尿道下裂病人中SRY基因缺失的快速检测

目的　建立一种快速筛查尿道下裂患者中SRY基因缺失的检测方法。方法　设立实验组 95例 (尿道下裂患者 ) ,阳性对照组 96例 (健康男性 ) ,隐性对照组 96例 (健康女性 ) ,分别采取外周血 ,提取DNA。采用套式PCR的方法 (加入Y染色体SRY基因核心片段引物 :76 5 76 6 ,β 珠蛋白基因引物 :10 8 B) ,分别扩增各组DNA ,使用琼脂糖凝胶电泳和紫外线荧光显像技术检测结果。结果　发现实验组有 4例SRY缺失 ,均为重度尿道下裂 ;阳性对照组均具有SRY基因 ;阴性对照组均无SRY基因。结论　部分重度尿道下裂患者有SRY基因的缺失 ,套式PCR是一种检测尿道下裂患者中SRY基因缺失的稳定、快速、有效的方法。     

1例与Y染色体畸变相关的无性腺症、矮身材和蹠骨畸形

目的:报告1例与Y染色体畸变相关的无性腺症、矮身材和蹠骨畸形的罕见病例。方法:对患者进行常规的染色体核型分析;选用X/Y着丝粒探针和Y染色体上性别决定基因(SRY)探针对患者进行原位荧光杂交(FISH);对SRY基因的HMG进行序列分析;应用多重PCR检测Y染色体微缺失;进行矮身材同源框基因(SHOXY)微卫星多态性分析;进行人绒毛膜促性腺激素(HCG)兴奋试验。结果:染色体核型分析显示患者核型为46,X del(Y)(q11.23);患者FISH显示只有1个X染色体和Y染色体杂交信号,但SRY有2个信号,分别位于Y染色体的短臂和长臂上。结合染色体核型和FISH结果,患者核型疑为46,X del(Y)(q11.23)(pter→p11.3::q11.23→p11.3:).ish del(Y)(SRY++,DYZ3+);Y染色体微缺失检测发现有AZFc的缺失;患者的SRY的HMG序列分析结果未显示有突变;SHOXY微卫星多态性分析未发现父亲来源的基因有缺失;兴奋试验显示HCG刺激后,雄激素、雌激素无升高反应,提示为无性腺症。结论:患者的无性腺症、矮身材和蹠骨畸形与Y染色体结构畸变有关,推测与SRY基因,SHOXY基因相关。     

先天性尿道下裂与SRY基因关系的探讨

目的 探讨尿道下裂与SRY基因的关系及意义。结果 采用PCR方法对42例先天性尿道下裂患者外周血白细胞进行SRY基因检测。结果 发现2例染色体核型为46,XY患者SRY基因缺失,DNA样品加入EF3、ER3引物及新Taq酶后,PCR反应结果可见332bp的Sox9基因片段,对照46,XY正常成年男性基因组DNA扩增产生436bpSRY基因片段。结论 （1）SRY基因不是性别决定的唯一基因。SRY基因缺失或突变可能导致性发育的一系列异常改变,尿道下裂的发生与SRY的缺失、变异有关。（2）先天性尿道下裂是一种性别发育异常,尿道缺失是性腺发育不全表现。（3）对尿道下裂患者进行SRY基因检测有一定的临床意义。     

46,XX男性性反转综合征1例的基因检测

目的探讨46，XX男性性反转综合征的临床表现及诊治要点。方法回顾分析1例46，XX男性性反转综合征患者的临床表现、激素水平及核型分析结果，并采用聚合酶链反应（PCR）及荧光原位杂交技术（FISH）对其Y染色体上的性别决定区（SRY）基因进行检测。结果通过PCR扩增检测发现患者SRY基因阳性，但FISH显示其SRY基因易位于X染色体上。结论SRY基因是参与性别决定和分化的关键基因，对其进行检测有利于明确性反转综合征的临床诊断。SRY基因易位于X染色体或其他常染色体是导致性反转综合征的重要原因之一。     

