RNA干扰技术抑制非小细胞肺癌表皮生长因子受体的表达

目的　观察RNA干扰技术是否能有效抑制非小细胞肺癌 (NSCLC)细胞株SPC A 1细胞表皮生长因子受体 (EGFR)的表达。方法　体外化学合成EGFR序列特异性双链RNA(dsRNA) ,与Lipofectamine 2 0 0 0结合后转染细胞 (分 4个组 ,A组 :加入无血清DMEM 5 0 0 μl;B组 :加入Lipofectamine2 0 0 0稀释液 2 5 0 μl及无血清DMEM 2 5 0 μl;C组 :加入非特异性dsRNA/Lipofectamine复合物 5 0 0 μl;D组 :加入dsRNA EGFR/Lipofectamine复合物 5 0 0 μl) ,用Westernblot和流式细胞仪检测EGFR表达。流式细胞仪测细胞周期 ,结合集落形成、化疗敏感性分析观察SPC A 1细胞生物学特性的改变。结果　与A组比较 ,D组EGFR数量减少了 71 31% (P <0 0 0 1) ,B组和C组分别降低了 9 0 %和 16 2 % (P >0 0 5 )。与A组比较 ,D组细胞生长抑制了 78 3% ,集落形成抑制了 6 6 8%。D组G0 G1期细胞百分数较A组增加了 17 4 8% ,D组进入S期的细胞百分数较A组减少了 19 2 0 %。据Origin 6 0计算的IC50 ,dsRNA EGFR可将细胞对顺铂的敏感性提高约 7倍。结论　dsRNA EGFR可有效抑制SPC A 1细胞EGFR表达 ,将更多的细胞阻滞在G0 G1期 ,抑制细胞增生 ,提高细胞对顺铂的敏感性 ,RNA干扰技术为NSCLC基因治疗提供了新策略。     

基质金属蛋白酶-9表达与非小细胞肺癌侵袭和转移的关系

非小细胞肺癌( NSCLC)占肺癌80％以上,常常在病变后期才被诊断出,大部分已发生浸润、转移,预后极差.细胞外基质(ECM)降解是引起肺癌侵袭、转移发生的主要因素.基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinases,MMP)是一大族对ECM成分有特异降解作用的蛋白酶,通过降解ECM在NSCLC浸润和转移中起重要作用.MMP-9在体内、外多种恶性肿瘤中呈过表达,且可特异性降解基底膜,已成为MMP家族在恶性肿瘤进展方面的研究热点.     

桩蛋白和基质金属蛋白酶-9在非小细胞肺癌组织中的表达及临床意义

目的探讨桩蛋白(Paxillin)和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)在非小细胞肺癌(Non-small cell lung cancer,NSCLC)组织中的表达及临床意义。方法采用免疫组化Enlivision法检测60例NSCLC和38例周围正常肺组织中Paxillin、MMP-9的表达,分析其表达与NSCLC临床病理特征的关系及两者表达的相关性。结果 Paxillin、MMP-9在NSCLC组织中的表达率均明显高于正常肺组织,且其高表达与淋巴结转移密切相关(P0.05),与性别、年龄、吸烟及病理类型无关(P0.05);Paxillin与MMP-9在NSCLC组织中的表达呈正相关关系(P0.05)。结论 Paxillin、MMP-9的表达可能与NSCLC的发生发展、侵袭转移有关,两者有望成为判定NSCLC及预测其侵袭转移能力的指标。     

肺癌相关抗原检测对非小细胞肺癌的诊断意义

目的探讨肺癌相关抗原（lung tumor antigen LTA）在纤维支气管镜支气管肺泡灌洗液、胸水和血清中的检测结果对肺癌的临床诊断意义。方法收集72例非小细胞肺癌（non-small cell lung cancerNSCLC）伴胸腔积液患者和对照组68例肺部良性病变（benign lungdisease BLD）患者的支气管肺泡灌洗液、胸水及血清样本,运用LTA检测试剂用快速乳胶凝集法分别检测,并对所得数据进行统计分析。结果肿瘤组病人支气管肺泡灌洗液、胸水和血清的LTA检测阳性率分别为58％、67％和75％,对照组三者的阳性检出率分别为22％、17％和20％,两组比较均有明显差异（P〈0．05）。LTA阳性检出率以肿瘤组的血清样本最高,达75％。特异性以胸水样本最高,为82％。结论支气管肺泡灌洗液、胸水和血清IJTA检测对肺癌的诊断有一定的临床参考意义。     

