白（bone sialoprotein,BSP）和骨钙蛋白（osteocalcin,OCN）mRNA...     

促红细胞生成素对人牙髓细胞增殖和成骨分化的影响

目的：探讨促红细胞生成素（EPO）对体外培养的人牙髓细胞（hDPCs）增殖和成骨分化的影响。方法：体外培养鉴定人牙髓细胞。使用 EPO 对在成骨诱导培养基中培养的牙髓细胞进行刺激,CCK-8检测 EPO 对牙髓细胞增殖的影响;20 U ／ml EPO 培养 hDPCs 7 d 和14 d,采用碱性磷酸酶活性（ALP）检测和茜素红染色观察 EPO 对牙髓细胞矿化的影响;利用 Real-time PCR 检测加入 EPO 后牙髓细胞成牙本质向分化相关基因的表达情况。结果：EPO 以时间和剂量依赖性方式促进牙髓细胞的增殖;20 U ／ml 的 EPO 后作用,牙髓细胞碱性磷酸酶活性显著提高（P ＜0．05）,钙结节形成明显增多;成牙本质向分化相关基因 DSPP、OCN、OSTERIX、RUNX2的表达明显上调（P ＜0．05）。结论：EPO 能促进人牙髓细胞的增殖和分化。     

组蛋白去乙酰化酶8对大鼠骨髓间充质干细胞成骨分化的影响

目的：探讨组蛋白去乙酰化酶8（histone deacetylase 8,HDAC8）对大鼠骨髓间充质干细胞（bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs）成骨分化的影响。方法：通过全骨髓贴壁法体外分离培养大鼠 BMSCs,转染 HDAC8过表达慢病毒载体,并于矿化诱导液中培养7 d后,实时荧光定量PCR、Western blot检测BMSCs成骨分化能力的变化;矿化诱导14 d后,茜素红钙结节染色检测BMSCs矿化能力的变化。组蛋白去乙酰化酶抑制剂---曲古抑菌素A（trichostatin A,TSA）刺激转染HDAC8过表达慢病毒载体的 BMSCs,于矿化诱导液中培养7 d后,实时荧光定量 PCR及 Western blot检测 TSA刺激前后过表达 HDAC8的BMSCs成骨分化能力的变化。结果：HDAC8过表达组经矿化诱导7 d 后,成骨分化相关基因 mRNA、蛋白表达水平均低于空白对照组;经14 d矿化诱导后,HDAC8过表达组茜素红钙结节的着色程度及范围低于空白对照组。TSA 刺激的 HDAC8过表达组矿化诱导7 d后,成骨分化相关基因 mRNA及蛋白的表达均高于未加刺激组（P＜0．05）。结论：HDAC8对大鼠 BMSCs成骨分化具有抑制作用。     

牙胚细胞条件培养液诱导大鼠胚胎面突外胚间充质细胞向成牙本质样细胞分化

目的：探讨牙胚细胞条件培养液（TGC—CM）在诱导面突外胚间充质细胞向成牙本质样细胞分化中的作用。方法：取妊娠12．5d SD大鼠胎鼠第4代下颌突外胚间充质细胞,在牙胚细胞条件培养液（TGC—CM）的诱导下,通过形态学观察、免疫组化、RT—PCR等方法,探索牙胚细胞条件培养液诱导面突外胚间充质细胞向成牙本质样细胞分化的可能。结果：面突外胚间充质细胞在诱导培养基中生长良好。培养7d,在诱导组中细胞出现核极化,有很长的突起,细胞平行排列。抗牙本质涎蛋白（DSP）呈阳性反应。RT—PCR显示mRNA水平表达成牙本质细胞特异的牙本质涎磷蛋白（DSPP）和牙本质基质蛋白-1（DMP-1）。结论：面突外胚间充质细胞在含有多种细胞因子的TGC—CM的作用下能分化为成牙本质样细胞,能为研究牙齿的分化和发育提供良好的模型和实验依据。     

