人脐血MSCs的生物学特性及其向神经细胞分化的研究进展

脐血间充质干细胞是从脐带血中分离和培养的一种多潜能成体干细胞,具有自我更新和多向分化潜能,在一定条件下可以分化成为神经细胞。脐血间充质干细胞的这些特性吸引了许多学者用它来治疗神经系统疾病如神经退行性疾病,神经损伤和中风等,并取得了一定进展。本文就脐血间充质干细胞的分离纯化和培养方法、生物学特性以及向神经细胞的分化作一简要综述。     

脐带血造血前体细胞在间质干细胞微环境中的增殖和分化特性研究

目的：用间质干细胞（MSC）体外模拟造血微环境,探讨脐带血造血前体细胞在MSC微环境中的增殖和分化特性。方法：实验组（CK+MSC组）以MSC为基质层细胞,建立基于MSC的体外造血细胞扩增体系,接种脐带血单个核细胞,培养体系中加入外源性造血生长因子SCF、Flt3L、TPO和IL-6,培养第1、2、3、4周对扩增的细胞进行细胞计数、集落培养,对照组为单纯细胞因子组（CK组,无MSC基质层细胞）和单纯MSC组（无脐带血单个核细胞）。结果：(1)第4周时CK+MSC组的细胞数扩增108倍,而CK组只有7.8倍。(2)CK+MSC组和CK组扩增的集落形成细胞（CFC）数量在第3周时达高峰,第4周时CFC数量已迅速下降。(3)红系CFC和高增殖潜能集落形成细胞（HPP-CFC）均于扩增1周后到达高峰,CK+MSC组的扩增效率要优于CK组,到第3周时两组均降为零。(4)粒单系CFC则在扩增第3周时到达高峰,CK+MSC组扩增效率优于CK组,从第4周开始出现回落。(5)扩增1周后,单位细胞（104个MNC）中的CFC数到达高峰,CK+MSC组优于CK组,从第2周开始每104个MNC中的CFC数迅速呈下降趋势,到第4周时已降至低于扩增前水平。(6)单纯MSC组无造血细胞生长。结论：(1)体外扩增脐带血造血前体细胞时,基于MSC的扩增体系要优于单纯细胞因子体系。(2)MSC在体外有利于脐带血造血前体细胞扩增的同时,并不能阻止其分化。(3)红系扩增出现在体外扩增的早期,粒单系扩增持续的时间比红系长,扩增的CFC数量更多。     

人脐血源性MSCs的免疫调节作用

目的 从人脐血中分离、培养间充质干细胞(MSCs)并探讨其对淋巴细胞的免疫调节作用.方法 淋巴细胞分离液分离人脐血单个核细胞,利用贴壁筛选法通过多次传代得到MSCs,流式细胞仪测定细胞表型;将获得的MSCs分别以不同数量加入到外周血混合淋巴细胞培养体系和植物血凝素(PHA)刺激的外周血淋巴细胞转化体系中,用H3-TdR标记β液体闪烁计数仪检测细胞增殖,观察脐血来源的MSCs对混合淋巴细胞反应和淋巴细胞转化的影响.结果 从人脐血中分离获得的贴壁细胞,呈成纤维样的细胞形态,CD29、CD105和CD166表达阳性,CD14、CD34和CD45表达阴性;人脐血源性MSCs在体外对混合淋巴细胞反应和PHA诱导的淋巴细胞转化均具有明显的抑制作用,抑制作用与细胞数量呈正相关.结论 从人脐血中可以成功地分离出MSCs,其对同种异体淋巴细胞具有免疫调节作用,为其作为骨组织工程异基因种子细胞来源打下基础.     