非小细胞肺癌患者CD166、MMP-9表达水平与转移及预后的关系

目的分析非小细胞肺癌(NSCLC)患者CD166、MMP-9表达水平与转移及预后的关系。方法选取2014年1月到12月内在我院接受肺癌根治术切除的82例NSCLC患者,采用免疫组化法对所有患者行CD166、MMP-9表达水平的检测并对比检测结果。结果 CD166在有无淋巴结转移以及TNM分期中的组内差异较大,差异具有统计学意义(P0.05);MMP-9在有无淋巴结转移以及TNM分期中的组内差异较大,P0.05;经过Spearman相关性分析,NSCLC患者的CD166、MMP-9与淋巴结转移成负相关。结论 MMP-9以及CD166在NSCLC转移淋巴结中为高表达,其淋巴结转移可能与CD166或MMP-9有关,且CD166及MMP-9的阳性表达患者的预后较差。     

鸦胆子苦醇抑制人非小细胞肺癌A549细胞转移的机制

目的探讨鸦胆子苦醇对人非小细胞肺癌A549细胞转移能力的抑制作用及其机制。方法采用Reed-Muench法计算鸦胆子苦醇对A549细胞的半数致死浓度(LC50);通过CCK-8测定细胞活力绘制增殖曲线和流式细胞周期测定鸦胆子苦醇对A549细胞增殖能力的影响;采用Transwell法检测鸦胆子苦醇对A549细胞株转移的抑制情况,以及在半数致死浓度的鸦胆子苦醇浓度下不同时间对细胞转移的抑制率;应用Western印迹法检测细胞转移相关蛋白的表达情况。结果非小细胞肺癌A549细胞的增殖能力在鸦胆子苦醇处理后基本没有变化;鸦胆子苦醇处理后A549细胞的转移能力与对照组相比明显下降,且在一定作用时间范围内有时间依赖性;肿瘤转移相关蛋白(BRF)2、胰岛素样生长因子结合蛋白-2(IGFBP-2)、CD151的表达水平在鸦胆子苦醇处理后的细胞中明显下调。结论鸦胆子苦醇是潜在的抗非小细胞肺癌的药物,有必要进一步阐明其抗非小细胞肺癌的分子机制,为临床治疗提供一定的指导意义。     

微小miR水平联合检测在非小细胞肺癌转移中的意义

目的 分析微小RNA(miRs)水平联合检测在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer, NSCLC)预测转移中的意义。方法 选择2019年1月至2021年12月我院收治的83例NSCLC患者为对象,29例淋巴结转移为观察组,54例无转移为对照组。检测血清miR-22、miR-126、miR-134-5p、miR-618、miR-885-5p相对表达量及血清基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、CC趋化因子配体20(CCL20)水平;Logistic分析NSCLC淋巴结转移的危险因素;ROC分析风险因素及危险因素。结果 观察组肿瘤分期Ⅲ期、低分化的患者比例高,肿瘤直径较大,血清miR-134-5p、miR-618表达低,miR-885-5p表达高,血清MMP-9、CCL20水平高(P<0.05);经ROC分析,肿瘤最大径≥3.172 cm、miR-134-5p≤0.719、miR-618≤0.736、miR-885-5p≥0.803、MMP-9≥912.562 ng/ml、CCL20≥64.287 ng/L是NSCLC淋巴结...     

