蝌蚪提取液对HL—60细胞相关癌基因表达的影响

目的：研究蝌蚪提取液（T871－3）对白血病细胞的作用机制。方法：利用细胞形态学观察,细胞化学、TUNEL法等技术,并采用原位mRNA杂交和完整细胞原位斑点印迹技术,观察T871－3诱导HL－60细胞分化和凋亡过程中c-myc,c-myb,bcl-2癌基因表达的变化。结果：1．T871－3能抑制TH－60细胞分裂增殖。2．T871－3在低浓度时诱导HL－60细胞向单核／巨噬样细胞方向分化,高浓度时诱导细胞凋亡。3．T871－3诱导HL－60细胞分化的过程中伴随着c-myc,c-myb癌基因表达的下调,诱导HL－60细胞凋亡的过程伴随着c-myc,bcl-2癌基因的表达的下调,结论：T871－3可能通过调节癌基因的表达发挥其诱导HL－60细胞分化和调亡的作用。     

蝌蚪提取液诱导HL-60细胞凋亡及相关基因的表达

以往实验证明蝌蚪提取液 (T871)具有抑制肿瘤细胞生长并诱导其分化的作用[1 ] 。为进一步探讨蝌蚪提取液的抗肿瘤作用 ,本实验观察了T871诱导人早幼粒白血病细胞系(HL 6 0 )细胞凋亡作用及其凋亡过程中相关癌基因的变化。1　材料和方法1 1　人早幼粒白血病细胞系 (HL 6 0 )细胞的培养 :用含 10 %胎牛血清的RPMI 16 4 0培养基培养 (含青霉素 10 5U L ,链霉素10 5U L ,L 谷氨酰胺 2mol L)。临用前用 8%NaHCO3调pH至7 0～ 7 2 ,37 0℃ ,饱和湿度 ,5 %CO2 条件下悬浮培养。1 2　蝌蚪提取液 (T871)的制备 :取池塘黑色有尾无腿活蝌蚪(经…     

红细胞分化因子对小鼠红白血病细胞系生长的抑制作用

分析了红细胞分化因子（ＥＤＦ）对小鼠红白血病（ＭＥＬ）细胞生长的抑制作用。当ＥＤＦ剂量８２％；在软琼脂上形成的集落数为照组的０．５２％。同时，处于细胞周期不同时相的细胞数量发生显著改变，Ｇｏ加Ｇ１期细胞数比对照组增加５５．６％，Ｓ期细胞数增加１４．．３％，而Ｇ２和Ｍ期细胞数则减少２８．８％。此外，细胞电泳迁移率也减少到对照组的５０％。以上结果说明，ＥＤＦ对ＭＥＬ细胞的增殖有抑制作用。     

二甲基亚砜诱导小鼠红白血病细胞分化的差异蛋白质组学

目的利用二甲基亚砜(DMSO)诱导小鼠红白血病(MEL)细胞分化,系统地分析和鉴定诱导分化不同时间的差异蛋白质组学。方法 DMSO诱导MEL细胞分化,通过联苯胺染色、MTT比色法和Ter119免疫荧光等实验检测细胞分化的比率和细胞的活力,并利用双向电泳耦联质谱技术,结合生物信息学分析诱导MEL细胞分化过程中差异表达的蛋白质。结果 1.2%DMSO诱导MEL细胞分化,分别培养0h、6h、12h、24h、36h、48h、72h、96h、120h,利用双向电泳和质谱分析,共鉴定出87种蛋白质。1.2%DMSO作用MEL细胞120h后,细胞诱导分化率达到67%。MTT实验显示,1.0%、1.2%、1.4%的DMSO对MEL细胞的活力无明显的抑制作用。结论 DMSO对MEL细胞有诱导分化作用,但无明显地抑制细胞增殖。87种双向电泳差异蛋白质按功能可分为12类,比例最大的前3类分别是:占41%的酶类蛋白、15%的结构蛋白、13%的调节蛋白。     

新型HMBA衍生物对红白血病细胞诱导分化作用研究

目的：寻找新的、更有效、低毒的六亚甲基双乙酰胺（HMBA）衍生物,方法：以人红白血病细胞（K562）、小鼠红白血病细胞）MEL）及其亚株MEL DS19为靶细胞,筛选并比较新合成的HMBA衍生物－HMBPA[N,N‘六亚甲基双（3吡啶）酰胺]与1,6－乙二胺四乙酸钴（Co-HDTA)的诱导分化活性。结果：MEL DS19细胞株对HMBA最敏感,联苯胺染色阳性率（B^ 可达76％。Co-HDTA有一定的抑制细胞增殖作用及微弱的诱导分化活性（B^ 2%-4.5%),有效浓度为0．5mmol/L,HMBPA在0．02－5μmmol/L的浓度范围内也有较低的诱导活性（B^ 3%-8%),低浓度HMBPA与HMBA（2mmol/L）联合应用,则可明显提高诱导分化活性（B^ 72%）其诱导活性与5mmol/LHMBA及1．6％DMSO接近。结论HMBAP与Co-hdta对MEL细胞具有诱导分化活性,HMBPA与HMBA有协同诱导分化作用。     

