胶质瘤细胞系T98G、U87和U251中CYP17A1的表达及意义

目的探讨细胞色素P450c17a酶(CYP17A1)在人神经胶质瘤细胞系T98G、U87和U251中的表达情况。方法采用Western blot和实时荧光定量PCR于蛋白质水平和mRNA水平检测细胞色素P450c17a酶(CYP17A1)在三种人胶质瘤细胞系中的表达。结果 Western blot检测出CYP17A1蛋白在胶质瘤细胞系T98G、U251和U87中的相对表达量为0.518±0.052、0.460±0.034和0.142±0.025。T98G和U251的CYP17A1蛋白表达水平明显高于U87,差异有统计学意义(P0.05)。实时荧光定量PCR检测结果显示CYP17A1的mRNA在T98G、U251和U87中相对转录水平为1.000±0.122、0.960±0.079、0.611±0.045,T98G和U251细胞中CYP17A1的mRNA转录水平均高于U87,差异有统计学意义(P0.05)。同时Western blot和实时荧光定量PCR都指出T98G和U251在CYP17A1在蛋白和mRNA的表达上无统计学差异(P0.05)。结论人胶质瘤细胞系T98G和U251中CYP17A1的表达量较高,这两种细胞系可作为良好的细胞模型用来研究CYP17A1在胶质瘤中的作用机制以及以CYP17A1为靶点的肿瘤治疗等。     

C1QBP调节线粒体功能介导胶质母细胞瘤对替莫唑胺耐受作用研究

目的 探讨C1QBP通过调节线粒体功能介导胶质母细胞瘤(GBM)对替莫唑胺(TMZ)的耐受作用。方法 采用MTT法检测GBM细胞系U251及耐受TMZ细胞系U251(U251/TMZ)半抑制指数,采用免疫荧光实验、Western Blot检测U251及U251/TMZ中C1QBP的表达水平,C1QBP过表达转染构建U251/TMZ+OE-C1QBP组,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测各组C1QBP的mRNA表达水平,MTT法检测U251/TMZ+OE-C1QBP组半抑制指数,流式检测仪检测各组细胞凋亡水平,荧光显微镜下观察线粒体膜电位变化情况。结果 相比较U251细胞系,U251/TMZ细胞系的半抑制指数以及C1QBP的蛋白表达水平要更高,而转染后的U251/TMZ+OE-C1QBP细胞系的半抑制指数最高,U251、U251/TMZ、U251/TMZ+OE-C1QBP三组细胞系中C1QBP的mRNA表达水平依次增高,细胞凋亡水平依次降低,同时线粒体膜电位表达越来越强。结论 C1QBP的表达水平与GBM对TMZ的耐药性有关,随着C1QBP表达水平的增高,线粒体膜电位即功能增强,同...     

TMZ对胶质瘤U251细胞及其干细胞TNF-α影响的体内研究

目的利用胶质瘤细胞及其干细胞制作裸鼠脑内种植瘤模型,动物水平研究替莫唑胺对胶质瘤细胞及其干细胞裸鼠脑内种植瘤肿瘤坏死因子α(TNF-α)表达的影响。方法免疫磁珠法分选CDl33+干细胞,脑立体定向制作裸鼠脑内种植瘤模型,不同浓度替莫唑胺干预,观察裸鼠生长行为学变化、肿瘤的病理学特征,荧光实时定量逆转录酶-聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测TNF-α表达。结果肿瘤组织的病理学观察发现干细胞较U251细胞具有更高的侵袭性。RT-PCR检测发现,干细胞中TNF-αmRNA表达量显著高于U251细胞(P0.01)。替莫唑胺(TMZ)对U251细胞及其干细胞TNF-αmRNA的表达产生抑制作用。60μmol/L TMZ干预时,干细胞TNF-αmRNA表达量显著低于U251细胞(P0.01)。结论胶质瘤干细胞较U251细胞具有更强的化疗耐药性,这可能是胶质瘤化疗耐药的机制。     