双色间期荧光原位杂交技术在异性间造血干细胞移植中的应用

目的 探讨双色间期荧光原位杂交（FISH）法在检测异性异基因造血干细胞移植后植活标志及微量残留病灶（MRD）中的作用。方法 采用X、Y染色体探针和间期双色间期FISH法检测35例异性异基因造血干细胞移植受者移植后不同时期的性染色体荧光杂交信号。并设对照组，分析检测的有效率。结果 35例受者移植后的细胞遗传学及双色间期FISH性染色体分析均可见植入证据。当受者出现原病复发时，双色间期FISH性染色体可检测出受者源克隆的增加；其再次缓解后受者源克隆也相应减少。在移植后不同时间，当染色体分析为100％XX或100％XY结果时，双色间期FISH可显示不同比例的受者源染色体。结论 双色间期FISH应用于异性异基因造血干细胞移植后植活标志及MRD检测，操作简单快速，是细胞形态学及细胞遗传学检查很好的补充。     

男性儿童常见外生殖器畸形的异常染色体核型特点

目的探讨男性儿童常见外生殖器畸形的异常染色体核型特点。方法回顾性分析2012年1月至2017年12月浙江大学医学院附属儿童医院收治的2 408例患儿的临床资料。平均年龄(38±7)个月。其中尿道下裂1 115例, 隐睾189例, 小阴茎304例, 隐匿性阴茎681例, 性发育异常119例。所有患儿均行外周血染色体550带检测, 并分析染色体的核型。结果本组2 408例, 共检测出异常染色体核型131例, 检出率5.4%, 其中染色体数量异常46例, 结构异常85例;性染色体异常64例, 常染色体异常67例。最常见的异常染色体核型为46, XY, inv(9)(p12q13), 共28例, 占比21.4%;其次为47, XXY, 共16例, 占比12.2%。性发育异常、尿道下裂、隐睾、小阴茎、隐匿性阴茎患儿染色体异常检出率分别为12.6%(15例)、5.5%(61例)、5.3%(10例)、4.9%(15例)、4.4%(30例)。结论男性常见外生殖器畸形患儿中染色体异常不罕见。染色体结构异常较数量异常更常见, 性染色体异常与常染色体异常占比相当。     

1例与Y染色体畸变相关的无性腺症、矮身材和踱骨畸形

目的：报告1例与Y染色体畸变相关的无性腺症、矮身材和踱骨畸形的罕见病例。方法：对患者进行常规的染色体核型分析；选用X／Y着丝粒探针和Y染色体上性别决定基因（SRY）探针对患者进行原位荧光杂交（FISH）；对SRY基因的HMG进行序列分析；应用多重PCR检测Y染色体微缺失；进行矮身材同源框基因（SHOXY）微卫星多态性分析；进行人绒毛膜促性腺激素（HCG）兴奋试验。结果：染色体核型分析显示患者核型为46，Xdel（Y）（q11．23）；患者FISH显示只有1个x染色体和Y染色体杂交信号，但SRY有2个信号，分别位于Y染色体的短臂和长臂上。结合染色体核型和FISH结果，患者核型疑为46，Xdel（Y）（q11．23）（pte—p11．3：：q11．23→p11．3：）．ishdel（Y）（SRY＋＋，DYZ3＋）；Y染色体微缺失检测发现有AZFc的缺失；患者的SRY的HMG序列分析结果未显示有突变；SHOXY微卫星多态性分析未发现父亲来源的基因有缺失；兴奋试验显示HCG刺激后，雄激素、雌激素无升高反应，提示为无性腺症。结论：患者的无性腺症、矮身材和踱骨畸形与Y染色体结构畸变有关，推测与SRY基因，SHOXY基因相关。     

