Vasostatin基因对胰腺癌细胞和血管内皮细胞增殖的影响

目的研究Vasostatin转基因对胰腺癌细胞、血管内皮细胞的作用，探讨其对胰腺癌生长抑制的作用机制。方法应用腺病毒载体将Vasostatin基因转入人胰腺癌细胞SW1990、人脐静脉血管内皮细胞ECV304，应用MTT方法检测转基因后细胞的生长活力。同时，应用小管形成实验研究Vasostatin对血管内皮细胞ECV304体外血管生成的影响。结果Vasostatin转基因对人胰腺癌SW1990细胞生长无显著影响。Vasostatin转基因（MOI分别为25和50）对人脐静脉血管内皮细胞ECV304作用72h后，Ad-Vasostatin组的ECV304细胞数目显著少于PBS组和Ad-lacZ组（P〈0．05）。小管形成实验结果显示，Ad-Vasostatin组内皮细胞数目较少，细胞排列连续性差，可见条索状的细胞链，但中空闭合的管状结构缺如。结论腺病毒介导的Vasostatin基因可显著抑制人脐静脉血管内皮细胞ECV304的体外细胞增殖，抑制其体外血管生成，而对人胰腺癌肿瘤细胞SW1990的体外细胞增殖无明显影响。     

Vasostatin基因对胰腺癌血管生成的抑制作用

目的研究 vasostatin 对体内、外血管生成的作用,探讨其对胰腺癌生长抑制的作用机制。方法应用小管形成实验研究 vasostatin 对体外血管生成的影响,鸡胚绒毛尿囊膜实验观察 vasostatin 对体内血管生成的作用。复制人胰腺癌裸鼠移植瘤模型,瘤内注射10~8pfu Ad-vasostatin、10~8pfu Ad-lacZ 及缓冲液,观察移植瘤生长曲线及瘤重。应用免疫组化法检测肿瘤微血管密度(MVD),研究 vasostatin 对胰腺癌移植瘤血管生成的影响。结果体外实验中,Ad-vasostatin 组细胞数较少,细胞排列连续性差,可见条索状细胞链,但中空闭合管状结构缺如。鸡胚绒毛尿囊膜实验提示 Ad-vasostatin 组的血管纹理欠清晰,小血管分布凌乱、稀疏,形态不规整,小血管分支少,多数在第二、第三级,极少数达到第四级。肿瘤生长3周后,Ad-vasostatin 组移植瘤瘤重(112mg±78mg)显著小于 Ad-laeZ 组(322mg±148mg)(P<0.05)及缓冲液组(468mg±160mg)(P<0.01)。免疫组化结果提示,Ad-vasostatin 组肿瘤组织 MVD[(76.2±16.8)个/mm~2]显著低于 Ad-lacZ 组[(144.0±16.6)个/mm~2]与缓冲液组[(147.0±22.7)个/mm~2)(P<0.05)。结论腺病毒介导的 vasostatin 基因可显著抑制体内、外血管生成,vasostatin 基因对人胰腺癌裸鼠移植瘤血管生成的抑制作用是其抑制人胰腺癌裸鼠移植瘤生长的重要原因。     

Vasostatin基因对胰腺癌细胞和血管内皮细胞增殖的影响

目的研究Vasostatin转基因对胰腺癌细胞、血管内皮细胞的作用,探讨其对胰腺癌生长抑制的作用机制。方法应用腺病毒载体将Vasostatin基因转入人胰腺癌细胞SW1990、人脐静脉血管内皮细胞ECV304,应用MTT方法检测转基因后细胞的生长活力。同时,应用小管形成实验研究Vasostatin对血管内皮细胞ECV304体外血管生成的影响。结果Vasostatin转基因对人胰腺癌SW1990细胞生长无显著影响。Vasostatin转基因(MOI分别为25和50)对人脐静脉血管内皮细胞ECV304作用72h后,Ad-Vasostatin组的ECV304细胞数目显著少于PBS组和Ad-lacZ组(P<0.05)。小管形成实验结果显示,Ad-Vasostatin组内皮细胞数目较少,细胞排列连续性差,可见条索状的细胞链,但中空闭合的管状结构缺如。结论腺病毒介导的Vasostatin基因可显著抑制人脐静脉血管内皮细胞ECV304的体外细胞增殖,抑制其体外血管生成,而对人胰腺癌肿瘤细胞SW1990的体外细胞增殖无明显影响。     