非小细胞肺癌中MMP-9、TIMP-1表达与转移和预后的关系

恶性肿瘤的浸润和转移是一个多阶段、多步骤、多种成分参与的序贯连续过程 ,肿瘤组织对细胞外基质 (ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｍａｔｒｉｘ,ＥＣＭ)的降解是肿瘤细胞能否形成转移的关键步骤。目前研究证实基质金属蛋白酶 (ｍａｔｒｉｘｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ ,ＭＭＰ)与金属蛋白酶组织型抑制因子 (ｔｉｓｓｕｅｉｎｈｉｂｉｔｏｒｏｆｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ ,ＴＩＭＰ)是参与和调控此过程的重要胶原酶系统[1] 。材料与方法　 65例非小细胞肺癌 (ＮＳＣＬＣ)组织蜡块来自中国医科大学附属第一医院 1989～ 1992年…     

miR-200通过靶向PD-L1抑制非小细胞肺癌A549细胞增殖、迁移和侵袭的研究

目的 探讨miR-200对非小细胞肺癌A549细胞的增殖、迁移和侵袭的影响及其与程序性死亡受体配体-1(Programmed death-ligand 1,PD-L1)的靶向关系.方法 选取非小细胞肺癌细胞株A549,正常肺成纤维细胞HLF-1为研究对象,根据A549细胞转染物质的不同,分为NC组(未进行任何处理的A5...     

慢病毒载体介导人非小细胞肺癌A549细胞Akt2基因靶向抑制

目的通过构建慢病毒shRNA表达载体,靶向抑制Akt2基因的表达,获得稳定干扰Akt2基因的细胞克隆,为进一步探讨Akt2的功能奠定基础。方法设计并合成针对Akt2靶基因的双链寡核苷酸序列,经退火、酶切、连接反应,将干扰序列插入pGCsil-GFP质粒,经感受态细胞转化、阳性克隆测序鉴定所插入的片段,经转染及慢病毒包装,收集浓缩病毒进行滴度测定,感染至人肺腺癌细胞A549,通过无菌流式细胞分选GFP强阳性细胞,并应用荧光定量PCR及Western-blot验证干扰效果。结果重组pGCsil-shAkt2-GFP质粒载体经阳性克隆测序鉴定显示插入序列与shAkt2干扰序列完全符合,测定重组慢病毒vshAkt2滴度为3E＋9TU/ml。重组慢病毒shAkt2感染A549细胞,经流式细胞术分选90.1%GFP为强阳性细胞群。通过qRT-PCR与western blot检测Akt2mRNA及蛋白表达水平,提示与正常对照组比较,shAkt2组细胞中Akt2mRNA水平下降63.39%,蛋白水平减少91.56%。结论本研究所构建的慢病毒shAkt2表达载体,能够在A549细胞内稳定、有效的抑制靶基因Akt2的表达,为深入研究Akt2在非小细胞肺癌（NSCLC）中的作用奠定了基础。     

非小细胞肺癌外周血T淋巴细胞活化抗原表达的临床研究

ＨＬＡ ＤＲ是人类主要组织相容性复合体 (ＭＨＣ)Ⅱ类分子的主要抗原之一 ,ＣＤ2 5是细胞膜上的白介素 2受体 (ＩＬ 2Ｒ) ,ＣＤ69是一种早期激活抗原 ,三者均为Ｔ淋巴细胞表面的细胞表型 ,其表达水平与肿瘤的关系已成为目前研究的热点。我们进行了这方面研究 ,以期探讨肺癌患者的细胞免疫功能状态及临床意义。对象与方法　对象 :肺癌患者 50例 ,均经手术病理和穿刺活检证实。其中男性 33例 ,女性 1 7例。年龄 35～ 76岁 ,平均 (50 0± 3 5)岁。进行手术的有 2 0例 ,化疗的有 30例。有淋巴结转移者 38例 ,无淋巴结转移者 1 2例。组织学分类…     