靶向PTTG1基因的微小RNA转染后诱导人脑胶质瘤细胞凋亡的研究

目的 构建表达靶向抑制垂体瘤转化基因1 (PTTG1)基因表达的RNA干扰载体microRNA,导入人脑胶质瘤细胞株U251中,研究靶向抑制PTTG1基因对U251细胞的凋亡诱导作用.方法 以PTG1为靶基因,根据pcDNATM6.2-GW/EmGFP-miR载体要求,设计针对PTIG1的microRNA序列,脂质体转染法将重组质粒转入U251细胞,采用荧光定量多聚酶链反应(PCR)以及Western blot分别从mRNA和蛋白水平检测干扰效果;膜联蛋白Ⅴ与碘化丙啶(annexinⅤ/PI)双色标记的流式细胞仪法检测microRNA诱导的细胞凋亡,碘化丙锭(PI)染色检测细胞周期阻滞.结果 实时荧光定量PCR以及Western blot检测显示,PTTG1基因的mRNA转录水平以及蛋白水平的表达均得到显著抑制;转染后,流式细胞仪检测分析显示,PTTG1基因表达被抑制后,U251细胞凋亡率明显增高,细胞周期出现明显的G2/M阻滞.结论 靶向PTTG1基因的重组microRNA干扰载体pcDNA6.2-GW/EmGFP-miR-PTTG1介导的RNAi显著靶向抑制了PTTG1基因在人脑胶质瘤细胞中的表达,并明显地诱导了脑胶质瘤细胞发生凋亡和G2/M期细胞周期阻滞.     

RNA干扰PDGF-B基因对胶质瘤U251细胞凋亡和增殖的影响

目的利用RNA干扰(RNA interference,RNAi)技术特定沉默胶质瘤U251细胞株的血小板源生长因子-B(PDGF-B)基因,观察其对U251细胞株细胞凋亡和增殖的影响。方法利用脂质体将针对PDGF-B基因的siRNA转染进入U251细胞,利用实时荧光定量多聚核苷酸链式反应(RTPCR)检测PDGF-B基因表达;Western blot检测显示siRNA转染组PDGF-B蛋白表达,采用MTT法检测胶质瘤U251细胞的增殖,应用流式细胞计数观察抑制PDGF-B基因后胶质瘤U251细胞的凋亡情况。结果 RT-PCR检测PDGF-B基因表达明显下降;Western blot检测显示siRNA转染组PDGF-B蛋白表达明显抑制(抑制率60%),MTT结果显示siRNA转染组U251细胞增殖较对照组明显降低;流式细胞学检测提示降低PDGF-B在胶质瘤细胞的表达能抑制胶质瘤细胞的有丝分裂,促进细胞的凋亡。结论构建针对胶质瘤细胞PDGF-B的RNA干扰质粒并转染人胶质瘤U251细胞株后,可明显抑制U251细胞株PDGF的表达,对人胶质瘤U251细胞株有明显的生长抑制和促进凋亡作用。     

太白银莲花皂甙-1抑制人脑胶质瘤U251细胞生长的实验研究

目的研究太白银莲花皂甙-1对人脑胶质瘤U251细胞生长的影响及其机制。方法采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测太白银莲花皂甙-1对U251细胞增殖的影响;应用倒置显微镜和Hochest33342荧光染色、透射电子显微镜观察细胞形态的变化;通过逆转录酶多聚酶链反应(RTPCR)检测与凋亡相关基因Bcl-2 mRNA和Bax mRNA水平的表达变化,Western blot分析Bcl-2和Bax在胶质瘤U251细胞中蛋白的表达情况。结果 U251细胞经太白银莲花皂甙-1诱导后,细胞的增殖明显受到抑制,通过RT-PCR结果证实Bcl-2 mRNA在太白银莲花皂甙-1作用下明显呈低表达而Bax mRNA的表达随时间延长逐渐增高,Western blot检测结果显示太白银莲花皂甙-1作用后,下调抑凋亡蛋白Bcl-2的表达并激活了促凋亡蛋白Bax的表达。结论太白银莲花皂甙-1明显抑制U251细胞的生长活性,且能引起胶质瘤细胞大量凋亡,具有显著的抗肿瘤作用。     

