显性失活IκBα质粒对胰腺癌PC-3细胞株核因子-κB和环氧合酶-2表达的影响

目的：观察显性失活IκBα质粒转染胰腺癌PC-3细胞株后，对细胞核因子-κB（NF-κB）和环氧合酶-2（COX-2）表达的影响。 方法： 免疫组织化学证实NF-κB和COX-2在胰腺癌PC-3细胞株中的表达，逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）和蛋白免疫印迹（Western blotting）检测PC-3细胞转染显性失活IκBα质粒后，细胞中NF-κB和COX-2表达的变化。 结果： 胰腺癌PC-3细胞株中存在NF-κB和COX-2的表达，转染显性失活IκBα质粒后，细胞中NF-κB和COX-2表达均下调，且体现出一定的时间依赖性关系。 结论： 胰腺癌PC-3细胞株中存在NF-κB和COX-2的阳性表达。显性失活的IκBα质粒可抑制细胞中NF-κB和COX-2的表达。     

双歧杆菌对实验性大肠癌NF-κB和ⅠκBα的影响

目的阐明青春型双歧杆菌的体内抑瘤机理.方法以大肠癌裸鼠移植瘤为动物模型,用激光共聚焦显微镜和免疫组化检测了大肠癌组织NF-κB及其抑制性蛋白ⅠκBα的活性.结果双歧杆菌注射组大肠癌移植瘤NF-κB的阳性细胞密度明显低于肿瘤对照组(P＜0.01);而ⅠκBα的表达则相反,双歧杆菌注射组大肠癌ⅠκBα的平均荧光强度显著高于肿瘤对照组(P＜0.01).结论青春型双歧杆菌体内能抑制大肠癌ⅠκBα的降解,进而阻止NF-κ B的活化.     

核转录因子-κB与前列腺肿瘤

核转录因子NF-кB具有多向性调节作用,可在多种因素作用下被激活,参与调控多种基因的表达;参与免疫反应、胚胎发育、凋亡、肿瘤形成和转移等多种生理及病理过程;并与肿瘤转移过程中起重要作用的粘附分子和细胞外基质蛋白水解酶等分泌调节有关.前列腺肿瘤的发生、发展及浸润转移,与NF-кB及其抑制因子间正常平衡的破坏及随之而来的系列NF-кB依赖基因表达的改变密切相关.本文综述了NF-кB与恶性肿瘤发生、发展、浸润转移的关系及与NF—κB相关的抗肿瘤策略.     

核转录因子-κB与前列腺肿瘤

核转录因子NF-κB具有多向性调节作用,可在多种因素作用下被激活,参与调控多种基因的表达;参与免疫反应、胚胎发育、凋亡、肿瘤形成和转移等多种生理及病理过程;并与肿瘤转移过程中起重要作用的粘附分子和细胞外基质蛋白水解酶等分泌调节有关.前列腺肿瘤的发生、发展及浸润转移,与NF-κB及其抑制因子间正常平衡的破坏及随之而来的系列NF-κB依赖基因表达的改变密切相关.本文综述了NF-κB与恶性肿瘤发生、发展、浸润转移的关系及与NF-κB相关的抗肿瘤策略.     

核因子κB 与恶性肿瘤

 核因子κB （nuclear factor kappa B，NF-κB）是由Rel/ NF-κB家族的多肽成员所形成的一组二聚体形式的转录因子的统称，首次被确认于1986年[1]。Rel/NF-κB家族成员包括NF-κB1（p50及其前体p105）、NF-κB2（p52及其前体p100）、Rel（c-Rel）、RelA（p65，或NF-κB3）、RelB蛋白，v-Rel以及果蝇蛋白dorsal和Dif。在人类，最先被确认且最为重要的NF-κB是p50/RelA（p50/p65），通常所说的NF-κB即指此。NF-κB/ Rel家族成员的共同特征是拥有一个高度保守的Rel同源区（Rel homology region，RHR，或称Rel同源结构域，Rel homology domain，RHD）。 NF-κB 在组织细胞中广泛存在，但在不同的组织细胞中，NF-κB 的活性状态存在生理性差异。NF-κB 通常以与其抑制蛋白 IκB （inhibitor of NF-κB）相结合的无活性状态贮存于细胞质中（由于 IκB 对 NF-κB 的位于 RHR 上的核定位序列的遮蔽作用）。当细胞在必须迅速做出反应时，NF-κB 将被激活，该激活过程主要依赖于由 IκB 激酶（IκB kinase，IKK）复合体所诱导的 IκB 蛋白的泛素化蛋白水解作用，NF-κB 此时因其核定位序列的重新显露而被介导进入细胞核，通过与位于目标基因的启动子和增强子区的特异位点的结合，实现其转录调控功能。在为数众多的转录因子中，NF-κB 因其在生命活动与疾病发生中的重要作用，特别是其与恶性肿瘤发生、发展的关系，以及可能据以设计新型药物与疾病治疗新策略，而备受瞩目。现扼要介绍其近年来的研究进展。     