200例稽留流产绒毛染色体的间期FISH分析

目的探讨荧光标记的原位杂交技术(FISH)检测稽留流产绒毛组织中染色体异常的临床价值。方法收集2016年1月至2018年9月在我院就诊/住院的稽留流产患者200例为研究对象,手术治疗后留取绒毛组织样本进行FISH检测,严格按照试剂盒说明书操作,应用13、16、18、21、22、X和Y染色体特异性DNA探针进行杂交处理,并对结果进行分析。结果 200例绒毛组织样本的间期FISH均获得杂交信号,其中112例(56.00%)杂交结果提示染色体异常。其中,常染色体单体2例,占1.79%(2/112);常染色体三体型72例,占64.29%(72/112);性染色体单体型19例,占16.96%(19/112);性染色体三体型2例,占1.79%(2/112);三倍体10例,占8.93%(10/112);四倍体、嵌合体各1例,分别占0.89%(1/112);其他5例,占4.46%(5/112)。结论染色体异常可能是稽留流产发生的主要因素之一;间期FISH的检测方法对于稽留流产的病因诊断有一定的预测价值,但是是否值得临床普及推广还需要进一步探讨验证。     

4例SRY阳性的46,XX男性综合征患者临床及细胞分子遗传学研究

目的:探讨SRY阳性的46,XX男性综合征患者的临床及细胞分子遗传学特征。方法:分析4例SRY阳性的46,XX男性综合征患者的临床特点,并进行染色体核型分析、荧光原位杂交(FISH)、SRY基因检测、Y染色体微缺失等细胞和分子遗传学检测。结果:4例患者社会性别均为男性,身材低于正常男性均值。均因不育就诊,双侧睾丸体积小、质地软,精液检查均为无精子症。阴茎发育正常。性激素检查示高促性腺激素性性腺功能不全。染色体核型均为46,XX,Y染色体微缺失检测示AZFa,b,c区域均缺失。SRY基因均存在,FISH结果3例患者显示SRY基因易位于X染色体短臂。结论:SRY阳性的46,XX男性综合征患者常为男性表型,但睾丸发育不良,多伴有身材矮小和不育。患者的男性表型是由于基因组中存在SRY基因。无精子表型是由于缺失AZF。Y染色体长臂上可能存在与身高相关的基因。深入进行细胞、分子遗传学研究有助于揭示46,XX男性综合征基因型-表型的关系。     

1例45,X男性的临床及遗传特征并文献复习

目的:探讨1例身材矮小合并无精子的45,X不育男性的临床表型与核型的关系。方法:采用外周血染色体G显带进行核型分析,PCR及FISH对Y染色体上SRY、AZF等基因进行检测和定位。结果:外周血染色体G显带分析显示该患者核型为45,X,add(14)(p11)。PCR结果显示该患者SRY基因存在,AZFa、AZFb、AZFc、AZFd全部缺失。FISH结果证实该患者Y染色体短臂及着丝粒区存在,且易位至14号染色体短臂,Y染色体长臂大部分片段丢失,断裂位点位于q11近着丝粒区。该患者核型描述为45,X,der(Y)t(Y;14)(q11;q11.2),-14.ish(SRY+,CEP Y+,DYZ1-)。结论:该患者核型实质是Y染色体与14号染色体的不平衡易位,SRY基因的存在是男性化的关键,AZFa~d区缺失导致精子生成障碍,Y染色体长臂缺失可能与身材矮小相关。     