miRNA-145在脑胶质瘤中的作用

目的探讨微小RNA(miRNA)-145在脑胶质瘤组织及胶质瘤细胞系中表达变化及对胶质瘤细胞系U251细胞增殖和凋亡的影响。方法采用实时荧光定量PCR检测检测10例胶质瘤组织和瘤周组织以及4种细胞系(人脑胶质细胞株HEB以及胶质瘤细胞系U251、T98和U87)miRNA-145的表达水平。将miRNA-145模拟物、阴性对照序列转染胶质瘤细胞系U251细胞,采用PCR检测U251细胞miRNA-145表达水平,采用MTT法检测U251细胞增殖能力,采用流式细胞仪检测U251细胞凋亡。结果与瘤周组织相比,胶质瘤组织miRNA-145表达水平明显降低(P0.05)。与正常胶质细胞HEB相比,胶质瘤细胞系U251、U87、T98细胞miRNA-145表达水平均明显降低(P0.05)。与阴性对照组相比,miRNA模拟物组U251细胞miRNA-145表达水平明显增高(P0.01),U251细胞增殖能力明显降低(P0.05),U251细胞凋亡水平明显增高(P0.05)。结论胶质瘤组织miRNA-145呈低表达,上调miRNA-145表达能够抑制胶质瘤细胞系U251细胞增殖能力并诱导U251细胞凋亡。这提示miRNA-145有可能成为胶质瘤治疗的靶点。     

CEP55在人胶质瘤组织的表达及对人胶质瘤U251细胞增殖和凋亡的影响

目的检测中心体相关蛋白55(CEP55)在人胶质瘤组织中的mRNA和蛋白表达水平;抑制人胶质瘤U251细胞中CEP55表达,观察其对U251细胞增殖、凋亡的影响。方法实时荧光定量聚合酶连锁反应(q-PCR)、蛋白质印记法(Western Blot)检测40例不同级别人胶质瘤组织和10例正常脑组织中CEP55的表达;RNAi抑制U251胶质瘤细胞CEP55基因表达,采用细胞增殖毒性检测试剂盒(CCK-8)和胸腺嘧啶核苷类似物(edu)检测CEP55对U251细胞增殖的影响,采用流式细胞仪分析CEP55对细胞凋亡的影响。结果 CEP55在40例人胶质瘤组织中表达显著高于正常脑组织(P0.01),但高级别胶质瘤CEP55的表达与低级别胶质瘤没有显著差异(P0.05)。在RNAi抑制U251细胞CEP55表达后,细胞的增殖显著受抑(P0.01),细胞的凋亡显著增加(P0.01)。结论人胶质瘤组织细胞较正常脑组织CEP55表达明显增高,抑制CEP55的表达抑制人胶质瘤U251细胞的增殖,同时促进人胶质瘤细胞的凋亡。     

白藜芦醇对脑胶质瘤U87细胞及干细胞凋亡诱导作用

目的比较研究白黎芦醇(Res)对人脑胶质瘤U87细胞及其胶质瘤干细胞(GSC)的作用。方法膜联蛋白Ⅴ(AnnexinⅤ)和碘化丙啶(PI)染色法测定细胞凋亡;CD133标记、CD133与AnnexinⅤ/PI共标记检测GSC相对含量及GSC的凋亡;实时荧光定量逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)检测mdr1基因mRNA表达,流式细胞术(FCM)测定P-糖蛋白(P-gp)的表达;集落形成法(CFU)检测细胞的自我更新和增殖能力。结果不同浓度的Res显著诱导U87细胞凋亡,抑制U87细胞集落的形成。40～160μmol/L Res作用后U87细胞群体中CD133+GSC相对含量显著增高、GSC凋亡细胞数量增加,但GSC对Res的敏感性低于U87群体细胞。Res诱导后U87细胞群体中高表达mdr1/P-gp的细胞显著增高,并与GSC含量的增高基本相一致。结论白黎芦醇可诱导脑恶性胶质瘤U87群体细胞及其干细胞凋亡。     