Vasostatin基因对胰腺癌细胞和血管内皮细胞增殖的影响

目的研究Vasostatin转基因对胰腺癌细胞、血管内皮细胞的作用,探讨其对胰腺癌生长抑制的作用机制.方法应用腺病毒载体将Vasostatin基因转入人胰腺癌细胞SW1990、人脐静脉血管内皮细胞ECV304,应用MTT方法检测转基因后细胞的生长活力.同时,应用小管形成实验研究Vasostatin对血管内皮细胞ECV304体外血管生成的影响.结果 Vasostatin转基因对人胰腺癌SW1990细胞生长无显著影响.Vasostatin转基因(MOI分别为25和50)对人脐静脉血管内皮细胞ECV304作用72 h后,Ad-Vasostatin组的ECV304细胞数目显著少于PBS组和Ad-lacZ组(P < 0.05).小管形成实验结果显示,Ad-Vasostatin组内皮细胞数目较少,细胞排列连续性差,可见条索状的细胞链,但中空闭合的管状结构缺如.结论腺病毒介导的Vasostatin基因可显著抑制人脐静脉血管内皮细胞ECV304的体外细胞增殖,抑制其体外血管生成,而对人胰腺癌肿瘤细胞SW1990的体外细胞增殖无明显影响.     

血管生成与胰腺癌

血管生成(angiogenesis)是指从已有的毛细血管或毛细血管后静脉发展而形成的新的血管。生理状态下,促血管生成因子和血管生成抑制因子处于动态平衡状态。血管生成加速可见于伤口愈合、炎症反应、月经周期和胚胎发育期;在病理情况下,血管生成加速可见于糖尿病、视网膜病变、恶性肿瘤。血管生成主要通过灌注作用、转移作用、相互旁分泌效应促进恶性肿瘤生长、进展和转移。自从Folkman et al首先提出肿瘤的生长取决于血管生成,抗血管生成疗法可用于治疗癌症以来,大量的实验证实,血管生成对肿瘤的诊断、治疗及预后评价具有重大意义。 1 血管生成与胰腺癌 1.1 血管生成与胰腺癌的生长肿瘤的生长有两个明显不同的阶段。即从无血管的缓慢血管生长阶段转变为有血管的快速     

真核翻译延长因子1A2对人胰腺癌裸鼠移植瘤生长和血管形成作用的研究

人类真核翻译延伸因子1A2（EEF1A2）是一种管家基因，可能作为一种新的潜在癌基因。参与肿瘤的发生、发展。目的：探讨EEFIA2对人胰腺癌裸鼠移植瘤生长和血管形成的作用。方法：以聚合酶链反应（PCR）扩增目的基因片段，应用基因重组技术构建Ad5／F35。EEF1A2重组腺病毒载体。15只裸鼠建立人胰腺癌移植瘤模型．随机分为对照组、绿色荧光蛋白（GFP）组和EEF1A2组，分别注射PBS0．1ml、Ad5／F35-GFP0．1ml（1×10^8PFU）和Ad5／F35-EEF1A20．1ml（1×10^8 PFU）。测定各组肿瘤体积和质量，应用免疫组化方法检测各组增殖细胞核抗原（PCNA）和CD31的表达。结果：成功构建了表达EEF1A2的重组腺病毒载体。与对照组和GFP组相比，EEF1A2组裸鼠肿瘤体积和质量显著增加（P〈O．05），PCNA和CD31表达显著增高（P〈O．05）。结论：EEF1A2可显著促进人胰腺癌裸鼠移植瘤生长，细胞增殖和肿瘤血管形成可能是其重要作用机制。     