荧光原位杂交技术在血尿患者膀胱尿路上皮癌筛查中的应用

目的 评价荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridization,FISH)技术在血尿患者膀胱尿路上皮癌筛查中的临床应用价值,为从尿液脱落细胞中早期诊断膀胱癌提供新的途径.方法 选择20例健康正常人,通过FISH技术检测9号染色体p16位点、3号染色体、7号染色体及17号染色体变异情况,建立阈值.100例血尿患者留取晨尿,分别进行尿脱落细胞学检查和FISH技术检查.统计分析FISH方法的敏感度和特异度.结果 探针检测p16基因完全缺失阈值为3.9%,部分缺失为5.4%,扩增为3.2%;3号染色体缺失阈值为4.0%.扩增为3.5%;7号染色体缺失阈值为4.0%,扩增为2.8%;17号染色体缺失阈值为5.8%,扩增为3.4%.以至少两种探针检测结果超过阈值或一种探针检测结果至少存在两种异常为诊断阳性.FISH技术在血尿患者膀胱尿路上皮癌筛查中的敏感度和特异度分别为93.6%和100%,尿脱落细胞学检测分别为46.8%和100%.结论 FISH技术无创快速,对血尿患者膀胱尿路上皮癌筛查的敏感度优于尿脱落细胞学检查方法.     

1例男性不育患者与1例产前诊断胎儿的idic(Yp)细胞及分子遗传学分析

目的:综合应用细胞及分子遗传学技术检测1例男性不育患者和1例产前诊断胎儿,以明确idic(Y)的基因诊断,并指导临床咨询和患者生育。方法:常规外周血和羊水细胞培养制片,G、C显带核型分析及荧光原位杂交(FISH);常规提取外周血和羊水基因组DNA,进行微阵列比较基因组杂交(Array-CGH)及多重连接依赖探针扩增(MLPA)分析。结果:综合各项检测结果,2例患者均诊断为45,X/46,X,idic(Y)(p11.31)嵌合型,男性不育患者Y染色体基因组序列为chrY:2,710,250-57,428,567;SRY、ZFY、UTY及AZF等关键基因结构完整。产前诊断胎儿除AZFc区有父源性微缺失外,与男性不育患者结果相似。结论:idic(Y)(p11.31)可引发矮小及男性不育症状。在经典的核型分析和FISH基础上,综合应用Array-CGH、MLPA技术可以提高idic(Y)的诊断准确度,有助于其遗传基础与临床效应的研究及指导临床遗传咨询。     

4例SRY阳性的46，XX男性综合征患者临床及细胞分子遗传学研究

目的：探讨SRY阳性的46，XX男性综合征患者的临床及细胞分子遗传学特征。方法：分析4例SRY阳性的46，XX男性综合征患者的临床特点，并进行染色体核型分析、荧光原位杂交（FISH）、SRY基因检测、Y染色体微缺失等细胞和分子遗传学检测。结果：4例患者社会性别均为男性，身材低于正常男性均值。均因不育就诊，双侧睾丸体积小、质地软，精液检查均为无精子症。阴茎发育正常。性激素检查示高促性腺激素性性腺功能不全。染色体核型均为46，XX，Y染色体微缺失检测示AZFa，b，C区域均缺失。SRY基因均存在，FISH结果3例患者显示SRY基因易位于X染色体短臂。结论：SRY阳性的46，XX男性综合征患者常为男性表型，但睾丸发育不良，多伴有身材矮小和不育。患者的男性表型是由于基因组中存在SRY基因。无精子表型是由于缺失AZF。Y染色体长臂上可能存在与身高相关的基因。深入进行细胞、分子遗传学研究有助于揭示46，XX男性综合征基因型-表型的关系。     

性分化异常病人SRY基因检测的临床意义

目的：为探讨Y染色体上性别决定区基因（SRY）在性分化中的作用。方法：在染色体核型分析的基础上，应用聚合酶链反应（PCR）对4例性分化异常的病人进行SRY检测、结果：2例46，XX男性中1例SRY阳性，1例SRY阴性．2例46，XY女性SRY阳性。结论：SRY基因检测在性分化异常的诊断中有重要意义，但性别决定是一个复杂的过程，不排除还有除SRY以外的遗传机制参与。     