人胎盘血间质干细胞分离培养

目的：分离培养人胎盘血间质干细胞（hMSC）,为hMSC探寻新来源。方法：采用羟乙基淀粉（HES）方法分离、富集胎盘血有核细胞;DMEM培养液体外培养、纯化、扩增hMSC;流式细胞仪检测细胞表面标记;地塞米松、IBMX、胰岛素和吲哚美辛定向诱导hMSC样细胞向脂肪细胞分化。结果：胎盘血来源有核细胞,在DMEM体外培养条件下,生长出具有塑料粘附特性的梭形细胞,阳性获得率29.17%（7/24）,该细胞传代培养达6个月以上;流式细胞仪检测结果显示CD29、CD44、CD59、CD90、CD105、CD166表达阳性,CD14、CD34、CD45、CD80、CD86表达阴性;加入脂肪细胞诱导剂,细胞在形态上向脂肪细胞转化,胞内出现脂滴、脂泡,油红O阳性。结论：人胎盘血可以分离培养出hMSC,是hMSC的重要来源。     

人胎肝MSCs的分离培养及其类ESCs特性的研究

目的：建立一种简便、有效且经济的分离人胎肝间充质干细胞(hFL-MSCs)的方法,在此基础上研究hFL-MSCs的类胚胎干细胞特性。方法:利用二步离心及羟乙基淀粉沉淀法分离hFL-MSCs,根据不同类型细胞对培养瓶的不同黏附特性,通过多次传代纯化得到hFL-MSCs;用流式细胞仪检测hFL-MSCs的细胞周期及表面标志;用免疫细胞化学及RT-PCR检测AKP、hTERT、SSEA-4和Oct-3等胚胎干细胞标志在hFL-MSCs中的表达;在不同条件下,诱导hFL-MSCs向类神经元、成肌细胞及胰岛β样细胞分化并加以鉴定。结果:从人胎肝中分离、纯化得到MSCs,P3代hFL-MSCs有91.2%处于G0/G1期;hFL-MSCs高表达CD29和CD44,不表达造血细胞标志CD34和CD45,极低表达与GVHD相关的HLA-DR、CD80、CD86和CD106;hFL-MSCs表达Oct-4、SSEA-4、AKP和hTERT等胚胎干细胞标志;在不同诱导条件下,hFL-MSCs可分化为类神经元、肌样细胞以及胰岛β样细胞。结论:二步离心联合羟乙基淀粉沉淀法是一种简便、高效且低成本的分离hFL-MSCs的方法;hFL-MSCs具有类胚胎干细胞的特性,体外诱导可向3个胚层来源的细胞分化,且免疫原性弱,是组织工程和细胞治疗较为理想的种子细胞。     

白血病干细胞生物学特性的研究

目的 通过对白血病原代细胞的体外培养,研究白血病干细胞(LSC)的生物学特性.方法 分离18例白血病患者骨髓或外周血中单个核细胞(MNC),在体外进行培养观察,并用流式细胞术方法检测分离的MNC中LSC的数量及和细胞表面标记.结果 从白血病患者中分离的MNC在体外培养1周后基本死亡.流式检测分离的MNC中免疫表型是CD34+CD38-CD123+的细胞群约有0.676%(0.03%～2%).结论 白血病干细胞难以在体外培养生长及扩增.外周血及骨髓中分离白血病患者的单个核细胞中,极少部分细胞表达干细胞标志.     

白血病干细胞生物学特性的研究

目的通过对白血病原代细胞的体外培养,研究白血病干细胞(LSC)的生物学特性。方法分离18例白血病患者骨髓或外周血中单个核细胞(MNC),在体外进行培养观察,并用流式细胞术方法检测分离的MNC中LSC的数量及和细胞表面标记。结果从白血病患者中分离的MNC在体外培养1周后基本死亡。流式检测分离的MNC中免疫表型是CD34 CD38-CD123 的细胞群约有0.676%(0.03%~2%)。结论白血病干细胞难以在体外培养生长及扩增。外周血及骨髓中分离白血病患者的单个核细胞中,极少部分细胞表达干细胞标志。     

人脐血干细胞体外诱导为肥大细胞的研究进展

Mast cells (MCs) play a key role in the pathogenesis of allergic diseases. Tissue MCs are originated from hematopoiefic stem cells in bone marrow. In recent years, it was reported that human mast cells could be differentiated from stem cells of umbilical cord blood. In this review, we summarize the development in this novel area.     