胰腺星状细胞对胰腺癌AsPC-1细胞侵袭转移的影响

目的 探讨胰腺星状细胞(PSCs)对胰腺癌细胞侵袭转移的影响及基质细胞因子-I(SDF-1)在此过程中的作用.方法 常规分离、培养PSCs,收集及浓缩PSCs条件培养液(PSC-CM),应用不同浓度的PSC-CM、抗SDF-1抗体(anti-SDF-1)及两者联合应用处理AsPC-1细胞,采用MTT法检测AsPC-1细胞的增殖,Transwell小室检测细胞迁移,体外侵袭实验观察细胞侵袭能力.结果 对照组及0.25、0.5、1 μg/μl PSC-CM组AsPC-1细胞增殖的吸光度值(A490)分别为0.437 ±0.041、0.472±0.048、0.553±0.057、0.690±0.051,PSC-CM呈剂量依赖性促进细胞增殖,其中0.5、1μg/μl PSC-CM组与对照组间以及0.5 μg/μl与1μg/μl PSC-CM组间的差异具有统计学意义(P值均＜0.05).对照组、anti-SDF-1组、PSC-CM组及PSC-CM± anti-SDF-1组细胞增殖的A490值分别为0.407±0.028、0.416±0.030、0.629±0.048、0.481±0.049;穿膜细胞数分别为(35.3±7.1)、(34.8±5.6)、(140.9±12.7)、(56.5±5.9)个;侵袭细胞数分别为(27.1±2.9)、(29.1±4.2)、(81.5±8.2)、(46.4±4.4)个.anti-SDF-1组与对照组间的差异无统计学意义,PSC-CM组细胞的增殖、迁移、侵袭能力较对照组显著增强(P＜0.05或P＜0.01),PSC-CM± anti-SDF-1组细胞的增殖、迁移、侵袭能力较PSC-CM组显著降低,但仍显著高于对照组(P＜0.05或P＜0.01).结论 PSC-CM可促进AsPC-1的增殖、迁移及侵袭,其机制为部分通过SDF-1/CXCR4受体配体系统.     

miR-101在胰腺癌组织中的表达以及对胰腺癌细胞ASPC-1增殖的影响

目的 观察miR-101在胰腺癌组织中的表达,探讨其对胰腺癌细胞增殖的影响.方法 采用实时定量PCR方法 检测miR-101在胰腺癌组织、癌旁组织和胰腺癌细胞株ASPC-1中的表达.通过基因重组技术构建miR-101的表达载体peGFPc1-miR-101,应用脂质体将其转染到ASPC-1细胞,荧光显微镜检测转染效率;实时定量PCR检测转染细胞miR-101的表达水平,以癌旁正常胰腺组织为1,折算成相对倍数;MTT法检测转染细胞的增殖率.利用在线软件targetScan预测miRNA可能的靶基因.结果 miR-101在胰腺癌组织和胰腺癌细胞株ASPC-1中相对表达量分别为55%和39%,较癌旁正常胰腺组织显著降低(P＜0.01).peGFPc1-miR-101转染ASPC-1细胞后,miR-101表达增加,为对照组的19.8倍(P＜0.01),癌细胞增殖率明显降低,最低仅为原代细胞的26%(P＜0.01).EZH2基因是miR-101影响胰腺癌细胞增殖活力的可能靶基因.结论胰腺癌组织miR-101低表达,它可能通过抑制EZH2的表达调控细胞的增殖.     

胰腺癌中三种血管生长因子受体的表达研究

目的：胰腺癌能依赖多种血管生长因子及受体的多步骤调控导致肿瘤血管大量生长。探讨血管内皮生长因子受体（flt-1)，碱性成纤维细胞生长因子受体（bFGFR)及血小板衍生生长因子受体（PDGFR）与胰腺癌生物学行为的关系及受体之间相互关系。方法：应用免疫组化方法检测51例胰腺癌及32例急慢性胰腺炎患者病变组织中，flt-1、bFGFR、PDGFR的表达。结果：flt-1、bFGFR、PDGFR在胰腺癌患者中的阳性率为52．9％，54．9％和45．1％，在胰腺炎中的阳性率为18．8％，18．8％和21．9％，差异均有显著性（P＜0．05或P＜0．01），它们的高表达与胰腺癌的分化程度呈负相关（P＜0．05或P＜0．01），与肿瘤大小无关（P＞0．05）。flt-1、bFGFR、PDGFR在胰腺癌中阳性表达呈相关密切关系（P＜0．05），它们在胰腺癌的发生、浸润、转移中可能存在相互诱导，相互诱导协同或互补作用。结论：flt-1、bFGFR、PDGFR的阳性表达可作为胰腺癌生长，转移及预后的重要判定指标，三种血管生长因子受体可作为胰腺癌抑血管生成治疗的有效靶点。     