沙立度胺对大鼠肝纤维化核因子-κB和肿瘤坏死因子-α表达的影响

目的： 观察沙立度胺抗大鼠肝纤维化的疗效和对NF-κB和TNF-α表达的影响。方法： 四氯化碳腹腔注射诱导大鼠肝纤维化模型，治疗组于造模同时用沙立度胺10 mg·kg^-1·d^-1和100 mg·kg^-1·d^-1灌胃8周。观察肝组织病理学改变，检测肝功能、血清肝纤维化指标及肝组织羟脯氨酸含量，免疫组化检测NF-κB p65、α-SMA 在肝内的表达和分布，Western blotting检测肝组织NF-κB p65、IκBα、TNF-α蛋白的表达，RT-PCR检测肝组织TNF-α mRNA表达。结果： 高剂量沙立度胺治疗组肝脏炎症及纤维化程度低于模型组；其ALT、AST水平,HA、LN及羟脯氨酸含量，肝组织细胞核NF-κB p65和肝组织α-SMA蛋白表达，以及肝组织TNF-α mRNA和蛋白表达均低于模型组(P<0.01）；而PA水平和细胞质中IκBα蛋白表达高于模型组(P<0.01)。结论： 沙立度胺可有效地抑制实验性大鼠肝纤维化的发展，通过抑制IκB解离和降解从而减弱NF-κB通路对TNF-α表达的诱导可能是它发挥疗效的机制之一。     

双歧杆菌对实验性大肠癌NF-κB和IκBα的影响

目的 :阐明青春型双歧杆菌的体内抑瘤机理。方法 :以大肠癌裸鼠移植瘤为动物模型 ,用激光共聚焦显微镜和免疫组化检测了大肠癌组织NF -κB及其抑制性蛋白IκBα的活性。结果 :双歧杆菌注射组大肠癌移植瘤NF -κB的阳性细胞密度明显低于肿瘤对照组 (P <0 0 1) ;而IκBα的表达则相反 ,双歧杆菌注射组大肠癌IκBα的平均荧光强度显著高于肿瘤对照组 (P <0 0 1)。结论 :青春型双歧杆菌体内能抑制大肠癌IκBα的降解 ,进而阻止NF -κB的活化。     

核转录因子—κB与免疫应答

核转录因子-κB(nuclear factor κB，NF—κB)是一种重要的核转录因子，NF-κB系统由NF-κB／Rel蛋白家族和IκB蛋白家族组成，通过对多种基因表达的调节，影响机体非特异性免疫反应和特异性免疫反应，从而在体机免疫功能调节中发挥重要作用。本文就NF-κB在免疫应答中的作用作一综述。     

羟基喜树碱通过激活NF-κB诱导人乳腺癌Bcap-37细胞凋亡

 目的: 探讨NF-κB信号转导途径在羟基喜树碱诱导人乳腺癌Bcap-37细胞凋亡中所起的作用。方法: 突变IκB-α-pcDNA3.1(-)质粒转染Bcap-37细胞，并用G418进行阳性克隆选择；采用MTT法测定细胞的增殖活力，琼脂糖凝胶电泳观察细胞凋亡，流式细胞仪进行细胞周期分析，Western blotting法和DIG-EMSA研究细胞凋亡途径。结果: 羟基喜树碱对Bcap-37有明显的生长抑制作用，琼脂糖凝胶电泳检测到典型的DNA梯状条带；羟基喜树碱可通过降解IκBα 蛋白进而激活NF-κB，并使NF-κB发生核移位；羟基喜树碱没有激活突变IκB-α-pcDNA3.1(-)质粒转染细胞的NF-κB，并且转染细胞凋亡受到抑制。结论: 羟基喜树碱对Bcap-37有明显的生长抑制和诱导凋亡作用；NF-κB 信号转导途径在羟基喜树碱诱导人乳腺癌Bcap-37细胞凋亡中起着促进凋亡的作用。     