牙周膜相关蛋白1在人牙周膜细胞成骨分化过程中的表达

目的 研究牙周膜相关蛋白1（PLAP-1）在人牙周膜细胞（PDLC）成骨分化过程中的表达变化,为明确PLAP-1 在牙周组织中的作用奠定基础.方法 酶消化法培养人PDLC,免疫细胞化学染色鉴定其来源和PLAP-1 的表达,茜素红染色和碱性磷酸酶（ALP）实验鉴定其成骨分化能力,定量反转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测其成骨分化过程中,PLAP-1、Periostin、RGD-CAP、RUNX2、OCN 和OPN mRNA 表达变化,Western blot 检测PLAP-1、RUNX2 和OCN 蛋白表达变化并进行统计分析.结果 培养的人PDLC 来源于间充质;人PDLC 矿化诱导21 d 后茜素红染色阳性,矿化诱导后7、14、21 d 时ALP 活性较对照组明显增高（P ＜ 0.05）,具有成骨分化能力;PLAP-1 免疫细胞化学染色阳性;定量RT-PCR 和Western blot 结果显示,人PDLC 在mRNA 和蛋白水平均表达PLAP-1,且mRNA 表达量随人PDLC 成骨分化过程发生变化,诱导14 d上调,诱导21 d 下调,较对照组有明显差异（P ＜ 0.05）,Western blot 检测蛋白表达显示类似的表达趋势.结论 PLAP-1 在基因及蛋白水平均高表达于人PDLC,其表达量随人PDLC 成骨分化成一定模式,提示其参与调控牙周膜的功能与稳定,但其精细的调控功能还有待进一步深入研究.     

miR-146a在人牙髓细胞中的表达及其作用研究

目的 检测miR-146a在正常及脂多糖（LPS）刺激的人牙髓细胞（hDPC）中的表达,探讨miR-146a对hDPC分泌炎性因子的影响及其机制.方法 （1）实时荧光定量聚合酶链反应（PCR）方法测定正常及LPS刺激的hDPC miR-146a的表达水平.（2） Lipofectamine 2000脂质体分别转染化学合成的miR-146a类似物（miR-146a mimics）、miR-146a抑制剂（miR-146a inhibitor）及其相应无关序列小RNA对照,转染24 h后1μg/ml LPS刺激hDPC,4h后实时荧光定量PCR检测白细胞介素6（IL-6）、IL-8 mRNA的表达,酶联免疫吸附试验（ELISA）检测细胞上清IL-6、IL-8的分泌;Western blot 法检测miR-146a下游靶标白细胞介素1受体相关激酶1（IRAK1）及肿瘤坏死因子受体相关因子6（TRAF6）的蛋白表达水平.两组比较采用独立样本t检验,多组比较采用方差分析.结果 （1）经LPS刺激的hDPC miR-146a表达水平高于正常hDPC（12 h：t=8.488,P=0.014;24 h：t=39.661,P＜0.001）.（2）转染miR-146a mimics的hDPC在1μg/mlLPS刺激下产生炎性因子IL-6、IL-8的水平低于阴性对照,差异有统计学意义（IL-6 PCR：P＜0.001,IL-6 ELISA：P＜0.001;IL-8 PCR：P＜0.001,IL-8ELISA：P=0.011）;过表达miR-146a后IRAK1及TRAF6蛋白水平明显下调（IRAK1：P=0.002; TRAF6：P＜ 0.001）.结论 miR-146a在LPS刺激的hDPC中表达上调,转染miR-146a可下调其靶基因IRAK1及TRAF6表达并降低IL-6、IL-8分泌,推测miR-146a参与牙hDPC的炎症反应调控.     

Potential Roles of Bone Morphogenetic Protein 9 in the Odontogenic Differentiation of Dental Pulp Cells

IntroductionThe differentiation of dental pulp cells (DPCs) plays an important role in the repair of dental pulp injury. Bone morphogenetic protein 9 (BMP9) is one of the most effective BMPs to induce the differentiation of stem cells. However, the role of BMP9 in promoting the odontogenic differentiation of DPCs and dentinogenesis is worth knowing.MethodsFluorescence in situ hybridization and immunohistochemistry staining were performed to detect the BMP9 expression in human dental pulp. BMP9 was overexpressed in human DPCs (hDPCs), and the mineralization of hDPCs was tested by alkaline phosphatase staining and alizarin red staining. The expression of odontogenic differentiation-related genes was examined by quantitative real-time polymerase chain reaction and western blotting. The subcutaneous transplantation experiment was performed to test the odonto-induction ability of BMP9 in vivo. The rat direct pulp-capping experiment was performed to test the function of BMP9 in promoting dentin formation.ResultsBMP9 showed an increased expression in odontoblast layer at both the mRNA and protein levels. BMP9 enhanced the mineralization and induced the expression of odontogenic differentiation-related genes in hDPCs. More mineralized nodules, and increased expression of dentin sialophosphoprotein (DSPP) and dentin matrix protein-1 (DMP1) were detected in the beta-tricalcium phosphate scaffold/cells composites of BMP9 group compared with the control group. Meanwhile, there was thicker reparative dentin formation in the BMP9 group in the rat pulp exposure experiment.ConclusionsBMP9 participates in the process of DPC differentiation and promotes DPC mineralization and dentinogenesis. BMP9 might be a potential therapeutic target in the repair of dental pulp injury.     