环氧化酶抑制剂吲哚美辛对胰腺癌新生血管生成的抑制作用

目的 通过观察环氧化酶(COX)抑制剂吲哚美辛对胰腺癌血管内皮生长因子(VEGF)表达及对体内外血管生成的的影响,探讨其对胰腺癌生长抑制的作用机制.方法 用RT-PCR方法检测不同浓度吲哚美辛对BxPC3细胞VEGF mRNA表达的调节作用;应用小管形成实验研究吲哚美辛对ECV304细胞体外血管生成的影响;建立裸鼠胰腺癌BxPC3细胞种植瘤模型,应用吲哚美辛给荷瘤裸鼠灌胃(3 mg·kg-1·d-1体重,共4周),观察其对种植瘤生长曲线、瘤重及种植瘤组织VEGF mRNA表达的影响;采用Ⅷ因子免疫组化染色评估瘤组织中微血管密度(MVD).结果 (1)小管形成实验中,吲哚美辛组ECV304细胞数较少,细胞排列差,偶可见条索状细胞链,中空闭合管状结构缺如.(2)吲哚美辛呈剂量依赖性抑制BxPC3细胞VEGF mRNA表达.(3)应用吲哚美辛给荷瘤裸鼠灌胃4周后,平均瘤重(0.495±0.31)g,显著小于对照组瘤重(1.57±1.06)g,抑瘤率为67%.吲哚美辛显著下调种植瘤VEGF mRNA表达.(4)对照组MVD为5.98±1.27,吲哚美辛组为2.02±0.28,差异有显著性(P＜0.01).结论 COX抑制剂吲哚美辛可下调VEGF mRNA的表达,抑制胰腺癌体内、体外血管的生成,抑制裸鼠种植瘤新生血管的生成,这可能是其抑制胰腺癌裸鼠种植瘤生长的重要原因.     

四氯化碳肝损伤模型中AMD3100对骨髓单个核细胞归巢的作用

目的用同种异体骨髓单个核细胞（BMMNC）与CXCR4特异性受体拮抗剂AMD3100孵育的BMMNC分别输注给四氯化碳构建的急性肝损伤SD大鼠,观察肝脏损伤修复作用,研究外源性骨髓单个核细胞是否通过SDF-1/CXCR4生物学轴归巢至受损肝脏。方法以四氯化碳作为肝脏毒剂,构建SD大鼠肝损伤模型。将SD大鼠随机分为4组：BMMNC移植（Ⅰ）组、AMD3100＋BMMNC（Ⅱ）组、肝损伤对照（Ⅲ）组、正常健康SD大鼠（Ⅳ）组,每组各6只大鼠,III组腹腔注射50%四氯化碳（CCl4）花生油溶液,I组和II组经腹腔注射CCl424h后,分别经鼠尾静脉途径输入BMMNC和AMD3100孵育的BMMNC,正常健康SD大鼠不做任何处理,1周后,取血测定肝功能、计算死亡率及观察肝脏病理组织学表现。结果不同剂量的CCl4可导致不同程度的肝损伤,而0.45mL/100g剂量较好地模拟了急性肝损伤的病理生理改变且稳定性较好。移植后1周,I组大鼠死亡率约为17%,II组死亡率约为83%,2组死亡率比较差异有统计学意义（P〈0.05）,I组大鼠肝功能明显好于II和III组（P〈0.05）,同时肝脏的病理形态有所好转。结论 CCl40.45mL/100g腹腔注射可以很好构建SD大鼠急性肝损伤模型。BMMNC移植对大鼠急性肝损伤有一定的治疗作用,AMD3100对BMMNC向受损肝脏归巢有一定的抑制作用。     