人脐血MSCs向神经元样细胞分化过程中neurogenin1的表达变化

目的:探讨人脐血间质干细胞(MSCs)体外向神经元样细胞分化过程中neurogenin1的表达变化。方法:常规从人脐血中分离MSCs,采用生长因子EGF和bFGF联合诱导人脐血MSCs向神经元样细胞分化,免疫细胞化学法检测诱导前、后神经元表面标志蛋白NF-M、NSE、胶质细胞标志蛋白GFAP和neurogenin1的表达情况;Westernblotting和RT-PCR法检测诱导前、后人脐血MSCs中neurogenin1蛋白和mRNA的表达变化。结果:诱导前,人脐血MSCs不表达NF-M、NSE和GFAP;诱导7d,人脐血MSCs可以分化为神经元样细胞,同时表达NF-M、NSE和GFAP。诱导前,人脐血MSCs不表达neurogenin1,诱导后neurogenin1蛋白和mRNA表达显著增加。结论:Neurogenin1可能参与了体外诱导人脐血MSCs向神经细胞分化的过程。     

胎肝条件培养液体外诱导人骨髓间充质干细胞定向分化为造血细胞的研究

目的：探讨人骨髓间充质干细胞（hMSCs）体外造血分化潜能。方法： 选用孕12.5-14.5 d（12.5-14.5 dpc）的昆明小鼠，分别制备小鼠胎肝基质细胞条件培养液（FLSC-CM）及胚胎成纤维细胞饲养层（FD），将体外扩增的CD34-CD45-hMSCs分别接种于含FLSC-CM、FD和IL-6及SCF组合的培养体系中，培养7 d后，通过形态学、表型、粒-单/巨噬细胞系集落培养（CFU-GM）对分化细胞进行鉴定。结果： hMSCs与FLSC-CM共培养组产生的非贴壁细胞明显增多，形态类似于单核或小淋巴细胞，部分细胞可表达人造血细胞特异性表面分子（CD34和CD45），在含人粒-单集落刺激因子（GM-CSF）的甲基纤维素培养体系中能够形成CFU-GM，而FD和IL-6+SCF诱导组无上述作用。结论： FLSC-CM可诱导CD34-CD45-hMSCs分化为造血细胞，提示hMSCs具有体外造血分化潜能。     

小鼠胎肝间质干细胞的纯化与分化多能性研究

目的：分离纯化小鼠胎肝间质干细胞（flMSCs）并探讨其分化潜能。方法：通过改良贴壁法分离BABL/c小鼠胎肝间质干细胞;流式细胞术测定细胞周期和表型;体外诱导贴壁细胞向脂肪、软骨、骨组织以及神经细胞分化;化学染色、RT-PCR和免疫细胞化学染色鉴定分化。结果：改进贴壁法分离的flMSCs呈均一梭形,(83.76±2.88)%处于G0/G1期,表达CD44、CD29,不表达造血细胞表面标志CD45、CD11b,诱导后能向脂肪、软骨、骨以及神经方向分化。结论：贴壁法可以分离纯化小鼠flMSCs,小鼠flMSCs具有较强的分化潜能和“可塑性”,可用于干细胞治疗疾病的进一步研究。     

小鼠胎肝间质干细胞体外向肌样细胞分化的研究

目的：了解小鼠胎肝间质干细胞在体外向肌样细胞分化的潜能。方法：无菌条件下从正常C57BL/6J胎鼠肝脏中分离出间质干细胞,体外培养传3代后用5-氮胞苷和二性霉素B诱导分化,观察胎肝间质干细胞诱导前后形态变化;用RT-PCR检测细胞诱导前后,成肌调控基因Myf5和成肌素myogenin的表达情况;诱导后7d和14d行免疫细胞化学染色鉴定诱导后细胞结蛋白和α-肌动蛋白的表达。结果：RT-PCR显示诱导后6h至72h成肌调控基因Myf5和myogenin序贯表达,而诱导前的细胞则没有检测到表达;免疫细胞化学染色提示第7d细胞结蛋白和α-肌动蛋白表达阳性,第14d阳性率明显升高。结论：胎肝中分离出的间质干细胞在体外可以定向诱导分化为肌样细胞。     

