人胚胎脐血间质干细胞生物学特性研究

目的:研究人中期胚胎脐血间质干细胞生物学特性,探讨其在自体宫内基因转移/治疗(IUGT)领域的应用前景。方法: 采用L-DMEM完全培养液培养中期胚胎脐血间质干细胞(MSC);流式细胞仪技术检测细胞表面标记;地塞米松/胰岛素等作为脂肪细胞诱导液,β-甘油磷酸钠/抗坏血酸等作为成骨细胞诱导液分别诱导细胞分化;将携带有绿色荧光蛋白的重组腺病毒转染MSC,荧光显微镜下检测MSC表达转基因特性;F344新生大鼠肝内注射MSC,免疫荧光检测6周后不同组织器官中人MSC存在;非肥胖型糖尿病/重症联合免疫缺陷性小鼠(NOD/SCID)皮下注射MSC,病理切片检测第30 d细胞体内成瘤性。 结果:3 mL人中期胚胎脐血可以分离、培养出MSC,细胞均一地表达CD29、CD44、CD59、CD105、CD166,不表达CD34、CD45、CD80、CD86、CD42a、HLA-DR分子,体外培养中具有成脂、成骨能力;细胞表达转基因产物绿色荧光蛋白阳性率高达56.32%±3.28%;在新生大鼠体内,人中期胚胎脐血来源的MSC能向多个不同组织器官迁移,在NOD/SCID小鼠内不具有成瘤性。结论:人中期胚胎脐血MSC适合中、晚期胚胎自体IUGT靶细胞。     

人脐血MSCs的生物学特性及其向神经细胞分化的研究进展

脐血间充质干细胞是从脐带血中分离和培养的一种多潜能成体干细胞,具有自我更新和多向分化潜能,在一定条件下可以分化成为神经细胞。脐血间充质干细胞的这些特性吸引了许多学者用它来治疗神经系统疾病如神经退行性疾病,神经损伤和中风等,并取得了一定进展。本文就脐血间充质干细胞的分离纯化和培养方法、生物学特性以及向神经细胞的分化作一简要综述。     

人脐血源性MSCs的免疫调节作用

目的 从人脐血中分离、培养间充质干细胞(MSCs)并探讨其对淋巴细胞的免疫调节作用.方法 淋巴细胞分离液分离人脐血单个核细胞,利用贴壁筛选法通过多次传代得到MSCs,流式细胞仪测定细胞表型;将获得的MSCs分别以不同数量加入到外周血混合淋巴细胞培养体系和植物血凝素(PHA)刺激的外周血淋巴细胞转化体系中,用H3-TdR标记β液体闪烁计数仪检测细胞增殖,观察脐血来源的MSCs对混合淋巴细胞反应和淋巴细胞转化的影响.结果 从人脐血中分离获得的贴壁细胞,呈成纤维样的细胞形态,CD29、CD105和CD166表达阳性,CD14、CD34和CD45表达阴性;人脐血源性MSCs在体外对混合淋巴细胞反应和PHA诱导的淋巴细胞转化均具有明显的抑制作用,抑制作用与细胞数量呈正相关.结论 从人脐血中可以成功地分离出MSCs,其对同种异体淋巴细胞具有免疫调节作用,为其作为骨组织工程异基因种子细胞来源打下基础.     