蝌蚪提取液诱导HL60细胞分化和凋亡的实验研究

目的 为了寻找新的肿瘤细胞分化诱导剂,探讨蝌蚪醚提取液（Ｔ８７１２）的抗肿瘤作用。方法 将ＨＬ６０细胞培养于Ｔ８７１２和ＲＰＭＩ１６４０按１：２００（ｖ／ｖ）混合的培养基中。结果 Ｔ８７１２能诱导ＨＬ６０细胞向单核／巨噬细胞方向分化,表现为生长抑制,ＮＢＴ还原能力提高,酸性非特异性酯酶（ＡＮＡＥ）活性增加,形态学观察类似单核／巨噬细胞。当Ｔ８７１２与ＲＰＭＩ１６４０培养基按１：１００（ｖ／ｖ）混合     

NonO蛋白在丁酸钠诱导小鼠红白血病细胞分化过程中的表达

目的探讨NonO蛋白在丁酸钠诱导小鼠红白血病(MEL)细胞向红细胞系分化过程中的表达变化。方法利用联苯胺染色观察丁酸钠诱导MEL细胞红细胞系分化情况,通过Western blotting、免疫细胞化学检测NonO蛋白在丁酸钠诱导MEL细胞分化的过程中表达量的变化,PCR技术检测NonO基因在RNA水平上的表达变化,免疫细胞化学技术检测NonO蛋白在MEL细胞中的定位。结果发现NonO在丁酸钠诱导MEL细胞向红细胞系分化过程中在基因水平和蛋白水平上均上调表达,NonO蛋白在MEL细胞中定位于细胞质和细胞核。结论NonO蛋白与丁酸钠诱导MEL细胞分化密切相关。     

卡介苗诱导小鼠脾脏树突状细胞分化作用研究

目的探讨卡介苗(BCG)诱导小鼠脾脏树突状细胞分化作用。方法分别用PBS和BCG免疫小鼠,收集免疫鼠脾单核细胞培养,通过瑞士-姬姆萨染色观察脾单核细胞形态;流式细胞术分析脾巨噬细胞、树突状细胞表型;MTS法检测小鼠脾淋巴细胞增殖;ELISPOT法检测脾淋巴细胞IFN-γ的分泌;ELISA法测定小鼠脾单核细胞分泌IL-2情况。结果与对照组相比,BCG免疫组镜下可见体积大、带毛刺状突起的细胞较多;CD14(P<0.05)、CD40、CD11C、CD86、CD68表达水平增高;小鼠脾淋巴细胞刺激指数增高(P<0.05);分泌IFN-γ的细胞频数增多(P<0.01);脾单核细胞培养上清中IL-2水平明显增高(P<0.01)。结论 BCG可诱导小鼠树突状细胞分化并活化Th1细胞。     

HMBA对人和小鼠3种红白血病细胞生长及分化的作用

本文通过绘制在六亚甲基双乙酰胺(HMBA)作用下人、小鼠红白血病细胞的生长曲线,计数其分裂指数及集落形成、联苯胺染色法检测其分化百分率等方法研究HMBA对人、小鼠红白血病细胞的抑制及诱导分化作用。红白血病细胞在HMBA作用下增殖能力下降,分裂指数减低,集落减少、MEL-DSl9细胞联苯胺染色阳性率可达76％。HMBA有一定的抑制MEL、MEL-DSl9、K562细胞增殖作用,但诱导MEL、K562分化活性作用较弱,而诱导MEL-DSl9细胞株的分化作用较强。     

苯丙氨酸及其代谢物影响P19细胞神经分化的形态学研究

本研究通过免疫组化及活细胞计数法研究了苯丙氨酸及其代谢物对 P19细胞神经分化的影响。结果显示 :在 P19细胞神经分化诱导期加入苯丙氨酸及其代谢物可降低 P19神经元存活率 ,导致 P19神经元肿胀、崩解 ,神经突起纤细且分支少 ,神经纤维丝蛋白的染色性降低 ,同时发现 P19神经元中多极神经元 /单双极神经元的比例下降。本研究表明 ,苯丙氨酸及其代谢物可影响 P19细胞的神经诱导和分化 ,提示母源性苯丙酮尿症中枢神经系统异常可能与其在脑发育早期神经诱导及分化过程中受到苯丙氨酸及其代谢物影响有关     