NF-κB1通过促进BCL2表达抑制胶质瘤细胞的早期凋亡

目的探讨核转录因子-κB1(NF-κB1)在人脑胶质瘤和胶质瘤细胞株U87、SHG44的表达及其与凋亡的相关性;以及NF-κB1对脑胶质瘤的作用机制。方法利用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测NF-κB1在非瘤脑组织和不同级别人脑胶质瘤组织中的表达水平。采用脂质体法将化学合成NF-κB1过表达/沉默表达质粒(NF-κB1 shRNA),以及BCL2沉默表达质粒(BCL2 shRNA)转染上述细胞系。通过流式细胞术检测NF-κB1对胶质瘤细胞株U87、SHG44凋亡的影响,并采用Western blotting分别检测NF-κB1、BCL2蛋白的表达水平。结果 qRT-PCR显示,NF-κB1在人脑胶质瘤中表达明显高于非瘤脑组织,并且表达水平随着肿瘤恶性程度的增高而逐渐升高(均P0.05)。在同一人脑胶质瘤标本中BCL2的表达水平与NF-κB1的表达趋势相同。流式细胞术检测结果显示,抑制NF-κB1表达明显促进人脑胶质瘤细胞U87、SHG44的凋亡(均P0.05)。Western blot检测证实,抑制NF-κB1蛋白表达后BCL2蛋白的表达水平也随之降低。结论 NF-κB1通过促进BCL2的表达而抑制胶质瘤细胞的早期凋亡。     

长链非编码RNA SMIM30在胶质瘤中的表达及功能

目的研究长链非编码RNA SMIM30在神经胶质瘤中的表达及作用。方法采用实时荧光定量PCR检测长链非编码RNA SMIM30在神经胶质瘤组织与细胞中的表达;采用siRNA选择性沉默SMIM30后,在胶质瘤细胞中的表达;使用CCK-8法检测SMIM30对U87和U251细胞增殖能力的影响。结果相对于正常参照,SMIM30在胶质瘤组织和细胞中显著高表达;相对于正常参照,SMIM30表达降低后显著抑制U87和U251细胞的增殖能力。结论长链非编码RNA SMIM30作为癌基因在胶质瘤中表达增高,且沉默后抑制胶质瘤细胞的增殖。     

Wip1基因在人脑胶质瘤细胞恶性增殖中的作用及其机制

目的研究Wip1基因在人脑胶质瘤细胞增殖的作用及机制。方法构建人Wip1基因RNA干扰(RNAi)慢病毒载体,有效沉默胶质瘤细胞U251及U87-MG细胞的Wip1基因表达,检测细胞增殖能力。流式细胞术PI单染法检测Wip1基因沉默后细胞周期分布。实时定量PCR法及Western blotting分别检测差异性基因m RNA及蛋白表达。结果胶质瘤细胞Wip1基因表达被有效沉默。Wip1基因沉默的胶质瘤细胞增殖变慢,在U87-MG细胞更加明显。细胞周期分析显示:Wip1基因沉默对U251细胞周期无明显影响,而U87-MG细胞则在10 d时出现明显S期增多和G1、G2期细胞减少。Wip1基因沉默后,U251细胞中CDKN2A和p14ARF基因表达下调,而在U87-MG细胞中表达均上调。Western blotting结果显示:在U251与U87-MG胶质瘤细胞中p38MAPK表达均上调。在U87-MG细胞中p53及p-p53(Ser 15)表达均上调,但在U251细胞中无明显变化。结论 Wip1对胶质瘤细胞增殖具有重要作用。在U87-MG细胞增殖作用主要与其调节p53功能有关。     