脐带血造血前体细胞在间质干细胞微环境中的增殖和分化特性研究

目的： 用间质干细胞（MSC）体外模拟造血微环境，探讨脐带血造血前体细胞在MSC微环境中的增殖和分化特性。方法： 实验组（CK+MSC组）以MSC为基质层细胞，建立基于MSC的体外造血细胞扩增体系，接种脐带血单个核细胞，培养体系中加入外源性造血生长因子SCF、Flt3L、TPO和IL-6，培养第1、2、3、4周对扩增的细胞进行细胞计数、集落培养，对照组为单纯细胞因子组（CK组，无MSC基质层细胞）和单纯MSC组（无脐带血单个核细胞）。结果： (1)第4周时CK+MSC组的细胞数扩增108倍，而CK组只有7.8倍。(2)CK+MSC组和CK组扩增的集落形成细胞（CFC）数量在第3周时达高峰，第4周时CFC数量已迅速下降。(3)红系CFC和高增殖潜能集落形成细胞（HPP-CFC）均于扩增1周后到达高峰，CK+MSC组的扩增效率要优于CK组，到第3周时两组均降为零。(4)粒单系CFC则在扩增第3周时到达高峰，CK+MSC组扩增效率优于CK组，从第4周开始出现回落。(5)扩增1周后，单位细胞（10⁴个MNC）中的CFC数到达高峰，CK+MSC组优于CK组，从第2周开始每104个MNC中的CFC数迅速呈下降趋势，到第4周时已降至低于扩增前水平。(6)单纯MSC组无造血细胞生长。结论： (1)体外扩增脐带血造血前体细胞时，基于MSC的扩增体系要优于单纯细胞因子体系。(2)MSC在体外有利于脐带血造血前体细胞扩增的同时，并不能阻止其分化。(3)红系扩增出现在体外扩增的早期，粒单系扩增持续的时间比红系长，扩增的CFC数量更多。     

人胎肝MSCs的分离培养及其类ESCs特性的研究

目的： 建立一种简便、有效且经济的分离人胎肝间充质干细胞(hFL-MSCs)的方法,在此基础上研究hFL-MSCs的类胚胎干细胞特性。方法: 利用二步离心及羟乙基淀粉沉淀法分离hFL-MSCs,根据不同类型细胞对培养瓶的不同黏附特性,通过多次传代纯化得到hFL-MSCs;用流式细胞仪检测hFL-MSCs的细胞周期及表面标志;用免疫细胞化学及RT-PCR检测AKP、hTERT、SSEA-4和Oct-3等胚胎干细胞标志在hFL-MSCs中的表达;在不同条件下,诱导hFL-MSCs向类神经元、成肌细胞及胰岛β样细胞分化并加以鉴定。结果: 从人胎肝中分离、纯化得到MSCs,P3代hFL-MSCs有91.2%处于G0/G1期;hFL-MSCs高表达CD29和CD44,不表达造血细胞标志CD34和CD45,极低表达与GVHD相关的HLA-DR、CD80、CD86和CD106;hFL-MSCs表达Oct-4、SSEA-4、AKP和hTERT等胚胎干细胞标志;在不同诱导条件下,hFL-MSCs可分化为类神经元、肌样细胞以及胰岛β样细胞。结论: 二步离心联合羟乙基淀粉沉淀法是一种简便、高效且低成本的分离hFL-MSCs的方法;hFL-MSCs具有类胚胎干细胞的特性,体外诱导可向3个胚层来源的细胞分化,且免疫原性弱, 是组织工程和细胞治疗较为理想的种子细胞。     

人胎盘血间质干细胞分离培养

目的：分离培养人胎盘血间质干细胞（hMSC），为hMSC探寻新来源。方法：采用羟乙基淀粉（HES）方法分离、富集胎盘血有核细胞；DMEM培养液体外培养、纯化、扩增hMSC；流式细胞仪检测细胞表面标记；地塞米松、IBMX、胰岛素和吲哚美辛定向诱导hMSC样细胞向脂肪细胞分化。结果：胎盘血来源有核细胞,在DMEM体外培养条件下，生长出具有塑料粘附特性的梭形细胞，阳性获得率29.17%（7/24），该细胞传代培养达6个月以上；流式细胞仪检测结果显示CD29、CD44、CD59、CD90、CD105、CD166表达阳性，CD14、CD34、CD45、CD80、CD86表达阴性；加入脂肪细胞诱导剂，细胞在形态上向脂肪细胞转化，胞内出现脂滴、脂泡，油红O阳性。结论：人胎盘血可以分离培养出hMSC，是hMSC的重要来源。     

白血病干细胞生物学特性的研究

目的 通过对白血病原代细胞的体外培养,研究白血病干细胞(LSC)的生物学特性.方法 分离18例白血病患者骨髓或外周血中单个核细胞(MNC),在体外进行培养观察,并用流式细胞术方法检测分离的MNC中LSC的数量及和细胞表面标记.结果 从白血病患者中分离的MNC在体外培养1周后基本死亡.流式检测分离的MNC中免疫表型是CD34+CD38-CD123+的细胞群约有0.676%(0.03%～2%).结论 白血病干细胞难以在体外培养生长及扩增.外周血及骨髓中分离白血病患者的单个核细胞中,极少部分细胞表达干细胞标志.     