非小细胞肺癌脑转移的治疗进展

<正>非小细胞肺癌(NSCLC)约占肺癌的80%〔1,2〕,5年生存率仅为15.6%,约2/3患者就诊时已发生区域或远处转移〔3〕。其中,首诊NSCLC的患者约有10%伴有脑转移;初诊没有脑转移的NSCLC患者也有30%~50%最终发生脑转移〔4〕,其预后极差,未经治疗患者的中位生存期(MST)仅1~2个月。随着影像学技术的进步、治疗手段的发展及各种靶向药物的应用,生     

PCSK9及其抑制剂在非小细胞肺癌中的研究进展

目前针对非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer, NSCLC)患者的内科治疗主要包括靶向基因治疗和免疫抑制剂治疗,然而对于靶向基因阴性的晚期非小细胞肺癌患者来说,免疫检查点抑制剂(immune checkpoint inhibitors,ICIs)治疗临床获益有限,近年来有研究发现前蛋白转化酶枯草杆菌蛋白酶/kexin 9型(propmtein convertase subtilisin/kexin 9,PCSK9)抑制剂在某些恶性肿瘤有一定的治疗作用。本文通过系统检索目前PCSK9与NSCLC的相关研究可发现PCSK9在肺癌细胞的迁移、凋亡及化学耐药中均发挥调节作用。抑制PCSK9或可成为治疗NSCLC的一种可行方法。     

MAGE mRNA和LUNX mRNA在非小细胞肺癌淋巴结的表达

目的 了解黑色素瘤抗原基因(MAGE mRNA)和肺特质性X蛋白基因(LUNX mRNA)在非小细胞肺癌(NSCLC)患者纵膈淋巴结中的阳性率.方法 利用RT-PCR方法检测26例患者的123组淋巴结MAGE mRNA和LUNX mRNA的表达.结果 LUNX mRNA表达在NSCLC淋巴结微转移阳性率分别为42.3％ (52/123)和34.1％ (42/123),差异无显著性(P＞0.05).非MAGE肺癌患者淋巴结四种LUNX mRNA未见表达.常规病理检查和RT-PCR检测MAGE和LUNX mRNA在淋巴结微转移阳性表达率为30.1％ (37/123)和44.7％ (55/123),差异有显著性(P＜0.05).结论 MAGE mRNA是应用RT-PCR法检测NSCLC淋巴结微转移的较好的分子标志物,与LUNX mRNA联合检测可能有助于早期诊断肺癌淋巴结微转移.     

非小细胞肺癌组织MMP9、EGFR的表达及意义

目的检测非小细胞肺癌(NSCLC)组织中基质金属蛋白酶(MMP-9)和表皮生长因子受体(EGFR)的表达对NSCLC发生、发展的影响。方法分析其表达与肺癌发生、发展的相关性;结果 NSCLC组织中MMP-9、EGFR的表达均高于正常组织,其比较差异有显著性(P<0.05)。结论检测NSCLC的MMP-9、EGFR的表达对判断肿瘤的恶性程度和预后评估有一定的意义。     

Survivin蛋白在非小细胞肺癌中表达的研究

目的探讨Survivin、突变型P53、Bcl-2蛋白在非小细胞肺癌组织中的表达及其三者之间的关系。方法用链霉菌生物素蛋白-过氧化物酶免疫组织化学法(SP法)检测71例手术切除的非小细胞肺癌(NSCLC)组织和30例正常肺组织中Survivin、突变型P53、Bcl-2蛋白的表达;用原位末端标记(TUNEL)法检测凋亡指数(AI)。结果在NSCLC组织中Survivin、突变型P53、Bcl-2蛋白的表达率分别为61.97%、52.52%、22.54%;30例正常肺组织中无Survivin、突变型P53蛋白表达(P<0.001),Bcl-2蛋白表达率为3.33%(P<0.005);肺癌Survivin阳性、阴性表达组织、正常肺组织的平均凋亡指数分别为11.86±4.67‰、18.67±7.93‰、23.32±6.98‰,肺癌Survivin阳性表达组织与正常肺组织的平均AI相比(P<0.001),肺癌Survivin阴性表达组织与正常肺组织的平均AI相比(P<0.05),差异有显著的统计学意义。结论Survivin蛋白在肺癌组织中的表达,提示该凋亡抑制蛋白在肺癌的发生发展中起抑制癌细胞凋亡的重要作用,AI显示出了Survivin蛋白的抗凋亡作用,Survivin基因有望成为基因治疗的新靶点。     