脑胶质瘤Wip1基因与DNA损伤修复关系的研究

目的研究U251胶质瘤细胞Wip1基因沉默对DNA核苷酸切除修复酶XPA、XPC的影响。方法体外培养人胶质瘤细胞U251,Wip1(-)组采用携带Wip1基因RNA干扰载体的慢病毒沉默Wip1基因,经实时定量PCR验证。对照组(NC组)采用阴性对照病毒感染。使用替莫唑胺(temozolomide,TMZ)进行干预,将细胞分为NC组、NC+TMZ组、Wip1(-)组和Wip1(-)+TMZ组。CCK-8法检测各组细胞的增殖,实时定量PCR检测细胞XPA、XPC m RNA表达,免疫印迹检测细胞XPA、XPC蛋白表达。结果 TMZ干预后48 h、72 h、96 h、120 h、144 h,Wip1(-)+TMZ组细胞增殖率低于其他3组(P0.05)。TMZ干预48 h后,NC+TMZ组细胞XPA和XPC m RNA表达远远高于NC组(P0.05),同时XPA和XPC蛋白表达远远高于NC组(P0.05)。TMZ干预48 h后,Wip1(-)+TMZ组细胞XPC m RNA和XPA蛋白表达水平明显高于Wip1(-)组(P0.05)。结论 Wip1基因与U251脑胶质瘤细胞DNA损伤修复有关,可通过调节下游产物XPA与XPC参与细胞核苷酸切除修复过程。     

siRNA沉默USP22基因对胶质瘤细胞增殖的抑制作用

目的探讨小干扰RNA(si RNA)沉默泛素特异性肽酶22(ubiquitin specific protease 22,USP22)对胶质瘤细胞增殖的影响和作用机制。方法合成USP22 si RNA及阴性对照si RNA(control si RNA),用脂质体Lipofectamine 2000转染至人胶质瘤U87和U251细胞,分别设为实验组和阴性对照组。通过逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot检测两组胶质瘤细胞USP22 mRNA和蛋白表达水平的变化。采用四甲基偶氮唑蓝比色法(MTT法)检测USP22 si RNA对两组胶质瘤细胞的增殖抑制率。流式细胞术定量检测USP22 si RNA对胶质瘤细胞凋亡及细胞周期分布的影响。Western blot检测胶质瘤细胞凋亡蛋白和周期调控蛋白的表达。结果与阴性对照组比较,实验组胶质瘤细胞中USP22 mRNA和蛋白表达显著下降(P0.05),细胞增殖明显受到抑制(P0.05),凋亡率明显上升(P0.05),细胞周期中G2/M期的细胞比例明显增高(P0.05)。Western blot结果显示:细胞凋亡蛋白Procaspase-3、Procaspase-8、Procaspase-9表达明显下降(P0.05);细胞周期蛋白CDK1、CDK2、Cyclin B1表达水平明显下降(P0.05),Cyclin D1表达水平无明显变化(P0.05)。结论 USP22基因在胶质瘤细胞的增殖中发挥重要作用,其机制可能为调节细胞凋亡和细胞周期。     

姜黄素通过Fas/FasL信号通路调控胶质瘤细胞增殖和凋亡

目的 探讨姜黄素通过Fas/FasL信号通路对胶质瘤细胞的增殖及凋亡产生影响.方法 以人胶质细胞瘤U87细胞为研究对象,采用细胞毒性试验检测姜黄素对U87胶质瘤细胞的细胞毒性作用.四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法、平板克隆实验(colony formation assay)观察姜黄素对胶质瘤增殖能力的影响;流式细胞术(FCM)及Caspase-3活性检测细胞凋亡;流式细胞术检测胶质瘤细胞周期;实时定量PCR、Western blot法检测细胞内Fas、FasL mRNA和蛋白的表达水平.结果 随着姜黄素浓度增加,胶质瘤细胞系的细胞毒性作用也增强(P＜0.05),24 h的IC50为14.28 μmol/L.流式细胞术检测姜黄素阻滞胶质瘤细胞周期于G舢压期.姜黄素作用胶质瘤后Fas和FasL在mRNA和蛋白表达水平上升(P＜0.05).姜黄索对胶质瘤细胞的增殖及细胞集落形成有抑制作用,并呈浓度和时间依赖性(P＜0.05).结论 姜黄素可能通过上调Fas/FasL通路抑制胶质瘤细胞增殖并促进凋亡.     