二甲双胍对人胰腺癌细胞株CFPAC-1增殖与凋亡的影响

目的观察二甲双胍对人胰腺癌细胞株CFPAC-1增殖、凋亡的影响,探讨其相关分子机制。方法应用1、2．5、5、10、20、40、60mmol／L二甲双胍处理人胰腺癌CFPAC-1细胞24、48、72h,以未处理的细胞作为对照组。采用CCK-8法检测细胞的增殖抑制率,流式细胞仪分析细胞周期,AnnexinV／PI双染法检测细胞凋亡,蛋白质印迹法检测磷酸化AMPK（p-AMPK）、FAS、cyclinD1、Bcl-xl、Bax、caspase-3、survivin蛋白的表达。结果二甲双胍呈浓度及时间依赖性抑制CFPAC-1细胞的增殖。40mmol／L二甲双胍处理细胞48h后,G0／G1细胞比例显著增多[（65．93±0.27）％比（42．89±1．02）％],G2／M期、s期细胞比例显著减少[（22．01±2．95）％比（38．28±4．93）％,（13．58±0．43）％比（20．12±3．38）％],差异均有统计学意义（P值均〈0．05）;细胞凋亡率从对照组的（3．01±0．49）％增加到（32．97±3．19）％（P〈0．05）;p-AMPK、Bax、caspase-3表达增强,FAS、cyclinD1、Bcl-xl、survivin表达减弱。结论二甲双胍可以显著抑制CFPAC-1细胞增殖,促进细胞凋亡,其机制可能通过激活AMPK信号通路,下调FAS、cyclinD1、survivin表达及Bcl-xl／Bax比值,上调caspase-3表达所致。     

异常表达的miRNA对胰腺癌细胞增殖和凋亡的影响

下调miR-221改变细胞周期,增加G0/G1期细胞,减少S期细胞,但对细胞活性无明显影响;miR-221和miR-21共同下调后,细胞活力则明显下降.其他miR转染对细胞生长和凋亡的影响不明显.结论 部分在胰腺癌中异常表达的miRNA对胰腺癌细胞的生长有一定影响,选用一定组合的联合转染,对细胞生长和凋亡的影响比单独转染时加强.     

氢化可的松对人NK细胞增殖及其对胰腺癌SW1990细胞杀伤效率的影响

目的 探讨氢化可的松对人外周血NK细胞增殖及其对胰腺癌SW1990细胞杀伤力的影响.方法 分离健康人外周血单个核细胞加入到含IL-15细胞因子的NK细胞培养基中诱导培养NK细胞.当NK细胞纯度达到70％以上时,加入10-6、10-5、10-4、10-3 μmol/L氢化可的松继续培养7d.以未加氢化可的松的NK细胞作为对照组.采用锥虫蓝染色计数细胞;采用流式细胞术检测CD3-CD56+ NK细胞含量及其穿孔素、颗粒酶B和IFN-γ的表达;以20∶1的效靶比将NK细胞与SW1990细胞共培养,用细胞增殖-毒性检验法(CCK-8)检测NK细胞对SW1990细胞的杀伤效应.结果 用氢化可的松处理7d后NK细胞量平均达到70.72％ ～ 76.39％,与对照组的(72.61±3.76)％差异无统计学意义;10-6、10-5、10-4、10-3 μmol/L氢化可的松处理组NK细胞的增殖倍数分别为(9.13±0.94)、(9.67±1.51)、(10.33± 1.07)、(8.40±1.47)倍,均显著高于对照组的(4.23±0.82)倍(P值均＜0.01);NK细胞对SW1990细胞的杀伤效率分别为(58.58±4.89)％、(62.27±5.63)％、(64.02±5.79)％、(63.88±3.61)％,均较对照组的(57.46±5.11)％增强,其中10-4μmol/L组的差异具有统计学意义(P ＜0.05);10-4、10-3μmol/L氢化可的松处理组NK细胞穿孔素表达分别为(96.71±3.04)％、(97.56±2.18)％,显著高于对照组的(92.40±3.53)％(P ＜0.05或0.01);10-5 μmol/L氢化可的松处理组NK细胞的颗粒酶B表达为(78.23±2.94)％,显著高于对照组(73.68±3.52)％(P＜0.05);10-5、10-4、10-3 μmol/L氢化可的松处理组NK细胞IFN-γ表达分别为(96.61±2.04)％、(97.58±2.17)％、(98.00±1.77)％,均显著高于对照组的(92.44±2.74)％(P值均＜0.01).结论 氢化可的松可促进IL-15活化的NK细胞增殖,适当浓度条件下增强对SW1990细胞杀伤活性,其机制可能与其穿孔素、颗粒酶B和IFN-γ表达上调有关.     