核转录因子-κB与免疫应答

核转录因子 κB(nuclearfactorκB ,NF κB)是一种重要的核转录因子 ,NF κB系统由NF κB Rel蛋白家族和IκB蛋白家族组成 ,通过对多种基因表达的调节 ,影响机体非特异性免疫反应和特异性免疫反应 ,从而在体机免疫功能调节中发挥重要作用。本文就NF κB在免疫应答中的作用作一综述。     

核因子-κB与神经损伤

核因子κB（nuclear factor kappa B，NF-κB）是在1986年由Sen和Baltimore 应用凝胶电泳迁移率实验（EMSA）分析B细胞核提取物中发现的。最近研究表明，NF-κB是一种重要的转录因子，广泛存在于真核细胞中，参与多种基因的表达调控，具有广泛的生物活性，能够促进多种细胞因子、粘附因子和趋化因子的基因转录，在炎症反应中起重要作用，具有多种生物学功能。NF--κB存在于神经系统几乎所有类型的细胞中，主要包括神经元、星胶质细胞、小胶质细胞和少突细胞，在神经塑型、神经发育及神经变性等过程中具有独特作用并参与神经系统的病理、生理过程，尤其是在中枢神经损伤和变性疾病中发挥着重要作用。     

TrKA-siRNA抑制乳腺癌细胞系MCF-7 NF-κB的表达并促细胞凋亡

目的 探讨TrKA基因表达的变化对NF-κBp65核蛋白的表达和细胞凋亡的影响。方法 构建TrKA特异小干扰RNA（siRNA）表达载体,重组体经测序鉴定正确后转染乳腺癌MCF-7细胞。G418(geneticin)筛选稳定表达TrKA siRNA干扰细胞株,命名为TrKA-siRNA。荧光实时定量RT-PCR,Western blot和免疫组化法检测TrKA基因的表达,Western blot检测NF-κBp65核蛋白的表达,流式细胞术检测细胞凋亡。结果 成功构建 TrKA-siRNA 表达载体,TrKA mRNA和蛋白水平分别下调74.7%和80.5%（P<0.05）。阳性对照 GAPDH 基因表达水平下降85.0%（p<0.05）;NGF作用2 h后,MCF-7组细胞NF-κBp65核蛋白表达明显增加,而TrKA-siRNA组细胞NF-κBp65核蛋白改变不显著。与MCF-7组相比,TrKA- siRNA组细胞凋亡明显增加（p<0.05）,NGF对其凋亡无促进作用。结论 有效阻断TrKA基因的表达能抑制NF-κB抗凋亡途径的活化,从而增加了乳腺癌MCF-7细胞的凋亡。此作用可能不依赖于外源性的NGF。     

肿瘤坏死因子α诱导蛋白3对NF-κB信号通路的抑制作用

研究肿瘤坏死因子α诱导蛋白3(A20)在病毒诱导的NF-κB信号通路中的调控功能.用TNF-α刺激RAW264.7细胞,获得其细胞总RNA,采用RT-PCR方法扩增鼠A20基因,经Xho Ⅰ和BamH Ⅰ双酶切后插入pcDNA3.1-myc-His(-).经鉴定,将真核表达质粒pcDNA3.1-A20转染293T细胞....     