Toll样受体2激动剂Pam3CSK4对人牙髓细胞表达细胞因子的影响

目的研究Toll样受体2（TLR2）激动剂Pam3CSK4对体外培养人牙髓细胞（hDPC）表达细胞因子的影响。方法特异性配体Pam3CSK4体外活化hDPC表面TLR2,实时荧光定量聚合酶链反应（PCR）检测不同时间处理后hDPC内白细胞介素6（IL-6）、IL-8、IL-1β及半胱氨酸-X-半胱氨酸趋化因子配体10（CXCLl0）mRNA的表达水平;双抗体夹心ELISA法检测上述细胞上清液中IL-6、IL-8蛋白的表达水平;激光共聚焦观察TLR2-核因子κB（NF-κB）信号通路关键蛋白p65的胞内分布情况。结果1μg／mlPam3CSK4处理hDPC0、4、8、12h,荧光定量PCR结果显示,除IL-6mRNA表达水平最先于4h达峰值外（P=0．006）,IL-8、IL-1β及CXCLl0mRNA表达水平均于4h开始升高．8h达峰值（P〈0．001）：双抗体夹心ELISA法显示,hDPC上清液中IL-6及IL-8的蛋白表达于4h开始升高．8～12h趋于平稳。激光共聚焦显微镜发现,表达绿色荧光的NF-κBp65蛋白主要位于对照组细胞质．经1μg／mlPam3CSK4刺激75min后转移至胞核。结论特异性配体Pam3CSK4通过结合hDPC表面TLR2启动细胞内NF-κB信号通路进而激活其转录作用．诱导hDPC表达多种细胞因子．从而参与牙髓炎的早期免疫调控。     

锌指E盒结合同源框2在人牙髓组织和细胞的表达

目的：检测锌指E盒结合同源框2（ZEB2）在人牙髓组织和细胞中的表达,并初步探讨其意义。方法：制作牙髓组织石蜡切片,荧光原位杂交技术（FISH）检测 ZEB2的表达;实时荧光定量聚合酶链反应（RT-qPCR）检测正常及TGF-β1刺激下人牙髓细胞（hDPCs）中ZEB2 mRNA表达水平;制作hDPCs细胞爬片, FISH检测ZEB2的表达。结果： FISH结果显示ZEB2在牙髓组织中主要表达于成牙本质细胞层,在牙髓细胞呈弱阳性表达。 RT-qPCR结果显示TGF-β1的作用促进ZEB2的表达,且具有浓度和时间依赖性,5ng/ml TGF-β1刺激ZEB2表达达最大（P〈0.05）;5ng/ml TGF-β1刺激后, ZEB2 mRNA在24h内表达逐渐上调,24h达峰值（P〈0.05）。 FISH结果示ZEB2在正常hDPCs胞质和胞核均呈弱阳性表达, TGF-β1刺激24h后ZEB2表达增强,胞核表达明显。结论： ZEB2在牙髓组织中主要表达于成牙本质细胞层,正常hDPCs中弱阳性表达,而TGF-β1可促进hDPCs中ZEB2表达,提示ZEB2可能通过参与TGF-β1信号通路调控hDPCs的成牙本质向分化过程。     

Leptin Induces Odontogenic Differentiation and Angiogenesis in Human Dental Pulp Cells via Activation of the Mitogen-activated Protein Kinase Signaling Pathway

Introduction

Up-regulation of odontogenic differentiation, dentin formation, and angiogenesis in dental pulp are key factors in vital pulp therapy. The aim of this study was to investigate whether leptin could promote odontogenic differentiation and angiogenesis in human dental pulp cells (hDPCs). In addition, the involvement of the intracellular signaling pathway in these effects was determined.

重组人结缔组织生长因子对牙髓细胞增殖与成牙本质分化的影响

目的：研究重组人结缔组织生长因子（recombinant connective tissue growth factor, rCTGF）对牙髓细胞（human dental pulp cells,hDPCs）增殖及分化的影响。方法：利用不同浓度（0、1、10、100 ng/mL）rCTGF分别处理牙髓细胞,CCK8法检测牙髓细胞增殖情况;茜素红染色和半定量试验检测细胞矿化结节的形成变化,qRT-PCR测定成牙本质分化相关基因DMP-1、DSPP和OC的表达情况,Western 免疫印迹法测定rCTGF刺激牙髓细胞后,ERK1/2信号通路的磷酸化水平。采用SAS 9.3软件包对数据进行统计学分析。结果：高浓度的rCTGF（100 ng/mL）可以促进牙髓细胞增殖;经矿化诱导后,10 ng/mL rCTGF促进牙髓细胞矿化结节形成的效果最好,钙盐沉积量最明显（P<0.05）,成牙本质分化相关基因DMP-1、DSPP的表达显著上调（P<0.05）。Western 免疫印迹结果显示,10 ng/mL rCTGF刺激牙髓细胞后,p-ERK1/2蛋白的表达升高。结论：rCTGF可能通过激活ERK1/2信号通路,促进牙髓细胞的增殖与分化。     