FISH技术对低级别尿路上皮癌复发、进展风险亚分层的研究

目的通过分析荧光原位杂交技术(FISH)检测的低级别尿路上皮癌(UC)的尿液标本结果以及相关临床资料,探讨FISH技术对低级别UC复发、进展风险进行亚分层的可能。方法从2009年1月到2015年1月间,收集桂林医学院附属医院及中山大学附属第三医院确诊为UC的患者107例,应用FISH技术检测患者尿液标本中的3、7、17、9p16号染色体,随访至2016年1月,平均47个月(6~80个月),结合临床资料,通过χ2检验分析染色体突变与低级别尿路上皮癌术后复发、进展的相关性。结果尿液中FISH检查出现CSP7/CSP17阳性并CSP3/GLPp16阳性者20例,CSP3/GLPp16阴性者28例,其中前者10例复发,8例进展;后者13例复发,10例进展;CSP7/CSP17阴性并CSP3/GLPp16阳性者36例,CSP3/GLPp16阴性者23例,其中前者8例复发,4例进展;后者5例复发,1例进展。通过χ2检验对CSP7/CSP17阳性者与CSP7/CSP17阴性者比较分析,CSP7/CSP17阳性和CSP3/GLPp16阳性比较分析,前者更易复发和进展(P0.05);CSP3/GLPp16阳性与CSP3/GLPp16阴性者、FISH全阴性者比较,CSP7/CSP17阳性中CSP3/GLPp16阳性者和CSP3/GLPp16阴性者比较,复发、进展皆无统计学意义(P0.05)。结论本研究证实FISH检查出尿液标本中的3、7、17、9p16染色体变异能协助低级别UC的风险分层,CSP7/CSP17阳性者易复发、进展,如果同时CSP3/GLPp16阳性则复发较早,CSP7/CSP17阴性者术后不易复发、进展。     

1例45,X不育症男性的分子遗传学特征

目的从1例45,X不育症男性的分子遗传学特征探讨无精子症或少弱精子症患者的遗传缺陷与精子生成障碍的关系,分析部分患者不育原因是否可能与染色体异常有关。方法采用常规染色体、FISH及分子检测技术,对该患者进行遗传学分析。结果常规染色体检测显示该患者核型为45,X,dic(Y;13)(q12;pl1)。且易位的染色体中只有一个着丝粒具有活性,其中72%的细胞Y染色体着丝粒失活,13号染色体着丝粒收缩,具有活性,其余28%的细胞13号染色体着丝粒失活。FISH与分子遗传学分析证实患者13号短臂增加部分来源于Y染色体,Y断裂位点位于q12异染色质区。近端包括AZF和SRY在内的所有Y常染色体部分与13号染色体短臂融合,形成一条双着丝粒染色体。其13号染色体与Y染色体功能基因区未发生任何缺失。核型描述为45,X,dic(Y;13)(q12;p11).ish(SRY+,DYZ3+,GLP13+)。结论本例遗传学分析结果提示部分男性不育症可能是由Y/常染色体易位造成减数分裂异常,导致生精受阻,精子生成大量减少而引发不育。     