EEF1A2基因对胰腺癌细胞生长和增殖的影响

目的 探讨EEF1 A2转基因对胰腺癌细胞SW1990生长和增殖的作用.方法 应用腺病毒载体将EEF1A2基因转染人胰腺癌细胞SW1990,采用MTT法检测细胞的增殖,软琼脂克隆形成试验检测细胞的生长,应用流式细胞仪检测细胞周期的变化.结果 带EEF1 A2的腺病毒感染SW1990细胞后,EEF1 A2 mRNA表达增加,72 h的A750值为1.2996±0.2091,培养6 d的细胞数为81250±1767,14 d的克隆形成率为82%,均较空载体腺病毒组和PBS组显著增加(P<0.05);G1期细胞比例为28.5%,S期细胞比例为60.9%,前者较空载体腺病毒组和PBS组显著减少,后者较空载体腺病毒组和PBS组显著增加(P<0.05).结论 EEF1 A2基因可以显著促进人胰腺癌细胞SW1990的生长和增殖.     

Kinetics of CXCR-4 and adhesion molecule expression during autologous stem cell mobilisation with G-CSF plus AMD3100 in patients with multiple myeloma

AMD3100, a competitive antagonist of CXCR-4, disrupts the binding of its ligand, stromal cell-derived factor-1 (SDF-1), and facilitates stem cell mobilisation in patients with haematological malignancies. This study investigated the differential kinetics of CXCR-4 and adhesion molecule expression and their impact on stem cell yield during mobilisation with granulocyte-colony stimulating factor (G-CSF) (days 1–4) followed by AMD3100 in 10 patients with multiple myeloma. A four-colour flow cytometry-based determination of CXCR-4, VLA-4, l-selectin, PECAM, LFA-1 and CD44 expression on CD34+ cells and measurement of SDF-1 concentration were performed at different time points. After G-CSF alone, CXCR-4 expression on patients’ blood and marrow CD34+ cells was significantly lower than in the healthy controls (p < 0.001), but allowed no prediction of stem cell yield. Except in the single poorly mobilising patient, AMD3100 led to a further significant decrease of CXCR4 (p = 0.001), which inversely correlated with the CD34+ counts in the blood (p = 0.005). SDF-1 level in patients’ marrow was positively correlated with CXCR-4 expression on CD34+ cells (p = 0.011). It is interesting to note that the expression of adhesion molecules remained unaffected by AMD3100 administration. Further studies will define the possible prognostic role of AMD3100 mediated changes in CXCR-4 expression for the prediction of stem cell yield attainable with this new mobilisation regimen.     

胰腺癌细胞TM4SF1的表达及其对细胞增殖、迁移及侵袭能力的影响

目的 检测5株人胰腺癌细胞株中TM4SF1 mRNA的表达,探讨TM4SF1基因对癌细胞增殖、迁移及侵袭能力的影响.方法 采用实时PCR方法检测人胰腺癌细胞株MPanc96、MiaPaCa-2、HPAC、PANC1、AsPC-1的TM4SF1 mRNA表达,并与人正常胰腺导管上皮细胞（HPDE）的TM4SF1mRNA表达进行比较.应用RNA干扰方法将靶向TM4SF1的siRNA及阴性对照siRNA瞬时转染MPanc96、MiaPaCa-2细胞.采用MTS法检测转染细胞的增殖能力,Transwell小室法检测细胞的迁移及侵袭能力.结果 胰腺癌细胞株MPanc96、MiaPaCa-2、PANC1、AsPC-1、HPAC的TM4SF1 mRNA相对表达量分别为1.205±0.073、1.096±0.260、1.382±0.075、1.374±0.363、0.744±0.096,均显著高于HPDE的0.020±0.003（F =22.26,P＜0.01）.与转染阴性对照siRNA的细胞比较,TM4SF1基因表达沉默的MPanc96、MiaPaCa-2细胞的增殖无显著变化,但细胞的迁移力分别降低（62.5±7.6）％、（72.8±4.0）％,侵袭能力分别下降（69.5±5.7）％、（78.6±6.3）％.结论 TM4SF1在人胰腺癌细胞中高表达,并增强胰腺癌细胞的迁移和侵袭能力.     