白血病干细胞生物学特性的研究

目的通过对白血病原代细胞的体外培养,研究白血病干细胞(LSC)的生物学特性。方法分离18例白血病患者骨髓或外周血中单个核细胞(MNC),在体外进行培养观察,并用流式细胞术方法检测分离的MNC中LSC的数量及和细胞表面标记。结果从白血病患者中分离的MNC在体外培养1周后基本死亡。流式检测分离的MNC中免疫表型是CD34 CD38-CD123 的细胞群约有0.676%(0.03%~2%)。结论白血病干细胞难以在体外培养生长及扩增。外周血及骨髓中分离白血病患者的单个核细胞中,极少部分细胞表达干细胞标志。     

人脐血干细胞体外诱导为肥大细胞的研究进展

Mast cells (MCs) play a key role in the pathogenesis of allergic diseases. Tissue MCs are originated from hematopoiefic stem cells in bone marrow. In recent years, it was reported that human mast cells could be differentiated from stem cells of umbilical cord blood. In this review, we summarize the development in this novel area.     

人脐血MSCs向神经元样细胞分化过程中neurogenin1的表达变化

目的: 探讨人脐血间质干细胞(MSCs)体外向神经元样细胞分化过程中neurogenin 1的表达变化。方法: 常规从人脐血中分离MSCs,采用生长因子EGF和bFGF联合诱导人脐血MSCs向神经元样细胞分化,免疫细胞化学法检测诱导前、后神经元表面标志蛋白NF-M、NSE、胶质细胞标志蛋白GFAP和neurogenin 1的表达情况;Western blotting和RT-PCR法检测诱导前、后人脐血MSCs中neurogenin 1蛋白和mRNA的表达变化。结果: 诱导前,人脐血MSCs不表达NF-M、NSE和GFAP;诱导7 d,人脐血MSCs可以分化为神经元样细胞, 同时表达NF-M、NSE和GFAP。诱导前,人脐血MSCs不表达neurogenin 1,诱导后neurogenin 1蛋白和mRNA表达显著增加。结论: Neurogenin 1可能参与了体外诱导人脐血MSCs向神经细胞分化的过程。     

脐带血间充质干细胞的研究进展

脐带血中存在着丰富的造血干细胞,在移植方面发挥重要作用,在脐血中是否还存在间充质干细胞却有争议,有的学者认为其中有间充质干细胞,且与骨髓间充质干细胞(mesenchymalstemcells,MSC)的形态、表面标志及分化潜能非常相似,有的学者认为含量较低,难以传代培养扩增,总结了近5年来国内外关于脐血间充质干细胞的研究情况,为脐血的充分利用提供更多的资料。     

足月小样儿及正常胎儿脐血间充质干细胞的分离培养及形态学观察

目的建立一种简单实用的脐血间充质干细胞(MSCs)的分离培养方法,观察其生物学特性,为脐血MSCs在临床的广泛应用奠定基础。方法无菌条件下采集足月小样儿和足月正常胎儿分娩脐血,密度梯度离心法分离脐血单个核细胞,采用MesencultTM培养基培养,观察脐血MSCs的生物学特性,免疫荧光方法检测其表面标记物的表达情况。结果采用MesencultTM培养基,正常儿脐血MSCs培养成功率为66.67%,相同培养条件下,足月小样儿脐血培养成功率低于正常体重胎儿的脐血。人脐血MSCs强表达CD29、CD44和CD90,不表达造血干细胞表面标志CD34。结论我们建立了最佳的脐血MSCs的分离培养方法。     

Immunomodulatory function of whole human umbilical cord derived mesenchymal stem cells