靶向表皮生长因子受体的RNA干扰技术对非小细胞肺癌细胞株A549细胞抑制及顺铂敏感性的研究

目的 利用RNA干扰(RNAi)技术,将携带表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)同源基因的重组质粒稳定转染非小细胞肺癌细胞株A549细胞,观察其对A549细胞生长抑制作用及对顺铂敏感性的变化.方法 根据RNAi原理,体外设计并合成靶向EGFR特异性干扰片段,即h-EGFR,以pGensil-1为载体,构建重组质粒pGensil-1-EGFR,以Lipofectamine 2000介导转染肺腺癌细胞株A549细胞,经G418筛选后挑选出稳定转染的单克隆细胞.将所挑选出的单克隆细胞大量培养后加入不同浓度顺铂(40 mg/L、10 mg/L、2.5 mg/L),采用四甲基偶氮唑蓝比色法检测细胞活力,绘制生长曲线,流式细胞仪分析细胞周期及细胞凋亡的变化,观察RNAi对A549细胞抑制作用及是否与顺铂有协同作用.结果 与对照组、阴性对照组相比,从第2天起实验组生长缓慢,吸光度有统计学差异(P＜0.05);顺铂或联合dsRNA-EGFR对A549细胞有抑制作用,且随着浓度的增加和时间的延长抑制作用增强,dsRNA-EGFR联合顺铂与等浓度顺铂吸光度有统计学差异(P＜0.05),顺铂作用24 h后40 mg/L、10 mg/L、2.5 mg/L顺铂抑制率分别提高了7.8%、30.70%、34.42%.实验组G0/G1细胞百分比较对照组增加了13.84%,较阴性对照组增加了14.65%,进入S期的细胞百分比较对照组减少了19.10%,较阴性对照组减少了18.68%;40 mg/L、10 mg/L、2.5 mg/L顺铂处理细胞24 h后,与对照组相比,凋亡率明显增高(P＜0.05),且浓度越高,凋亡率越高;同一浓度顺铂作用下转染pGensil-1-EGFR的A549细胞凋亡率较A549细胞增高(P＜0.05).结论 dsRNA-EGFR可有效抑制A549细胞生长,使细胞阻滞在G0-G1期,顺铂可有效诱导细胞凋亡,RNAi与顺铂具有协同效应,提高细胞对顺铂的敏感性,RNAi技术为非小细胞肺癌基因治疗提供了新策略.     

Cortactin与非小细胞肺癌侵袭和转移研究进展

皮层肌动蛋白（Cortactin）是一种细胞骨架蛋白,通过细胞运动、细胞外基质降解、失巢凋亡及肿瘤细胞与细胞微环境基质之间黏附等多种途径参与肿瘤侵袭和转移.最近研究表明,Cortactin在非小细胞肺癌、结直肠癌、食管癌、肝癌、乳腺癌、骨肉瘤等肿瘤组织中过度表达,与多种肿瘤的侵袭和转移密切相关.本文就Cortactin的结构、在肿瘤侵袭和转移中的作用及与非小细胞肺癌的关系作一综述.     

非小细胞肺癌侵袭相关的分子学研究进展

非小细胞肺癌是常见的恶性肿瘤之一,病死率高,且易发生局部浸润及远处转移.侵袭是一个极其复杂的多步骤发展过程,这一过程涉及到多种基因,黏附分子、细胞因子、生长因子、酶,气体微环境等因素的异常.研究侵袭相关分子在肺癌侵袭过程中的作用有助于阐明侵袭的发生机制,进而为肺癌的治疗提供一定的理论依据和可能的治疗靶点.