外周血基质干细胞培养鉴定及其向施万细胞的诱导分化

目的研究体外分离培养大鼠外周血基质干细胞(PBMSCs)并诱导分化为施万细胞的潜能。方法从SD大鼠取血分离培养PBMSCs,采用流式细胞术和免疫细胞化学法对其细胞表面抗原进行检测与鉴定,并用免疫细胞化学法检测BrdU作用4h后BrdU的阳性率。PBMSCs经β-巯基乙醇、全反式维甲酸及复合条件培养基等三个步骤向施万细胞定向诱导后,用免疫细胞化学法检测S-100和P75的表达。结果流式细胞术显示培养获得的PBMSCs中CD11b、CD29、CD45、CD49d、CD90及CD106的阳性率分别为19.97%、99.96%、46.62%、5.46%、71.22%和10.76%。免疫细胞化学法显示PBMSCs呈CD34阴性,而BrdU阳性率为(34.1±4.3)%。PBMSCs经定向诱导后S-100和P75的阳性率分别是(75.2±4.1)%和(78.9±4.6)%。结论从外周血分离获得的干细胞符合基质干细胞的特性,这些细胞在特定的条件下可诱导分化成为施万细胞。     

胎盘组织——间充质干细胞的新来源

间充质干细胞（mesenchymal stemcells,MSC）是最早分离自人骨髓组织的一类具有多向分化潜能的干细胞,随后陆续在人脂肪组织、外周血、肌肉和结缔组织中也发现了MSC。目前MSC是临床研究最普遍的细胞来源,在组织工程研究、创伤修复和肿瘤治疗等领域应用广泛,但MSC在骨髓、外周血等组织中的含量极低,并且有研究表明MSC含量会随着人年龄的增长而逐渐降低,同时细胞的增殖分化能力也大大下降因此国内外学者们开始探索在更为幼稚的组织如胚胎、胎盘组织中是否含有MSC。     

小鼠脐血造血干/祖细胞含量与特性初步观察

目的:探讨小鼠脐血(umbilicalcordblood,UCB)造血干/祖细胞含量与特性。方法:采用体外集落培养和流式细胞术检测C57BL/6(H-2b)小鼠脐血与骨髓(bonemarrow,BM)造血干/祖细胞。结果:小鼠脐血培养7d粒单系祖细胞(CFU-GM)及早期红系祖细胞(BFU-E)集落产率与骨髓相近,但14dCFU-GM、多向祖细胞(CFU-GEMM)明显高于后者(P<0.05),且见含细胞多体积巨大的致密型集落。脐血CD34+Sca-1+细胞亚群也明显高于骨髓(P<0.05)。结论:小鼠F脐血富含造血干/祖细胞,具有高增殖潜能。     

人胚胎脐血间质干细胞生物学特性研究

摘要目的:研究人中期胚胎脐血间质干细胞生物学特性,探讨其在自体宫内基因转移/治疗(IUGT)领域的应用前景。方法:采用L-DMEM完全培养液培养中期胚胎脐血间质干细胞(MSC);流式细胞仪技术检测细胞表面标记;地塞米松/胰岛素等作为脂肪细胞诱导液,β-甘油磷酸钠/抗坏血酸等作为成骨细胞诱导液分别诱导细胞分化;将携带有绿色荧光蛋白的重组腺病毒转染MSC,荧光显微镜下检测MSC表达转基因特性;F344新生大鼠肝内注射MSC,免疫荧光检测6周后不同组织器官中人MSC存在;非肥胖型糖尿病/重症联合免疫缺陷性小鼠(NOD/SCID)皮下注射MSC,病理切片检测第30d细胞体内成瘤性。结果:3mL人中期胚胎脐血可以分离、培养出MSC,细胞均一地表达CD29、CD44、CD59、CD105、CD166,不表达CD34、CD45、CD80、CD86、CD42a、HLA-DR分子,体外培养中具有成脂、成骨能力;细胞表达转基因产物绿色荧光蛋白阳性率高达56.32%±3.28%;在新生大鼠体内,人中期胚胎脐血来源的MSC能向多个不同组织器官迁移,在NOD/SCID小鼠内不具有成瘤性。结论:人中期胚胎脐血MSC适合中、晚期胚胎自体IUGT靶细胞。