红细胞分化调节因子对体外培养的L929和KB细胞的生长抑制作用

从兔网织红细胞提纯的红细胞分化调节因子(erythroid differentiation factor,EDF),能对体外培养的自发转化成纤维细胞系L929及人鼻咽癌细胞系KB产生作用。当EDF剂量为0.10μg/ml时,可引起L929细胞形态发生改变,并有细胞核固缩现象。第2d的细胞生长抑制率为64.86％,软琼脂集落形成率为0;第5d时细胞增殖为负值。~3H-TdR掺入率明显降低。EDF剂量为0.15μg/ml时,对KB细胞生长已有抑制作用。EDF剂量达0.30μg/ml时,生长抑制明显。以上结果证明了EDF对恶性细胞具有增殖抑制作用。这种作用对不同种类细胞敏感性不同,并且与剂量呈正相关。     

克隆化LAK细胞及其培养上清对白血病细胞的细胞毒和分化诱导作用

用半固体－液体两步法克隆的人ＬＡＫ细胞不仅表现对ＮＫ敏感的Ｋ５６２细胞和ＮＫ抵抗的ＨＬ－６０细胞强烈的细胞毒性，在二次杀瘤过程中表现同样高的活性，而且ＬＡＫ细胞培养上清对白血病细胞系ＨＬ－６０和新鲜白血病细胞具有增殖抑制和分化诱导作用。然而不同杀伤活性的ＬＡＫ细胞培养上清对新鲜白血病细胞增殖的影响不同。结果表明ＬＡＫ细胞在直接杀伤白血病细胞的同时，还通过分泌一些活性因子间接影响白血病细胞的增殖和促进其分化成熟，反映了ＬＡＫ细胞抗白血病作用的多向性。     

松果体及其褪黑素影响胸腺T细胞发育周期

目的 探讨松果体对胸腺分化发育时细胞周期的影响。方法 选用清洁级SD大鼠,分为正常对照组、假手术对照组、松果体摘除、松果体摘除 褪黑素腹腔注射7．5mg／kg组和松果体摘除 褪黑素腹腔注射15mg／kg组。术后4、8周取材。用ABC法染胸腺cyclin A、cyclinE阳性细胞,计算机图像分析仪测量各阳性细胞面积及其染色强度。以碘化丙啶(PI)一步插入性DNA定量荧光染色法,流式细胞术测定胸腺T淋巴细胞不同细胞周期的分布状况。以Rrr-PCR法检测褪黑素对胸腺细胞周期依赖性激酶1β表达的影响。结果 松果体摘除对胸腺cyclin E表达的影响甚于对cyclin A的影响,促进cyclinE的合成,松果体摘除后胸腺细胞周期的变化表现为G1期减少,S期和G2 M期百分比增多。补充褪黑素后上述改变有所恢复,但与剂量不成线性关系,且对皮髓质影响有所不同。褪黑素能促进胸腺细胞表达细胞周期依赖性激酶1β。结论 松果体摘除能显著影响胸腺细胞分化发育,补充褪黑素能缓解相关影响。     

中脑顶盖提取液对培养在不同支持物的初生大鼠视网膜神经细胞生长的影响

将生后3～4天大鼠视网膜细胞分离,培养在人羊膜基膜(HABM)、基板蛋白(LN)和多聚鸟氨酸(PO)支持物上。分为加顶盖提取液(Te)和未加Te对照两组,以形态学和四唑盐(MTT)微量自动比色法对细胞生长进行定量测定。用神经元特异性烯醇酶(NSE)抗体作免疫细胞化学染色,以便辨认神经细胞。所得结果表明,经48小时培养,加Te的HABM、LN和PO实验组与相应的对照组比较,视网膜细胞生长更活跃。在有Te的HABM和LN上生长的细胞直径,超过10μm的比无Te的对照组多3倍。从MTT光密度值显示,加Te的实验组细胞,生长在7×10~4～1.2×10~5/孔的密度范围内,与无Te的对照组相比差异非常显著(P<0.01);尤以1×10~5细胞密度/孔的生长最为活跃。在细胞密度低于6×10~4/孔时,细胞生长不活跃。证实在一定的视网膜细胞密度范围内,Te对其生长有明显的促进作用。NSE免疫细胞化学染色证实,90％以上的视网膜分离培养细胞为阳性,其中绝大部分为小细胞,其直径为5～6μm,大细胞直径在10μm以上的约占0.1％。