Bone marrow derived mesenchymal stem cells (MSCs) play a critical role in immune modulation. However, immunomodulatory function of whole human umbilical cord derived mesenchymal stem cells (UC-MSCs) remains unclear. In this study, UC-MSCs were separated from whole umbilical cord using a single enzyme digestion. UC-MSCs (CD73⁺, CD90⁺, CD105⁺, and CD34⁻, CD45⁻, HLA-DR⁻) were differentiated into adipocytes, osteocytes and chondrocytes in vitro under specific stimulatory environments. UC-MSCs suppressed umbilical cord blood lymphocyte proliferation stimulated by mitogen, and ELISA showed that the secretion of INF-γ was downregulated, and the secretion of IL-4 was upregulated, with CD8⁺ T cells markedly decreased and CD4⁺ T cells changed lightly. Moreover, the infusion of UC-MSCs in recipient mice transplanted with donor bone marrow cells ameliorated acute graft-versus host disease (aGVHD) and extended survival. In conclusion, UC-MSCs might negatively modulate immunoreactions, and have application potential in the treatment of aGVHD caused by allogeneic stem cells transplantation.     

人脐带间充质干细胞研究进展及应用

人脐带间充质干细胞是一类具有自我更新和多向分化潜能的成体干细胞。随着细胞技术的提高,人们对于脐带间充干细胞的研究越发深入,在医学的各个领域都取得了长足的进步,如脐带间充质干细胞分离技术及脐带间充质干细胞的诱导分化技术。本文就脐带间充质干细胞的生物学特性、诱导分化潜能、免疫原性进行综述,重点讨论其最新的临床应用。     

人脐带血来源的间充质干细胞特性及对卵巢癌细胞趋化作用的研究

目的为人脐带血（HUCD）可成为间充质干细胞（MSCs）重要新来源提供依据,着重研究对人卵巢癌细胞的趋化作用,为临床靶向治疗卵巢癌提供新的载体。方法征求足月健康的自然产孕妇同意,获得脐带血,从中提取MSCs。获得稳定增殖传代的MSCs后,鉴定其生物特性和抗原表型,将其与人卵巢癌HO-8910细胞共培养,探讨其对卵巢癌细胞的趋化作用。结果成功从HUCD中提取MSCs,筛选出稳定传代的细胞系。其生物学特性与骨髓来源的MSCs一样具有多向细胞分化潜能,可诱导分化成脂肪细胞、成骨细胞;同时还具有相同的免疫表型,CD29、CD44、CD105阳性表达,CD13、CD14、CD34、CD45阴性表达,并且其免疫表型不随着细胞传代而改变。HUCD来源的MSCs与HO-8910细胞共培养时发现,MSCs对其有趋化作用。结论证实HUCD可以作为MSCs的新的重要来源。实验发现MSCs对人卵巢癌细胞株HO-8910有明显趋化作用,这一发现可能为卵巢肿瘤靶向治疗提供了新的有效载体。     

人脐带间充质干细胞的快速分离、纯化及冻存

目的:建立在一般实验条件下快速分离、纯化及冻存人脐带间充质干细胞(UC-MSCs)的简便有效方法并研究其冻存复苏后的增殖及多向分化能力。方法:用胶原酶Ⅱ、胰蛋白酶次序消化及二步离心法从人的完整脐带中快速分离UC-MSCs,通过把握传代时的消化程度及酸化培养基来快速纯化UC-MSCs,以流式细胞仪检测表面抗原进行鉴定;用简易二步法(-4℃停留30 min,-20℃存放2 h,-80℃长期保存)冻存UC-MSCs,半年后复苏,扩增、传代,检测其胚胎干细胞特异性抗原Oct4、SSEA-4和人端粒酶逆转录酶hTERT的表达情况,并诱导其向神经元样细胞、成肌细胞和肝细胞样细胞分化。结果:通过双酶次序消化结合二步离心法,2 h可提取全脐带中的MSCs,原代培养7 d即可传代,通过适度消化传代和选用弱酸性培养基培养,第3代即可得到纯化的UC-MSCs,UC-MSCs表达CD29和CD44,不表达CD34和CD45,极低表达HLA-DR、CD80、CD86和CD106。简易法冻存半年后复苏的UC-MSCs表达Oct4、SSEA-4和hTERT,可向三个胚层来源的细胞分化。结论:双酶次序消化结合二步离心法是从人的完整脐带中快速分离UC-MSCs的一种简便有效方法,偏酸性环境有利于UC-MSCs的扩增及纯化;简易二步法冻存对UC-MSCs增殖和多向分化能力没有明显影响。