恶性胶质瘤耐药细胞通过Beclin1上调自噬抵抗替莫唑胺化疗

目的 分析Beclin 1与临床胶质瘤病理等级和胶质瘤复发间的关系,探讨其在胶质瘤耐药中的作用和机制. 方法 收集南方医科大学珠江医院和南方医院神经外科自2012年4月至2013年4月手术切除的胶质瘤标本53例(WHO分级Ⅰ级7例,复发2例;Ⅱ级9例,复发4例;Ⅲ级11例,复发6例;Ⅳ级9例,复发5例),免疫组化和Western blotting检测胶质瘤标本中Beclin1的表达;体外培养胶质瘤耐药细胞系U251AR和非耐药U251细胞,Western blotting检测细胞中Beclin 1和耐药蛋白P-gP的表达;Western blotting检测双链小分子Beclin 1干扰RNA(siBeclin l)转染U251AR细胞48h后Beclin 1蛋白的表达;CCK8法检测不同浓度替莫唑胺(TMZ)作用U251、U251AR和U251AR-siBeclin 1后细胞活性;Western blotting检测200μmol/L TMZ作用U251、U251AR和U251AR-siBeclin 1 48 h后Capase-3的表达;吖啶橙染色和Western blotting分别检测干扰Beclin 1表达和HCQ对U251AR细胞自噬小体数量和Capase-3表达的影响. 结果 免疫组化染色结果显示Ⅲ、Ⅳ级胶质瘤中Beclin 1阳性细胞数明显高于Ⅰ、Ⅱ级胶质瘤.Western blotting结果显示Ⅳ级、Ⅱ和Ⅲ级、Ⅰ级中Beclin 1的表达依次降低,Ⅲ、Ⅳ级复发肿瘤Beclin 1的表达量明显高于原发肿瘤,差异有统计学意义(P＜0.05); U251AR中Beclin 1和耐药蛋白P-gP的表达量均高于U251细胞.与干扰对照组和空白对照组比较,转染siBeclin 1 48 h后干扰组Beclin 1蛋白的水平明显下降;在含TMZ(50,100,500和1000 μmol/L)培养基中培养24 h后,U251AR细胞存活率明显高于U251和si-Bec1-U251AR细胞,差异有统计学意义(P＜0.05).200 μmol/L TMZ作用48 h后,U251细胞凋亡蛋白Caspase-3的表达量明显高于U251AR和si-Bec l-U251AR细胞.吖啶橙染色显示在TMZ培养U251AR 48 h后,HCQ和Beclin 1干扰都导致自噬小体形成明显减少,Caspase-3的表达增高,差异有统计学意义(P＜0.05). 结论 Beclin 1与胶质瘤恶性程度、复发和耐药相关,可能用于胶质瘤恶性诊断和预后评估.Beclin 1在胶质瘤中的耐药功能可能是通过自噬实现的,联合运用TMZ和自噬抑制剂或Beclin 1干扰剂有助于胶质瘤的治疗.     

PHAP1通过AKT信号通路调控脑胶质瘤细胞增殖作用的研究

目的探讨人类白细胞抗原关联蛋白1(putative HLA-associated protein1,PHAP1)是否通过蛋白激酶B信号通路进而影响胶质瘤细胞的增殖。方法应用Western blotting检测PHAP1在胶质瘤组织中的表达水平。用CCK-8实验检测沉默或者过表达PHAP1对U251和U87细胞增殖能力的影响;用免疫印迹法检测沉默或者过表达PHAP1对AKT/p27/Stathmin信号分子的影响;裸鼠体内验证PHAP1对胶质瘤移植瘤生长的作用。结果 PHAP1在胶质瘤组织呈高表达。CCK-8实验显示,沉默PHAP1后胶质瘤细胞U251和U87的增殖能力下降,而过表达PHAP1后U251和U87细胞的增殖能力增强。Western blotting检测证实沉默PHAP1后,AKT活化显著下降,从而导致下游p27表达水平增高和Stathmin蛋白表达水平降低,过表达PHAP1产生相反的效应。进一步裸鼠体内实验验证,沉默PHAP1抑制胶质瘤移植瘤的生长。结论 PHAP1可以通过调控AKT/p27/Stathmin信号通路,从而促进胶质瘤的增殖。     