维生素D3通过Hedgehog信号通路对胰腺癌PANC1细胞增殖与凋亡的影响

目的 探讨维生素D3抗胰腺癌的作用机制.方法 应用不同浓度的维生素D3（25、50、75、100 μmol/L）干预胰腺癌PANC1细胞,以未干预细胞作为阴性对照组.MTT比色法检测细胞的生长抑制率;流式细胞仪检测细胞的早期凋亡率;RT-PCR法检测细胞PTCH、Gli-1 mRNA的表达.结果 维生素D3呈浓度依赖性抑制PANC1细胞的增殖,以48 h点的抑制作用最强,阴性对照组及25、50、75、100 μmol/L维生素D3组的生长抑制率分别为0、16.1％、18.8％、31.8％、39.4％,组间差异有统计学意义（P值均＜0.05）.阴性对照组及25、50、75、100 μmol/L维生素D3干预24 h时PANC1细胞的早期凋亡率分别为（5.89±0.57）％、（6.06±0.44）％、（16.21± 1.62）％、（16.94±0.91）％、（20.96±0.98）％,早期凋亡率随浓度的增加而增加,差异有统计学意义（P＜0.05）.维生素D3干预PANC1细胞24 h后,阴性对照组及25、50、75、100 μmol/L组细胞的PTCH mRNA表达量分别为0.117±0.009、0.104 ±0.011、0.069±0.011、0.052±0.009、0.056±0.007;Gli-1 mRNA表达量分别为0.323±0.007、0.312±0.015、0.299±0.015、0.233 ±0.007、0.175 ±0.014,均随浓度的增加而下调,差异有统计学意义（P值均＜0.05）.75 μmol/L维生素D3干预0、12、24、36、48 h后,PTCH mRNA表达量分别为0.142±0.008、0.127 ±0.009、0.111±0.010、0.115 ±0.003、0.102±0.007;Gli-1 mRNA分别为0.341±0.011、0.317 ±0.017、0.320±0.018、0.226 ±0.011、0.191±0.010,均随时间的延长而下调,差异有统计学意义（P值均＜0.05）.结论 维生素D3可以有效抑制胰腺癌PANC1细胞的增殖,促进细胞凋亡,其机制可能与阻滞Hedgehog信号通路有关.     

AMD3100 disrupts the cross-talk between chronic lymphocytic leukemia cells and a mesenchymal stromal or nurse-like cell-based microenvironment: pre-clinical evidence for its association with chronic lymphocytic leukemia treatments

Background

Interactions with the microenvironment, such as bone marrow mesenchymal stromal cells and nurse-like cells, protect chronic lymphocytic leukemia cells from spontaneous and drug-induced apoptosis. This protection is partially mediated by the chemokine SDF-1α (CXCL12) and its receptor CXCR4 (CD184) present on the chronic lymphocytic leukemia cell surface.

Design and Methods

Here, we investigated the ability of AMD3100, a CXCR4 antagonist, to sensitize chronic lymphocytic leukemia cells to chemotherapy in a chronic lymphocytic leukemia/mesenchymal stromal cell based or nurse-like cell based microenvironment co-culture model.

Results

AMD3100 decreased CXCR4 expression signal (n=15, P=0.0078) and inhibited actin polymerization/migration in response to SDF-1α (n=8, P<0.01) and pseudoemperipolesis (n=10, P=0.0010), suggesting that AMD3100 interferes with chronic lymphocytic leukemia cell trafficking. AMD3100 did not have a direct effect on apoptosis when chronic lymphocytic leukemia cells were cultured alone (n=10, P=0.8812). However, when they were cultured with SDF-1α, mesenchymal stromal cells or nurse-like cells (protecting them from apoptosis, P<0.001), chronic lymphocytic leukemia cell pre-treatment with AMD3100 significantly inhibited these protective effects (n=8, P<0.01) and decreased the expression of the anti-apoptotic proteins MCL-1 and FLIP. Furthermore, combining AMD3100 with various drugs (fludarabine, cladribine, valproïc acid, bortezomib, flavopiridol, methylprednisolone) in our mesenchymal stromal cell co-culture model enhanced drug-induced apoptosis (n=8, P<0.05) indicating that AMD3100 could mobilize chronic lymphocytic leukemia cells away from their protective microenvironment, making them more accessible to conventional therapies.

Conclusions

Taken together, these data demonstrate that interfering with the SDF-1α/CXCR4 axis by using AMD3100 inhibited chronic lymphocytic leukemia cell trafficking and microenvironment-mediated protective effects. Combining AMD3100 with other drugs may, therefore, represent a promising therapeutic approach to kill chronic lymphocytic leukemia cells.