羊水间期细胞荧光原位杂交检测残余风险评估:6125例产前细胞遗传学诊断回顾性分析

目的评估中孕期羊水间期细胞荧光原位杂交(FISH)检测之后漏诊非13、18、21、X、Y染色体的非整倍体异常核型的残余风险,从产前咨询的角度来评价间期FISH检测在产前诊断中的作用。方法对6 125例中孕期羊水传统核型分析的结果进行回顾性分析,假设这些病例均进行间期FISH检测,计算在三大产前诊断指征(孕妇高龄、孕母血清学筛查18-三体或21-三体高风险、妊娠23周前超声发现胎儿有结构异常)情况下间期FISH检测的检出率以及残余风险。结果从2011年1月至2014年9月共有6 125例单胎孕妇行中孕期羊水细胞核型分析,共检出207例(3.38%)异常核型。有161例(77.8%)为涉及13、18、21、X、Y染色体非整倍体的异常核型(包括嵌合体),其间期FISH检测结果为阳性。有46例(22.2%)异常结果是非13、18、21、X、Y染色体的非整倍体,其中包括平衡性结构重排31例(67.4%)、非平衡性结构重排14例(30.4%)、其他染色体非整倍体1例(2.2%)。在这46例异常核型中,有6例涉及21号染色体和1例涉及13号染色体的不平衡性重排的间期FISH检测结果为阳性,其余39例间期FISH检测结果均为阴性。计算间期FISH检测的检出率为81.2%(168/207),间期FISH检测的残余风险为0.65%(39/5957)。结论间期FISH检测是核型分析的有效补充,但不能取代核型,单纯行间期FISH检测进行产前诊断会漏诊约18.8%的染色体异常。在产前遗传咨询时应向病人解释间期FISH的检出率和残余风险,了解间期FISH的优点和局限性,帮助其选择合适的产前诊断手段。     

荧光原位杂交技术在膀胱肿瘤诊断中的应用

目的：评价荧光原位杂交技术（FISH）在膀胱肿瘤诊断中的应用价值。方法：20例正常人通过FISH技术检测9号染色体P16位点、3号染色体、7号染色体及17号染色体的变异情况，建立阈值。20例血尿患者留取晨尿，分别进行尿脱落细胞学检查和FISH检查。以至少两种探针检测结果超过阈值或一种探针检 测结果至少存在两种异常为诊断阳性。结果：20例血尿患者除1例为泌尿系结石、1例为BPH外，病理检查证实的18例膀胱肿瘤患者中，FISH检出16例，尿脱落细胞学检出4例。结论：FISH无创快速，检出率高，在膀胱肿瘤早期诊断中优于尿脱落细胞学检查方法。     

SRY阴性XX男性综合征一例报告

20 0 3年9月我们收治1例4岁合并会阴型尿道下裂和双侧隐睾的性别决定区基因(SRY)阴性XX男性综合征患者,现报道如下。患者,男,4岁。因先天性尿道下裂合并双侧隐睾入院。查体阴茎发育正常,会阴型尿道下裂,双侧阴囊发育差,双侧睾丸未下降至阴囊,双侧腹股沟可以触到睾丸,但双侧睾丸发育差,睾丸质地偏软。术前检查未发现其他部位和脏器的畸形。术前两次染色体检查均为4 6XX ,没有染色体缺失和配体异常,睾酮(T)、雌激素(E)、卵泡刺激素(FSH)和黄体生成素(LH)均明显下降,PCR法两次检测SRY基因,均为阴性。逆行尿道造影未发现尿生殖窦,B超检…     

荧光原位杂交技术在膀胱移行细胞癌诊断中的应用

目的 应用荧光原位杂交技术对膀胱癌患者尿液中脱落细胞染色体基因异常做出判断,从而探究其在诊断膀胱癌中的应用价值,为膀胱癌患者寻求一种无创的诊断膀胱癌的新方法.方法 应用荧光标记的3、7、17号染色体着丝粒探针及定位于p16基因的探针检测膀胱癌患者尿液中脱落细胞的染色体基因变化,从而对膀胱癌作出诊断,同时将FISH诊断膀胱移行细胞癌敏感性与尿细胞学结果进行比较.结果 FISH和尿细胞学诊断膀胱癌的总敏感性分别为85.5%和34.2%.FISH诊断膀胱癌的总敏感性高于尿细胞学(P<0.05).在肿瘤的各种分期分级中,FISH诊断膀胱癌的敏感性也高于尿细胞学.且FISH敏感性随肿瘤病理级别的增高而增高(P<0.05),但不随肿瘤临床分期的增高而增高(P＞0.05).结论 FISH对于膀胱移行细胞癌的诊断有较高的敏感性,有可能成为在中国人群中检测膀胱移行上皮癌的有效手段.