miR-29c对脑胶质瘤U251细胞生物学活性的影响

目的 探讨miR-29c对脑胶质瘤U251细胞生物学活性的影响及可能机制.方法 体外培养胶质瘤U251细胞,实验组将miR-29c mimics转染至细胞,miR mimcs转染作为对照组.应用实时荧光定量PCR检测转染后miR-29c表达量的改变,MTT实验测定细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡情况,体外侵袭实验分析miR-29c转染后细胞的体外侵袭能力,Western blot检测转染后转录因子YY1蛋白的表达.结果 荧光定量PCR结果显示:实验组miR-29c表达量为(106.65±15.51),较对照组显著上调(P＜0.01).与对照组比较,实验组U251细胞的增殖能力明显降低(P＜0.01),凋亡率增加(P＜0.05),体外侵袭能力明显减弱(P＜0.01),YY1蛋白表达下调(P＜0.01).结论 miR-29c可能通过调控YY1蛋白的表达抑制胶质瘤细胞的生物活性.     

RNA结合蛋白RBM38表达对胶质瘤细胞增殖、迁移、侵袭能力的影响

目的探讨RNA结合蛋白RBM38(RNA结合基序蛋白38,RNA-binding motif protein 38)在胶质瘤组织和细胞中的表达水平及其对胶质瘤细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡的调节作用。方法采用实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,q RT-PCR)检测胶质瘤组织和瘤旁正常组织的RBM38表达水平。采用q RT-PCR和Western blot检测胶质瘤细胞U87、U251和正常星形胶质细胞HA1800的RBM38表达水平。用免疫组化染色检测59例胶质瘤组织的RBM38表达水平,并分析其与临床病理资料的关系。将靶向RBM38的特异性小干扰RNA运用脂质体介导转染法转染至胶质瘤细胞U87和U251。应用CCK-8(cholecystokinin-8)增殖实验、划痕实验、Transwell小室实验、流式细胞仪测凋亡细胞,检测RBM38对于胶质瘤细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡能力的影响。采用q RT-PCR检测抑制RBM38表达后肿瘤细胞P53基因的表达水平。结果相较于瘤旁的脑组织,胶质瘤组织RBM38的表达量明显升高(P 0. 05)。胶质瘤细胞中的RBM38表达水平明显高于正常胶质细胞(均P 0. 001)。免疫组化结果显示,与低级别胶质瘤相比,高级别胶质瘤的RBM38表达水平更高(P 0. 05)。抑制RBM38的表达后,胶质瘤细胞U87和U251的增殖速率明显下降、迁移距离变短、能透过生物膜的细胞数目明显下降(均P 0. 05)。下调了RBM38的表达后胶质瘤细胞的凋亡比率升高(P 0. 05)。被抑制了RBM38表达的胶质瘤细胞P53基因的表达水平升高(P 0. 05)。结论 RBM38在胶质瘤组织及细胞系中呈高表达,RBM38的高表达与胶质瘤的临床分级密切相关。下调RBM38的表达后能抑制胶质瘤细胞的增殖、迁移、侵袭能力,促进细胞的凋亡,并使P53基因的表达水平增高;可能为临床诊断和治疗胶质瘤提供新的靶点。     

RNA干扰XBP1基因表达对人胶质瘤细胞增殖及凋亡的影响

目的 探讨X-盒结合蛋白1(X-box binding protein 1,XBP1)对人脑胶质瘤细胞增殖与凋亡的影响。方法 设计并合成干扰XBP1表达的小干扰RNA(siXBP1),转染人脑胶质瘤U251细胞,MTT 法检测细胞的增殖能力,流式细胞术检测细胞凋亡率,Hoechst 33258染色观察细胞凋亡,Western blot法检测Bax、Caspase-3及Bcl-2的表达水平。结果 siXBP1可有效抑制U251细胞增殖,促进细胞凋亡,Western blot显示,siXBP1上调了U251细胞中促凋亡信号分子Bax及Caspase-3的表达,抑制了U251细胞中抗凋亡信号分子Bcl-2的表达。结论 下调脑胶质瘤细胞XBP1基因表达有望为脑胶质瘤的治疗提供理想的分子靶点。