核因子-κB "decoy"寡核苷酸对LPS诱导巨噬细胞TNF-α和IL-6表达的影响

目的 :研究核因子 -κB“decoy”寡核苷酸 (decoyODNs)对脂多糖 (LPS)诱导小鼠巨噬细胞株J774 1细胞TNF -α和IL - 6表达的影响。方法 :酶联免疫吸附法 (ELISA)测定培养上清液中TNF -α、IL - 6含量 ,半定量RT -PCR观察细胞TNF -α、IL - 6mRNA表达变化。结果 :核因子 -κB“decoy”ODNs可降低LPS诱导的J774 1细胞TNF -α和IL - 6含量 ,减少TNF -α及IL - 6的表达 ;对照序列的ODNs和转染剂对TNFα、IL - 6无明显影响。结论 :核因子-κB“decoy”ODNs可抑制TNF -α和IL - 6生成 ,为急性失控性炎性疾病的防治提供了新思路。     

NF-κB超抑制物IκBαM重组腺病毒的构建

目的 在克隆IκBα基因并构建IκBαM的基础上，构建重组腺病毒AdIκBαM。方法 将IκBαM克隆至穿梭质粒，线性化后与骨架质粒共同转染BJ5183菌，构建重组腺病毒质粒。酶切及PCR法鉴定；将其线性化后转染293细胞，观察绿色荧光以确定转染结果，以Western blot法检测目的基因表达。结果 凝胶电泳及行酶切鉴定表明同源重组成功；一PCR产物测序证明确为lxBaM；以重组腺病毒质粒转染293细胞，见绿色荧光；感染293细胞得到大量病毒。结论 成功构建了IκBαM重组腺病毒，为进一步研究奠定了基础。     

核因子-κB信号转导途径的调节研究进展

在静息状态时 ,核因子 κB((nuclearfactorκB ,NF κB)通常与其抑制物以无活性的复合物形式存在于胞浆 ,当受到胞外信号刺激时 ,通过一个或多个信号转导途径 ,激活一系列激酶 ,迅速从胞浆易位到胞核 ,调控相应靶基因的表达。目前发现它是免疫和炎症反应的主要调节因子 ,也参与胚胎发育、细胞周期的调控、细胞凋亡的调节 ,NF κB的过度表达与多种疾病的免疫病理机制有关。近年来许多学者深入探讨了NF κB信号转导途径的调节机制 ,使得许多疾病的发病机制得以进一步阐明 ,并最终为其治疗提供了理论基础     

超声靶向微泡破坏联合核因子κB结合基序促进SDF-1α质粒转染血管内皮细胞

目的 应用超声靶向微泡破坏技术（UTMD）和核因子κB（NF-κB）结合基序分别促进人基质细胞衍生因子-1α（SDF-1α）质粒进入细胞质和细胞核,提高对血管内皮细胞的转染效率.方法 构建含NF-κB结合基序的人SDF-1α质粒（phSDF-1α-NF-κB）和不含NF-κB结合基序的人SDF-1α质粒（phSDF-1α）,用核酸染料Cy3标记后在优化的UTMD条件下分别转染人脐静脉血管内皮细胞.流式细胞仪检测质粒入胞效率;荧光显微镜观察质粒入核情况;RT-PCR、Western印迹和ELISA分别从基因水平和蛋白水平检测SDF-1α质粒的表达.比较两种质粒的入胞率、入核率以及表达率以评价UTMD和NF-κB结合基序对转染的作用.结果 UTMD能显著提高质粒的入胞效率（81％±7％）,同时保持较高细胞存活率（86％±6％）.含NF-κB结合基序组的质粒入核效率和蛋白表达效率均较不含NF-κB结合基序组显著提高[65％±12％比10％±3％,（63±10）比（15±5）μg/g蛋白,均P＜0.01].结论 UTMD联合NF-1κB结合基序转染系统通过提高质粒的人胞和入核效率能显著提高SDF-1α质粒对血管内皮细胞的转染效率.     

NF-κB/IκB:重要的转录调节因子

核转录因子ｋａｐｐａ Ｂ（ＮＦκＢ）是一组重要的转录调节因子,可在免疫刺激剂等多种因素作用下激活而调节基因的转录,参与调节许多与免疫功能和炎症有关的基因。ＩκＢ（Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ ＮＦκＢ）是其抑制分子,对其激活的调控起着关键作用。本文综述了ＮＦκＢ激活及调控的有关机理,为对其进一步研究提供理论依据。