转录因子Nanog过表达对人牙髓细胞增殖及多向分化能力的影响

目的探讨过表达多能相关转录因子Nanog对人牙髓细胞增殖及多向分化能力的影响。 方法构建过表达Nanog的慢病毒载体质粒pSIN-EF2-Nanog-IRES-GFP-puro,采用psPAX和pMD2.G慢病毒包装系统转入293T细胞进行病毒液的生产和收取,转染生长良好的第3代人牙髓细胞,构建稳定过表达Nanog的人牙髓细胞株,以空载体转染的细胞为对照组,对细胞进行成脂及成牙本质诱导。采用BrdU法检测细胞的增殖情况,检测多能性转录因子Oct4和Sox2的表达,以及细胞成脂、成牙本质分化能力。采用单因素方差分析数据。 结果成功构建Nanog过表达的人牙髓细胞株;BrdU法检测结果显示,Nanog过表达组比对照组细胞增殖能力强（F = 90.421,P = 0.000）。过表达组Oct4、Sox2 mRNA和蛋白表达水平明显高于对照组（F_{Oct4 mRNA} = 71.649,P_{Oct4 mRNA}=0.000;F_{Sox2 mRNA} = 106.278,P_{Sox2 mRNA} = 0.000;F_Oct4蛋白 = 41.632,P_Oct4蛋白 = 0.002;F_Sox2蛋白 = 38.962,P_Sox2蛋白 = 0.002）。在矿化诱导条件下,Nanog过表达组DSPP、DMP1和OCN表达量、矿化结节产生量高于对照组（F_DSPP = 15.261,P_DSPP<0.05;F_DMP1 = 16.235,P_DMP1<0.05;F_OCN = 17.019,P_OCN<0.05）;成脂诱导21 d后,Nanog过表达组LPL和PPARγ2表达量及脂质产生高于对照组（F_LPL = 15.542,P_LPL<0.05;F_PPARγ2 = 10.437,P_PPARγ2<0.05）。 结论过表达Nanog能提高人牙髓细胞增殖能力,促进多能性转录因子Oct4、Sox2的表达,增强细胞多向分化能力。     

高迁移率族蛋白B1在人牙髓细胞成牙本质分化中的表达

目的:检测人牙髓细胞(human dental pulp cells,hDPCs)诱导矿化过程中高迁移率族蛋白B1(high-mobility group box 1,HMGB1)的表达变化,探讨HMGB1在人牙髓细胞损伤修复中的可能作用。方法:组织块法分离培养hDPCs,收集矿化诱导0、3、7、11、14d后hDPCs的mRNA、蛋白质及细胞爬片,实时荧光定量反转录聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白质印迹法(western blot)分别检测HMGB1、牙本质涎磷蛋白(dentin sialophosphoprotein, DSPP)、牙本质基质蛋白1(dentin matrix protein 1, DMP1)及碱性磷酸酶(alkaline phosphatase, ALP)的mRNA及蛋白表达水平;并检测ALP活性,免疫荧光检测HMGB1在hDPCs矿化过程中的表达。结果:hDPCs矿化诱导后,DMP1、DSPP、ALP及HMGB1的mRNA表达显著性上调,DMP1、DSPP和ALP的mRNA以及碱性磷酸酶活性在诱导7 d、11 d和14 d后与对照组间差异有统计学意义(P<0.05),HMGB1mRNA在矿化诱导11d和14d后与对照组的差异具有统计学意义(P<0.05)。蛋白印迹法检测示细胞内各矿化标记的蛋白表达均较对照组上调,而细胞内HMGB1的蛋白表达较对照组下调。免疫荧光结果显示hDPCs矿化过程中,HMGB1逐渐从胞核转移至胞浆。结论:在hDPCs诱导成牙本质细胞分化过程中,HMGB1在mRNA水平上与DMP1、DSPP和ALP的表达变化趋势相似,而细胞内HMGB1蛋白水平表达下调,且HMGB1在hDPCs细胞内出现转位,提示HMGB1与hDPCs的成牙本质分化有关,可能在牙髓细胞损伤修复中发挥作用。